JPH04352783A - １２員環マクロライド系化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗腫瘍作用を有する新
規な１２員環マクロライド系化合物に関する。

【０００２】

【従来の技術】本発明の化合物と構造類似で同様の作用
を持つ化合物は知られていない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗腫
瘍作用を有する新規な化合物を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、制癌活性
を有する新規物質を土壌分離菌の中から得るべく探索研
究を重ねた結果、本発明者らの見出した特定の微生物が
、癌培養細胞に対して増殖抑制作用を有する新規な生理
活性物質を生産することを見出し本発明を完成するに至
った。本発明は、

【０００５】

【化２】

【０００６】で表される化合物（以下、これをＦＤ−８
９５と称する。）である。ＦＤ−８９５を生産する菌株
は、本発明者らが、沖縄県西表島で採取した土壌より新
たに分離した菌株であり、微生物の名称「ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ・ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　　Ａ−９
５６１」及び微生物寄託番号「微工研菌寄第１２２２３
号（ＦＥＲＭ　　Ｐ−１２２２３）」として、工業技術
院微生物工業技術研究所に寄託されている。この菌学的
性状を以下に示す。 ■　　形態 本菌株の栄養菌糸は合成寒天培地及び天然寒天培地にお
いてよく発達し、不規則に分枝する。また隔壁は認めら
れない。胞子はスターチ・無機塩寒天培地およびオート
ミール寒天培地などで栄養菌糸より伸長した気菌糸の先
端に良好に形成される。顕微鏡で観察すると、胞子形成
菌糸の分岐方法は単純分岐で、胞子は通常気菌糸の先端
に螺旋状に形成される。胞子は１０個以上連鎖し、表面
は瘤状である。胞子の形成は、短円筒形でその大きさは
、１．０〜１．２μｍ×０．８〜０．９μｍである。 菌核、胞子嚢、鞭毛胞子は観察されない。 ■　　培地上での生育状態 各種培地上で２８℃、１４日間培養した時の肉眼による
観察結果を表１に示す°

【０００７】

【表１】

【０００８】■　　生理的性質 １）生育温度範囲 イースト・麦芽エキス培地で２４．５〜３０℃の範囲で
良好に生育する。１５℃以下、３８℃以上の温度範囲で
は生育しない。 ２）生化学的性質 ａ）好気性、嫌気性の区別；好気性 ｂ）ゼラチンの液化；陽性 ｃ）脱脂乳の凝固；陰性 ｄ）脱脂乳のペプトン化；陽性 ｅ）スターチの加水分解；陽性 ｆ）メラニン様色素の生成；陰性 ｇ）細胞壁の型；Ｉ型 ｈ）メナキノン組成；ＭＫ−９（Ｈ６，Ｈ８）３）炭素
源の利用 （プリドハム・ゴドリーブ寒天培地上）利用する：Ｌ−
アラビノース、Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、Ｄ−
フラクトース、シュクロース、イノシトール、ラムノー
ス、ラフィノース、Ｄ−マンニット

【０００９】以上の
性状から本菌株が放線菌中、ストレプトミセス属に属す
ることが明らかとなったので、上記諸性状をＩ．Ｓ．Ｐ
．「ジ・インターナショナル・ストレプトミセス・プロ
ジェクト」、バージー著「マニュアル・オブ・シスマテ
ック・バクテリオロジー」第４巻（１９８９年）及びワ
ックスマン著「ジ・アクチノミセテス」第２巻（１９６
１年）に報告されている多くの既知菌株と比較した結果
、本菌株は、ストレプトミセス・ハイグロスコピカス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ
）に最も近い性状を示していた。 以上の結果より本菌株はストレプトミセス・ハイグロス
コピカスと種を同じくするものと判断し、本菌株をスト
レプトミセス・ハイグロスコピカス　　Ａ−９５６１と
命名した。この培養液中に生産されたＦＤ−８９５を単
離するには、発酵生産物を採取する一般的な方法に準じ
て行えば良い。すなわち各種の栄養物質を含む培地でＳ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕ
ｓ　　Ａ−９５６１株を好気的条件下で培養し、培養終
了後、培養液をアセトン抽出し、更に酢酸エチルエステ
ルにて抽出する。抽出されたＦＤ−８９５の画分を濃縮
してシロップ状とする。このシロップをシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー、ゲルろ過カラムクロマトグラフ
ィーに付すことにより、ＦＤ−８９５を精製単離するこ
とができる。

【００１０】以上の精製法によって得られたＦＤ−８９
５の理化学的性質を以下に示す。 （１）外観：白色粉末 （２）融点：７２〜７６℃ （３）質量分析値： ＥＩＭＳスペクトル　　ｍ／ｚ　　５６６（Ｍ＋）陽イ
オンＦＡＢＭＳスペクトル　　ｍ／ｚ　　５６７（Ｍ＋
Ｈ）＋ 陰イオンＦＡＢＭＳスペクトル　　ｍ／ｚ　　５６５（
Ｍ−Ｈ）− （４）ＥＩ−高分解能マススペクトル：実測値：５６６
．３４６５ 理論値：５６６．３４５５（Ｃ３１Ｈ５０Ｏ９として計
算） （５）分子式：Ｃ３１Ｈ５０Ｏ９ （６）分子量：５６６ （７）比旋光度： ［α］Ｄ２５＝２０．０°（ｃ＝０．１，メタノール溶
液） （８）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液で測定し
た結果、 （９）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 （１０）１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中、
４００ＭＨｚで測定したスペクトルを図２に示す。 （１１）１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中
、１００ＭＨｚで測定したスペクトルを図３に示す。 （１２）溶剤に対する溶解性：メタノール、クロロホル
ム、アセトン、酢酸エチルエステルに易溶。ｎ−ヘキサ
ンに難溶。水に不溶。 また、ＦＤ−８９５はその元素分析値，分子量，紫外線
スペクトル，赤外線スペクトル，１Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル，１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルの解祈によりその構造式
が化２のように決定された。

【００１１】

【発明の効果】本発明の化合物は癌培養細胞に対して増
殖抑制作用を有するので医薬として有用である。

【００１２】

【実施例】以下、実施例および試験例を挙げて本発明を
具体的に説明する。 実施例 （１）１００ｍｌ当りオートミール２ｇ、グルコース２
ｇ、塩化ナトリウム０．３ｇ、肉エキス０．３ｇ、硫酸
第二鉄０．０４ｇ、塩化マンガン（４水和物）０．０４
ｇ、炭酸カルシウム０．３ｇを含む無菌液体培地にＳｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ
　　Ａ−９５６１株を接種し、２８℃、９６時間振とう
培養した。次に内容量５Ｌのミニジャー２基を用いて種
培地と同じ組成の無菌培地３Ｌに前記培養液１００ｍｌ
を接種し、２８℃、９６時間通気攪拌培養した。 （２）培養終了後、２基分の培養液６Ｌをアセトン６Ｌ
で抽出した。アセトンを除去した後、酢酸エチルエステ
ル６Ｌで抽出を行い、無水硫酸ナトリウムで脱水後、濃
縮し褐色のシロップ状物質２．２ｇを得た。 （３）シロップ状物質をクロロホルムに溶解し、クロロ
ホルムで調製したシリカゲルを充填した５００ｍｌのカ
ラムに吸着させ、メタノールの濃度を徐々にあげながら
メタノール／クロロホルム（９８：２〜９６：４）溶液
で溶出した。活性画分を合わせ、濃縮乾固し、油状物質
４１５ｍｇを得た。 （４）前項の油状物質４１５ｍｇを、メタノール３ｍｌ
に溶解し、メタノールで調製したセファデックスＬＨ−
２０（商品名，ファルマシア社製）を充填した４００ｍ
ｌのカラムを用いて、クロロホルム：メタノール：ｎ−
ヘキサン（５：１：５）でゲルろ過を行った。活性画分
を集め、油状物質６７ｍｇを得た。 （５）前項の薄黄色の油状物質６７ｍｇを、メタノール
１ｍｌに溶解し、メタノールで調製したトヨパール（東
洋ソーダ社製）を充填した３５０ｍｌのカラムに吸着さ
せ、同一溶媒にてゲル濾過を行い、活性画分を集め、白
色粉末３９ｍｇを得た。 （６）前項の白色粉末３９ｍｇを７０％メタノール２ｍ
ｌに溶解し、７０％メタノールで調製した逆相シリカゲ
ルのクロマトレックス（商品名，フジ−デビットソン社
製）を充填した１００ｍｌのカラムに吸着させ、同一溶
媒にて溶出し、活性画分を集め、白色粉末１８ｍｇを得
た。

【００１３】試験例（各種培養細胞に対する増殖阻害作
用） （検体）実施例で得られた白色粉末１０ｍｇをメタノー
ルに溶解し、目的濃度となるように滅菌生理食塩水にて
希釈したものを用いた。 （試験細胞） ■　　Ｐ３８８　　マウス白血病 ■　　Ｌ−１２１０　　マウス白血病 ■　　ＨＬ−６０　　ヒト白血病 （使用した培養液） ■　　ＲＰＭＩ−１６４０培地 （試験方法）前記培養液を用いて各種癌細胞を、２×１
０４〜１×１０５／ｍｌとし、直径３５ｍｍの６穴シャ
ーレに２ｍｌずつ分注した。次いで目的濃度にあらかじ
め希釈した検体５０μｌを、培養開始と同時に添加した
。試験細胞は、３７℃、５％炭酸ガス培養器内で３〜４
日間培養を続けた後、生細胞を測定し、試料濃度と阻害
率から、ＩＣ５０値（５０％阻害のための濃度）を求め
た。 （結果）結果は表２に示す。

【００１４】

【表２】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＫＢｒ錠にて測定したＦＤ−８９５の赤外線吸
収スペクトルを示す。

【図２】重クロロホルム中、４００ＭＨｚで測定したＦ
Ｄ−８９５の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。

【図３】第３図は重クロロホルム中、１００ＭＨｚで測
定したＦＤ−８９５の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す
。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 【化１】 で表される化合物。