JPH02149515A - アルドースリダクターゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はアルドースリダクターゼ阻害作用を有し、白内
障、網膜症、神経障害、腎障害等の糖尿病における各種
合併症の治療に有用なアルドースリダクターゼ阻害剤に
関するものである。

［従来の技術および課題］ 近年、白内障、網膜症、腎障害等の糖尿病における各種
合併症の成因として、グルコースの代謝経路であるポリ
オール経路を介した細胞内ソルビトールの蓄積が注目さ
れている。ポリオール経路は、グルコース、ガラクトー
ス等のアルドースがソルビトール、ガラクチトール等の
ポリオールを介してフルクトース等のケトースに変換さ
れる代謝経路であり、免疫組織化学的手法により全身諸
臓器に広く存在することが明らかになってきた。

この経路の第一段階であるアルドース−ポリオール間の
変換を触媒する酵素をアルドースリダクターゼといい、
この酵素がポリオール経路の律速酵素と考えられている
。このアルドースリダクターゼを阻害し、ソルビトール
の生産や蓄積を低下させることが、糖尿病患者における
合併症の治療に有効であるという報告がなされている。

そこで、アルドースリダクターゼ阻害作用を育する薬剤
の開発が望まれていた。

［課題を解決するための手段］ 本発明者等は、優れたアルドースリダクターゼ阻害剤を
提供すべく鋭意研究を重ねた結果、臨床的にも広く用い
られている生薬決明子および何首烏またはその他同居植
物に含まれる下記式（式中、Ｒ１は水酸基またはメトキ
シル基、Ｒ。

は水素原子または水酸基、Ｒ５は水酸基またはメトキシ
ル基、Ｒ１は水素原子または水酸基、Ｒ６はメトキシル
基または水酸基を示す。） で表される化合物がアルドースリダクターゼ阻害作用を
有することを見いだし、本発明を完成させた。

すなわち、本発明は下記式 （式中、Ｒ１は水酸基またはメトキシル基、Ｒ３は水素
原子または水酸基、Ｒ１は水酸基またはメトキシル基、
Ｒ３は水素原子または水酸基、Ｒ５はメトキシル基また
は水酸基を示す。） で表される化合物（以下、式の化合物と称する。）を有
効成分とするアルドースリダクターゼ阻害剤である。

式の化合物は降圧、抗菌作用を有することで知られる決
明子または降脂血、抗菌作用を有することで知られる何
首鳥より下記の様にして単離することができる。

すなわち決明子または何首鳥をメタノール、エタノール
、クロロホルム、エーテル等の有機溶媒を用いて室温か
ら使用する溶媒の沸点の範囲の温度で抽出する。得られ
た抽出物を水とベンゼン、ｎ−ヘキサン等の水不溶性溶
媒とで分配するか、または酢酸エチル等の適当な溶媒に
溶解して可溶部と不溶部に分けた後、シリカゲル、ケイ
酸、ポリアミド等の担体を用いたカラムクロマトグラフ
ィーに１回またはそれ以上付すことによって得ることが
できる。

溶出に用いる溶媒の具体例としてはベンゼン、酢酸エチ
ル、メタノール、アセトン、ｎ−ヘキサン等が挙げられ
る。

また、場合によっては水、メタノール、エタノール、ア
セトン等の溶媒を用いて再結晶することによって精製し
てもよい。

以下に式の化合物の製造の具体例を示す。

具体例！ 粉砕した決明子５　ｋｇを７０％メタノール３５＆で２
回温浸抽出し、得られた抽出液より溶媒を除去した。こ
のメタノールエキスを水およびベンゼンで分配抽出し、
得られたベンゼン層より溶媒を除去してベンゼンエキス
３０ｇを得た。このベンゼンエキスを３０倍量のケイ酸
（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ）を用いたカラムクロマト
グラフィーに付し、ベンゼン−酢酸エチル系で溶出し、
フラクション！およびフラクション２を得た。

フラクション！より黄色針状晶２０肩９を得た。

この黄色針状晶は下記に示す理化学的性質を有し、これ
らのデータより式中Ｒ、、Ｒ３が水酸基、Ｒ、、Ｒ，が
水素原子、Ｒ６がメトキシル基で表されるクエスチンで
あると同定した。

融点＝３００〜３０３℃ 赤外線吸収スペクトル　ν　ユＩα−１＝３２５０．１
６８０．１６３０．１５９０プロトン核磁気共鳴スペク
トル （δ　ｐｐｍ　ｉｎ　ＣＤＣｌ５）： ２．４３（３Ｈ，ｂｒ、）、４．０４（３１−１，ｓ）
。

６．７９　（ｌ　Ｉ−１、ｄ　、Ｊ　＝　２．４　Ｈｚ
）。

６．９３（Ｉ　Ｈ，ｓ）、７．０２（ｌ　Ｈ，ｂｒ、）
７．３７（Ｉ　Ｈ，ｄ）、７．５５（ｌ　Ｈ，ｂｒ、）
。

１３．１１（ｌ　Ｈ，ｓ） マススペクトル ＨＲ−Ｍ　Ｓ　　　ｍ／ｚ　　： 計算値　２８４．０６８４　　Ｃ，。１４１２０５実測
値　２８４．０６８９ 具体例２ 具体例１で得たフラクション２をポリアミドカラムに付
し、７０％メタノール溶出部分より、黄橙色針状晶を１
９得た。

この黄橙色針状晶は下記に示す理化学的性質を存し、こ
れらのデータより式中、Ｒ１およびＲ３がメトキシル基
、Ｒｔ　、　Ｒ４およびＲ６が水酸基で表されるアウラ
ンチオーオブツソンであると同定した。

融点：２７５−２７８℃ 赤外線吸収スペクトル　ν　七Ｓ、、−１゜３４５０．
３３００，１６５５．１６２５゜プロトン核磁気共鳴ス
ペクトル （δ　Ｊ）ｐ＋ｎ　ｉｎ　ＣＤＣ１，）２　、３９　（
３Ｈ、ｂｒ、） ４．０２，４．１２（ｅａｃｈ　３１−１．ｓ）６．３
７，６．６７（ｅａｃｈ　　ＩＨ，ｓ）。

７．３　９（Ｉ　　Ｈ，ｓ）、７．９　４（Ｉ　　Ｈ，
ｂｒ、）マススペクトル ＨＲ−Ｍ　Ｓ　　ｍ／ｚ　： 計算値　３３０．０７３９　、ＣＩ？Ｈ１４０７実測値
　３３０．０７４０ 具体例３ 具体例２で得られた７０％メタノール溶出部分より、黄
褐色針状晶（ａｏｏｘｇ）を得た。

この黄褐色針状晶は下記に示す理化学的性質を存し、こ
れらのデータより式中ｒ（、、Ｒｔ、Ｒ、およびＲ６が
水酸基、Ｒ１がメトキシル基で表されるｌ−デスメチル
アウランチオーオブッシンであると同定した。

融点：＞３００°Ｃ 赤外線吸収スペクトル　ν　ｌｌｌ：Ｘ　ｃ７１１−　
’　：３４００．１６７０，１６２０．１５８０プロト
ン核磁気共鳴スペクトル （δ　ｐｐｍ　ｉｎ　ＣＤＣｌ５）： ２．３８（３Ｈ，ｂｒ、）、４．１２（３Ｈ，ｓ）。

６．３　　＋、６．５　７．１　２．２０１　２．４　
２（ｅａｃｈ　　ＩＨ，ｓ）、７．４　５（Ｉ　　Ｈ，
ｓ）。

７　．６　８　（Ｉ　　Ｈ、ｂｒ、） マススペクトル ＨＲ−ＭＳ　　ｍ／ｚ： 計算（＋ａ　　３１６．０５８２．Ｃ，ｅＨ，、Ｏ？実
測値　３１６．０５９８ 具体例４ 何首烏４．３に９をクロロホルム１０σで３回抽出し、
得られた抽出液より溶媒を除去してエキス２６０ｇを得
た。このエキスを酢酸エチルにて処理し可溶部と不溶部
に分け、不溶部をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
に付し、５％アセトンヘキサン溶出フラクションをエタ
ノールから再結晶し橙色針状晶（４４５，６ａｙ）を得
た。

この橙色針状晶は下記に示す理化学的性質を存し、これ
らのデータより式中Ｉ’ｔ、、Ｒ３およびＲ６が水酸基
、Ｒ２およびＲ４が水素原子で表されるエモジンである
と同定した。

赤外線吸収スペクトル　ν　二ｕＪｏｌα−１：プロト
ン核磁気共鳴スペクトル （δ　ｐｐｍ　ｉｎ　ＭｅＯＩｌ−ｄａ／ａｃｅｔｏｎ
ｅ−ｄｅ＝１：１）：２．４３　（３Ｈ，ｓ　） ６．５４　（ｌ　Ｈ、ｄ　、Ｊ　＝　２．４　Ｈ’ｚ）
。

７．０７　（ｌ　Ｈ、ｂｒ、、Ｊ　＝　２　Ｈｚ）。

７．１４（１１−１，ｄ、Ｊ　＝２．４Ｈｚ）。

７．５１　（１１−１、ｂｒ、、Ｊ　＝　２　Ｈｚ）マ
ススペクトル Ｅｌ−ＭＳ　　ｍ／ｚ： ２　７　０　（Ｍ’）、２４　２　（Ｍ”−ＣＯ）次に
、式の化合物がアルドースリダクターゼ阻害作用を有す
ることを実験例を挙げて説明する。

実験例 ６週齢のウィスター（Ｗｉｓｔａｒ）系雄性ラットをエ
ーテル麻酔下に致死させ、直ちに水晶体を摘出し、２０
℃にて保存した。

水晶体は０．５朋フ工ニルメチルスルホニルフ融点＝２
５６〜２５７℃ ロリドを含む１３５　ｍＭナトリウムー力リウムーリン
酸緩衝液（ｐＨ７，０）にてホモジナイズして、３０，
０００ｒｐｍで３０分間遠心した。その上清をアルドー
スリダクターゼ活性阻害の検体とした。

また、以上の操作はすべて４℃で行い、検体は２０℃で
保存した。

アルドースリダクターゼ活性の測定はデュフラン（Ｄｕ
ｆｒａｎｅ）らの方法［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｍｅ
ｄｉｃｉｎｅ、３２゜９９−１０５（１９８４）参照］
により行った。すなわち、１００鱈硫酸リチウム、０　
、０３　ｊ＋Ｍ　ＮＡＤＰＨ（還元型ｎｉｃｏＬｉｎａ
ｍｉｄｅ　ａｄｅｎｉｎｅ　ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、および基質として２０ＪＩＭ
グルコースを含むように調製した１３５ＪＩＭナトリウ
ムーカリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ７，０）８００７Ｊ
に、上記の検体１００ｄおよび上記具体例で得た化合物
をそれぞれＤＭＳＯに１．０ｘｌＯ−’〜４．０ｘｌＯ
−’Ｍの終濃度となるように溶解させた薬物溶解液１０
０Ａをそれぞれ加え、３０℃にて３０分間反応させた。

次に、０．５Ｎ塩酸０．３７を加えて反応を停止させ、
１０１Ｍイミダゾールを含む６Ｎ水酸化ナトリウムｌｄ
を添加することにより、前記の反応によって生じたＮＡ
ＤＰ（酸化型ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ　ａｄｅｎｉｎ
ｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｈｏｓｐｂａｔｅ）を
蛍光物質に変換して、３０分後にその蛍光強度を測定し
た。蛍光強度は、室温で分光光度計Ｆ−４０００（株式
会社日立製作所製）を用いて励起波長３６０ｙ＋ｍ、蛍
光波長４６０ｒｙｔの条件で測定した。また、具体例で
得た化合物の溶解液を加えるかわりにＤＭＳＯを加える
以外は上記と同様にして反応させて測定した蛍光強度を
コントロール値とした。

アルドースリダクターゼはＮＡＤＰＨを補酵素として、
ＤＬ−グリセルアルデヒドあるいはグルコースをポリオ
ールに変換する酵素であり、この反応に伴ってＮ　Ａ　
Ｄ　Ｐ　ＩＩはＮＡＤＰに変化する。従ってＮＡＤＰが
少なければ、アルドースリダクターゼが阻害されている
ことになる。

その結果を、阻害率（％）および５０％阻害濃度（ｔＣ
Ｓ。）として、第１表に示す。

第　　　　１　　　　表 次に、具体例で得た化合物の経口投与での急性毒性試験
を　ＩＣＲ系雄性マウスを用いて行ったところ製造例で
得た化合物はＩ９／に９の経口投与で死亡例はなかった
。

このように、式の化合物は極めて毒性が低く、安全性の
高いものである。

次に、式の化合物の投与ｍおよび製剤化について説明す
る。

式の化合物はそのまま、あるいは慣用の製剤担体と共に
動物および人に投与することができる。

投与形態としては、特に限定がなく、必要に応じ適宜選
択して使用され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、
散剤等の経口剤、注射剤、平削等の非経口剤が挙げられ
る。

経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の年
令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で本発
明の化合物の重量として５〜５００句を、■日数回に分
けての服用が適当と思われる。

経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、
カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩
類等を用いて常法に従って製造される。

この種の製剤には、適宜前記賦形剤の他に、結合剤、崩
壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着
色剤、香料等を使用することができる。それぞれの具体
例は以下に示す如くである。

［結合剤］ デンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、
ヒドロキシプロピルスターチ、メヂルセルロース、カル
ボキンメチルセルロースナトリウム、ヒドロキノプロピ
ルセル［ｌ−ス、結晶セルロース、エチルセルロース、
ポリビニルピロリドン、マクロゴール。

［崩壊剤］ デンプン、ヒドロキンプロピルスターチ、カルボキンメ
チルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロー
ス力ルンウム、カルボキシメチルセルロース、低置換ヒ
ドロキンプａピルセルロース。

［界面活性剤］ ラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸
エステル、ポリソルベート　８０゜［滑沢剤コ タルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステ
ル、ステアリン酸マグネンウム、ステアリン酸カルシウ
ム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコー
ル。

［流動性促進剤コ 軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケ
イ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム。

また、式の化合物は、懸ｆＡ液、エマルジョン剤、シロ
ップ剤、エリキシル剤としても投与することができ、こ
れらの各種剤形には、矯味矯臭剤、着色剤を含有しても
よい。

非経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の
年令、体重、疾弘の程度により異なるが、通常成人で式
の化合物の重量として１日０．５〜１００即までの静注
、点滴静注、皮下注射、筋肉注射が適当と思われる。

この非経口剤は常法に従って製造され、希釈剤として一
般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射
用植物油、ゴマ７１１１、ラッカセイ油、ダイズ油、ト
ウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレング
リコール等を用いることができる。さらに必要に応じて
、殺菌剤、防腐剤、安定剤を加えてもよい。また、この
非経口剤は安定性の点から、バイアル等に充填後冷凍し
、通常の凍結乾燥技術により水分を除去し、使用直前に
凍結乾燥物から液剤を再調製することもできる。さらに
、必要に応じて適宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛
化剤等を加えても良い。

その池の非経口剤としては、外用液剤、軟膏等の塗布剤
、直腸内投与のための平削等が挙げられ、常法に従って
製造される。

次に、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが
、本発明はこれによりなんら制限されるものではない。

実施例１ ■コーンスターチ　　　　　　４４９ ■結晶セルロース　　　　　　４０９ ■カルボキンメヂル セルロースカルンウム　　　５９ ■軽質無水ケイ酸　　　　　　０．５９■ステアリン酸
マグネンウム　０．５９■具体例！で得た化合物　　　
１ｒＪｇ計　　　　　１００ｇ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、打鍵機にて
圧縮成型して一部２００　ｔｔｔｑの錠剤を得た。

この錠剤−錠には、具体例１で得た化合物２０句が含有
されており、成人１日５〜２５錠を数回にわけて服用す
る。

実施例２ ■結晶セルロース　　　　　８４．５９■ステアリン酸
マグネンウム　０．５９■カルボキシメチル セルロース力ルンウム　　　　５ｇ ■具体例２で得た化合物　　　１０ｇ 計　　　　　　＋ｏｏｇ 上記の処方に従って■、■および■の一部を均一に混合
し、圧縮成型した後、粉砕し、■および■の残量を加え
て混合し、打鍵機にて圧縮成型して一部２００　Ｒ９の
錠剤を得た。

この錠剤−錠には、具体例２で得た化合物２０Ｒ９が含
有されており、成人１日５〜２５錠を数回１こわけて刀
反用する。

実施例３ 実施例４ ■結晶セルロース　　　　　４９．５９■ｌＯ％ヒドロ
キシプロピル セルロースエタノール溶液　３５９ ■カルボキシメチル セルロースカルシウム　　　５ｇ ■ステアリン酸マグネシウム　０．５９■具体例３で得
た化合物　　　！０９ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■、■および■を均一に混合し、常
法によりねっ和し、押し出し造粒機により造粒し、乾燥
・解砕した後、■および■を混合し、打錠機にて圧縮成
型して一部２００〜の錠剤を得た。

この錠剤−錠には、具体例３で得た化合物２０１９が含
有されており、成人１日５〜２０錠を数回にわけて服用
する。

■コーンスターチ　　　　　　　８４９■ステアリン酸
マグネシウム　０．５９■カルボキシメチル セルロースカルシウム　　　５９ ■軽質無水ケイ酸　　　　　　０．５９■具体例４で得
た化合物　　　１０ｇ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、圧縮成型機
にて圧縮成型後、破砕機により粉砕し、篩別して顆粒剤
を得た。

この顆粒剤！９には、具体例４で得た化合物１００　Ｒ
９が含有されており、成人１日１−１０９を数回にわけ
て服用する。

実施例５ ■結晶セルロース　　　　　　５５９ ■ｌＯ％ヒドロキシプロピル セルロースエタノール溶液３５９ 体例１で得た化合　　　　ｌＯ 計　　　　　１０　０９ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、ねつ和した
。押し出し造粒機に上り造粒後、乾燥し、篩別して顆粒
剤を得た。

この顆粒剤１９には、具体例１で得た化合物１００１９
が含有されており、成人１日ｌ〜４９を数回にわけて服
用する。

実施例６ ■コーンスターチ　　　　　８９．５９■軽質無水ケイ
酸　　　　　　０．５９■　体ＰＪ２で　た化合　　　
　１０９計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、２００　Ｒ
９を２号カプセルに充填した。

このカプセル剤ｌカプセルには、具体例２で得た化合物
２０Ｍ９が含有されており、成人１日５〜２０カプセル
を数回にわけて服用する。

実施例７ ■注射用蒸留水　　　　　　８９．５９０大豆油　　　
　　　　　　　　５９ ■大豆リン脂質　　　　　　　２，５９■グリセリン　
　　　　　　　　２９ ■　体例３で得た化合物　　　　１９ 全量　　　　　　　１００ｇ 上記の処方に従って■を■および■に溶解し、これに■
と■の溶液を加えて乳化し、注射剤を得た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１は水酸基またはメトキシル基、Ｒ＿２は
   水素原子または水酸基、Ｒ＿３は水酸基またはメトキシ
   ル基、Ｒ＿４は水素原子または水酸基、Ｒ＿５は水酸基
   またはメトキシル基を示す。） で表される化合物を有効成分とするアルド−スリダクタ
   ーゼ阻害剤。