JPH03209400A - ライム病に対するワクチン、その取得法、モノクローナル抗体、抗原、組換えｄｎａ、組換えベクター及び抗原の取得法 - Google Patents
ライム病に対するワクチン、その取得法、モノクローナル抗体、抗原、組換えｄｎａ、組換えベクター及び抗原の取得法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、ライム−病（Ｌｙｍｅ −Ｋｒａｎｋｈｅｉ
ｔ）に対る、ワクチン、その取得法、モノクローナル抗
体、病原性ボレリア・ブルグドルフェリ菌株、抗原、組
換えＤＮＡ、組換えベクター、抗原の取得法及び病原性
Ｂ、ブルグドルフェリを単離かつ再培養る、方法に関る
、。
ｔ）に対る、ワクチン、その取得法、モノクローナル抗
体、病原性ボレリア・ブルグドルフェリ菌株、抗原、組
換えＤＮＡ、組換えベクター、抗原の取得法及び病原性
Ｂ、ブルグドルフェリを単離かつ再培養る、方法に関る
、。
［従来の技術１
ライムーボレリオース（Ｌｙｉｅ −Ｂｏｒｒｅｌｉｏ
ｓｅ）は、温帯における屡々、ダニにより媒介される伝
染病である。これは、スピロヘータ ボレリア゛ブルグ
ドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅ
ｒｉ）により惹起され、この菌は特にマダニ（Ｉｘｏｄ
ｅｓ）によりヒトに伝染される。この病気は、多くの臓
器例えば皮ふ、中枢又は末梢神経系、心臓、肝臓、腎臓
及び骨格筋系に羅病る、慢性で漸進性の伝染病である。
ｓｅ）は、温帯における屡々、ダニにより媒介される伝
染病である。これは、スピロヘータ ボレリア゛ブルグ
ドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅ
ｒｉ）により惹起され、この菌は特にマダニ（Ｉｘｏｄ
ｅｓ）によりヒトに伝染される。この病気は、多くの臓
器例えば皮ふ、中枢又は末梢神経系、心臓、肝臓、腎臓
及び骨格筋系に羅病る、慢性で漸進性の伝染病である。
抗生物質を用いる治療によるこの病気の可能な処置は困
雌であるので、現在は、ｇｌＩｉ菌そのもの及び宿主の
Ｂ、プルグドル７エリでの感染に対る、免疫応答を研究
る、多大の努力がなされている。ライム病にかかったヒ
トでは、Ｂ、ブルグドルフェリに対る、高い抗体価が確
認されるが、この感染に対る、保護の作用は得られない
。この病原体は非常に迅速に血管から組織中に移行し、
そこで、免疫系にもはや直接到達可能ではないと考えら
れる。このことは、抗体による保護は、感染の開始の直
後にのみ、病原体がなお血管内に存在る、かぎりにおい
て可能であることを意味している種々の動物におけるＢ
、ブルグドルフェリによる自然の感染が発見された事実
は、ライム病に関る、英検室内モデルを作る試みをもた
らした。このことは、限られた結果で成功した。例えば
、マウスにおけるＢ、ブルグドルフェリに対して特異的
な免疫応答の誘発を目的とした実験では、既に長時間培
養したＢ、ブルグドルフェリー単離体での同系交配−マ
ウス種の感染は、種々の臓器例えば脳、心臓、肺及び腎
臓内での、ライム病を有る、患者で観察されるそれと匹
敵る、中程度であるが顕著な病理形態学的な変化をもた
らしたことが判明した（ ５ｃｈａｉｂｌｅ等による（
１９８８） 、Ｉｎｆｅｃｔ、 Ｉｍｍｕｎ、 ｌ
、 ４１）。動物における重大な病気の発症は、おそ
らく、宿主の免疫防御及び／又は長時間にわたり試験管
内で培養されたスピロヘータの減少された毒性に依り、
阻止された（ Ｊｏｈｎｓｏｎ等による（ １９８４）
Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ２０
。
雌であるので、現在は、ｇｌＩｉ菌そのもの及び宿主の
Ｂ、プルグドル７エリでの感染に対る、免疫応答を研究
る、多大の努力がなされている。ライム病にかかったヒ
トでは、Ｂ、ブルグドルフェリに対る、高い抗体価が確
認されるが、この感染に対る、保護の作用は得られない
。この病原体は非常に迅速に血管から組織中に移行し、
そこで、免疫系にもはや直接到達可能ではないと考えら
れる。このことは、抗体による保護は、感染の開始の直
後にのみ、病原体がなお血管内に存在る、かぎりにおい
て可能であることを意味している種々の動物におけるＢ
、ブルグドルフェリによる自然の感染が発見された事実
は、ライム病に関る、英検室内モデルを作る試みをもた
らした。このことは、限られた結果で成功した。例えば
、マウスにおけるＢ、ブルグドルフェリに対して特異的
な免疫応答の誘発を目的とした実験では、既に長時間培
養したＢ、ブルグドルフェリー単離体での同系交配−マ
ウス種の感染は、種々の臓器例えば脳、心臓、肺及び腎
臓内での、ライム病を有る、患者で観察されるそれと匹
敵る、中程度であるが顕著な病理形態学的な変化をもた
らしたことが判明した（ ５ｃｈａｉｂｌｅ等による（
１９８８） 、Ｉｎｆｅｃｔ、 Ｉｍｍｕｎ、 ｌ
、 ４１）。動物における重大な病気の発症は、おそ
らく、宿主の免疫防御及び／又は長時間にわたり試験管
内で培養されたスピロヘータの減少された毒性に依り、
阻止された（ Ｊｏｈｎｓｏｎ等による（ １９８４）
Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ２０
。
７４７ 、 Ｓｃｈｗａｎ等による（ １９８８ ）
Ｉｎｆｅｃｔ。
Ｉｎｆｅｃｔ。
ａｎｄ Ｉｍｍｕｎ、 ５６ 、 ｌ ８３７）。
［発明が解決しようとる、課題］
本発明の基礎となっている課題は、ライム病に対る、有
効なワクチンを製造る、ことである。しかしながら、こ
のためには、まず、適当な実験動物モデルの開発が必要
である。ところで、機能的Ｔ−及びＢ−細胞のないマウ
ス、いわゆる５ｃｉｄ−マウス（Ｓ ｃｉｄ −Ｍａｕ
ｓ ； Ｂｏｓｍａ等によるＮａｔｕｒｅ（１９８３）
１０．５２参照）を実験動物として使用る、ことが提
案されている。
効なワクチンを製造る、ことである。しかしながら、こ
のためには、まず、適当な実験動物モデルの開発が必要
である。ところで、機能的Ｔ−及びＢ−細胞のないマウ
ス、いわゆる５ｃｉｄ−マウス（Ｓ ｃｉｄ −Ｍａｕ
ｓ ； Ｂｏｓｍａ等によるＮａｔｕｒｅ（１９８３）
１０．５２参照）を実験動物として使用る、ことが提
案されている。
それというのも、５Ｃ１ｄ−マウスは病原性Ｂ。
ブルグドルフェリー単離体での感染時に、多系統疾病し
かも、主として多発関節炎及び心筋炎を発症る、からで
ある。この動物モデルにより、はじめて、ライム病に対
る、このワクチンの作用を確かめることが可能になる。
かも、主として多発関節炎及び心筋炎を発症る、からで
ある。この動物モデルにより、はじめて、ライム病に対
る、このワクチンの作用を確かめることが可能になる。
本発明の対象物は、Ｂ、ブルグドルフェリの３１ｋＤ抗
ｊＦｒ（ＯｓｐＡ）又は／及び３４ｋＤ抗原（ＯｓｐＢ
）殊に菌株Ｂ３１ （ＡＴＣＣ３５２１０） 又は／及
びＺＳ７ （ＤＳＭ５５２７）のＯｓｐＡ又は／及びＯ
ｓｐＢに関して特異的なモノクローナル抗体１種以上を
含有る、、ライム病に対る、受動ワクチンである。１５
０群特にＩｇＧ２ｂ又はＩｇＧ１亜群の本発明による抗
体を含有る、ワクチンが有利である。本発明による抗体
の適用は、意外にも、例えばＢ。
ｊＦｒ（ＯｓｐＡ）又は／及び３４ｋＤ抗原（ＯｓｐＢ
）殊に菌株Ｂ３１ （ＡＴＣＣ３５２１０） 又は／及
びＺＳ７ （ＤＳＭ５５２７）のＯｓｐＡ又は／及びＯ
ｓｐＢに関して特異的なモノクローナル抗体１種以上を
含有る、、ライム病に対る、受動ワクチンである。１５
０群特にＩｇＧ２ｂ又はＩｇＧ１亜群の本発明による抗
体を含有る、ワクチンが有利である。本発明による抗体
の適用は、意外にも、例えばＢ。
ブルグドルフェリの４１ｋＤ表面抗原（Ｆｒａｇｅ−１
１ｉｎ）に対る、他の抗体の適用とは反対に、免疫欠失
実験動物特に生存可能な病原性Ｂ、ブルグドルフェリ特
にＢ、プルグドル７エリＺＳ７で感染された５ｃｉｄ−
マウスにおいて、関節炎、心筋炎及び肝炎の発症を完全
に又は少なくとも充分に阻止る、作用をる、。
１ｉｎ）に対る、他の抗体の適用とは反対に、免疫欠失
実験動物特に生存可能な病原性Ｂ、ブルグドルフェリ特
にＢ、プルグドル７エリＺＳ７で感染された５ｃｉｄ−
マウスにおいて、関節炎、心筋炎及び肝炎の発症を完全
に又は少なくとも充分に阻止る、作用をる、。
場合によっては、本発明によるワクチンは、作用物質と
しての抗体と共になお慣用の担持剤、充填剤及び助剤を
も含有していてもよい。
しての抗体と共になお慣用の担持剤、充填剤及び助剤を
も含有していてもよい。
更に、本発明は、実験動物特に、Ｂ、ブルグドルフェリ
組織又はその１部特に完全Ｂ、プルグドル７エリＢ３１
又は／及びＺＳ７組織で免疫化されているマウスのリン
パ細胞又は脾臓細胞からの、ライム病に対る、受動ワク
チンの取得法にも関し、この際、免疫化された動物のリ
ンパ細胞又は脾臓細胞から細胞融合により、本発明のモ
ノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマを取得る、
。
組織又はその１部特に完全Ｂ、プルグドル７エリＢ３１
又は／及びＺＳ７組織で免疫化されているマウスのリン
パ細胞又は脾臓細胞からの、ライム病に対る、受動ワク
チンの取得法にも関し、この際、免疫化された動物のリ
ンパ細胞又は脾臓細胞から細胞融合により、本発明のモ
ノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマを取得る、
。
ＯｓｐＡに対る、本発明による抗体ＬＡ−２（ＩｇＧ２
ｂ）を産生ずるハイブリド−マーセルライン（ＥＣＡＣ
Ｃ８９０９１３０２）も本発明の対象物である。更に、
ＯｓｐＡに対る、抗体ＬＡ−２６，１（Ｉ ｇＧｌ）を
産生ずるハイブリド−マーセルラインＥＣＡＣＣ９００
５０４０６並びにＯｓ ｐＢに対る、抗体ＬＡ−２５，
１もしくはＬＡ−２７，１（ＩｇＧ２ｂもしくはＩｇＧ
ｌ）産生性のハイブリド−マーセルラインＥＣＡＣＣ９
００５０４０５もしくはＥＣＡＣＣ９００５０４０７も
本発明の対象物である。
ｂ）を産生ずるハイブリド−マーセルライン（ＥＣＡＣ
Ｃ８９０９１３０２）も本発明の対象物である。更に、
ＯｓｐＡに対る、抗体ＬＡ−２６，１（Ｉ ｇＧｌ）を
産生ずるハイブリド−マーセルラインＥＣＡＣＣ９００
５０４０６並びにＯｓ ｐＢに対る、抗体ＬＡ−２５，
１もしくはＬＡ−２７，１（ＩｇＧ２ｂもしくはＩｇＧ
ｌ）産生性のハイブリド−マーセルラインＥＣＡＣＣ９
００５０４０５もしくはＥＣＡＣＣ９００５０４０７も
本発明の対象物である。
同様に、本発明には、病原性Ｂ、ブルグドルフェリ菌株
ＺＳ７ （ＤＳＭ５５２７）も包含される。
ＺＳ７ （ＤＳＭ５５２７）も包含される。
更に、本発明のモノクローナル抗体と免疫反応る、抗原
も本発明の対象物である。これは、ＯｓｐＡもしくはＯ
ｓｐＢの全アミノ酸配列又はＯｓｐＡもしくはＯｓｐＢ
の免疫原作用をる、部分配列（免疫原性エピトープ）の
みをも含有る、抗原である。当業者は、この蛋白質の可
能な免疫原性エピトープを困難なく、ＯｓｐＡ蛋白質の
構造分析（例えばＣｈｏｕ −Ｆａｓｓｍａｎｎ＾ｎａ
ｌｙｓｅ）により確認し、実験的にその作用を試験る、
ことができる。
も本発明の対象物である。これは、ＯｓｐＡもしくはＯ
ｓｐＢの全アミノ酸配列又はＯｓｐＡもしくはＯｓｐＢ
の免疫原作用をる、部分配列（免疫原性エピトープ）の
みをも含有る、抗原である。当業者は、この蛋白質の可
能な免疫原性エピトープを困難なく、ＯｓｐＡ蛋白質の
構造分析（例えばＣｈｏｕ −Ｆａｓｓｍａｎｎ＾ｎａ
ｌｙｓｅ）により確認し、実験的にその作用を試験る、
ことができる。
本発明の１目的物は、殊に本発明の抗体と免疫反応る、
組換え抗原でもあり、この際抗原に関して暗号化る、Ｄ
ＮＡ−配列は、組換えベクター特に蛋白質表現のために
好適である原核性ベクター上に存在る、。
組換え抗原でもあり、この際抗原に関して暗号化る、Ｄ
ＮＡ−配列は、組換えベクター特に蛋白質表現のために
好適である原核性ベクター上に存在る、。
殊に、本発明の目的物は、特異的に本発明の抗体と免疫
反応し、第１図に記載のアミノ酸配列又はこの配列から
の免疫原性エピトープを有る、、Ｂ、プルグドル７エリ
からの抗原である。相応して、本発明は、（１）第１図
に記載の配列、（２）遺伝子コードの変性の範囲内でそ
れに相応る、核酸配列又は（３） （１）又は／及び（
２）からの配列と厳しい条件下にハイブリド形成し、Ｂ
、プルグドル７エリＺＳ７の３１ｋＤ抗原又はその免疫
原性エピトープに関して暗号化る、配列を有る、組換え
ＤＮＡにも関る、。ここで「厳しいハイブリド形成条件
」なる概念は、マニアチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）等のモ
レキュラー・クローニング・ア・ラボラトリイ・マニュ
アル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９３２）
、 Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏ−ｒａｔｏｒｙ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）に記
載のような条件と解すべきである。
反応し、第１図に記載のアミノ酸配列又はこの配列から
の免疫原性エピトープを有る、、Ｂ、プルグドル７エリ
からの抗原である。相応して、本発明は、（１）第１図
に記載の配列、（２）遺伝子コードの変性の範囲内でそ
れに相応る、核酸配列又は（３） （１）又は／及び（
２）からの配列と厳しい条件下にハイブリド形成し、Ｂ
、プルグドル７エリＺＳ７の３１ｋＤ抗原又はその免疫
原性エピトープに関して暗号化る、配列を有る、組換え
ＤＮＡにも関る、。ここで「厳しいハイブリド形成条件
」なる概念は、マニアチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）等のモ
レキュラー・クローニング・ア・ラボラトリイ・マニュ
アル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９３２）
、 Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏ−ｒａｔｏｒｙ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）に記
載のような条件と解すべきである。
特に、組換え非融合蛋白質又はβ−ガラクトシダーゼ−
融合蛋白質である、本発明の抗原が有利である。
融合蛋白質である、本発明の抗原が有利である。
更に、本発明は、本発明による組換えＤＮＡの１以上の
コピーを有る、組換えベクターをも包含る、。この本発
明によるベクターは、原核性及び／又は真核性のベクタ
ーであってよく、原核性ベクターが有利である。この組
換えベクターは、宿主細胞中に染色体外に存在（例えば
プラスミド）していてよいか又は宿主細胞のゲノム内に
組み込むこともできる（例えばバタテリオ７アージラム
ダ）。本発明のベクターはプラスミドが有利である。特
に、組換えベクターｐＺＳ−７／３１−２ （ＤＳＭ５
５２８）が有利である。
コピーを有る、組換えベクターをも包含る、。この本発
明によるベクターは、原核性及び／又は真核性のベクタ
ーであってよく、原核性ベクターが有利である。この組
換えベクターは、宿主細胞中に染色体外に存在（例えば
プラスミド）していてよいか又は宿主細胞のゲノム内に
組み込むこともできる（例えばバタテリオ７アージラム
ダ）。本発明のベクターはプラスミドが有利である。特
に、組換えベクターｐＺＳ−７／３１−２ （ＤＳＭ５
５２８）が有利である。
１以上の本発明による抗体を用いるＢ、プルグドル７エ
リ遺伝子バンクの検査により、本発明による抗原を取得
る、方法も本発明の対象であり、ここでは、使用抗体と
正の免疫反応を示すクローンを単離る、。
リ遺伝子バンクの検査により、本発明による抗原を取得
る、方法も本発明の対象であり、ここでは、使用抗体と
正の免疫反応を示すクローンを単離る、。
本発明による抗原は、それ自体、活性免疫化のため、即
ち、組織内での抗体形成を誘発る、ために使用る、こと
ができるので、作用物質としての本発明の抗原を、場合
によっては慣用の担持剤、充填剤及び助剤と共に含有る
、、ライム病に対る、活性ワクチンも本発明に包含され
る。本発明による抗原を遺伝子工学的な方法で取得る、
のが有利な実施形である。
ち、組織内での抗体形成を誘発る、ために使用る、こと
ができるので、作用物質としての本発明の抗原を、場合
によっては慣用の担持剤、充填剤及び助剤と共に含有る
、、ライム病に対る、活性ワクチンも本発明に包含され
る。本発明による抗原を遺伝子工学的な方法で取得る、
のが有利な実施形である。
天然のもしくは組換えＯｓｐＡを正常マウスに適用る、
と、５ｃｉｄ−マウスへの受動的伝達の後にこれをライ
ムーポレリオースに対して保護る、防御抗体の形成を誘
発る、事実が判明した。殊に、組換えＯｓｐＡは、天然
のＯｓｐＡと匹敵る、保護的免疫応答を誘発し、従って
、ヒトのライムーポレリオースに対る、ワクチンに関る
、有望な候補であることが判明した。
と、５ｃｉｄ−マウスへの受動的伝達の後にこれをライ
ムーポレリオースに対して保護る、防御抗体の形成を誘
発る、事実が判明した。殊に、組換えＯｓｐＡは、天然
のＯｓｐＡと匹敵る、保護的免疫応答を誘発し、従って
、ヒトのライムーポレリオースに対る、ワクチンに関る
、有望な候補であることが判明した。
更に、本発明の対象は、ライム病に対る、受動ワクチン
を取得る、方法であり、この際、実験動物特にマウスを
本発明による抗原で免疫化し、この免疫化された実験動
物から常法で、保護性の、ポリクローナル又はモノクロ
ーナルの抗体を取得る、。
を取得る、方法であり、この際、実験動物特にマウスを
本発明による抗原で免疫化し、この免疫化された実験動
物から常法で、保護性の、ポリクローナル又はモノクロ
ーナルの抗体を取得る、。
最後に、本発明には、病原性Ｂ、ブルグドルフェリ組織
の単離及び再培養法も包含され、これは、免疫欠失実験
動物特に、予め病原体で感染されｔ：マウスから病原体
を取得し、この際、病原体の病原性を保持残留させるこ
とよりなる。特に、感染された５ｃｉｄ−マウスの血液
及び／又は関節から病原性Ｂ、ブルグドルフェリＺＳ
７ （ＤＳＭ５５２７）組織を取得る、方法が有利であ
る。
の単離及び再培養法も包含され、これは、免疫欠失実験
動物特に、予め病原体で感染されｔ：マウスから病原体
を取得し、この際、病原体の病原性を保持残留させるこ
とよりなる。特に、感染された５ｃｉｄ−マウスの血液
及び／又は関節から病原性Ｂ、ブルグドルフェリＺＳ
７ （ＤＳＭ５５２７）組織を取得る、方法が有利であ
る。
次の実施例及び第１図及び第２図により本発明を詳述る
、。
、。
！１ｒＸＪはＢ、プルクドル７エリ２５７がらの３１ｋ
Ｄ抗原（Ｏｓ ｐ Ａ）のＤＮＡ−及びアミノ酸配列を
示す図であり、第２図は、組換え蛋白質ｒＺＳ７／３１
２の免疫学的特性を示す図である。
Ｄ抗原（Ｏｓ ｐ Ａ）のＤＮＡ−及びアミノ酸配列を
示す図であり、第２図は、組換え蛋白質ｒＺＳ７／３１
２の免疫学的特性を示す図である。
実施例
例 Ｉ
Ｂ、ブルグドルフェリ菌株での感染による５Ｃ１ｄ−マ
ウスでの関節炎、心臓炎及び肝炎の誘発 Ｂ、プルグドル７エリでのマウスの処置Ｃ２Ｂ １７
５ｃｉｄ種（Ｓ ｃｉｄ−突然変異に関る、ホモ接合
体）及びＣ，Ｂ−１７種の成長したマウスに生存可能で
あるか又は殺した（ＵＶ−照射）Ｂ、ブルグドルフェリ
有機体ｌＸ１Ｏ’ ５ Ｘ Ｉ ０５ １ Ｘ Ｉ
０６又は１ＸＩＯａを尻尾のつけ根に皮下注射る、。
ウスでの関節炎、心臓炎及び肝炎の誘発 Ｂ、プルグドル７エリでのマウスの処置Ｃ２Ｂ １７
５ｃｉｄ種（Ｓ ｃｉｄ−突然変異に関る、ホモ接合
体）及びＣ，Ｂ−１７種の成長したマウスに生存可能で
あるか又は殺した（ＵＶ−照射）Ｂ、ブルグドルフェリ
有機体ｌＸ１Ｏ’ ５ Ｘ Ｉ ０５ １ Ｘ Ｉ
０６又は１ＸＩＯａを尻尾のつけ根に皮下注射る、。
ダニ及びマウスからのＢ、ブルグドルフェリの単離
この実験をすでに長期間培養されてきたＢ。
ブルグドルフェリ菌株Ｂ３１ （ＡＴＣＣ３５２１０
）及び雌のイキソデス・リチヌスダニ（Ｉｘｏｄｅｓ
ｒｉｚｉｎｕｓ Ｚｅｃｋｅ）から単離された、新
らしい単離体Ｂ、ブルグドルフェリｚｓ７（ＤＳＭ５５
２７）を用いて実施した。すべてのＢ、ブルグドルフェ
リ株を変性ケリーの培地（Ｋｅｌｌｙ’ｓ Ｍｅｄｉ
ｕｍ）中で培養した（ Ｂａｒｂｏｕｒ等著、１９８３
年、５ｗ１ｔｚｅｒｌａｎｄ、 Ｃｕｒｒ、 Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ。
）及び雌のイキソデス・リチヌスダニ（Ｉｘｏｄｅｓ
ｒｉｚｉｎｕｓ Ｚｅｃｋｅ）から単離された、新
らしい単離体Ｂ、ブルグドルフェリｚｓ７（ＤＳＭ５５
２７）を用いて実施した。すべてのＢ、ブルグドルフェ
リ株を変性ケリーの培地（Ｋｅｌｌｙ’ｓ Ｍｅｄｉ
ｕｍ）中で培養した（ Ｂａｒｂｏｕｒ等著、１９８３
年、５ｗ１ｔｚｅｒｌａｎｄ、 Ｃｕｒｒ、 Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ。
第８巻、第１２３頁）。エタノールで殺菌したダニの腸
中部から、又は感染したマウスの血液から得られたＢ、
ブルグドルフェリ有機体をカナマイシン８μｇ／＊Ｑ及
びフルオルウラシル２３０Ｐｇ／＋Ｑを添加下にケリー
の培地中でまず培養した（ Ｊｏｈｎｓｏｎ等著、１９
８４年、 Ｊ。
中部から、又は感染したマウスの血液から得られたＢ、
ブルグドルフェリ有機体をカナマイシン８μｇ／＊Ｑ及
びフルオルウラシル２３０Ｐｇ／＋Ｑを添加下にケリー
の培地中でまず培養した（ Ｊｏｈｎｓｏｎ等著、１９
８４年、 Ｊ。
Ｃｌ１ｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 第１巻、第８
１頁）。
１頁）。
血清学的テスト
Ｂ、プルグドル７エリ特異的抗体の検出を慣用のエリザ
（ＥＬＩＳＡ）法により実施した（Ｊｕｓｔｕｓ等著、
１９８８年、Ｗｅｈｒｍｅｄ、 Ｍｓｃｈｒ。
（ＥＬＩＳＡ）法により実施した（Ｊｕｓｔｕｓ等著、
１９８８年、Ｗｅｈｒｍｅｄ、 Ｍｓｃｈｒ。
第３２巻、第２６３頁）。免疫グロブリン（Ｉｇ）の含
量に関る、標準曲線を抗マウスＩｇ（Ｐａｅｓｅｌ、
７ランクアルト、西独からの血清溶液のｌ ： ５００
希釈）を含有る、シャーレの塗布及び全一マウスＩｇＧ
−又は１ｇＭ含量の滴定（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、
ＬａＪｏｌｌａ、 Ｕ Ｓ Ａ ）により得に。全血清
ＩｇＭ及びＴｇＧを同様に測定した。
量に関る、標準曲線を抗マウスＩｇ（Ｐａｅｓｅｌ、
７ランクアルト、西独からの血清溶液のｌ ： ５００
希釈）を含有る、シャーレの塗布及び全一マウスＩｇＧ
−又は１ｇＭ含量の滴定（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、
ＬａＪｏｌｌａ、 Ｕ Ｓ Ａ ）により得に。全血清
ＩｇＭ及びＴｇＧを同様に測定した。
Ｂ、プルグドル７エリ特異的１ｇＭ＝又はＩｇＧ−抗体
の濃度をＥｇ ｆｉ９／ｍＱ血清で示した。
の濃度をＥｇ ｆｉ９／ｍＱ血清で示した。
免疫蛍光法及びギームザ（Ｇｉｅｍｓａ）染色血液５０
μＱをヘマトクリット管中にピペットで採取しくＢｅｃ
ｔｏｎ ｕｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ。
μＱをヘマトクリット管中にピペットで採取しくＢｅｃ
ｔｏｎ ｕｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ。
Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、 Ｂ ＲＤ ） 、ヘマトク
リット遠心分離機（ＥＣＣＯ，ＢＲＤ）中５０００９で
遠心分離した。この管を血清と赤血球の中間相で切開し
、血清の５μｇをスライドプレート上に担持した（
５ｕｐｅｒｉｏｒ、 Ｂａｄ Ｍｅｒｇｅｎｔｈｅｉ
ｍ。
リット遠心分離機（ＥＣＣＯ，ＢＲＤ）中５０００９で
遠心分離した。この管を血清と赤血球の中間相で切開し
、血清の５μｇをスライドプレート上に担持した（
５ｕｐｅｒｉｏｒ、 Ｂａｄ Ｍｅｒｇｅｎｔｈｅｉ
ｍ。
ＢＲＤ）。血清試料で被覆されたスライドプレートを空
中で乾燥し、１００％エタノール中−２０℃で１分間固
定る、。家兎−抗Ｂ、ブルグドル７エリ高免疫血清（１
：ｌｏＯ希釈）と共に室温で１時間恒温保持した後、こ
のスライドプレートをＰＢＳ中で５回洗浄し、次いでＦ
ＩＴＣ結合山羊−家兎一抗血清Ｃ１：２０希釈、Ｊａｃ
ｋｓｏｎ Ｌａｂ、、 Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、
Ｕ Ｓ Ａ ）で１時間染色る、。このスライドプレ
ートを洗浄し、カイザー（Ｋａｉｓｅｒ）のグリセリン
−ゼラチン（Ｍｅｒｃｋ、 Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、
Ｂ ＲＤ ）中に埋め込み、すぐに蛍光Ｓ微鏡で検査
した。未処置の血液滴を空気中で乾燥し、メタノール中
で固定し、ギームザ（０６１％、Ｍｅｒｃｋ、 Ｄａ
ｒｍｓｔａｄｔ、 ＢＲＤ）で染色し、ＰＢＳ中で脱
色し、エンテラン（Ｅｎｔｅｌｌａｎ ； Ｍｅｒｃｋ
、 Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、 Ｂ ＲＤ）中に埋め込
む。
中で乾燥し、１００％エタノール中−２０℃で１分間固
定る、。家兎−抗Ｂ、ブルグドル７エリ高免疫血清（１
：ｌｏＯ希釈）と共に室温で１時間恒温保持した後、こ
のスライドプレートをＰＢＳ中で５回洗浄し、次いでＦ
ＩＴＣ結合山羊−家兎一抗血清Ｃ１：２０希釈、Ｊａｃ
ｋｓｏｎ Ｌａｂ、、 Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、
Ｕ Ｓ Ａ ）で１時間染色る、。このスライドプレ
ートを洗浄し、カイザー（Ｋａｉｓｅｒ）のグリセリン
−ゼラチン（Ｍｅｒｃｋ、 Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、
Ｂ ＲＤ ）中に埋め込み、すぐに蛍光Ｓ微鏡で検査
した。未処置の血液滴を空気中で乾燥し、メタノール中
で固定し、ギームザ（０６１％、Ｍｅｒｃｋ、 Ｄａ
ｒｍｓｔａｄｔ、 ＢＲＤ）で染色し、ＰＢＳ中で脱
色し、エンテラン（Ｅｎｔｅｌｌａｎ ； Ｍｅｒｃｋ
、 Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、 Ｂ ＲＤ）中に埋め込
む。
組織学的標本作製及び染色法
あらかじめＢ、プルグドル７エリで感染させたマウスか
ら種々の内部器官（脳、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓及
び関節）を感染後の種々異なる時点で取り出し、凍結薄
片の調製のために液体窒素中で保存る、か、又はパラフ
ィン又はメタクリレート中への埋め込みのために５％ホ
ルムアルデヒド（ＰＢＳ中）中で保存る、。４〜７μ肩
の薄片を製造し、ヘマトキシリン−エオシンで染色し、
エンテラン（Ｅｎｔｅｌｌａｎ ；Ｍｅｒｃｋ社、ダル
ムシュタット、Ｂ ＲＤ）中に埋め込む。免疫組織学を
ストレプトアビジン／ビオチン／ペルオキ／ダーゼシス
テムを使用して実施した（ Ｋｒａｍｅｒ等著、１９８
９年、Ｅｕｒ、Ｊ。
ら種々の内部器官（脳、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓及
び関節）を感染後の種々異なる時点で取り出し、凍結薄
片の調製のために液体窒素中で保存る、か、又はパラフ
ィン又はメタクリレート中への埋め込みのために５％ホ
ルムアルデヒド（ＰＢＳ中）中で保存る、。４〜７μ肩
の薄片を製造し、ヘマトキシリン−エオシンで染色し、
エンテラン（Ｅｎｔｅｌｌａｎ ；Ｍｅｒｃｋ社、ダル
ムシュタット、Ｂ ＲＤ）中に埋め込む。免疫組織学を
ストレプトアビジン／ビオチン／ペルオキ／ダーゼシス
テムを使用して実施した（ Ｋｒａｍｅｒ等著、１９８
９年、Ｅｕｒ、Ｊ。
１ｍｍｕｎｏ１．第１９巻、第１５１頁）。
第１表は単離体ＺＳ７及びＢ３１のＢ、ブルグドルフェ
リ有機体が、あらかじめ生存可能な有機体を接種したＳ
ｃｉｄ−マウスの血液中に全実験期間の量検出された
ことを示す。いずれにせよ、試験管内においては、菌株
２５７のスピロヘーターのみを再培養る、ことができ、
菌株Ｂ３１を再培養る、ことはできなかった。再培養し
た有機体と最初のＢ、ブルグドルフェリｚＳ７単離体と
の比較の際に、蛋白質含量において又はプラスミドプロ
フィルにおいて全く変化を確認る、ことはできなかった
。Ｂ、ブルグドルフェリで感染した５ａｉｄ−マウス中
には全監察期間の間、重要でない抗体の力価は全く検出
されなかったか、又は著しく僅かであった。この動物中
では、Ｂ、プルグドル７エリ特異的ＩｇＭ−又はＩｇＧ
−抗体は全く見い出されなかった（第１表）。これに対
し、Ｂ、プルグドル７エリで感染したすべてのｃ、Ｂ−
１７一対照マウスは多量の全−ｒｇ及びＢ、ブルグドル
フェリ特異的１ｇＭ−及びＩｇＧ−抗体の高められた力
価を示した。Ｂ、プルグドル７エリＺＳ７での感染７日
〜２０日後に、５ｃｉｄ−マウスは関節炎の第１次臨床
症状（両方の脛骨足根骨関節の発赤及びはれ）を示し、
これは時間と共にひどくなった。これに対してＵＶ−照
射Ｂ、プルグドル７エリＺＳ７で又は生存可能なり、ブ
ルグドルフェリＢ３＋有機体で感染したＳ ｃｉｄ−マ
ウス及び生存可能なり、ブルグドルフェリＺＳ７有機体
で感染したＣ、Ｂ−１７一対照マウスには全く関節炎の
症状は見い出されなかった。
リ有機体が、あらかじめ生存可能な有機体を接種したＳ
ｃｉｄ−マウスの血液中に全実験期間の量検出された
ことを示す。いずれにせよ、試験管内においては、菌株
２５７のスピロヘーターのみを再培養る、ことができ、
菌株Ｂ３１を再培養る、ことはできなかった。再培養し
た有機体と最初のＢ、ブルグドルフェリｚＳ７単離体と
の比較の際に、蛋白質含量において又はプラスミドプロ
フィルにおいて全く変化を確認る、ことはできなかった
。Ｂ、ブルグドルフェリで感染した５ａｉｄ−マウス中
には全監察期間の間、重要でない抗体の力価は全く検出
されなかったか、又は著しく僅かであった。この動物中
では、Ｂ、プルグドル７エリ特異的ＩｇＭ−又はＩｇＧ
−抗体は全く見い出されなかった（第１表）。これに対
し、Ｂ、プルグドル７エリで感染したすべてのｃ、Ｂ−
１７一対照マウスは多量の全−ｒｇ及びＢ、ブルグドル
フェリ特異的１ｇＭ−及びＩｇＧ−抗体の高められた力
価を示した。Ｂ、プルグドル７エリＺＳ７での感染７日
〜２０日後に、５ｃｉｄ−マウスは関節炎の第１次臨床
症状（両方の脛骨足根骨関節の発赤及びはれ）を示し、
これは時間と共にひどくなった。これに対してＵＶ−照
射Ｂ、プルグドル７エリＺＳ７で又は生存可能なり、ブ
ルグドルフェリＢ３＋有機体で感染したＳ ｃｉｄ−マ
ウス及び生存可能なり、ブルグドルフェリＺＳ７有機体
で感染したＣ、Ｂ−１７一対照マウスには全く関節炎の
症状は見い出されなかった。
組織病理学も、生存可能なり、ブルグドルフェリｚＳ７
で感染した５ｃｉｄ−マウス中での関節炎による関節変
化を証明した（第１表）。軟骨組織及び／又は骨の康爛
疎び破壊を伴なう、形成過度の炎症性関節液−被覆細胞
の存在により特徴付けられる重症の関節障害が確認され
た。
で感染した５ｃｉｄ−マウス中での関節炎による関節変
化を証明した（第１表）。軟骨組織及び／又は骨の康爛
疎び破壊を伴なう、形成過度の炎症性関節液−被覆細胞
の存在により特徴付けられる重症の関節障害が確認され
た。
更に心内膜、心筋層及び６膜中への単核細胞の浸潤を伴
なう心臓全璧炎が確認された。同様に、肝臓の進行性の
炎症が確認され、この際、門脈域及び中心静脈に限定さ
れた単核細胞の浸潤、肉芽腫症反応及び最後に肝臓線維
症が確認された。更に、腎臓、肺、脳及び横紋筋中で僅
かな障害が確認された。
なう心臓全璧炎が確認された。同様に、肝臓の進行性の
炎症が確認され、この際、門脈域及び中心静脈に限定さ
れた単核細胞の浸潤、肉芽腫症反応及び最後に肝臓線維
症が確認された。更に、腎臓、肺、脳及び横紋筋中で僅
かな障害が確認された。
第
１
表
Ｂ、、ブルグドルフェリを用いにＣ，Ｂ −１７５ｃｉ
ｄ−組織からのスピロヘーターの再単離；関節炎の抗体
ブマウス種 Ｃ，Ｂ−１７ ｃｉｄ （ｎ４） Ｂ、プルグドル７エリ 菌株 感染時 感染後 の数 の日数 Ｓ７ Ｘ１０５ Ｂ、プルグドル７エリ 血中での 単離０ 検出＊ ＋ Ｓ７ Ｓ７ ５７ ＺＳ７（ｕｖ−照射） ３１ Ｘ１０８ Ｘ１０８ Ｘ１０５ Ｘ１０６ Ｘ１０８ Ｘ１０８ Ｘ１０８ Ｂ ＋Ｇ ”Ｂ／Ｇ 不測 不測 ＋ Ｃ，Ｂ−１７ （ｎ・７） Ｓ７ Ｘ１０８ マウス及び０゜ １価及び形成 り−１７対照マウスの感染； 関節炎 臨床０ 組織 病理学 抗体（μｇ／罰） ｏ。
ｄ−組織からのスピロヘーターの再単離；関節炎の抗体
ブマウス種 Ｃ，Ｂ−１７ ｃｉｄ （ｎ４） Ｂ、プルグドル７エリ 菌株 感染時 感染後 の数 の日数 Ｓ７ Ｘ１０５ Ｂ、プルグドル７エリ 血中での 単離０ 検出＊ ＋ Ｓ７ Ｓ７ ５７ ＺＳ７（ｕｖ−照射） ３１ Ｘ１０８ Ｘ１０８ Ｘ１０５ Ｘ１０６ Ｘ１０８ Ｘ１０８ Ｘ１０８ Ｂ ＋Ｇ ”Ｂ／Ｇ 不測 不測 ＋ Ｃ，Ｂ−１７ （ｎ・７） Ｓ７ Ｘ１０８ マウス及び０゜ １価及び形成 り−１７対照マウスの感染； 関節炎 臨床０ 組織 病理学 抗体（μｇ／罰） ｏ。
全 ｒｇ 物理的 Ｉｇ
μ γ μ γ
０
不測
不測
不測
不測
６
７
４
５１５
１４５
０４
１６
７
６４
９６３
３７４
８０４
９５２
４３８ ５６
５０６ ９４
：ギームザ（Ｇｅｉ＋５ｓａ）−染色又は免疫蛍光：Ｓ
１１：血液（Ｂ）、関節（Ｇ）からの単離；：（＋）脛
骨足根骨関節の発赤及びはれ；” ： （−）＜７．
５μｇ７’ａＱ血清例 ２ Ｓｃｉｄ−マウスのライム・ポレリオース（Ｌｙ＋ａｅ
−Ｂｏｒｒｅｌｉｏｓｅ）の経過に対る、Ｂ、ブルグド
ル７エリ３１ｋＤ抗原にとって特異的なモノクローナル
抗体の作用 モノクローナル抗体の製造 完全な免疫システムを有る、マウスをＢ、ブルグドルフ
ェリ有機体で免疫にる、際に、Ｂ゛。
１１：血液（Ｂ）、関節（Ｇ）からの単離；：（＋）脛
骨足根骨関節の発赤及びはれ；” ： （−）＜７．
５μｇ７’ａＱ血清例 ２ Ｓｃｉｄ−マウスのライム・ポレリオース（Ｌｙ＋ａｅ
−Ｂｏｒｒｅｌｉｏｓｅ）の経過に対る、Ｂ、ブルグド
ル７エリ３１ｋＤ抗原にとって特異的なモノクローナル
抗体の作用 モノクローナル抗体の製造 完全な免疫システムを有る、マウスをＢ、ブルグドルフ
ェリ有機体で免疫にる、際に、Ｂ゛。
ブルグドルフェリに特異的であるポリクローナル抗体が
表現される（第１表参照）。
表現される（第１表参照）。
生後１０週の、同血統交配種Ｂ Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃの
酸マウスを超音波ホモジナイズドボレリエン（Ｂｏｒｒ
ａｌｉｅｎ ； Ｂ 、、ブルグドルフェリ、８３１株
；ＡＴＣＣ３５２１０）で免疫にる、。
酸マウスを超音波ホモジナイズドボレリエン（Ｂｏｒｒ
ａｌｉｅｎ ； Ｂ 、、ブルグドルフェリ、８３１株
；ＡＴＣＣ３５２１０）で免疫にる、。
免疫法：
０出目：完全７０インドのアジュバント中のポレリエン
ー抗原２００μりを皮下注射 ２１日目、３５日目、４９日目、６３日出目燐酸塩緩衝
食塩水中のポレリエンー抗原 １００μグで促進（腹腔内） ６６日出目牌脾臓取り出し、及び個々の細胞懸濁液の製
造 この免疫脾臓細胞を骨髄腫細胞系Ａｇ８−ＰＡｌとポリ
エチレングリコールの使用下に標準法により融合させた
（ Ｊ 、 Ｈ、ＰｅＬｅｒｓ％Ｈ。
ー抗原２００μりを皮下注射 ２１日目、３５日目、４９日目、６３日出目燐酸塩緩衝
食塩水中のポレリエンー抗原 １００μグで促進（腹腔内） ６６日出目牌脾臓取り出し、及び個々の細胞懸濁液の製
造 この免疫脾臓細胞を骨髄腫細胞系Ａｇ８−ＰＡｌとポリ
エチレングリコールの使用下に標準法により融合させた
（ Ｊ 、 Ｈ、ＰｅＬｅｒｓ％Ｈ。
Ｂａｕｓｇａｒｔｅｎ、 Ｍ、 ５ｃｈｕｌｚｅ著、Ｍ
ｏｎｏｋｌｏｎａｌｅＡｎｔｉｋｏｅｒｐｅｒ” Ｓ
ｐｒｉｎｇｅｒ −Ｖｅｒｌａｇ社、ハイデルベルグ）
。
ｏｎｏｋｌｏｎａｌｅＡｎｔｉｋｏｅｒｐｅｒ” Ｓ
ｐｒｉｎｇｅｒ −Ｖｅｒｌａｇ社、ハイデルベルグ）
。
融合生成物を９６穴組織培養プレート中に播種した。、
８日後、Ｂ、ブルグドルフェリ特異的モノクローナル抗
体の存在に関して細胞培養上澄を固層−エリザを用いて
調べた（Ｊ、Ｈ。
８日後、Ｂ、ブルグドルフェリ特異的モノクローナル抗
体の存在に関して細胞培養上澄を固層−エリザを用いて
調べた（Ｊ、Ｈ。
Ｐｅｔｅｒｓ等著、前記）。
抗体−生産性培養からのハイブリドーマ細胞を限界希釈
法によりクローン化した。引き続き、個々のクローンの
培養上澄を新たに固相エリザ中で、かつウェスタンプロ
ット分析により、かつ免疫蛍光試験により特徴付けた。
法によりクローン化した。引き続き、個々のクローンの
培養上澄を新たに固相エリザ中で、かつウェスタンプロ
ット分析により、かつ免疫蛍光試験により特徴付けた。
亜クラスＩｇＧ２ｂのモノクローナル抗体ＬＡ−２はモ
ノクローナルハイブリドーマ系から生産され、分泌され
、かつウェスタンプロット法で、電気泳動法により５Ｄ
Ｓ−ゲル上で分離され、ウェスタンプロット法で膜上に
搬送されたＢ、ブルグドルフェリ蛋白質と接触る、際に
すべての実験したＢ、ブルグドルフェリ菌株（特に、単
離体ＺＳ７及びＢ５１）からの３１ｋＤａ−構造（Ｏｓ
ｐ−Ａ）と反応る、。モノクローナル抗体ＬＡ−２６，
１ｃ （抗−〇ｓｐＡＩｇＧｌ）、ＬＡ２５．１ （抗
−〇ＳｐＢ （３４ｋＤａ抗原）；ＩｇＧ２ｂ）及びＬ
Ａ２７．１ （抗ＯｓｐＢ （３４ｋＤａ抗原）、Ｉｇ
ＣＩ）は同様に製造され、特徴付けられた。
ノクローナルハイブリドーマ系から生産され、分泌され
、かつウェスタンプロット法で、電気泳動法により５Ｄ
Ｓ−ゲル上で分離され、ウェスタンプロット法で膜上に
搬送されたＢ、ブルグドルフェリ蛋白質と接触る、際に
すべての実験したＢ、ブルグドルフェリ菌株（特に、単
離体ＺＳ７及びＢ５１）からの３１ｋＤａ−構造（Ｏｓ
ｐ−Ａ）と反応る、。モノクローナル抗体ＬＡ−２６，
１ｃ （抗−〇ｓｐＡＩｇＧｌ）、ＬＡ２５．１ （抗
−〇ＳｐＢ （３４ｋＤａ抗原）；ＩｇＧ２ｂ）及びＬ
Ａ２７．１ （抗ＯｓｐＢ （３４ｋＤａ抗原）、Ｉｇ
ＣＩ）は同様に製造され、特徴付けられた。
Ｂ、プルグドル７エリＺＳ７でのマウスの感染
Ｃ−Ｂ−１７５ｃｉｄ−マウスに生存可能なり。
、ブルグドルフェリＺＳ７−有機体Ｉ Ｘ ｌ ０ｇを
尻尾のつけ根に皮下注射した。
尻尾のつけ根に皮下注射した。
抗血清でのマウスの処置
感染した５ｃｉｄ−マウスを種々の抗血清で１週間あた
り２回処置した。第１の群をＮＭＳ （正常マウス血清
）で、第２の群をＩＭＳ （免疫マウス血清）で、かつ
ｔＩｇ３の群をモノクローナル抗体ＬＡ−２（Ｂ、ブル
グドルフェリからの３１ｋＤ抗原に対る、）で処置した
。投与抗血清の量はｖｇ１週目週日００μＱもしくはＬ
Ａ−２において１００μ９、第２週日は２００μｇもし
くはＬＡ−２において２００μｇ及び第３週日は３００
μＱもしくはＬＡ−２において３００μ９であった。
り２回処置した。第１の群をＮＭＳ （正常マウス血清
）で、第２の群をＩＭＳ （免疫マウス血清）で、かつ
ｔＩｇ３の群をモノクローナル抗体ＬＡ−２（Ｂ、ブル
グドルフェリからの３１ｋＤ抗原に対る、）で処置した
。投与抗血清の量はｖｇ１週目週日００μＱもしくはＬ
Ａ−２において１００μ９、第２週日は２００μｇもし
くはＬＡ−２において２００μｇ及び第３週日は３００
μＱもしくはＬＡ−２において３００μ９であった。
第２表は未処置又はＮＭＳ処置５ｃｉｄ−マウスが１２
日後に関節炎もしくは心臓炎及び肝炎の臨床的及び組織
病理学的徴候を現わしたことを示す。これに対してモノ
クローナル抗体ＬＡ−２の投与が５ｃｉｄ−マウスにお
いて明らかに症状の減少に作用した。臨床的には関節の
わずかな発赤、そして組織病理学的には辺縁の変化のみ
が確認された。ＩＭＳで処置したマウスは全く臨床的関
節炎の所見を示さなかった。
日後に関節炎もしくは心臓炎及び肝炎の臨床的及び組織
病理学的徴候を現わしたことを示す。これに対してモノ
クローナル抗体ＬＡ−２の投与が５ｃｉｄ−マウスにお
いて明らかに症状の減少に作用した。臨床的には関節の
わずかな発赤、そして組織病理学的には辺縁の変化のみ
が確認された。ＩＭＳで処置したマウスは全く臨床的関
節炎の所見を示さなかった。
Ｂ、プルグドル７エリ病原体の検出は、未処置又はＮＭ
Ｓ処置のマウスにおいてのみ試験管内培養において得ら
れた。ＬＡ−２又は１ＭＳ処置マウスにおいてはＢ、ブ
ルグドルフェリは検出されなかった（第２表）。
Ｓ処置のマウスにおいてのみ試験管内培養において得ら
れた。ＬＡ−２又は１ＭＳ処置マウスにおいてはＢ、ブ
ルグドルフェリは検出されなかった（第２表）。
第
２
表
Ｂ。
ブルグドルフェリ及び抗血清でのＣ。
マウス種
抗血清での処置
関
Ｃ，Ｂ−１７
ｃ １ｄ
（ｌ
臨
床
ｎ＝３
＋
ｎ＝３
ＭＳ
＋
２
ＭＳ
ｎ＝３
Ａ
関節の僅かな発赤
辺縁変化のみ
−１７
Ｓｃｉｄ−マウスの処置
節
炎
心臓炎／肝炎
Ｂ、ブルグドルフェリ
２日後）
検
出
組織病理学
組織病理学
（培養）
＋
＋
＋
＋
＋
＋
例 ３
Ｂ、ブルグドルフェリＺＳ７からの３１ｋＤ抗原（Ｏｓ
ｐＡ）の発現クローン化 ＤＮＡ−調製 Ｂ、プルグドル７エリ株ＺＳ７からの高分子ＤＮＡを変
性ケリーの培地中で培養る、ことにより精製した。この
スピロヘーターを１００００ｇで遠心分離る、ことによ
りペレットにし、ＰＢＳ−緩衝液中で３回洗浄る、。乾
燥したペレットをＴＥ（トリスＩ Ｏｍｍｏｌ／ｆｆ
、 Ｅ ＤＴＡｌ ｍｍｏｌ／Ｑ％ｐ Ｈ７，４）
ｌ ＯｍＱ中に再懸濁し、リゾチーム（５す／講Ｑ）で
３０°Ｃで１５分間処置し、２０％ＳＤＳ１ｍ（ｌを添
加る、ことによりＤＮＡを遊離る、。ＮａＣｌ１ ｌ
、５＊Ｑ（５ｍｏｌ／１１）の添加後、この溶液を同
容量の７エノールで抽出し、次いでクロロホルムでの抽
出を行なう。次いで、このＤＮＡを無水エタノール２容
量を添加し、−２０℃で１夜恒温保持る、ことにより沈
殿させた。遠心分離後、残分をＴＥＯ，５＊Ｑ中に溶か
し、Ｄ Ｎ Ａ ｓｅ不含ＲＮ Ａ ５ｅＡ（２０７１
ｇ／１ａＱ）と４５分間５５℃で恒温保持し、３７℃で
グロティナーゼＫ （０，１μｇ／１１１２）で１時間
の処置を行なった。この溶液を０゜３ｍｏｌ／ｌ Ｎａ
０Ａ ｃで調節し、フェノール−クロロホルムで前記の
ように抽出した。エタノールで沈殿させた後、ＤＮＡを
再びＴＥ中に取り込む。
ｐＡ）の発現クローン化 ＤＮＡ−調製 Ｂ、プルグドル７エリ株ＺＳ７からの高分子ＤＮＡを変
性ケリーの培地中で培養る、ことにより精製した。この
スピロヘーターを１００００ｇで遠心分離る、ことによ
りペレットにし、ＰＢＳ−緩衝液中で３回洗浄る、。乾
燥したペレットをＴＥ（トリスＩ Ｏｍｍｏｌ／ｆｆ
、 Ｅ ＤＴＡｌ ｍｍｏｌ／Ｑ％ｐ Ｈ７，４）
ｌ ＯｍＱ中に再懸濁し、リゾチーム（５す／講Ｑ）で
３０°Ｃで１５分間処置し、２０％ＳＤＳ１ｍ（ｌを添
加る、ことによりＤＮＡを遊離る、。ＮａＣｌ１ ｌ
、５＊Ｑ（５ｍｏｌ／１１）の添加後、この溶液を同
容量の７エノールで抽出し、次いでクロロホルムでの抽
出を行なう。次いで、このＤＮＡを無水エタノール２容
量を添加し、−２０℃で１夜恒温保持る、ことにより沈
殿させた。遠心分離後、残分をＴＥＯ，５＊Ｑ中に溶か
し、Ｄ Ｎ Ａ ｓｅ不含ＲＮ Ａ ５ｅＡ（２０７１
ｇ／１ａＱ）と４５分間５５℃で恒温保持し、３７℃で
グロティナーゼＫ （０，１μｇ／１１１２）で１時間
の処置を行なった。この溶液を０゜３ｍｏｌ／ｌ Ｎａ
０Ａ ｃで調節し、フェノール−クロロホルムで前記の
ように抽出した。エタノールで沈殿させた後、ＤＮＡを
再びＴＥ中に取り込む。
遺伝子バンクの製造
高分子ＤＮＡを３秒間の超音波処置により静力学的に破
砕る、。Ｔ４−ＤＮＡ−ポリメラーゼ（３７℃で３０分
間）及びフレノウ酵素（２０°Ｃで５分間）を、生じた
ＤＮＡ−７ラグメントの末端を平面にる、ために使用し
た。平らな末端を有る、ＤＮＡを発現ベクターｐＵＥＸ
ｌのＢａｍＨ［−位中にアダプター／クロン化法の適用
下に連結る、（ Ｂｒｅｓａｎ 及び５ｔａｎｌｅｙ
著１９８７年、Ｎｕｃｌ、 Ａｃ１ｄ、 Ｒｅｓ、
、第１０５６頁）、−１＝７アクリル（Ｓｅｐｈａｃｒ
ｙｌ） Ｓ −１０００を介る、モレキュラーシーブ・
クロマトグラフィーによる大きさ選択工程及びコンビテ
ント宿主細胞大腸菌（ＭＣＩ０６１）の形質転換の後、
組換えプラーク形成単位（ｐｆｕ）の量を次のように測
定した：任意抽出クローンをとり出し、選択培地（２５
μｇ／ｍＱアンビンリンを有る、ＬＢ）２ｉＱ中で飽和
まで培養る、。このプラスミド−ＤＮＡを常用のアルカ
リ性溶菌法により単離し、引き続きＢａｍＨＩで切断る
、。
砕る、。Ｔ４−ＤＮＡ−ポリメラーゼ（３７℃で３０分
間）及びフレノウ酵素（２０°Ｃで５分間）を、生じた
ＤＮＡ−７ラグメントの末端を平面にる、ために使用し
た。平らな末端を有る、ＤＮＡを発現ベクターｐＵＥＸ
ｌのＢａｍＨ［−位中にアダプター／クロン化法の適用
下に連結る、（ Ｂｒｅｓａｎ 及び５ｔａｎｌｅｙ
著１９８７年、Ｎｕｃｌ、 Ａｃ１ｄ、 Ｒｅｓ、
、第１０５６頁）、−１＝７アクリル（Ｓｅｐｈａｃｒ
ｙｌ） Ｓ −１０００を介る、モレキュラーシーブ・
クロマトグラフィーによる大きさ選択工程及びコンビテ
ント宿主細胞大腸菌（ＭＣＩ０６１）の形質転換の後、
組換えプラーク形成単位（ｐｆｕ）の量を次のように測
定した：任意抽出クローンをとり出し、選択培地（２５
μｇ／ｍＱアンビンリンを有る、ＬＢ）２ｉＱ中で飽和
まで培養る、。このプラスミド−ＤＮＡを常用のアルカ
リ性溶菌法により単離し、引き続きＢａｍＨＩで切断る
、。
分析したプラスミドの５０％より多くが平均〉１．５ｋ
ｂの長さのＤＮＡ−挿入を有した。
ｂの長さのＤＮＡ−挿入を有した。
Ｂ、ブルグドルフェリＺＳ７−遺伝子バンクの平板培養
及びスクリーニング 細胞を２４ Ｘ ２４ ｃｍプレート上に、プレトあた
り７０００ ｐｆｕの密度で平板培養し、３０°ＣＴ
ｌ 夜ｆｆｌ温保持る、。ニトロセルロースフィルター
（ＮＣ）上にクローンを移した後、βガラクトシダーゼ
−融合蛋白質の発現を４２°Ｃで２時間の恒温保持によ
り誘発した。このフィルターを５％ＳＤＳ処置したワッ
トマン（Ｗｈａｔｍａｎ） ３ Ｍ Ｍ紙上に移し、９
５℃で約２５分間恒温保持した。次いで、この蛋白質を
、常用の半乾燥ウェスタンプロット法装置を使用して電
気プロットした。ＮＣ−フィルターをＤＮＡ５ｅ−処置
した後、免疫活性クローンをモノクローナル抗体の使用
下に発現スクリーニングにより同定した。ＮＣ−フィル
ター上の非特異的結合位を０．２％（重量／容量）ゼラ
チンと３ｍｍｏｌ／ Ｑ Ｎ ａＮ ３を含有る、Ｐ
ＢＳと４時間恒温保持る、ことにより飽和した。引き続
き、このフィルターを抗−３１ｋＤモノクロ一ナル抗体
クローンＬ Ａ −２の培養上澄と共に１８時間連続的
な振盪下に恒温保持した。十分な洗浄（ＰＢＳ＋１％（
容量／容量）トライトンｘ−１００： ＰＢＳ＋０．５
ｍｏｌ／１１塩化ナトリウム；Ｐ Ｂ Ｓ ＋ ｌ ｍ
ｏｌ／１２塩化ナトリウム：各工程１０分間）の後、こ
のフィルターを家兎−抗一マウスーＩｇＧ−抗体のペル
オキシダーゼ標識Ｆ（ａｂ） ２−調剤のｌ ： １０
０００希釈と室温テ１．５時間連続的振盪下に恒温保持
した。このフィルターを再び前記のように洗浄し、次い
でペルオキシダーゼ基質としてのジアミノベンチグンと
共に恒温保持る、。組換ＰＦＵ１０４のうちの２０クロ
ーンがモノクローナル抗体ＬＡ２と反応した。
及びスクリーニング 細胞を２４ Ｘ ２４ ｃｍプレート上に、プレトあた
り７０００ ｐｆｕの密度で平板培養し、３０°ＣＴ
ｌ 夜ｆｆｌ温保持る、。ニトロセルロースフィルター
（ＮＣ）上にクローンを移した後、βガラクトシダーゼ
−融合蛋白質の発現を４２°Ｃで２時間の恒温保持によ
り誘発した。このフィルターを５％ＳＤＳ処置したワッ
トマン（Ｗｈａｔｍａｎ） ３ Ｍ Ｍ紙上に移し、９
５℃で約２５分間恒温保持した。次いで、この蛋白質を
、常用の半乾燥ウェスタンプロット法装置を使用して電
気プロットした。ＮＣ−フィルターをＤＮＡ５ｅ−処置
した後、免疫活性クローンをモノクローナル抗体の使用
下に発現スクリーニングにより同定した。ＮＣ−フィル
ター上の非特異的結合位を０．２％（重量／容量）ゼラ
チンと３ｍｍｏｌ／ Ｑ Ｎ ａＮ ３を含有る、Ｐ
ＢＳと４時間恒温保持る、ことにより飽和した。引き続
き、このフィルターを抗−３１ｋＤモノクロ一ナル抗体
クローンＬ Ａ −２の培養上澄と共に１８時間連続的
な振盪下に恒温保持した。十分な洗浄（ＰＢＳ＋１％（
容量／容量）トライトンｘ−１００： ＰＢＳ＋０．５
ｍｏｌ／１１塩化ナトリウム；Ｐ Ｂ Ｓ ＋ ｌ ｍ
ｏｌ／１２塩化ナトリウム：各工程１０分間）の後、こ
のフィルターを家兎−抗一マウスーＩｇＧ−抗体のペル
オキシダーゼ標識Ｆ（ａｂ） ２−調剤のｌ ： １０
０００希釈と室温テ１．５時間連続的振盪下に恒温保持
した。このフィルターを再び前記のように洗浄し、次い
でペルオキシダーゼ基質としてのジアミノベンチグンと
共に恒温保持る、。組換ＰＦＵ１０４のうちの２０クロ
ーンがモノクローナル抗体ＬＡ２と反応した。
３１ｋＤ抗ｊｉ［（ＯｓｐＡ）の配列分析ＬＡ−２との
抗体反応プラスの組換え大腸菌の挿入ＤＮＡを常法で単
離した。このクローンのＤＮＡ−挿入分はＢ、ブルグド
ルフェリ３１ｋＤ抗原をコードる、ＯｓｐＡ−遺伝子を
完全な長さで含有る、。この挿入分を有る、プラスミド
をｐ Ｚ Ｓ −７／ ３１−２と表わし、ＤＳＭにブ
タペスト条約にのっとり寄託した（ＤＳＭ５５２８）。
抗体反応プラスの組換え大腸菌の挿入ＤＮＡを常法で単
離した。このクローンのＤＮＡ−挿入分はＢ、ブルグド
ルフェリ３１ｋＤ抗原をコードる、ＯｓｐＡ−遺伝子を
完全な長さで含有る、。この挿入分を有る、プラスミド
をｐ Ｚ Ｓ −７／ ３１−２と表わし、ＤＳＭにブ
タペスト条約にのっとり寄託した（ＤＳＭ５５２８）。
この免疫プラスのクローンから生産された組換蛋白質は
ｒＺＳ７／３１−２として示された。ＯｓｐＡ−遺伝子
のコードしたＤＮＡ−配列を決定した。この配列をこれ
から誘導したＯｓｐＡ蛋白質のアミノ酸配列と共に第１
１ｆｆｌに示した。
ｒＺＳ７／３１−２として示された。ＯｓｐＡ−遺伝子
のコードしたＤＮＡ−配列を決定した。この配列をこれ
から誘導したＯｓｐＡ蛋白質のアミノ酸配列と共に第１
１ｆｆｌに示した。
第１図は、Ｂ、ブルグドルフェリの３１ｋＤ抗原がアモ
ノ酸２７３を有る、蛋白質に相当る、こと明らかにる、
。
ノ酸２７３を有る、蛋白質に相当る、こと明らかにる、
。
非融合蛋白質の調製
ａ） 免疫反応性蛋白質ｒ Ｚ Ｓ ７ ／ ３１−２
を発現る、クローンをアンピシリンを含有スるＬＢｌＯ
ｍｌｌ中で３０℃で一夜培養した。培養物１ｍｆｆ１を
選択培地１００ｍ１ｌ中に装入し、良好な通気下に３０
℃で密度８Ｘ１０７細胞／＋ＩＱ（Ａ６００−０．２）
まで培養した。組換蛋白質の発現を４２°Ｃへの宿主細
胞の移動により得た。冷却し、遠心分離した後、細胞を
５ＴＥ−緩衝液（１０ｍｍｏｌ／ Ｑ トリス、１００
ｍｍｏｌ／ Ｑ塩化ナナトリウム１ｉ＋ｍｏｌ／ｌ：
ＤＴＡ、ｐＨ８，０）中で洗浄し、残分を溶菌緩衝液（
２５％蔗糖、５０ｍｍｏｌ／１２トリス、ｐＨ８，０）
０．６ｔｇＱ中に再懸濁させた。リゾチーム（Ｉ ０ｙ
ａｙ ／ａｉｌ） ｌ ５０μＱを添加し、この混合
物を氷上で１５分間恒温保持した後、ＤＮＡ５ｅｌ （
ｌ ０１１ｇ／１１１り １８μＱと共に１ｍｏｌ／（
ｌ塩化マグネシウム５ μａの存在下に、更に恒温保持
（氷上１５分間）した。最後に４×洗洗浄剤台物（１％
トライトンＸ１００．０．５％デオキンコレーＩ・、０
．１１ＩＩｏｌ／ＱＮａＣＱ、ＩＯｍｍｏｌ／１２ｈリ
ス、ｐＨ７，４）２５０ｐｆｆを添加し、氷上で５分間
恒温保持した。遠心分離後、残分を２回緩荷液Ａ（５０
ｍｌｌｌＯ１／Ｑト リス、 ５０ ｍｍｏｌ／ Ｑ
Ｎ ａＣＱ、 １ ｍｍｏｌ／Ｑ ＥＤＴＡ、ｐ
Ｈ８，０）で洗浄し、付加的に８Ｍ尿素を含有る、緩衝
液Ａ９容量中に再懸濁し、室温で１時間恒温保持した。
を発現る、クローンをアンピシリンを含有スるＬＢｌＯ
ｍｌｌ中で３０℃で一夜培養した。培養物１ｍｆｆ１を
選択培地１００ｍ１ｌ中に装入し、良好な通気下に３０
℃で密度８Ｘ１０７細胞／＋ＩＱ（Ａ６００−０．２）
まで培養した。組換蛋白質の発現を４２°Ｃへの宿主細
胞の移動により得た。冷却し、遠心分離した後、細胞を
５ＴＥ−緩衝液（１０ｍｍｏｌ／ Ｑ トリス、１００
ｍｍｏｌ／ Ｑ塩化ナナトリウム１ｉ＋ｍｏｌ／ｌ：
ＤＴＡ、ｐＨ８，０）中で洗浄し、残分を溶菌緩衝液（
２５％蔗糖、５０ｍｍｏｌ／１２トリス、ｐＨ８，０）
０．６ｔｇＱ中に再懸濁させた。リゾチーム（Ｉ ０ｙ
ａｙ ／ａｉｌ） ｌ ５０μＱを添加し、この混合
物を氷上で１５分間恒温保持した後、ＤＮＡ５ｅｌ （
ｌ ０１１ｇ／１１１り １８μＱと共に１ｍｏｌ／（
ｌ塩化マグネシウム５ μａの存在下に、更に恒温保持
（氷上１５分間）した。最後に４×洗洗浄剤台物（１％
トライトンＸ１００．０．５％デオキンコレーＩ・、０
．１１ＩＩｏｌ／ＱＮａＣＱ、ＩＯｍｍｏｌ／１２ｈリ
ス、ｐＨ７，４）２５０ｐｆｆを添加し、氷上で５分間
恒温保持した。遠心分離後、残分を２回緩荷液Ａ（５０
ｍｌｌｌＯ１／Ｑト リス、 ５０ ｍｍｏｌ／ Ｑ
Ｎ ａＣＱ、 １ ｍｍｏｌ／Ｑ ＥＤＴＡ、ｐ
Ｈ８，０）で洗浄し、付加的に８Ｍ尿素を含有る、緩衝
液Ａ９容量中に再懸濁し、室温で１時間恒温保持した。
この試料をＭ衝ＨＢＣ５０ｍｍｏｌ ＫＨ２ＰＯ４／
Ｋ２ＨＰＯ４５０ｍｏｌ／ｉｌ ＮａＣｌ２．１ｍｍ
ｏｌ／（ｌ ＥＤＴＡ、ｐＨ１０，７）９部で希釈し、
室温で３０分間撹拌し、この際ｐＨ−値をＫＯＨの添加
下に１Ｏ１７に保持しＩ；。溶剤のｐＨ値をＨＣＱの添
加により７．０にＩＩＲ節した後、この試料を一夜緩荷
液へに対して透析しく４°Ｃで）、５５３４回転装置中
で４°Ｃ，＋００００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。
Ｋ２ＨＰＯ４５０ｍｏｌ／ｉｌ ＮａＣｌ２．１ｍｍ
ｏｌ／（ｌ ＥＤＴＡ、ｐＨ１０，７）９部で希釈し、
室温で３０分間撹拌し、この際ｐＨ−値をＫＯＨの添加
下に１Ｏ１７に保持しＩ；。溶剤のｐＨ値をＨＣＱの添
加により７．０にＩＩＲ節した後、この試料を一夜緩荷
液へに対して透析しく４°Ｃで）、５５３４回転装置中
で４°Ｃ，＋００００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。
組換蛋白質を含有る、上澄を２０℃で保存した。
ｂ） このクローンは免疫反応性蛋白質ｒ Ｚ Ｓ ７
／ ３１−２を培地中にも分泌る、ので、培養上澄か
ら直接精製（アフィニティークロマトグラフィー）る、
ことも可能である。
／ ３１−２を培地中にも分泌る、ので、培養上澄か
ら直接精製（アフィニティークロマトグラフィー）る、
ことも可能である。
組換ＯｓｐＡ（非融合）蛋白質の調製及びアフィニティ
ークロマドグラフイー精製 引き続き組換蛋白質をアフィニティークロマトグラフィ
ーにより精製した。この目的のためには精製したモノク
ローナル抗体ＬＡ−２を活性化セファロースＣＬ４Ｂに
共有結合させた。
ークロマドグラフイー精製 引き続き組換蛋白質をアフィニティークロマトグラフィ
ーにより精製した。この目的のためには精製したモノク
ローナル抗体ＬＡ−２を活性化セファロースＣＬ４Ｂに
共有結合させた。
組換蛋白質を含有る、透析尿素抽出液をマウスＩｇＧ−
セファロースＣＬ４Ｂに吸着し、引き続きＬＡ−２−セ
ファロースＣＬ４Ｂカラムを介して加えた。強力な洗浄
後、結合した組換蛋白質を０ 、１ ｍｏｌ／ Ｑグリ
セリン／ＭＣＩ２−０．１ｍｏｌ／（ｌ ＮａＣ（１
、Ｐ）４２．５で溶離した。集めた７ラク／ＢンのｐＨ
値を ０．５ ｍｏｌ／ＱＫ２ＨＰＯ４’八。容量の
添加により、すぐに中和した。蛋白質含有７ラクシラン
を濃縮し、透析した。５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動を用いて精製の度合を測定した。
セファロースＣＬ４Ｂに吸着し、引き続きＬＡ−２−セ
ファロースＣＬ４Ｂカラムを介して加えた。強力な洗浄
後、結合した組換蛋白質を０ 、１ ｍｏｌ／ Ｑグリ
セリン／ＭＣＩ２−０．１ｍｏｌ／（ｌ ＮａＣ（１
、Ｐ）４２．５で溶離した。集めた７ラク／ＢンのｐＨ
値を ０．５ ｍｏｌ／ＱＫ２ＨＰＯ４’八。容量の
添加により、すぐに中和した。蛋白質含有７ラクシラン
を濃縮し、透析した。５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動を用いて精製の度合を測定した。
組換蛋白質ｒ Ｚ Ｓ ７ ／ ３１−２の免疫学的特
徴付は 組換蛋白質ｒ Ｚ Ｓ ７ ／ ３１−２を免疫学的に
調べた。比較のｊ；めに組換蛋白質ｒ Ｂ ３１ ／
４ｌ−９（Ｂ、ブルグドルフェリ４＋ｋＤ表面抗原）を
用いた。
徴付は 組換蛋白質ｒ Ｚ Ｓ ７ ／ ３１−２を免疫学的に
調べた。比較のｊ；めに組換蛋白質ｒ Ｂ ３１ ／
４ｌ−９（Ｂ、ブルグドルフェリ４＋ｋＤ表面抗原）を
用いた。
平板−マイクロ力価プレートを組換蛋白質ｒ Ｚ Ｓ
７ ／ ３１−２及びｒ Ｂ ３１ ／ ４１−９の尿
素抽出液で、もしくは遺伝子発現のために使用した大腸
菌株ＭＣｌ０６１の尿素抽出液で塗布した。非特異的結
合位を燐酸塩緩衝食塩溶液中の０．２％ゼラチンで封鎖
した。このように準備したマイクロ力価プレートの窪み
を前記モノクローナル抗体ＬＡ−２（抗−３１ｋＤ。
７ ／ ３１−２及びｒ Ｂ ３１ ／ ４１−９の尿
素抽出液で、もしくは遺伝子発現のために使用した大腸
菌株ＭＣｌ０６１の尿素抽出液で塗布した。非特異的結
合位を燐酸塩緩衝食塩溶液中の０．２％ゼラチンで封鎖
した。このように準備したマイクロ力価プレートの窪み
を前記モノクローナル抗体ＬＡ−２（抗−３１ｋＤ。
０ｓｐ−Ａ）、ＬＡ−１（抗−４１ｋＤ、フラジェリン
）もしくはＡＣＨＴ−２（抗−σ１抗キモトリプシン）
で配合した。結合したモノクローナル抗体をペルオキシ
ダーゼ標識した種特異性抗−マウス免疫グロブリンと反
応させた、結合したペルオキシダーゼ標識抗体をペルオ
キシダーゼ基質オルトフェニレンジアミンを使用して定
量した。マイクロ力価プレート中で４９２０ＩＩｌ（Ａ
４９２）ニオケル吸収ヲ自動プレート測光機を用いて直
接測定した。吸収の強度は結合したモノクローナル抗体
の量に関る、尺度である。
）もしくはＡＣＨＴ−２（抗−σ１抗キモトリプシン）
で配合した。結合したモノクローナル抗体をペルオキシ
ダーゼ標識した種特異性抗−マウス免疫グロブリンと反
応させた、結合したペルオキシダーゼ標識抗体をペルオ
キシダーゼ基質オルトフェニレンジアミンを使用して定
量した。マイクロ力価プレート中で４９２０ＩＩｌ（Ａ
４９２）ニオケル吸収ヲ自動プレート測光機を用いて直
接測定した。吸収の強度は結合したモノクローナル抗体
の量に関る、尺度である。
モノクローナル抗体はＬＡ−２は特異的な方法でｒＺＳ
７／３１ ２と反応る、が、ＭＣｌ０６１もしくはｒＢ
３１／４１ ９とは反応しない。モノクローナル抗体Ｌ
Ａ−１の対照反応はｒ Ｂ ３１ ／ ４１−９に関し
て特異的である。
７／３１ ２と反応る、が、ＭＣｌ０６１もしくはｒＢ
３１／４１ ９とは反応しない。モノクローナル抗体Ｌ
Ａ−１の対照反応はｒ Ｂ ３１ ／ ４１−９に関し
て特異的である。
モノクローナル対照抗体ＡＣＨＴ−２（負対照）は蛋白
質のいずれとも注目に値る、反応を示さない。
質のいずれとも注目に値る、反応を示さない。
第２図はモノクローナル抗体ＬＡ−２により特異的な方
法で認識される抗原エピトープがＢ、ブルグドルフェリ
ＺＳ７のゲノムからクローン化された組換蛋白質ｒ Ｚ
Ｓ ７ ／ ３１−２上に発現されることを示す。
法で認識される抗原エピトープがＢ、ブルグドルフェリ
ＺＳ７のゲノムからクローン化された組換蛋白質ｒ Ｚ
Ｓ ７ ／ ３１−２上に発現されることを示す。
例 ４
３１ｋＤ （Ｏｓ ｐＡ）もしくは３４ｋＤ抗原（Ｏｓ
ｐＢ）に関して特異的な抗体と４１ｋＤ抗原（フラノニ
リン）に特異的な抗体との比較モノクローナル抗体ＬＡ
−２及びＬＡ−２６゜１は３＋ｋＤ抗原Ｏｓ ｐ Ａを
認識し、アイソタイプＩｇＧ２ｂもしくはＩｇＧ１から
のものである。モノクローナル抗体ＬＡ−２５，１及び
ＬＡ−２７，１は３４ｋＤ抗原ＯｓｐＢを認識し、アイ
ソタイプＩ ｇＧ２ ｂもしくはＩｇＧ１からのもので
ある。モノクローナル抗体ＬＡ−１Ｏ及びＬＡ−２１は
Ｂ ブルグドルフェリの７ラジ工リンー結合４１ｋＤペ
リプラズム蛋白質に関して特異的であり、アイソタイプ
ＩｇＧ２ａもしくはＩｇＧ１からのものである。すべて
の前記抗体は例２に記載された方法により得られた。こ
の実験においては５ｃｉｄ−マウス中の他のＢ、ブルグ
ドルフェリに対る、モノクローナル抗体もライムーポレ
リオース（ＬｙｍｅＢｏｒｒｅｌｉｏｓｅ）の臨床的症
状の保護に作用る、かどうかを確認した。
ｐＢ）に関して特異的な抗体と４１ｋＤ抗原（フラノニ
リン）に特異的な抗体との比較モノクローナル抗体ＬＡ
−２及びＬＡ−２６゜１は３＋ｋＤ抗原Ｏｓ ｐ Ａを
認識し、アイソタイプＩｇＧ２ｂもしくはＩｇＧ１から
のものである。モノクローナル抗体ＬＡ−２５，１及び
ＬＡ−２７，１は３４ｋＤ抗原ＯｓｐＢを認識し、アイ
ソタイプＩ ｇＧ２ ｂもしくはＩｇＧ１からのもので
ある。モノクローナル抗体ＬＡ−１Ｏ及びＬＡ−２１は
Ｂ ブルグドルフェリの７ラジ工リンー結合４１ｋＤペ
リプラズム蛋白質に関して特異的であり、アイソタイプ
ＩｇＧ２ａもしくはＩｇＧ１からのものである。すべて
の前記抗体は例２に記載された方法により得られた。こ
の実験においては５ｃｉｄ−マウス中の他のＢ、ブルグ
ドルフェリに対る、モノクローナル抗体もライムーポレ
リオース（ＬｙｍｅＢｏｒｒｅｌｉｏｓｅ）の臨床的症
状の保護に作用る、かどうかを確認した。
Ｂ、ブルグドルフェリＢ５１−有機体ｌＸ１０８での皮
下接種後９１ＢでＣ５７ＢＬ／６−マウスからポリクロ
ーナル抗−８３１−免疫血清（Ｉ Ｍ Ｓ ）を採取し
た。Ｂ、ブルグドルフェリ２Ｓ７ １Ｘ１０８での皮下
接種後６８日でＣ５７ｓ Ｉ−／ ６−マウスからポリ
クローナル抗−２５７ＩＭＳを採取した。両方の血清は
エリザシステムで測定したように特異的抗体６０μ９／
ｍＱを含有した（Ｓｃｈａｉｂｌｅ等著、Ｊ、 Ｅｘｐ
、 Ｍｅｄ。
下接種後９１ＢでＣ５７ＢＬ／６−マウスからポリクロ
ーナル抗−８３１−免疫血清（Ｉ Ｍ Ｓ ）を採取し
た。Ｂ、ブルグドルフェリ２Ｓ７ １Ｘ１０８での皮下
接種後６８日でＣ５７ｓ Ｉ−／ ６−マウスからポリ
クローナル抗−２５７ＩＭＳを採取した。両方の血清は
エリザシステムで測定したように特異的抗体６０μ９／
ｍＱを含有した（Ｓｃｈａｉｂｌｅ等著、Ｊ、 Ｅｘｐ
、 Ｍｅｄ。
、第１７０巻、１９８９年、第１４２７〜１４３２頁）
。正常マウス血清（ＮＭＳ）を非感染（５７ＢＬ／６−
マウスから採取した。
。正常マウス血清（ＮＭＳ）を非感染（５７ＢＬ／６−
マウスから採取した。
接種時及びこれに続き４日間の間隔で、前記抗体、ＩＭ
Ｓ、ＮＭＳ又はＰＢＳ−緩衝液を次の記録により５ｃｉ
ｄ−マウス中に腹腔内に受動移動した。
Ｓ、ＮＭＳ又はＰＢＳ−緩衝液を次の記録により５ｃｉ
ｄ−マウス中に腹腔内に受動移動した。
０日目及び ３日日：１００μＱ
７日目及びｌＯ日出目２００μＱ
１３３日目び１７日回目：００μＱ
抗−２５７ＩＭＳ、抗−８３１ＦＭＳで、又はモノクロ
ーナル抗体ＬＡ−２で処置した５ｃｉｄ−マウスは全く
関節炎の臨床的症状を示さなかった、すなわち２１日間
の監察期間の間、脛骨足根骨関節の発赤及びはれは全く
現われなかった。同様に心臓炎及び肝炎の症状も全く確
認されなかった。組織病理学的検査は抗−２５７−ＩＭ
Ｓ、抗−Ｂ３１−ＩＭＳで、又はモノクローナル抗体Ｌ
Ａ−２で処置した５ｃｉｄ−マウスの関節、心臓及び肝
臓に全く変化がないということを示した。
ーナル抗体ＬＡ−２で処置した５ｃｉｄ−マウスは全く
関節炎の臨床的症状を示さなかった、すなわち２１日間
の監察期間の間、脛骨足根骨関節の発赤及びはれは全く
現われなかった。同様に心臓炎及び肝炎の症状も全く確
認されなかった。組織病理学的検査は抗−２５７−ＩＭ
Ｓ、抗−Ｂ３１−ＩＭＳで、又はモノクローナル抗体Ｌ
Ａ−２で処置した５ｃｉｄ−マウスの関節、心臓及び肝
臓に全く変化がないということを示した。
アイソタイプＩｇＧ１の他のＯｓ ｐＡ−特異的モノク
ローナル抗体ＬＡ−２６，１並びにＯｓ ｐＢ特異的抗
体ＬＡ−２５，１及びＬＡ−２７，１は関節炎、心臓炎
及び肝炎の臨床的症状をやわらげる。ここでは検査した
器官中に弱い病理学的変化が見られた。
ローナル抗体ＬＡ−２６，１並びにＯｓ ｐＢ特異的抗
体ＬＡ−２５，１及びＬＡ−２７，１は関節炎、心臓炎
及び肝炎の臨床的症状をやわらげる。ここでは検査した
器官中に弱い病理学的変化が見られた。
これとは反対に、ＰＢＳ−緩衝液、ＮＭＳ又は７ラジエ
リンに対る、モノクローナル抗体（ＬＡ−１０又はＬＡ
−２１）を投与された５ｃｉｄ−マウスは未処置の５ｃ
ｉｄ−マウスに典型的な関節炎の臨床的徴候、病理学的
変化を示した（第３表）。最後にあげた動物の症状の重
さは接種後時間と共に上昇し、全監察期間の間低下しな
かった。まず抗２５７ ［ＭＳで、 又は抗ＬＡ−２
で処置したＳ ｃｉｄ−マウスからは全くスピロヘータ
ーは単離されなかった。これとは反対に、ＰＢＳ−緩衝
液、ＮＭＳ又はモノクローナル抗体ＬＡ−２５，１、Ｌ
Ａ−２６，１，ＬＡ２７．１．ＬＡ−１０又はＬＡ２１
で処置しり５ｃｉｄ−マウスの血液からの免疫蛍光法に
より、かつ培養によりスピロヘーターの検出が可能であ
る。
リンに対る、モノクローナル抗体（ＬＡ−１０又はＬＡ
−２１）を投与された５ｃｉｄ−マウスは未処置の５ｃ
ｉｄ−マウスに典型的な関節炎の臨床的徴候、病理学的
変化を示した（第３表）。最後にあげた動物の症状の重
さは接種後時間と共に上昇し、全監察期間の間低下しな
かった。まず抗２５７ ［ＭＳで、 又は抗ＬＡ−２
で処置したＳ ｃｉｄ−マウスからは全くスピロヘータ
ーは単離されなかった。これとは反対に、ＰＢＳ−緩衝
液、ＮＭＳ又はモノクローナル抗体ＬＡ−２５，１、Ｌ
Ａ−２６，１，ＬＡ２７．１．ＬＡ−１０又はＬＡ２１
で処置しり５ｃｉｄ−マウスの血液からの免疫蛍光法に
より、かつ培養によりスピロヘーターの検出が可能であ
る。
第
３
表
マウス種
Ｃ，Ｂ−１７５ｃｉｄ
（１つ１の数）
ｎ＝８
ｎ＝３
ｎ＝３
ｎ＝２
−６
ｎ＝３
−３
ｎ＝３
ｎ＝３
ｎ＝３
処
置
ＰＢＳ （負の対照）
ＮＭＳ（負の対照）
抗−８３１１ＭＳ
抗−ＺＳ７ １Ｍ５
Ｌ Ａ −２（ＯｓｐＡ）
Ｌ Ａ −１０（フラジェリノ）
ＬＡ−２１（７うへリン）
ＬＡ −２６，１（ＯｓｐＡ ）
ＬＡ −２５，１（ＯｓｐＢ ）
Ｌ Ａ −２７，１（ＯｓｐＢ ）ＩｇＧ 臨
床 サブタイプ 関節↓ ± ＋ 組織病理学的変化を次のように示した：なし 無症状 中程度 重い 免疫蛍光によるＢ、ブルグドルフェリの検出は＋／− 組織病理学 Ｂ、プルグドフェリの検出 瞼 末梢関節炎／関節炎 心臓炎 （培養及び免疫蛍光法） ＋ ＋ 十 ＋ ＋ ヅ 士 ± ± ＋ ± ± 釘べての検査個体に可能なわけではなかった例 ５ ＯｓｐＡで免疫したマウスからの抗血清の、５ｃｉｄ〜
マウスのライム・ボレリオースの経過に対る、作用 この実験において、天然ＯｓｐＡ（Ｂ、ブルグドルフェ
リＺＳ−７から単離）又は組換Ｏ５ｐＡ（組換プラスミ
ドｐＺＳ−７／３１−２ （ＤＳＭ ５５２８ ”）で
形質転換した大腸菌から単離）の正常マウス（マウス種
Ｃ５７ＢＬ／６）中への投与は保護ポリクローナル抗体
を生産る、。
床 サブタイプ 関節↓ ± ＋ 組織病理学的変化を次のように示した：なし 無症状 中程度 重い 免疫蛍光によるＢ、ブルグドルフェリの検出は＋／− 組織病理学 Ｂ、プルグドフェリの検出 瞼 末梢関節炎／関節炎 心臓炎 （培養及び免疫蛍光法） ＋ ＋ 十 ＋ ＋ ヅ 士 ± ± ＋ ± ± 釘べての検査個体に可能なわけではなかった例 ５ ＯｓｐＡで免疫したマウスからの抗血清の、５ｃｉｄ〜
マウスのライム・ボレリオースの経過に対る、作用 この実験において、天然ＯｓｐＡ（Ｂ、ブルグドルフェ
リＺＳ−７から単離）又は組換Ｏ５ｐＡ（組換プラスミ
ドｐＺＳ−７／３１−２ （ＤＳＭ ５５２８ ”）で
形質転換した大腸菌から単離）の正常マウス（マウス種
Ｃ５７ＢＬ／６）中への投与は保護ポリクローナル抗体
を生産る、。
この抗体を５ｃｉｄ−マウスに投与る、場合、ライム・
ポレリオースに対る、保護が生じる。この際、組換Ｏｓ
ｐＡは天然ＯｓｐＡと比較可能な保護免疫応答を誘発る
、ことが確認される。
ポレリオースに対る、保護が生じる。この際、組換Ｏｓ
ｐＡは天然ＯｓｐＡと比較可能な保護免疫応答を誘発る
、ことが確認される。
この実験における結果及び実施方法の詳細を第４表に記
載る、。
載る、。
組換ＯｓｐＡの獲得は例３に記載した。
天然ＯｓｐＡの獲得並びにＯｓｐＡでのマウスの免疫を
次のように行なう： 天然３＋ｋＤａ ＯｓｐＡの富化 スピロヘータ−３，２ｘｌ□＋ｏをプロテアーゼ阻害剤
（５ｍｍｏｌ／ｆｆ ＥＤＴＡ、 ５＋ｏｍｏｌ／（
１ベンズアミジン及び０．５ ｍｍｏｌ／１２ Ｐ
ＭＳＦ）の存在下にＰ Ｂ Ｓ ５ｍＱ／ ７．５ｍＱ
ｎ−ブタノール中で２時間マグネットスターラーで撹
拌る、。その後、この混合物を１１００００ｒｐ及び４
℃でゾルパル（Ｓｏｒｖａｌｌ）−遠心分離機（固定角
度ローター）中で９０分間遠心分離る、。
次のように行なう： 天然３＋ｋＤａ ＯｓｐＡの富化 スピロヘータ−３，２ｘｌ□＋ｏをプロテアーゼ阻害剤
（５ｍｍｏｌ／ｆｆ ＥＤＴＡ、 ５＋ｏｍｏｌ／（
１ベンズアミジン及び０．５ ｍｍｏｌ／１２ Ｐ
ＭＳＦ）の存在下にＰ Ｂ Ｓ ５ｍＱ／ ７．５ｍＱ
ｎ−ブタノール中で２時間マグネットスターラーで撹
拌る、。その後、この混合物を１１００００ｒｐ及び４
℃でゾルパル（Ｓｏｒｖａｌｌ）−遠心分離機（固定角
度ローター）中で９０分間遠心分離る、。
表面蛋白質を含有る、水相を取り出し、クロロホルムで
３回洗浄る、。
３回洗浄る、。
１白質含量を２８０ｎｍでの吸光により、もしくはＢＣ
Ａ−テストで測定る、。
Ａ−テストで測定る、。
抗−Ｂ、ブルグドルフェリ家兎血清でのウェスタンプロ
ットもしくはジルベルゲル（Ｓｉｌｂｅｒ−ｇｅ＋）法
においては、菌株ＺＳ７にとって主バンドは３１ｋＤａ
の分子量範囲に、かつ弱いバンドは２０．３４及び６５
〜６８ｋＤａに見い出された。Ｂ、ブルグドルフェリ菌
株Ｂ３１のブタノール／木調剤は主バンドを３１ｋＤａ
に、弱いバンドを２０及び３４ｋＤａに有る、。
ットもしくはジルベルゲル（Ｓｉｌｂｅｒ−ｇｅ＋）法
においては、菌株ＺＳ７にとって主バンドは３１ｋＤａ
の分子量範囲に、かつ弱いバンドは２０．３４及び６５
〜６８ｋＤａに見い出された。Ｂ、ブルグドルフェリ菌
株Ｂ３１のブタノール／木調剤は主バンドを３１ｋＤａ
に、弱いバンドを２０及び３４ｋＤａに有る、。
天然及び組換ＯｓｐＡでのマウスの免疫Ｃ５７ＢＬ６も
しくはＣ，Ｂ−１７マウスを７〜ＩＯ日間の間隔で３回
アジュバント（ＡＢＭ３ ； ５ｅｂａｋ社、Ａｉｄ
ｅｎｂａｃｈ 、 Ｂ ＲＤ ） ｌ ００μａ中の
５μｇ （菌株Ｂ３１からの天然ＯｓｐＡ）もしくはＩ
Ｏμｇ （菌株ＺＳ７からの天然ＯｓｐＡ、ＺＳ、７か
らの組換ＯｓｐＡ）を尻尾のつけねに皮下注射した。
しくはＣ，Ｂ−１７マウスを７〜ＩＯ日間の間隔で３回
アジュバント（ＡＢＭ３ ； ５ｅｂａｋ社、Ａｉｄ
ｅｎｂａｃｈ 、 Ｂ ＲＤ ） ｌ ００μａ中の
５μｇ （菌株Ｂ３１からの天然ＯｓｐＡ）もしくはＩ
Ｏμｇ （菌株ＺＳ７からの天然ＯｓｐＡ、ＺＳ、７か
らの組換ＯｓｐＡ）を尻尾のつけねに皮下注射した。
最後の免疫の後、早くても３週間後、３〜４ケ月の血清
を取り出すことができた。特異的な抗体の含量はエリザ
システムで測定る、。
を取り出すことができた。特異的な抗体の含量はエリザ
システムで測定る、。
４
第１図はＢ、ブルグドルフェリＺＳ７からの３］ｋＤ抗
原（ＯｓｐＡ）のＤＮＡ配列及びアミノ酸配列を示す図
であり、第２図は、組換え蛋白質ｒＺＳ７／３ ２の免
疫学的特徴を示す図である。 咽シ 第 図
原（ＯｓｐＡ）のＤＮＡ配列及びアミノ酸配列を示す図
であり、第２図は、組換え蛋白質ｒＺＳ７／３ ２の免
疫学的特徴を示す図である。 咽シ 第 図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ボレリア・ブルグドルフェリの３１ｋＤ抗原（Ｏｓ
ｐＡ）又は３４ｋＤ抗原（ＯｓｐＢ）に対して特異的な
モノクローナル抗体１種以上を含有することを特徴とす
る、ライム病に対するワクチン。 ２、抗体は、菌株ＺＳ７（ＤＳＭ５５２７）又は／及び
Ｂ３１（ＡＴＣＣ３５２１０）のボレリア・ブルグドル
フェリの３１ｋＤ又は３４ｋＤ抗原に対して特異的であ
る、請求項１記載のワクチン。 ３、ＩｇＧ群有利にＩｇＧ２ｂ又はＩｇＧ１亜群のモノ
クローナル抗体を作用物質として含有する、請求項１又
は２記載のワクチン。 ４、生存可能な病原性Ｂ、ブルグドルフェリ組織で感染
された免疫欠失実験動物において、関節炎、心筋炎及び
肝炎の発症を阻止する、請求項１から３までのいずれか
１項記載のワクチン。 ５、生存可能なＢ、ブルグドルフェリ組織菌株ＺＳ７で
接種された免疫欠失Ｓｃｉｄ−マウスにおいて、関節炎
、心筋炎及び肝炎の発症を阻止する、請求項１から４ま
でのいずれか１項記載のワクチン。 ６、Ｂ、ブルグドルフェリ組織又はその１部で免疫化さ
れている実験動物のリンパ細胞又は脾臓細胞からのライ
ム病に対するワクチンを取得する方法において、リンパ
細胞又は脾臓細胞融合物から、請求項１から５までのい
ずれか１項記載のモノクローナル抗体を産生するハイブ
リドーマを得ることを特徴とする、ライム病に対するワ
クチンの取得法。 ７、免疫化のために、完全Ｂ、ブルグドルフェリＢ３１
又は／及びＺＳ７組織を使用する、請求項６記載の方法
。 ８、ハイブリドーマ−セルラインＥＣＡＣＣ８９０９１
３０２から分泌された、ＯｓｐＡに対するモノクローナ
ル抗体ＬＡ２。 ９、ハイブリドーマ−セルラインＥＣＡＣＣ９００５０
４０６から分泌された、ＯｓｐＡに対するモノクローナ
ル抗体ＬＡ２６．１。 １０、ハイブリドーマ−セルラインＥＣＡＣＣ９００５
０４０５から分泌された、ＯｓｐＢに対するモノクロー
ナル抗体ＬＡ２５．１。 １１、ハイブリドーマ−セルラインＥＣＡＣＣ９００５
０４０７から分泌された、ＯｓｐＢに対するモノクロー
ナル抗体ＬＡ２７．１。 １２、病原性Ｂ、ブルグドルフェリ菌株ＺＳ７（ＤＳＭ
５５２７）。 １３、請求項１から５までのいずれか１項記載の、Ｏｓ
ｐＡに対する抗体と免疫反応する抗原。 １４、請求項１から５までのいずれか１項記載の、Ｏｓ
ｐＢに対する抗体と免疫反応する抗原。 １５、そのために暗号化するＤＮＡ−配列が、蛋白質表
現のために好適であるベクター上に存在する、請求項１
３又は１４記載の抗原。 １６、次のアミノ酸配列： 【遺伝子配列があります】 又はこの配列からの免疫原性エピトープを含有する、請
求項１３又は１５記載の抗原。 １７、β−ガラクトシダーゼ−融合蛋白質又は非融合蛋
白質である、請求項１３から１６までのいずれか１項記
載の抗原。 １８、請求項１３、１５、１６又は１７に記載の抗原に
対して暗号化されており、 （１）次に記載の核酸配列： 【遺伝子配列があります】 （２）遺伝子コードの変性の範囲内でそれに相応する配
列又は （３）（１）又は／及び（２）からの配列と、厳しい条
件下にハイブリド形成する配列を含有することを特徴と
する、組換えＤＮＡ。 １９、請求項１８記載の組換えＤＮＡの１以上のコピー
を含有することを特徴とする、組換えベクター。 ２０、原核性ベクターである、請求項１９記載の組換え
ベクター。 ２１、プラスミドである、請求項２０記載の組換えベク
ター。 ２２、組換えベクターｐＺＳ−７／３１−２（ＤＳＭ５
５２８）。 ２３、請求項１３から１７までのいずれか１項記載の抗
原を得るために、Ｂ、ブルグドルフェリ遺伝子バンクを
、請求項１から５までのいずれか１項記載の抗体１種以
上を用いて検査し、抗体と正の免疫反応を示すクローン
を単離することを特徴とする、請求項１３から１７まで
のいずれか１項記載の抗原の取得法。 ２４、ライム病に対する活性ワクチンにおいて、請求項
１３から１７までのいずれか１項記載の抗原１種以上を
作用物質として、場合によっては慣用の担持剤、充填剤
及び助剤と共に含有することを特徴とする、ライム病に
対する活性ワクチン。 ２５、抗原を遺伝子工学的方法で取得した、請求項２４
記載のワクチン。 ２６、ライム病に対するワクチンを得るために、実験動
物を請求項１３から１７までのいずれか１項記載の抗原
で免疫化させ、この免疫化された実験動物から慣用法で
、ＯｓｐＡ及び／又はＯｓｐＢに対する保護性の、ポリ
クローナル又はモノクローナル抗体を取得することを特
徴とする、ライム病に対するワクチンを取得する方法。 ２７、病原性Ｂ、ブルグドルフェリを単離又は再培養す
る方法において、予め病原体で感染された免疫欠失実験
動物から病原体を取得し、この際、この病原体の病原性
を保持残留させることを特徴とする、病原性Ｂ、ブルグ
ドルフェリ組織を単離し、再培養する方法。２８、感染
Ｓｃｉｄ−マウスの血液又は／及び関節から病原性Ｂ、
ブルグドルフェリＺＳ７組織を取得する、請求項７記載
の方法。
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| DE4015911A DE4015911A1 (de) | 1989-09-19 | 1990-05-17 | Impfstoff gegen die lyme-krankheit |
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