JPH0123117B2

JPH0123117B2 -

Info

Publication number: JPH0123117B2
Application number: JP5387981A
Authority: JP
Inventors: Teruhiko Betsupu
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1981-04-10
Filing date: 1981-04-10
Publication date: 1989-05-01
Also published as: JPS57206397A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は抗生物質AT265および／又はAT−
265−Ｂの新規な製造法に関する。その目的とす
るところは、グラム陽性菌又はグラム陰性菌に対
して抗菌力を有する抗生物質AT−265および／
又はAT−265−Ｂを製造する新規な方法を提供
することにある。本発明者らは、このような目的
のもとに天然界より数多くの微生物を入手し抗生
物質の生産性について研究した。その結果、AT−265生産菌のうち、本発明者
等が、東京都文京区弥生、東京大学構内の土壌か
ら新しく分離した菌株〔ストレプトマイセスリ
シリエンシスサブスピーシーズ SP−265、
（streptomyces rishiriensis subspecies SP−
265）、以下SP−265株と称する〕を培養すると、
培養物中に抗生物質を生産する事実を見い出し
た。この抗生物質はその後化学的、物理的性状に
ついて分析が行なわれた結果、下記一般式（）
に示すような構造をもつた抗生物質であることが
明らかになつた。（但し、Ｒは−Ｈまたは−SO₂NH₂を示す）一般式（）中Ｒが−SO₂NH₂の場合AT−
265と称し、一般式（）中Ｒが−Ｈの場合AT
−265−Ｂと称する。 AT−265−Ｂは２−クロロアデノシンと呼ば
れている。AT−265は5′−スルフアモイル−２−
クロロアデノシンとも呼ばれ有機化学的合成法に
より２−クロロアデノシンから誘導されることが
知られている。（G.R.Gough Journal of Medi−
cinal Chemistry1978 vol21(6) 520−525）しかしながら両物質とも、これまでストレプト
マイセス属の放線菌によつて生産されるという知
見はなく、本発明者らによつてはじめて見い出さ
れた。以下、本抗生物質AT−265およびAT−265−
Ｂの製造法について詳述する。 (A) SP−265株の同定前記のSP−265株の形態的特徴および生理的
性質を観察、試験した結果は次の通りである。形態的性質胞子形成菌糸の分枝法：単純分枝胞子形成菌糸の形態：螺旋状胞子の数：10個以上胞子の表面構造及び大きさ：なめらか0.5〜
0.7×1.0〜1.5ミクロン鞭毛胞子、胞子嚢の有無：認められない胞子柄の着生位置：気菌糸上各種培地上の生育状態

【表】

【表】生理的性質 SP−265株の生理的諸性質を以下に示す。 (1) 生育温度範囲：20〜40℃最適34〜36℃ (2) チロシナーゼ反応：陽性 (3) ゼラチンの液化：陽性 (4) 硝酸塩還元性：陰性 (5) 澱粉加水分解性：陽性 (6) 脱脂牛乳の凝固（26℃）：陰性（37℃）：陽性 (7) 脱脂牛乳のペプトン化（26℃）：陽性（37℃）：陽性 (8) メラニン様色素の生成（チロシン寒天培
地及びペプトン・イースト鉄寒天培地
上）：陽性各炭素源の同化性（プリドハム・ゴツトリ
ーブ寒天培地上）Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、Ｌ−ア
ラビノース、Ｌ−ラムノース、Ｄ−フラクト
ース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−ラフイノー
ス、ｉ−イノシトール、シユクロース、Ｄ−
セロビオース、ソルブルスターチ、デキスト
リン、Ｄ−マンノース、Ｄ−トレハロース、
ラクトース、イヌリン、マルトース、、Ｄ−
メリビオース、グリセロール、等を良く資化
する。サリシン、コハク酸ナトリウムを資化
し、マンニトール、セルロース、ズルシトー
ル、酢酸ナトリウム等を資化し難い。以上のような菌学的性質を有する菌につい
て、インターナシヨナル・ジヤーナル・オ
ブ・システマテイツク・バクテリオロジー
（International Journal of Systematic
Bacteriology）第18巻69〜189頁、279−392
頁；第19巻391−512頁；第22巻265−394頁、
及びバージ・マニユアル第８版（Bergey′s
Manual of Determinative Bacteriology、
eighth−edition）により検索を行つた結果
ストレプトマイセス・リシリエンシス
（Streptomyces rishiriensis）が最も近縁と
考えられる。しかしながら、SP−265株は、
AT−265及びAT−265−Ｂ物質を生産する
特徴を有するので、ストレプトマイセス・リ
シリエンシス・サブスピーシズSP−265
（Streptomyces rishiriensis subspecies SP
−265）と命名した。該菌株は工業技術院微
生物工業技術研究所に微生物保管委託申請書
受理番号第5921号として登録されている。この発明者等が分離した該菌株は、AT−
265物質およびAT−265−Ｂ物質を生産する
が、ストレプトマイセス属に属する菌がAT
−265物質およびAT−265−Ｂ物質を生産す
ることは知られていない。 (B) SP−265株の培養本菌株の培養においては通常の放線菌の培養
法が一般に用いられる。培養に用いられる培地
としては、ストレプトマイセス属に属するAT
−265物質生産菌が利用する栄養源を含有する
培地であればよい。すなわち合成培地、半合成
培地あるいは天然培地が用いられ、培地の組成
としては、たとえばグルコース、シユークロー
ス、でん粉等、窒素源としては肉エキス、ペプ
トン、大豆粉、コーンスチープリカー、乾燥酵
母、硫酸アンモニウム、その他有機または無機
の窒素源が用いられる。このほか金属の燐酸塩
や炭酸塩、塩化物が添加される。培養中の発泡
の著しい時はシリコン、植物油、鉱物油等の消
泡剤を添加するとよい。培養温度は25℃〜30℃前後が適当であり培養
容量の増大に従つて適宜種培養を行つて接種す
る。本培養の培養時間は60〜100時間位である。以上述べた培養条件は使用生産菌株の特性に
応じてそれぞれの最適の条件を選択して適用さ
れる。このようにして培養物中に蓄積されたAT−
265物質およびAT−265−Ｂ物質は主に培養液
中に含有されているので、遠心分離または過
により菌体を除去した後、液から有効物質を
精製単離する。 (C) AT−265およびAT−265−Ｂの精製・単離
培養液から本物質の精製単離には微生物代謝
生産物をその培養液から単離するために用いら
れる分離精製の方法が利用される。すなわち、
イオン交換樹脂による吸脱着法、シリカゲルカ
ラムクロマトグラフイー、セフアデツクスLH
−20カラムクロマトグラフイー、ダイヤイオン
HP−20等の吸脱着法、溶媒による抽出法等を
適当に組合せて用いることができる。次にその
一例を示す。すなわち、培養液を酢酸エチルで抽出す
る。この抽出操作を数回繰り返し、抽出画分を
集めて減圧下で濃縮する。この濃縮液をあらか
じめクロロホルムに懸濁しカラムにつめたシリ
カゲルに通し、メタノールで溶出する。溶出画
分のうちAT−265およびAT−265−Ｂの含ま
れる画分を集め、減圧下で濃縮したあと、メタ
ノールで懸濁し、カラムに充填したセフアデツ
クスLH−20に通し、メタノールで溶出する
と、AT−265−Ｂが溶出され、ついでAT−
265が溶出されてくる。各々の画分を集め減圧
下で濃縮してメタノールを溜去したあと、メタ
ノールあるいは水等で結晶として得られる。このようにして得られるAT−265およびAT−
265−Ｂの理化学的性質は表１に示すとおりであ
る。

【表】 AT−265およびAT−265−Ｂの薄層クロマト
グラフイーのRf値は表−２のとおりである。

【表】

【表】 AT−265およびAT−265−Ｂに関するこれら
の諸性質に加えて ¹³C−NMR、FDマススペク
トル、インビームマススペクトル等による構造分
析の結果から、AT−265は、5′−スルフアモイル
−２−クロロアデノシンと同定した。またAT−
265−Ｂは、２−クロロアデノシンと同定した。 AT−265および／又はAT−265−Ｂの各種細
菌に対する抗菌スペクトル（ハートインフイージ
ヨン培地を用い、寒天稀釈法により測定した（37
℃、20時間））を示すと表−３のとおりである。

【表】前記のようにAT−265は抗菌作用を有してお
り、またAT−265−Ｂは弱い抗菌作用を有して
おり、すでに知られているような方法によつて合
成的にAT−265に変換することができ（G.R.
Gough Journal of Medicinal
Chemistry1978vol 21(6) 520〜525）、抗菌作用
を増大することができ、医薬あるいは動物薬とし
て使用できる。次にこの発明の実施例を示す。実施例１ポルペプトン１％、酵母エキス0.5％、グルコ
ース0.5％の組成の培地を、500ml容振とうフラス
コ10本に各100mlづつ分注し、常法どおり滅菌し
た後これらにストレプトマイセス・リシリエンシ
ス・サブスペシス・SP−265株（微生物委託申請
書受理番号第5921号）を接種し、27℃で２日間培
養を行う。別に溶性デンプン１％、綿実粕0.5％、
酵母エキス0.5％、りん酸１カリウム0.2％、りん
酸２カリウム1.0％、硫酸マグネシウム（７水化
物）0.01％、塩化コバルト1ppmの組成の培地15
を常法どおり滅菌した後これに上記培養物５％
を接種する。次いで毎分15の無菌空気を通し、
毎分300回転の撹拌を行いながら27℃で５日間培
養を行う。培養終了後培養液にハイフロースーパーセル
（Johns−Manville Sales Corp.製）３％を添加
し、過する。得られた液15を酢酸エチルで
３回抽出する。抽出液を減圧蒸留し濃縮する。次
いでこの濃縮液をクロロホルムに浸したシリカゲ
ル（メルク社製）２を充填したカラムに通し、
最初クロロホルム500ml、クロロホルム：メタノ
ール（９：１）500ml、クロロホルム：メタノー
ル（９：２）４、クロロホルム：メタノール
（７：３）１順に溶出を行う。目的物はクロロ
ホルム：メタノール（８：２）にて溶出されてく
る。溶出液を濃縮し、セフアデツクスLH−20
（フアルマシア社製）のカラム（直径50mm、長さ
100cm）に通し、メタノールにて溶出を行う。約
２の溶出液が溶出された所にAT−265−Ｂ物
質が、次に約2.5の溶出液が溶出された所にAT
−265物質が溶出されてくる。各画分を減圧濃縮、乾燥してそれぞれ白色粉末
を得た。AT−265の白色粉末を水に溶かして再
結晶すると白色針状結晶が得られる。収量は７mg
であつた。また、AT−265−Ｂの白色粉末をメ
タノールに溶かして再結晶すると白色針状結晶10
mgが得られた。実施例２実施例１の如く培養した種培養を溶性デンプン
２％、綿実粕２％、りん酸１カリウム0.2％、り
ん酸２カリウム1.0％、硫酸マグネシウム（７水
化物）0.01％、塩化コバルト5ppmの組成の培地
15を常法どおり滅菌した後、５％接種し、毎分
300回転の撹拌を行いながら27℃で５日間培養を
行う。培養終了後、菌体を遠心分離して除いた液を
ダイヤイオンHP−20（三菱化成製）１のカラ
ムに通し、吸着させる。溶出は、10％メタノー
ル、20％メタノール、30％メタノール、40％メタ
ノール各１にて行う。活性画分は30％メタノー
ルにて溶出がなされる。活性画分を濃縮し、エー
テルに浸したシリカゲル（Merk社製）に通し、
エーテル：メタノールの比を徐々にメタノール含
量を上げて溶出を行う。目的の画分はエーテル：
メタノールの比が９：１において溶出されてく
る。目的画分を合わせて濃縮し、セフアデツクス
LH−20のカラムに通す。メタノールにて溶出を
行うとAT−265−Ｂ物質、次にAT−265物質が
溶出されてくる。各画分を減圧濃縮して、結晶化を行うと、両物
質共に、白色針状結晶として得られる。収量は
AT−265が10mg、AT−265−Ｂが15mgであつた。
尚、これらの物質の性状を表−１に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図は、それぞれAT−265お
よびAT−265−Ｂの紫外部吸収スペクトルを、
第３図および第４図は、それぞれAT−265およ
びAT−265−Ｂの赤外吸収スペクトルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１ストレプトマイセス属に属し、下記一般式
（）においてＲがSO₂NH₂である構造式を有す
る抗生物質AT−265および下記一般式（）に
おいてＲがＨである構造式を有する抗生物質AT
−265−Ｂを生産する能力を有する微生物を栄養
培地に培養し、培養物中に抗生物質AT−265お
よび／又はAT−265−Ｂを蓄積せしめ、該培養
物から該蓄積された抗生物質を採取することを特
徴とする抗生物質AT−265および／又はAT−
265−Ｂの製造法。