JPH0564927B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野 本発明はストレプトミセス属に属する微生物が
産生する化合物KS−619−１を含有してなる血管
拡張剤に関する。 従来の技術 有用な新規生理活性物質を提供するという目的
のもとに、天然界より入手した数多くの微生物の
生産物について研究を行つた結果、新たに分離し
た微生物の培養物中に血管拡張作用を有する生理
活性物質が生産される事実を見い出した。つい
で、該培養物から該物質を単離、精製し、その理
化学的性質を調べたところ新規生理活性物質であ
ることが判明した。以下、該物質をKS−619−１
と称する。 微生物によつて製造される血管拡張剤として
は、ストレプトミセス・オーレオフアシエンスの
菌株を培養することによつて生産されるWS−
1228A及びＢが知られている〔J.Antibiotics35
151〜156（1982）、同35，157〜163（1982）〕。 発明が解決しようとする問題点 有用な血管拡張剤は常に求められている。 問題点を解決するための手段 KS−619−１は血管拡張作用を有し動脈を拡張
し、末梢血流を増加させ総括的な血圧を降下させ
ることができる薬物である血管拡張剤として有用
である。すなわち、KS−619−１は高血圧、狭心
症、末梢循環不全等の予防治療もしくは処置のた
めに有用である。すなわち、本発明はKS−619−
１単独もしくは有効量のKS−619−１と少なくと
も１種の医薬用補助剤を含有してなる血管拡張剤
に関する。 これらの目的のための投与量は目的とする治療
効果、投与方法、治療期間、年齢、体重等によつ
て異なるが、通常経口もしくは非経口投与（例え
ば注射、塗布、吸入等）の場合大人に対し１日あ
たり0.1〜４mg／Kgである。KS−619−１はその
まま投与することもできるが、通常錠剤、丸剤、
粉末剤、粒剤、カプセル剤、坐剤、注射等の形態
で投与する。 常用の製剤上許容される補助剤を本発明の医薬
組成物のために用いることができる。かかる補助
剤は水、ラクトース、デキストロース、シユクロ
ース、ソルビトール、マニトール、グルコース、
セルロース、シクロデキストリン、タルク、スタ
ーチ、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴ
ム、ポリエチレングリコール、カルボキシメチル
セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、安
息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ステ
アリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウ
ム、鉱物油、植物油、白色ワセリン、液体パラフ
イン等を包含し、製剤の種類によつて適当に選択
する。本組成物は通常KS−619−１を0.01〜85重
量％含有する。 KS−619−１のマウスにおける急性毒性
（LD₅₀）は300mg／Kgpo及び100mg／Kgipである。 KS−619−１は下記式（）で示される化合物
であり、以下の理化学的性質を有する。 性状：橙色粉末 融点：198〜200℃（分解）。198℃付近から褐変し
始め、明瞭な融点を示さない。 比旋光度：〔α〕²⁰ _DはKS−619−１の強い可視部吸
収がナトリウム−Ｄ線と重なるため測定で
きなかつた。 溶解性：酢酸に易溶、メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチル、ブタノールに可
溶、クロロホルム、水に難溶。 呈色反応：塩化第二鉄，ヨウ素およびアニスアル
デヒドの各反応に陽性。 可視部吸収スペクトル：第１図 λmax（Ｅ％）は83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水
中（中性）で470（339）nm、 0.08N HC−83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水中
で450−475（330）nm、 0.08N NaOH−83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水
中で390−410（250），515（340）nm 紫外部吸収スペクトル：第２図 λmax（Ｅ％）は83％メタノール水中（中性）
で225（816），302（587），317（542）nm、 0.08N HC−83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水中
で240（761），265（491），300（681），345（236）
nm、 0.08N NaOH−83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水
中で242（877），298（540），330（721）nm 赤外部吸収スペクトル（KBr） 3380，2960，2900，2840，1697，1664，1618，
1594，1490，1476，1428，1401，1390，1358，
1340，1319，1260，1216，1168，1105，1065，
1029，1021，998，980，921，860，823，772，
757，643，592，575cm^-1 マススペクトル：本物質のマススペクトルは次の
ようなイオンを与える。 457（M⁺−17，ベース・ピーク），431，388 分子量：474 元素分析：（実測値）Ｈ：3.68，Ｃ：65.52，Ｎ：
０％ （計算値）C₂₆H₁₈O₉として Ｈ：3.79，Ｃ：65.82，Ｏ：30.38，
Ｎ：０％¹ H−NMRスペクトル（400MHz，DMSO−d₆，
δ） 12.51（1H，br.s），12.17（1H，br.s），9.08（1H，
ｓ），7.15（1H，ｄ，Ｊ＝2.2），6.58（1H，ｄ，Ｊ
＝2.2），6.38（1H，ｓ），4.01（2H，ｓ），ca.2.8
（2H，ｍ），ca.2.7（2H，ｍ），2.14（3H，ｓ）¹³ C−NMRスペクトル（100MHz，DMSO−d₆，
δc） 189.4，181.6，172.3，165.6，164.7，164.4，
157.8，142.1，141.4，140.5，135.4，131.4，
130.0，120.1，119.9，118.3，116.5，112.4，
109.0，108.7，107.7，49.9，29.8，28.2，20.2 以上のデータよりKS−619−１は新規化合物で
あることが判明した。 次に各種展開剤によるKS−619−１の薄層クロ
マトグラフイーのRf値を第１表に示す。検出は
ヨウ素反応により行つた。

【表】 次にKS−619−１の製造法について説明する。 KS−619−１はストレプトミセス属に属し、
KS−619−１生産能を有する微生物を培地に培養
し、培養物中にKS−619−１を生成蓄積させ、該
培養物からKS−619−１を採取することによつて
製造される。 KS−619−１生産性微生物としてはストレプト
ミセス属に属し、KS−619−１生産能を有するも
のであればいずれの微生物でも用いることができ
る。具体的に好適な例は、ストレプトミセス・カ
リフオルニカスATCC3312株である。該菌株の形
態的特徴および生理的性質は Waksman，S.A.and R.E.Curtis（1916） Soil Science １巻99〜134頁および Waksman，S.A.and A.T.Henrici（1984 in Breed.R.S.，E.G.D.Murray and A.P.Hitc
henseds.） Bergey's Mannual of Determinative Bacteriology ６巻（The williams and wil
kins Co.，Baltimore）929〜980頁 に記載されている。 微生物の培養に際しては放線菌の培養に用いら
れる通常の培養方法が適用される。用いられる培
地は菌の資化しうる炭素源、窒素源、無機物等を
程よく含有する培地であれば天然培地、合成培地
いずれでも用いうる。 炭素源としてはグルコース、フラクトース、シ
ユクロース、スタビロース、澱粉、デキストリ
ン、マンノース、マルトース、糖密等の炭水化
物、クエン酸、リンゴ酸、酢酸、フマール酸など
の有機酸、メタノール、エタノール等のアルコー
ル、メタン、エタン、プロパン、ｎ−パラフイン
等の炭化水素、グルタミン酸等のアミノ酸あるい
はグリセロール等が用いられる。 窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモ
ニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
等のアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミ
ン、シスチン、アラニン等のアミノ酸、尿素、ペ
プトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コー
ン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実粕、大豆カ
ゼイン、カザミノ酸、フアーマメデイア等が用い
られる。 無機物としてはリン酸二水素カリウム、リン酸
水素二ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一
鉄、硫酸マンガン、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パ
ントテン酸カルシウム、モリブデン酸アンモニウ
ム、硫酸アルミニウムカリウム、炭酸バリウム、
炭酸カルシウム、塩化コバルト、食塩等が用いら
れる。 その他必要に応じて培地にビタミン、サイアミ
ン等菌体の増殖あるいはKS−619−１の生産を促
進する物質を加えることができる。 用いられる微生物が特定の物質を要求する場合
は勿論生育に必要な物を加えることが必要であ
る。 培養は振盪培養法、通気攪拌培養法等により、
20〜40℃の温度で中性付近のPHで行われる。 ３〜15日の培養によつてKS−619−１の蓄積が
最大に達し、培養は完了する。 培養物中に、蓄積したKS−619−１を培養液か
ら単離採取するに際しては、通常の生理活性物質
の培養液から採取する方法が適用される。 即ち、濾過、遠心分離等による菌体除去、吸着
樹脂、シリカゲル、シラナイズドシリカゲル、ア
ルミニウム、セルロース、珪藻土、珪酸マグネシ
ウム、ゲル濾過剤等を用いるカラムクロマトグラ
フイーもしくは薄層クロマトグラフイーによる活
性物質の吸脱着処理等によつてKS−619−１は単
離される。 培養液からKS−619−１を単離する１例は次の
通りである。 培養液を濾過もしくは遠心分離することによつ
て菌体を除去する。得られた濾液もしくは上澄液
を吸着樹脂、ダイヤイオンHP−10（三菱化成工
業(株)製）で処理して活性物質を樹脂に吸着する。
ついで、メタノール等の適当な溶剤にて溶出し、
溶出液を減圧濃縮することにより溶剤をとばし水
溶液とする。ついで、この水溶液に水と混和しな
い溶媒たとえば酢酸エチル、酢酸ブチル等を添加
して抽出する。 抽出液を減圧下濃縮し、シリカゲルカラムクロ
マトグラフイーをくり返し行うことによつて精製
する。展開溶媒としては最初はクロロホルム：メ
タノール＝９：１（Ｖ／Ｖ）を用いて溶出し、次
回のクロマトグラフイーの溶媒としてはブタノー
ル：エタノール：クロロホルム：濃アンモニア水
＝４：５：２：２（Ｖ／Ｖ）を用いて溶出する。
更に３番目のシリカゲルカラムクロマトグラフイ
ーの溶媒としてはクロロホルム：メタノール：エ
タノール：水＝10：４：４：２（Ｖ／Ｖ）を用い
て溶出する。KS−619−１を含有する区分を減圧
下濃縮し、メタノールを展開溶媒として用いる
LH−20（フアルマシア社製）カラムクロマトグ
ラフイーを行う。KS−619−１を含む画分を集め
減圧下で濃縮し、KS−619−１の橙色粉末を得
る。 上記精製工程中のKS−619−１の検出は、シリ
カゲル薄層クロマトグラフイー、ついでヨウ素反
応により行つた。 以下に実施例、実験例、参考例を示す。 実施例１ 錠剤 10％ヒドロキシプロピルセルロース溶液をKS
−619−１ 100g、ラクトース40g、コーンスタ
ーチ18g及びカルボキシメチルセルロースカルシ
ウム10gよりなる混合物に加え、混合物を練合す
る。練合物をついで1.0mmの網目を有する押出造
粒機で造粒し、造粒物を60℃で乾燥する。乾燥造
粒物を16メツシユの篩で篩分けし、ついでステア
リン酸マグネシウムを加えて錠剤用粒状物を調製
する。 ついで常法により直径８mmで１錠（170mg）中
KS−619−１を100mgを含有する錠剤を調製する。 実施例２ カプセル剤 10％ヒドロキシプロピルセルロース溶液をKS
−619−１ 50g、ラクトース80g及びポテトスタ
ーチ38gよりなる混合物に加え、混合物を練合す
る。練合物を実施例１と同様にして造粒し、ステ
アリン酸マグネシウムを加えたあと、常法により
１カプセル（170mg）あたりKS−619−１ 50mg
を含有するカプセルを調製する。 実施例３ ソフトカプセル剤 KS−619−１ 10gを大豆油100gに溶解し、溶
液を常法によつてカプセルにみたし、１カプセル
あたりKS−619−１ 10mgを含有するソフトカプ
セルを調製する。 実験例 KS−619−１の血管拡張作用を摘出血管標本を
用いる収縮抑制実験例で説明する。 １ 表面潅流摘出腸間膜動脈標本 白色雑系ウサギ（雄、２〜３Kg）の腹部正中線
を切開し、上腸間膜動脈を腹部大動脈分岐部から
約２〜2.5cmの長さで切り出し、巾３〜４mmのラ
セン状条片を作成した。両端を絹糸で結紮し、下
端は固定棒、上端は強力トランスデユーサー（日
本光電製、SB−1T）につなぎ、初期張力1.5gで
懸垂した。標本はペリスタポンプ（Peristaltic
pump）（Harbard 1210）を用いて、37±１℃に
保ち、95％O₂、５％CO₂ガスを通じた。クレブ
ス・ハンゼライト（Krebs−Henseleit）液〔組
成（ｇ／）、NaC6.92 ，KC0.35，
MgSO₄・7H₂O0.29，CaC₂0.28，KH₂PO₄0.16，
NaHCO₃2.1，グルコース2.0〕を用い10ml／min
の速度で表面潅流を行つた。標本は１〜２時間安
定化させた後、実験に供した。血管収縮物質とし
て塩化カリウムを終濃度20mMになるように標本
の直前に留置したカニユーレから、潅流路内に注
入した。惹起された収縮反応は、張力トランスデ
ユーサーを介して等尺性にポリグラフ（日本光
電；RM−45）に記録した。KS−619−１をエタ
ノールに20mg／mlになるように溶解し、栄養液で
適宜希釈したものを、収縮薬適用の10分前から収
縮反応の終了前まで持続潅流した。 ２ 実験成績

【表】 〓 縮度 〓
第２表に示すようにKS−619−１は濃度依存的
にウサギ腸間膜動脈の収縮を抑制した。 参考例 種菌として、ストレプトミセス・カリフオルニ
カスATCC3312、第１種培地として、グルコース
1.0g／dl、溶性デンプン1.0g／dl、肉エキス
0.3g／dl、酵母エキス0.5g／dl、バクトトリプト
ン（デイフコ社製）0.5g／dl、炭酸カルシウム
0.2g／dl、PH7.2〜7.4の組成を有する培地を用い
る。種菌１白金耳を50ml太型試験管に入れた上記
種培地14mlに植菌し、30℃で１日間振盪培養す
る。 この種培養液４mlを300ml容エルレンマイヤー
フラスコに入つた40mlの第２種培地に植菌する。
第２種培地の組成は第１種培地の組成と同じであ
る。第２種培養は30℃で１日間行う。この種培養
液40mlを２容バツフル付きエルレンマイヤーフ
ラスコに入つた300mlの第３種培地に植菌する。
第３種培地の組成は第１種培地の組成と同じであ
る。第３種培養は30℃で１日間行う。この第３種
培養液900mlを30容のステンレス製ジヤーフア
ーメンター中の主醗酵培地18に植菌する。主醗
酵培地としては、デキストリン3.0g／dl、ソイビ
ーンミール2.0g／dl、コーンスチープリカー
0.25g／dl、リン酸２カリウム0.05g／dl、硫酸マ
グネシウム・７水塩0.05g／dl、塩化カリウム
0.03g／dl、炭酸カルシウム0.3g／dl、PH7.8の組
成を有するものを用いた。 培養は28℃、３日間通気攪拌下に行う。培養後
の培養液中に0.32μg／mlのKS−619−１が蓄積す
る。培養終了後、培養液を遠心分離（15000rpm）
する。上澄液36をダイヤイオンHP−10を充填
した２カラムに通塔し、KS−619−１を吸着さ
せた後、30％（Ｖ／Ｖ）メタノール６で洗浄
し、メタノール６で溶出する。溶出液全てを集
めて濃縮して500mlとし、酢酸エチル1.5で抽出
する。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで脱水
後、濃縮乾固すると、2.0gの油状物が得られる。
これをクロロホルムを用いて充填した150mlのシ
リカゲルカラム（ワコーゲル：和光純薬社製）の
上端に供給する。クロロホルム750mlで洗浄後、
クロロホルム：メタノール＝９：１（Ｖ／Ｖ）450
mlの溶媒を用いて溶出する。溶出液全てを集めて
減圧下で濃縮乾固すると122.8mgの油状物質が得
られる。この油状物をブタノール：エタノール：
クロロホルム：濃アンモニア水＝４：５：２：２
（Ｖ／Ｖ）を用いて充填した100mlのシリカゲルカ
ラム（ワコーゲル）の上端に供給し、展開溶媒と
して充填溶媒と同一組成の溶媒を用いて溶出す
る。溶出画分を7gずつ分取するとフラクシヨン
番号12〜18にKS−619−１が溶出される。この画
分を集め減圧下で濃縮乾固すると約70.7mgの油状
物質が得られる。この油状物をクロロホルム：メ
タノール：エタノール：水＝10：４：４：２
（Ｖ／Ｖ）を用いて充填した90mlのシリカゲルカ
ラム（ワコーゲル）の上端に供給し、展開溶媒と
して充填溶媒と同一組成の溶媒を用いて溶出す
る。溶出画分を7gずつ分取するとフラクシヨン
番号２〜22にKS−619−１が溶出される。この画
分を集め減圧下で濃縮乾固すると約60mgの油状物
質が得られる。この油状物を約５mlのメタノール
に溶解し、メタノールを用いて充填した300mlの
セフアデツクスLH−20（フアルマシア社製）カ
ラムの上端に供給する。メタノールを用いて展開
を行い5gずつ分取すると、フラクシヨン番号24
〜57にKS−619−１が溶出される。この画分を集
め減圧下濃縮乾固すると9.7mgのKS−619−１で
ある橙色粉末が得られる。なお上記工程中のKS
−619−１の検出はシリカゲル薄層クロマトグラ
フイー、ついでヨウ素反応により行つた。 発明の効果 KS−619−１は血管拡張作用を有する。

【図面の簡単な説明】

第１図はKS−619−１の可視部吸収スペクトル
である。実線は0.08N HC−83％（Ｖ／Ｖ）メ
タノール水中、点線は83％（Ｖ／Ｖ）メタノール
水中（中性）、一点鎖線は0.08N NaOH−83％
（Ｖ／Ｖ）メタノール水中で測定した結果を表す。
第２図はKS−619−１の紫外部吸収スペクトルで
ある。各線の意義は上記と同様である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記式（）で示されるKS−619−１を含有
   してなる血管拡張剤。