JPH028719B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH028719B2 JPH028719B2 JP57101628A JP10162882A JPH028719B2 JP H028719 B2 JPH028719 B2 JP H028719B2 JP 57101628 A JP57101628 A JP 57101628A JP 10162882 A JP10162882 A JP 10162882A JP H028719 B2 JPH028719 B2 JP H028719B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tryptophan
- acid
- resistant
- producing
- strain
- Prior art date
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- Expired - Lifetime
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は、発酵法によるＬ−トリプトフアン
（以下、トリプトフアンと記す）の製造法に関す
る。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或は３−インドールピルビン酸よりトリプ
トフアンを製造する方法が知られている。 これら前駆物質を使用する方法に対し、前駆物
質を使用しないで、糖類等を炭素源とし、バチル
ス属に属しトリプトフアンアナログに耐性を有す
る変異株を使用して直接発酵法によりトリプトフ
アンを生産する方法（特公昭48−18828、特公昭
53−39517）が開発されている。 そこで、本発明者らはバチルス属の微生物を用
いて更に糖類等の炭素源からトリプトフアンを直
接発酵法により安価に製造する方法を開発すべく
研究を行つた結果、バチルス属の上記のようなト
リプトフアンアナログ耐性の他に更にケイヒ酸あ
るいはヒドロケイヒ酸に耐性を有する微生物の中
に、従来知られているものより更に大量のトリプ
トフアンを生産する能力を有する菌株があること
も見い出した。この発明はこの知見に基づいて更
に研究の結果完成されたものである。 本発明の方法で使用される変異株は、バチルス
属に属しトリプトフアンアナログ及びケイヒ酸あ
るいはヒドロケイヒ酸に耐性を有し、かつトリプ
トフアンを生産する能力を有する微生物であり、
例えば、次のような変異株が使用される。 バチルス・ズブチリス AJ11906 FERM−
P6562（５−Ｆ−Trpr、Cinr） バチルス・ズブチリス AJ11907 FERM−
P6563（５−Ｆ−Trpr、Leu-、Cinr） バチルス・ズブチリス AJ11908 FERM−
P6564（５−Ｆ−Trpr、IMr、Cinr） バチルス・ズブチリス AJ11909 FERM−
P6565（５−Ｆ−Trpr、IMr、HCinr） ５・Ｆ・Trpr：５−フロオロトリプトフアン耐
性 Leu-：Ｌ−ロイシン要求性 IMr：インドールマイシン耐性 Cinr：ケイヒ酸耐性 HCinr：ヒドロケイヒ酸耐性 これら本発明で使用される変異株は、バチルス
属のトリプトフアンアナログ耐性のトリプトフア
ン生産菌を親株とし、これに通常の変異誘導操
作、例えば、紫外線照射或はＮ−メチル−N′−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以下、NGと
略す。）亜硝酸等の化学薬剤処理を施し、変異処
理した菌株を親株が生育できないような量のケイ
ヒ酸あるいはヒドロケイヒ酸を含有する平板寒天
培地で培養し、該平板培地上に生育するコロニー
を分離することによつて得られる。 上記の親株としては、トリプトフアンアナログ
耐性の他にトリプトフアン生産に有用な性質を有
するトリプトフアン生産菌、例えば、Ｌ−アルギ
ニン、Ｌ−リジン、Ｌ−ロイシンもしくはＬ−フ
エニルアラニン要求性のトリプトフアン生産菌
（特公昭53−39517号公報）、更にはトリプトフア
ンアナログ耐性でかつインドールマイシン耐性の
トリプトフアン生産菌（特開昭56−92796号公報）
等が使用される。具体例としては次のようなトリ
プトフアンアナログ耐性のトリプトフアン生産菌
が使用される。 バチルス・ズブチリス FT−145 FERM−
P1783（５−Ｆ−Trpr） バチルス・ズブチリス FFL−５ FERM−
P1786（５−Ｆ−Trpr＋Leu-） バチルス・ズブチリス AJ11483 FERM−
P5286（５−Ｆ−Trpr＋IMr） その他、本発明の変異株はバチルス属の野性株
を親株とし、これにケイヒ酸あるいはヒドロケイ
ヒ酸耐性を付与した後トリプトフアンアナログ耐
性を付与することによつても誘導することができ
る。この場合にも更にトリプトフアン生産に有用
な性質、例えば、Ｌ−フエニルアラニン、Ｌ−チ
ロシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−ヒスチジン等のアミ
ノ酸に対する栄養要求性、或はフエニルアラニン
アナログ耐性等を付与することが望ましい。 以下の実験例にて、本発明のケイヒ酸耐性トリ
プトフアン生産菌のケイヒ酸に対する耐性度及び
ヒドロケイヒ酸耐性トリプトフアン生産菌のヒド
ロケイヒ酸に対する耐性度を示す。 実験例 第１表に示す組成の最少培地を直径16.5mmの試
験管に4.0ml宛分注し、110℃で10分間加熱した。
これに別途フイルターで過（除菌）したケイヒ
酸（ヒドロケイヒ酸）溶液を、第２表に示す濃度
となるように加えて調体培地を調製した。 上記培地にケイヒ酸（ヒドロケイヒ酸）を含ま
ない最少培地で24時間培養して得られたバチル
ス・ズブチリス AJ11906、AJ11907、AJ11908
及びAJ11909の培養液を夫々各0.1ml宛接種し、
30℃で48時間振盪培養を行い、培養液の570nｍ
の吸光度を測定した。その結果を第２表に示す。 第１表 最少培地の組成（PH7.0） 成 分 濃 度 グルコース 5.0ｇ／ 硫酸アンモニウム 1.0 〃 KH2PO4 8.65 〃 MgSO4・7H2O 0.2 〃 FeSO4・7H2O 10mg／ MnSO4・4H2O 10 〃 クエン酸ナトリウム 0.5ｇ／ ※Ｌ−ロイシン 10mg／dl （※Ｌ−ロイシン要求株の場合のみ添加）
（以下、トリプトフアンと記す）の製造法に関す
る。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或は３−インドールピルビン酸よりトリプ
トフアンを製造する方法が知られている。 これら前駆物質を使用する方法に対し、前駆物
質を使用しないで、糖類等を炭素源とし、バチル
ス属に属しトリプトフアンアナログに耐性を有す
る変異株を使用して直接発酵法によりトリプトフ
アンを生産する方法（特公昭48−18828、特公昭
53−39517）が開発されている。 そこで、本発明者らはバチルス属の微生物を用
いて更に糖類等の炭素源からトリプトフアンを直
接発酵法により安価に製造する方法を開発すべく
研究を行つた結果、バチルス属の上記のようなト
リプトフアンアナログ耐性の他に更にケイヒ酸あ
るいはヒドロケイヒ酸に耐性を有する微生物の中
に、従来知られているものより更に大量のトリプ
トフアンを生産する能力を有する菌株があること
も見い出した。この発明はこの知見に基づいて更
に研究の結果完成されたものである。 本発明の方法で使用される変異株は、バチルス
属に属しトリプトフアンアナログ及びケイヒ酸あ
るいはヒドロケイヒ酸に耐性を有し、かつトリプ
トフアンを生産する能力を有する微生物であり、
例えば、次のような変異株が使用される。 バチルス・ズブチリス AJ11906 FERM−
P6562（５−Ｆ−Trpr、Cinr） バチルス・ズブチリス AJ11907 FERM−
P6563（５−Ｆ−Trpr、Leu-、Cinr） バチルス・ズブチリス AJ11908 FERM−
P6564（５−Ｆ−Trpr、IMr、Cinr） バチルス・ズブチリス AJ11909 FERM−
P6565（５−Ｆ−Trpr、IMr、HCinr） ５・Ｆ・Trpr：５−フロオロトリプトフアン耐
性 Leu-：Ｌ−ロイシン要求性 IMr：インドールマイシン耐性 Cinr：ケイヒ酸耐性 HCinr：ヒドロケイヒ酸耐性 これら本発明で使用される変異株は、バチルス
属のトリプトフアンアナログ耐性のトリプトフア
ン生産菌を親株とし、これに通常の変異誘導操
作、例えば、紫外線照射或はＮ−メチル−N′−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以下、NGと
略す。）亜硝酸等の化学薬剤処理を施し、変異処
理した菌株を親株が生育できないような量のケイ
ヒ酸あるいはヒドロケイヒ酸を含有する平板寒天
培地で培養し、該平板培地上に生育するコロニー
を分離することによつて得られる。 上記の親株としては、トリプトフアンアナログ
耐性の他にトリプトフアン生産に有用な性質を有
するトリプトフアン生産菌、例えば、Ｌ−アルギ
ニン、Ｌ−リジン、Ｌ−ロイシンもしくはＬ−フ
エニルアラニン要求性のトリプトフアン生産菌
（特公昭53−39517号公報）、更にはトリプトフア
ンアナログ耐性でかつインドールマイシン耐性の
トリプトフアン生産菌（特開昭56−92796号公報）
等が使用される。具体例としては次のようなトリ
プトフアンアナログ耐性のトリプトフアン生産菌
が使用される。 バチルス・ズブチリス FT−145 FERM−
P1783（５−Ｆ−Trpr） バチルス・ズブチリス FFL−５ FERM−
P1786（５−Ｆ−Trpr＋Leu-） バチルス・ズブチリス AJ11483 FERM−
P5286（５−Ｆ−Trpr＋IMr） その他、本発明の変異株はバチルス属の野性株
を親株とし、これにケイヒ酸あるいはヒドロケイ
ヒ酸耐性を付与した後トリプトフアンアナログ耐
性を付与することによつても誘導することができ
る。この場合にも更にトリプトフアン生産に有用
な性質、例えば、Ｌ−フエニルアラニン、Ｌ−チ
ロシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−ヒスチジン等のアミ
ノ酸に対する栄養要求性、或はフエニルアラニン
アナログ耐性等を付与することが望ましい。 以下の実験例にて、本発明のケイヒ酸耐性トリ
プトフアン生産菌のケイヒ酸に対する耐性度及び
ヒドロケイヒ酸耐性トリプトフアン生産菌のヒド
ロケイヒ酸に対する耐性度を示す。 実験例 第１表に示す組成の最少培地を直径16.5mmの試
験管に4.0ml宛分注し、110℃で10分間加熱した。
これに別途フイルターで過（除菌）したケイヒ
酸（ヒドロケイヒ酸）溶液を、第２表に示す濃度
となるように加えて調体培地を調製した。 上記培地にケイヒ酸（ヒドロケイヒ酸）を含ま
ない最少培地で24時間培養して得られたバチル
ス・ズブチリス AJ11906、AJ11907、AJ11908
及びAJ11909の培養液を夫々各0.1ml宛接種し、
30℃で48時間振盪培養を行い、培養液の570nｍ
の吸光度を測定した。その結果を第２表に示す。 第１表 最少培地の組成（PH7.0） 成 分 濃 度 グルコース 5.0ｇ／ 硫酸アンモニウム 1.0 〃 KH2PO4 8.65 〃 MgSO4・7H2O 0.2 〃 FeSO4・7H2O 10mg／ MnSO4・4H2O 10 〃 クエン酸ナトリウム 0.5ｇ／ ※Ｌ−ロイシン 10mg／dl （※Ｌ−ロイシン要求株の場合のみ添加）
【表】
【表】
【表】
本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機
塩類、その他必要に応じてアミノ酸、ビタミン等
の有機微量栄養素を含有する通常の栄養培地が使
用される。炭素源としてはグルコース、シユーク
ロース、マルトース、澱粉水解物、糖蜜等が使用
され、その他エタノール、酢酸、クエン酸等も単
独或は上記他の炭素源と併用して用いられる。窒
素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝
酸塩、尿素、ペプトン等有機或は無機の窒素源が
使用される。有機微量栄養素としてはアミノ酸、
ビタミン、脂肪酸、核酸、更にこれらのものを含
有するペプトン、カザミノ酸、酵母エキス、大豆
蛋白分解物等が使用され、生育にアミノ酸等を要
求する栄養要求性変異株を使用する場合には要求
される栄養素を補添することが必要である。無機
塩類としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシ
ウム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用される。 培養は通常の培養条件下で行えば良く、PHを５
ないし９、温度を20ないし40℃に制御しつつ１〜
４日間振盪培養又は通気撹拌培養することにより
培養液中に著量のトリプトフアンが蓄積される。
培養中にPHが下がる場合には、炭素カルシウムを
別殺菌して加えるか又はアンモニア水、アンモニ
アガス等のアルカリで中和する。又、有機酸を炭
素源とする場合はPHの上昇を鉱酸又は有機酸で中
和する。 培養液からトリプトフアンを採取する方法は、
公知のトリプトフアン回収方法に従つて行えば良
く、培養液から菌体を除去した後濃縮晶析する方
法或はイオン交換クロマトグラフイー等によつて
採取される。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第３表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500ml容フラスコに分注し、110℃で
10分間加熱した後、第４表に示す微生物をそれぞ
れ1/3スラント量植えつけ30℃で96時間振盪培養
した。それぞれの培養液中のトリプトフアン生成
量は第４表の如くであつた。 第３表 トリプトフアン生産用培地組成（PH7.0） 成 分 濃 度 グルコース 80ｇ／ 塩化アンモニウム 10 〃 KH2PO4 １ 〃 KCl ２ 〃 MnSO4・7H2O 10ml／ FeSO4・4H2O 10 〃 カザミノ酸 ４ｇ／ MgSO4・7H2O 0.4 〃 CaCO2 40 〃 ※Ｌ−ロイシン 20mg／dl （※Ｌ−ロイシン要求株の場合のみ添加） 第４表 トリプトフアン生成量 菌 株 （mg／ml） FT−145 1.90 AJ11906 3.5 FEL−５ 4.2 AJ11907 6.5 AJ11483 6.2 AJ11908 8.0 AJ11909 7.5
塩類、その他必要に応じてアミノ酸、ビタミン等
の有機微量栄養素を含有する通常の栄養培地が使
用される。炭素源としてはグルコース、シユーク
ロース、マルトース、澱粉水解物、糖蜜等が使用
され、その他エタノール、酢酸、クエン酸等も単
独或は上記他の炭素源と併用して用いられる。窒
素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝
酸塩、尿素、ペプトン等有機或は無機の窒素源が
使用される。有機微量栄養素としてはアミノ酸、
ビタミン、脂肪酸、核酸、更にこれらのものを含
有するペプトン、カザミノ酸、酵母エキス、大豆
蛋白分解物等が使用され、生育にアミノ酸等を要
求する栄養要求性変異株を使用する場合には要求
される栄養素を補添することが必要である。無機
塩類としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシ
ウム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用される。 培養は通常の培養条件下で行えば良く、PHを５
ないし９、温度を20ないし40℃に制御しつつ１〜
４日間振盪培養又は通気撹拌培養することにより
培養液中に著量のトリプトフアンが蓄積される。
培養中にPHが下がる場合には、炭素カルシウムを
別殺菌して加えるか又はアンモニア水、アンモニ
アガス等のアルカリで中和する。又、有機酸を炭
素源とする場合はPHの上昇を鉱酸又は有機酸で中
和する。 培養液からトリプトフアンを採取する方法は、
公知のトリプトフアン回収方法に従つて行えば良
く、培養液から菌体を除去した後濃縮晶析する方
法或はイオン交換クロマトグラフイー等によつて
採取される。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第３表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500ml容フラスコに分注し、110℃で
10分間加熱した後、第４表に示す微生物をそれぞ
れ1/3スラント量植えつけ30℃で96時間振盪培養
した。それぞれの培養液中のトリプトフアン生成
量は第４表の如くであつた。 第３表 トリプトフアン生産用培地組成（PH7.0） 成 分 濃 度 グルコース 80ｇ／ 塩化アンモニウム 10 〃 KH2PO4 １ 〃 KCl ２ 〃 MnSO4・7H2O 10ml／ FeSO4・4H2O 10 〃 カザミノ酸 ４ｇ／ MgSO4・7H2O 0.4 〃 CaCO2 40 〃 ※Ｌ−ロイシン 20mg／dl （※Ｌ−ロイシン要求株の場合のみ添加） 第４表 トリプトフアン生成量 菌 株 （mg／ml） FT−145 1.90 AJ11906 3.5 FEL−５ 4.2 AJ11907 6.5 AJ11483 6.2 AJ11908 8.0 AJ11909 7.5
Claims (1)
- １ バチルス属に属し、トリプトフアンアナログ
及びケイヒ酸あるいはヒドロケイヒ酸に耐性を有
し、かつＬ−トリプトフアン生産能を有する微生
物を液体培地中に好気的に培養し、培養液中にＬ
−トリプトフアンを生成蓄積せしめ、これを採取
することを特徴とするＬ−トリプトフアンの製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10162882A JPS58220693A (ja) | 1982-06-14 | 1982-06-14 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10162882A JPS58220693A (ja) | 1982-06-14 | 1982-06-14 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58220693A JPS58220693A (ja) | 1983-12-22 |
| JPH028719B2 true JPH028719B2 (ja) | 1990-02-26 |
Family
ID=14305663
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10162882A Granted JPS58220693A (ja) | 1982-06-14 | 1982-06-14 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58220693A (ja) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55103943A (en) * | 1979-02-06 | 1980-08-08 | Fuji Shoji Kk | Bead wire and production thereof |
| FR2456610A1 (fr) * | 1979-02-19 | 1980-12-12 | Michelin & Cie | Procede de fabrication de tringles pour bourrelets de pneumatiques |
-
1982
- 1982-06-14 JP JP10162882A patent/JPS58220693A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58220693A (ja) | 1983-12-22 |
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