JPH0449291A - 生理活性物質ｆｄ―８９１ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用骨￥ｆ］ 本発明は、抗腫瘍作用を有する新規な生理活性物質に関
する。

［従来の技術］ 本発明の生理活性物質ＦＤ−８９１は分子ｆｆ１５７８
、分子式Ｃ３３Ｈｓ＜ｏ　８の新規な物質であり、これ
と同一の物理化学的性質、および生理活性を有する物質
の存在は知られていない。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明の目的は、抗腫瘍作用を有する新規な生理活性物
質を提供することにある。

［課題を解決するための手段］ 本発明者らは、制癌活性を有する新規物質を土壌分離菌
の中から得るべく探索研究を重ねた結果、本発明者らの
見出した特定の微生物が、癌培養細胞に対して増殖抑制
作用を有する新規な生理活性物質を生産することを見出
し本発明を完成するに至った。

よ 本発明台構造式（１） ％式％ る菌株は、本発明者らが、山梨県韮崎市で採取した土壌
より新たに分離した菌株であり、微生物の名称５ｔｒｅ
ｐｔｏＢｅｅｓ　＋ｇｒａｉｉｎｏｆａｃｉｅｎｓ　ｒ
　Ａ　−８８９０」および微生物寄託番号「微工研菌寄
第１１５０４号（ＦＥＲＭ　　Ｉ）−１１５０４）　Ｊ
として、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて
おり、この菌株を培養して得られる本発明の生理活性物
質を生理活性物質ＦＤ−８９１と命名した。

この菌学的性状を以下に示す。

■　形態 本菌株の栄養糸は合成寒天培地においてよく発達し、不
規則に分岐する。また隔壁は認められない。胞子はスタ
ーチ・無機塩寒天培地およびオートミール寒天培地など
で栄養菌糸より伸長した気菌糸の先端に良好に形成され
る。顕微鏡で観察すると、胞子形成菌糸の分岐方法は単
純分岐で、胞子は通常気菌糸の先端に螺旋状に形成され
る。

胞子は１０個以上連鎖し、表面は瘤状である。

胞子の形成は、円筒形でその大きさは、１．３〜１．７
×０．７〜０．８μである。菌核、胞子嚢、鞭毛胞子は
観察されない。

■　培地上での生育状態 各種培地上で２８℃、工４日間培養した時の肉眼的観察
結果を第１表に示す。

（この頁以下、余白） ■　生理的、生態的性質 １）生育温度範囲 イースト・麦芽エキス培地で２０〜３３°Ｃの範囲で良
好に生育する。１４°Ｃ以下、３９℃以上の忍度範囲で
は生育しない。

２）生化学的性質 ａ）好気性、嫌気性の区別；好気性 ｂ）ゼラチンの液化；陽性 Ｃ）脱脂乳の凝固；陽性 ｄ）脱脂乳のペプトン化；陽性 ｅ）スターチの加水分解；陽性 ｆ）メラニン様色素の生成；陰性 ｇ）細胞壁の型 ３）炭素源の利用 （ブリドハム・ゴドリーブ寒天培地上）利用する： Ｌ−アラビノース、Ｄ−グルツース、 Ｄ−牛シロース、Ｄ−フラクトース、 ツユクロース、イノントール、ラムノース、ラフィノー
ス、Ｄ−マンニット 以上の性状から本菌株が放線菌中、ストレプトミセス属
に属することが明かとなったので、上記諸性状をｌ５Ｐ
ｒジ・インターナショナル・ストレプトミセス・プロジ
ェクト」、パーシーズ・マニュアル・オブ・シスマチッ
ク・バクテリオロジー、第４巻、　　（１９８９年）お
よびワックスマン著「ジ・アクチノミセテス」第２巻（
１９６１年）に報告されている多くの既知菌株と比較し
た結果、本菌株は、ストレプトミセス・グラミノファシ
ェンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｇｒａｍｉｎｏ
ｆａｃｆｅｎｓ）に最も近い性状を示していた。

以上の結果より本菌株はストレプトミセス・グラミノフ
ァシェンスと種を同じくするものと判断し、本菌株をス
トレプトミセス・グラミノファシェンス　Ａ−８８９０
と命名した。

この培養液中に生産された生理活性物質ＦＤ−８９１を
単離するには、発酵生産物を採取する一般的な方法に準
じて行えば良い。すなわち培養終了後、培養液をアセト
ン抽出し、更に酢酸エチルエステルにて抽出する。抽出
された生理活性物質ＦＤ−８９１の画分を濃縮してシロ
ップ状とする。

このシロップをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラ
フ、セファデックスＬＨ〜２０（商品名：ファルマシア
社製）を用いたゲルろ過により、生理活性物質ＦＤ−８
９１を精製単離することができる。

以上の精製法によって得られた生理活性物質ＦＤ−８９
１の理化学的性質を以下に示す。

（生理活性物質ＦＤ−８９１の理化学的性質）（１）外
観：白色粉末 （２）融点：６８．５−７２℃ （３）質量分析値：陽イオンＦＡＢＭＳスペクトル　ｍ
／　ｚ　　５７９　（Ｍ＋Ｈ）　”（４）高分解能マス
スペクトル： 実測値：５７８．３８２７ 理論値：５７８．３８１９ Ｃ３３Ｈ５４０８として計算 （５）　分子式：　Ｃ３３Ｈ５４０Ｂ （６）［ａ］　ｏ　：　１４．００　（ｃ＝０．１．　
　メタノール溶液） （７）Ｕ■吸収スペクトル：メタノール溶液で測定した
結果、 λＭＡｘ：　　２０８ｎｍ（ε＝５０５８）２７０ｎｍ
（ε＝１２４８５） （８）ＩＲ吸収スペクトル： ＫＢｒ錠中で測定したスペクトルを第１図に示す。

（９）’Ｈ−ＮＭＲスペクトル： 重クロロホルム中、４００ＭＨｚで測定したスペクトル
を第２図に示す。

（１０）　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム
中、１００ＭＨｚで測定したスペクトルを第３図に示ス
。

（１１）溶解性： メタノール、クロロホルム、アセトン、酢酸エチルエス
テルに易溶。

ｎ−へキサン、ベンゼン、水に難溶。

エチルエーテルに不溶。

（１２）呈色反応： 陽性：硫酸、ヨウ素 陰性：ニンヒドリン、ＦｅＣ１２ （１３）塩基性、酸性、中性の区別　中性また、生理活
性物質ＦＤ−８９１は、その元素分析値２分子量、紫外
線スペクトル、赤外線スペクトル、’Ｈ−ＮＭＲスペク
トル、　　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルの解析によりその
構造式が次の如く決定された。

（生理活性物質ＦＤ−８９１の構造式）［発明の効果］ 本発明の生理活性物質ＦＤ−８９１は癌培養細胞に対し
て増殖抑制作用を有するので医薬として有用である。

［実施例］ 以下、実施例および試験例を挙げて本発明を具体的に説
明する。

実施例（ＦＤ−８９１の単離、精製） （１）　　１００ｍ１当り、オートミール２ｇ、　　グ
ルコース２ｇ１塩化ナトリウム０．３ｇ、肉エキス０．
３ｇ、硫酸第二鉄０．０４ｇ、塩化マンガン（４水和物
）０．０４ｇ、炭酸カルシウム０゜３ｇを含む無菌液体
培地にＡ３Ｂ９０株を接種し、２８℃、９６時間抜とう
培養した。次に内容量５１のミニジャー２基を用いて種
培地と同じ組成の無菌培地３１に前記培地１００ｍ１を
接種し、２８℃、９６時間通気攪拌培養した。

（２）　培養終了後、２基分の培養液６１をアセトン６
１で抽出した。アセトンを除去した後、酢酸エチルエス
テル６１で抽出を行い、無水硫酸ナトリウムで脱水後、
濃縮し黄色のシロップ状物質２ｇを得た。

（３）　シロップ状物質をクロロホルムに溶解し、クロ
ロホルムで調製したシリカゲル（商品名；シリーｈｙル
６０．メルク社製）を充填した５００ｍ１のカラムに吸
着させ、メタノールの濃度を徐々にあげながらく０〜１
００％）メタノール／クロロホルム溶液で溶出した。活
性画分を合わせ、濃縮乾固し、薄黄色のシロップ状物質
７００ｍｇを得た。

（４）　前項の薄黄色のシロップ状物質７００ｍｇを、
メタノール３ｍｌに溶解し、メタノールで調製したセフ
ァデックスＬＨ−２０（商品名、ファルマシア社製）を
充填した２００ｍ１のカラムを用いて、メタノールでゲ
ルろ過を行った。活性画分を集め、薄黄色のシロップ状
物質５００ｍｇを得た。

（５）　前項の薄黄色のシロップ状物質５００ｍｇを、
クロロホルム１ｍｌに溶解し、ｎ−へキ中サンで調製し
たシリカゲル（商品名；シリカゲル６０、メルク社製）
を充填した２５ｍ１のカラムに吸着させ、ｎ〜ヘキサン
−アセトンの混合溶媒にて溶出し、活性画分を集め、白
色粉末１１３ｍｇを得た。

試験例１　（各種培養細胞に対する増殖阻害作用）（検
体） 実施例で得られた白色粉末１０ｍｇをメタノールに溶解
し、目的濃度となるように滅菌生理食塩水にて希釈した
ものを用いた。

（試験細胞） ■　Ｐ２Ｓ５　マウス白血病 ■　Ｌ−１２１０マウス白血病 ■　ＨＬ−６０ヒト白血病 （使用した培養液） ■　ＲＰＭＩ−１６４０培地 （試験方法） 前記培養液を用いて各種癌細胞を、２Ｘ１０’〜１×１
０５／ｍｌとし、直径３５ｍｍの６穴ンヤーレに２ｍｌ
ずつ分注した。次いで目的濃度にあらかじめ希釈した検
体５０μｍを、培養開始と同時に添加した。

試験細胞は、３７°Ｃ１５％炭酸ガス場養器内で３〜４
日間培養を続けた後、生細胞を測定し、試＃Ｊ濃度と阻
害率から、１Ｃ５ｏ値（５０％阻害のためのｆｉ度）を
求めた。

１＃り

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＫＢｒ錠にて測定したＦＤ−８９１のＩＲス
ペクトルを示す。 第２図は重クロロホルム中、４００　ＭＨｚ　ｒ測定し
たＦＤ−８９１の’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。　第
３図は重クロロホルム中、１００ＭＨｚで測定したＦＤ
−８９１の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される化合物。