JPH04228065A - クロトノベタインからｌ−（−）−カルニチンの製法 - Google Patents
クロトノベタインからｌ−（−）−カルニチンの製法Info
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- JPH04228065A JPH04228065A JP3107485A JP10748591A JPH04228065A JP H04228065 A JPH04228065 A JP H04228065A JP 3107485 A JP3107485 A JP 3107485A JP 10748591 A JP10748591 A JP 10748591A JP H04228065 A JPH04228065 A JP H04228065A
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- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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- C12P13/007—Carnitine; Butyrobetaine; Crotonobetaine
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- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
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- C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、クロトノベタインから
のＬ−（−）−カルニチンの生体触媒製造方およびそれ
に使用されるプロテエアエ（Ｐｒｐｔｅｅａｅ）に関す
る。すなわち、クロトノベタインのＬ−（−）−カルニ
チンへの立体特異的水和を触媒する微生物が産生する酵
素の作用によるクロトノベタイン（１）からのＬ−（−
）−カルニチン（２）の製造方法に関する。本発明はま
た、この方法の実施に適した新規なプロテエアエ（Ｐｒ
ｐｔｅｅａｅ）株に関する。
のＬ−（−）−カルニチンの生体触媒製造方およびそれ
に使用されるプロテエアエ（Ｐｒｐｔｅｅａｅ）に関す
る。すなわち、クロトノベタインのＬ−（−）−カルニ
チンへの立体特異的水和を触媒する微生物が産生する酵
素の作用によるクロトノベタイン（１）からのＬ−（−
）−カルニチン（２）の製造方法に関する。本発明はま
た、この方法の実施に適した新規なプロテエアエ（Ｐｒ
ｐｔｅｅａｅ）株に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】周知
のように、カルニチンは１個の不斉炭素中心を有してお
り、Ｄ−（＋）−カルニチンおよびＬ−（−）−カルニ
チンと称される二種の鏡像異性体が存在する。これらの
うち、Ｌ−（−）−カルニチンのみが生命有機体中に見
られ、ミトコンドリア膜を通過して脂肪酸を輸送する媒
体として機能している。Ｌ−（−）−カルニチンは生理
学的活性鏡像体であるが、数年間にわたり、ＤＬ−カル
ニチンは治療剤として使用されて来た。しかしながら、
今回、Ｄ−（＋）−カルニチンはカルニチントランスフ
ェラーゼの競合的阻害剤であり、心筋層および骨格筋中
のＬ−（−）−カルニチン含有量を減少させ得ることが
判明した。したがって、Ｌ−（−）−カルニチンのみが
血液透析処置または心臓または脂肪代謝障害治療を受け
ている患者に投与できるということは重要てある。カル
ニチンの工業的規模の生産のためには種々の化学的方法
が提案されている。これらの方法は立体特異的ではなく
、Ｄ−（＋）−およびＬ−（−）−異性体のラセミ混合
物を導くものである。すなわち、ラセミ体の鏡像異性体
構成成分を分離するための方法が必要である。上述の化
学的合成方法は複雑かつ経済的に不利で、すべての場合
に、等モルのＤ−（＋）−カルニチンおよびＬ−（−）
−カルニチンを生成する。
のように、カルニチンは１個の不斉炭素中心を有してお
り、Ｄ−（＋）−カルニチンおよびＬ−（−）−カルニ
チンと称される二種の鏡像異性体が存在する。これらの
うち、Ｌ−（−）−カルニチンのみが生命有機体中に見
られ、ミトコンドリア膜を通過して脂肪酸を輸送する媒
体として機能している。Ｌ−（−）−カルニチンは生理
学的活性鏡像体であるが、数年間にわたり、ＤＬ−カル
ニチンは治療剤として使用されて来た。しかしながら、
今回、Ｄ−（＋）−カルニチンはカルニチントランスフ
ェラーゼの競合的阻害剤であり、心筋層および骨格筋中
のＬ−（−）−カルニチン含有量を減少させ得ることが
判明した。したがって、Ｌ−（−）−カルニチンのみが
血液透析処置または心臓または脂肪代謝障害治療を受け
ている患者に投与できるということは重要てある。カル
ニチンの工業的規模の生産のためには種々の化学的方法
が提案されている。これらの方法は立体特異的ではなく
、Ｄ−（＋）−およびＬ−（−）−異性体のラセミ混合
物を導くものである。すなわち、ラセミ体の鏡像異性体
構成成分を分離するための方法が必要である。上述の化
学的合成方法は複雑かつ経済的に不利で、すべての場合
に、等モルのＤ−（＋）−カルニチンおよびＬ−（−）
−カルニチンを生成する。
【０００３】最近、Ｌ−（−）−カルニチンの微生物学
的製法が提案されているが、いずれも通常の発酵成分か
ら、またはアキラルなベタイン誘導体の立体特異的変換
を経る新規な方法である。前者の方法に関連して、日本
特許７１５６７／１９８４（武田）は糸状菌エメリセラ
・カドリリネアタ（Ｅｍｅｒｉｃｅｌｌａ ｑｕａｄｒ
ｉｌｉｎｅａｔａ）によるＬ−（−）−カルニチンの製
法を記載しており、その際、微生物は複合培地中で培養
される。後者の方法の多くはクロトノベタインのＬ−（
−）−カルニチンへの立体特異的水和に基礎を置くもの
であり、主に重要な生化学的変換を行うために採用され
る特定の微生物によって区別される。
的製法が提案されているが、いずれも通常の発酵成分か
ら、またはアキラルなベタイン誘導体の立体特異的変換
を経る新規な方法である。前者の方法に関連して、日本
特許７１５６７／１９８４（武田）は糸状菌エメリセラ
・カドリリネアタ（Ｅｍｅｒｉｃｅｌｌａ ｑｕａｄｒ
ｉｌｉｎｅａｔａ）によるＬ−（−）−カルニチンの製
法を記載しており、その際、微生物は複合培地中で培養
される。後者の方法の多くはクロトノベタインのＬ−（
−）−カルニチンへの立体特異的水和に基礎を置くもの
であり、主に重要な生化学的変換を行うために採用され
る特定の微生物によって区別される。
【０００４】関連する特許文献中に記載される微生物の
多くは、腸内細菌料（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃ
ｅａｅ）［例えば、ＥＰ１２１，４４４（浜理）、ＥＰ
１２２，７９９（味の素）、ＤＤＲＰ２２１，９０５（
カールマルクス大学）、日本特許出願６１−２３４７８
８（セイテツ）］であるが、非腸内細菌料のものも用い
られている［例えば、ＥＰ１５８，１９４およびＥＰ１
９５，９４４（ロンザ）、これらはアクロモバクター・
キシロキシダン（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ ｘｙｌ
ｏｓｏｘｙｄａｎｓ）を用いており、日本特許出願６０
−２７５，１８１（バイオール株式会社およびチョーカ
セヒン株式会社）、これによれば、糸状菌、ペニシリウ
ム・シトリナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｔｒｉ
ｎｕｍ）を用いて最良結果を記載している］。Ｌ−（−
）−カルニチンの微生物学的生産のための前駆体として
試験されたクロトノベタイン以外の物質には３−デヒド
ロカルニチン［例えば、日本特許２７２０８６／１９８
７（味の素）］およびカルニチンニトリル［ＥＰ３１９
，３４４（協和発酵工業）］がある。
多くは、腸内細菌料（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃ
ｅａｅ）［例えば、ＥＰ１２１，４４４（浜理）、ＥＰ
１２２，７９９（味の素）、ＤＤＲＰ２２１，９０５（
カールマルクス大学）、日本特許出願６１−２３４７８
８（セイテツ）］であるが、非腸内細菌料のものも用い
られている［例えば、ＥＰ１５８，１９４およびＥＰ１
９５，９４４（ロンザ）、これらはアクロモバクター・
キシロキシダン（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ ｘｙｌ
ｏｓｏｘｙｄａｎｓ）を用いており、日本特許出願６０
−２７５，１８１（バイオール株式会社およびチョーカ
セヒン株式会社）、これによれば、糸状菌、ペニシリウ
ム・シトリナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｔｒｉ
ｎｕｍ）を用いて最良結果を記載している］。Ｌ−（−
）−カルニチンの微生物学的生産のための前駆体として
試験されたクロトノベタイン以外の物質には３−デヒド
ロカルニチン［例えば、日本特許２７２０８６／１９８
７（味の素）］およびカルニチンニトリル［ＥＰ３１９
，３４４（協和発酵工業）］がある。
【０００５】しかしながら、今日までに提案された微生
物学的方法は、下記の１またはそれ以上の理由により、
工業的規模の製造には適さないことが証明されている。 （ｉ）Ｌ−（−）−カルニチンの収率が非常に低い。 （ｉｉ）前駆体物質が非常に不安定である。 （ｉｉｉ）微生物を高価な培地中で培養しなければなら
ない。 （ｉｖ）微生物はクロトノベタインの低濃度（２−３（
ｗ／ｖ）％まで）でしか耐性がない。 （ｖ）クロトノベタインのガンマ−ブチロベタインへの
還元またはＬ−（−）−カルニチンから３−デヒドロカ
ルニチンへの酸化などの副反応が最終的なＬ−（−）−
カルニチンの収率を減少させる。
物学的方法は、下記の１またはそれ以上の理由により、
工業的規模の製造には適さないことが証明されている。 （ｉ）Ｌ−（−）−カルニチンの収率が非常に低い。 （ｉｉ）前駆体物質が非常に不安定である。 （ｉｉｉ）微生物を高価な培地中で培養しなければなら
ない。 （ｉｖ）微生物はクロトノベタインの低濃度（２−３（
ｗ／ｖ）％まで）でしか耐性がない。 （ｖ）クロトノベタインのガンマ−ブチロベタインへの
還元またはＬ−（−）−カルニチンから３−デヒドロカ
ルニチンへの酸化などの副反応が最終的なＬ−（−）−
カルニチンの収率を減少させる。
【０００６】
【課題を解決するための手段】下記の工程に使用される
クロトノベタインは、約８９％（ｗ／ｗ）クロトノベタ
イン分子内塩（脱塩クロトノベタイン）＋約１１％（ｗ
／ｗ）水（カールフッシャー試薬を用いて測定）、これ
はクロトノベタイン１モル当たり水約１モルに対応する
。したがって、この物質は、以後「クロトノベタイン一
水和物（ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）」と称するが、「一
水和物」は、クロトノベタインと水の明確な構造的関係
を含むもの意味するものではない。「クロトノベタイン
分子内塩」という語を使用する場合は、常に１００％純
粋なクロトノベタイン分子内塩（無水脱塩クロトノベタ
イン）をいうものとする。
クロトノベタインは、約８９％（ｗ／ｗ）クロトノベタ
イン分子内塩（脱塩クロトノベタイン）＋約１１％（ｗ
／ｗ）水（カールフッシャー試薬を用いて測定）、これ
はクロトノベタイン１モル当たり水約１モルに対応する
。したがって、この物質は、以後「クロトノベタイン一
水和物（ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）」と称するが、「一
水和物」は、クロトノベタインと水の明確な構造的関係
を含むもの意味するものではない。「クロトノベタイン
分子内塩」という語を使用する場合は、常に１００％純
粋なクロトノベタイン分子内塩（無水脱塩クロトノベタ
イン）をいうものとする。
【０００７】クロトノベタイン分子内塩が約１０−１２
％（ｗ／ｖ）存在する生体内変換用培地上でクロトノベ
タインをＬ−（−）−カルニチンに水和し得る、新規な
４種のプロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ Ｍｉ
ｒａｂｉｌｉｓ）分離し、生化学的なタイプを決定した
。これらの新規な株は、高価な栄養素または生体内変換
または生長のための添加剤のいずれも必要でなく、むし
ろ、細胞生長および生体内変換はいずれも単純かつ安価
な培地を用いて行うことができる。用いる分析方法の検
知範囲内で、本発明の新規なプロテウス・ミラビリス（
Ｐ． Ｍｉｒａｂｉｌｉｓ ）株は、前述の（ｖ）で指
摘したＬ−（−）−カルニチンの最終的な収量を減少さ
せるような副反応を触媒しない。４種のプロテウス・ミ
ラビリス（Ｐ． Ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）は４０％を越え
るモル収率でクロトノベタイン一水和物（７４４．４ｍ
Ｍ）をＬ−（−）−カルニチンに変換し得ることが判明
した。
％（ｗ／ｖ）存在する生体内変換用培地上でクロトノベ
タインをＬ−（−）−カルニチンに水和し得る、新規な
４種のプロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ Ｍｉ
ｒａｂｉｌｉｓ）分離し、生化学的なタイプを決定した
。これらの新規な株は、高価な栄養素または生体内変換
または生長のための添加剤のいずれも必要でなく、むし
ろ、細胞生長および生体内変換はいずれも単純かつ安価
な培地を用いて行うことができる。用いる分析方法の検
知範囲内で、本発明の新規なプロテウス・ミラビリス（
Ｐ． Ｍｉｒａｂｉｌｉｓ ）株は、前述の（ｖ）で指
摘したＬ−（−）−カルニチンの最終的な収量を減少さ
せるような副反応を触媒しない。４種のプロテウス・ミ
ラビリス（Ｐ． Ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）は４０％を越え
るモル収率でクロトノベタイン一水和物（７４４．４ｍ
Ｍ）をＬ−（−）−カルニチンに変換し得ることが判明
した。
【０００８】４種のプロテウス・ミラビリス（Ｐ．Ｍｉ
ｒａｂｉｌｉｓ）単離株（社内ではシグマ−タウＳＰ２
３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１、シグマ−タウＢＴ１
ＩＶ、シグマ−タウＧＰ１ＡＶＩおよびシグマ−タウＲ
２ＡＩＸと称している）はアグリカルチュラル・リサー
チ・サービス・カルチュア・コレクション、ノザーン・
リージョナル・リサーチ・センター、アメリカ合衆国農
務省、アメリカ合衆国６１６０４イリノイ州ペオリア、
ノース・ユニバーシティ・ストリート１８１５に寄託さ
れ、アグリカルチュラル・リサーチ・サービスにより、
各々、ＮＲＲＬＢ−１８４８０、ＮＲＲＬＢ−１８４８
１、ＮＲＲＬＢ−１８４８２、およびＮＲＲＬＢ−１８
４８３の寄託番号が付された。４種の株の分離方法およ
び形態学的性質および生理学的／生化学的性質を次に記
載する。
ｒａｂｉｌｉｓ）単離株（社内ではシグマ−タウＳＰ２
３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１、シグマ−タウＢＴ１
ＩＶ、シグマ−タウＧＰ１ＡＶＩおよびシグマ−タウＲ
２ＡＩＸと称している）はアグリカルチュラル・リサー
チ・サービス・カルチュア・コレクション、ノザーン・
リージョナル・リサーチ・センター、アメリカ合衆国農
務省、アメリカ合衆国６１６０４イリノイ州ペオリア、
ノース・ユニバーシティ・ストリート１８１５に寄託さ
れ、アグリカルチュラル・リサーチ・サービスにより、
各々、ＮＲＲＬＢ−１８４８０、ＮＲＲＬＢ−１８４８
１、ＮＲＲＬＢ−１８４８２、およびＮＲＲＬＢ−１８
４８３の寄託番号が付された。４種の株の分離方法およ
び形態学的性質および生理学的／生化学的性質を次に記
載する。
【０００９】（ｉ）プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔ
ｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１４８４０
（シクマ−タウＳＰ２３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１
）この生物体は当初、形態学的にアシネトバクター・ル
オーフイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｌｗｏｆｆｉ
ｉ）のプレート上で混入物として検知された。ついで、
この微生物を、栄養ブイヨン＋０．８％（ｗ／ｖ）塩化
ナトリウム＋０．５％（ｗ／ｖ）くえん酸一水和物＋１
．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物＋２％寒天
からなり、水酸化カリウムでｐＨを６．８に調整した培
地（以下、ＮＡＣｉｔ＋ｃｂという）を用いて精製した
。この生物体は毎日、ＮＡＣｉｔ＋ｃｂに移し替え（３
７℃）にて維持した。これはアメリカン・タイプ・カル
チャー・コレクション（ＡＴＣＣ）（アメリカ合衆国メ
リーランド、ロックビル）およびシグマ−タウ・インド
ゥストリエ・ファルマチェウチケ・リウニテ・ソシエタ
・ペル・アチオニのインダストリアル・マイクロバイオ
ロジー・ラボラトリーにより、ＡＰＩ２０Ｅ（変法Ｃ）
、ＡＰＩＺＹＭ（変法Ｂ）、ＡＰＩ５０ＣＨＥ（変法Ｃ
）およびＡＰＩ２０ＣＨＥ（変法Ｄ）ストリップ（ＡＰ
Ｉシステム・ソシエタ・アノニム、フランス、モンタリ
ウ−ベルシュー）を組み合わせた形態学的試験用い、さ
らに必要とみなされたその他の生化学的／生理学的試験
によって型を決定した。 形態学的性質 グラム染色：陰性 形態：桿菌 大きさ：０．９×４μ べん毛：周毛性 運動性：有り、スウォーミング性 色素形成：陰性 胞子形成：陰性 生理学的／生化学的性質 ＞ＣＯ２要求性：陰性 ≧０．５％ＮａＣｌ要求性：陰性 フォーゲス−プロスカウア反応（室温）：弱フォーゲス
−プロスカウア反応（３７℃）：不明メチルレッド：陽
性 Ｈ２Ｓの産生（トリプル糖（ｔｒｉｐｌｅ ｓｕｇａｒ
）鉄寒天）：陰性 シモンズくえん酸培地中での生長：陰性くえん酸塩の利
用：陰性 酒石酸塩の利用：陰性 ムチン酸塩の利用：陰性 唯一炭素源としての酢酸塩上での生長：陰性唯一炭素源
としてのマロン酸塩上での生長：陰性マックコンケイ寒
天上での生長：陽性 ゼラチンの液化：陰性 アミノ酸栄養要求性：Ｌ−ヒスチジン ペクチン加水分解：陰性 酸性ホスファターゼ（ナフトール−ＡＳ−ＢＩ−ホスフ
ァート、ｐＨ５．４ ）：陰性 酸性ホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ５．４
）：陽性 アルカリホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ８
．５）：陽性 エステラーゼ（酪酸β−ナフチル）：陰性エステラーゼ
（カプリル酸β−ナフチル）：陰性リパーゼ（ミリスチ
ン酸β−ナフチル）：陰性ツイーン２０（商標）の加水
分解：陽性ツイーン８０（商標）の加水分解：陰性アル
ギニンジヒドロラーゼ：陰性 アルギニン利用（モラー培地）：陰性 オルニチンデカルボキシラーゼ：陰性 リジンデカルボキシラーゼ：陰性 インドールの産生：陰性 トリプトファンデアミナーゼ：陽性（弱）フェニルアラ
ニンデアミナーゼ：陽性 ウレアーゼ：陽性 トリプシン：陰性 キモトリプシン：陰性 シスチンアリルアミダーゼ：陰性 ロイシンアリルアミダーゼ：陽性 バリンアリルアミダーゼ：陰性 カタラーゼ：陽性 オキシダーゼ：陰性 硝酸塩から亜硝酸塩への還元：陽性 ＫＣＮ存在下での生長：陽性 Ｏ−Ｆグルコース、酸化性：陽性 Ｏ−Ｆグルコース、発酵性：陽性 α−ガラクトシダーゼ：陰性 β−ガラクトシダーゼ：陰性 β−グルクロニダーゼ：陰性 α−グルクロニダーゼ：陰性 β−グルコシダーゼ：陰性 Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ：陰性α−フコ
シダーゼ：陰性 α−マンノシダーゼ：陰性 炭水化物からの酸およびガスの産生（２４時間、３７℃
） 炭水化物＊
酸 ガス
ｍｅｓｏ−アドニトール
− −
エスクリン
− −
アミグダリン
− − Ｄ−
アラビノース
＋（弱） − Ｌ−アラビノー
ス −
− Ｄ−アラビトール
−
− Ｌ−アラビトール
−
− アルブチン
−
− セロビオース
− −
ｍｅｓｏ−ズルシトール
− −
ｍｅｓｏ−エリスリトール
− − フルクト
ース
− − Ｄ−フコース
−
− Ｌ−フコース
−
− ガラクトース
＋
− ゲンチオビオース
−
− グルコース
＋
− α−メチルグルコシド
− −
グルコナート
＋ −
２−ケトグルコナート
− − ５−ケトグル
コナート −
− Ｎ−アセチルグルコサミン
＋
− グリセリン
＋（弱） −
グリコーゲン
− −
ｍｙｏ−イノシトール
− − イヌ
リン
− − ラク
トース
− − リキソ
ース
− − マルトー
ス
− − マンニトー
ル
− − マンノース
−
− α−メチルマンノ
シド −
− メレジトース
−
− メリビオース
−
− ラフィノース
−
− Ｌ−ラムノース
− −
リボース
＋ −
サリシン
− −
ソルビトール
− −
Ｌ−ソルボース
− − 澱粉
− − ス
クロース
＋（弱） − タガト
ース
− − トレハロ
ース
＋ − ツラノース
− − ｍｅｓｏ−キシ
リトール −
− Ｄ−キシロース
−
− Ｌ−キシロース
−
− β−メチル−Ｄ−キシロース
− −＊特に断
らなければ、これらの試験に使用した不斉炭水化物はす
べてＤ−立体配置である。
ｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１４８４０
（シクマ−タウＳＰ２３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１
）この生物体は当初、形態学的にアシネトバクター・ル
オーフイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｌｗｏｆｆｉ
ｉ）のプレート上で混入物として検知された。ついで、
この微生物を、栄養ブイヨン＋０．８％（ｗ／ｖ）塩化
ナトリウム＋０．５％（ｗ／ｖ）くえん酸一水和物＋１
．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物＋２％寒天
からなり、水酸化カリウムでｐＨを６．８に調整した培
地（以下、ＮＡＣｉｔ＋ｃｂという）を用いて精製した
。この生物体は毎日、ＮＡＣｉｔ＋ｃｂに移し替え（３
７℃）にて維持した。これはアメリカン・タイプ・カル
チャー・コレクション（ＡＴＣＣ）（アメリカ合衆国メ
リーランド、ロックビル）およびシグマ−タウ・インド
ゥストリエ・ファルマチェウチケ・リウニテ・ソシエタ
・ペル・アチオニのインダストリアル・マイクロバイオ
ロジー・ラボラトリーにより、ＡＰＩ２０Ｅ（変法Ｃ）
、ＡＰＩＺＹＭ（変法Ｂ）、ＡＰＩ５０ＣＨＥ（変法Ｃ
）およびＡＰＩ２０ＣＨＥ（変法Ｄ）ストリップ（ＡＰ
Ｉシステム・ソシエタ・アノニム、フランス、モンタリ
ウ−ベルシュー）を組み合わせた形態学的試験用い、さ
らに必要とみなされたその他の生化学的／生理学的試験
によって型を決定した。 形態学的性質 グラム染色：陰性 形態：桿菌 大きさ：０．９×４μ べん毛：周毛性 運動性：有り、スウォーミング性 色素形成：陰性 胞子形成：陰性 生理学的／生化学的性質 ＞ＣＯ２要求性：陰性 ≧０．５％ＮａＣｌ要求性：陰性 フォーゲス−プロスカウア反応（室温）：弱フォーゲス
−プロスカウア反応（３７℃）：不明メチルレッド：陽
性 Ｈ２Ｓの産生（トリプル糖（ｔｒｉｐｌｅ ｓｕｇａｒ
）鉄寒天）：陰性 シモンズくえん酸培地中での生長：陰性くえん酸塩の利
用：陰性 酒石酸塩の利用：陰性 ムチン酸塩の利用：陰性 唯一炭素源としての酢酸塩上での生長：陰性唯一炭素源
としてのマロン酸塩上での生長：陰性マックコンケイ寒
天上での生長：陽性 ゼラチンの液化：陰性 アミノ酸栄養要求性：Ｌ−ヒスチジン ペクチン加水分解：陰性 酸性ホスファターゼ（ナフトール−ＡＳ−ＢＩ−ホスフ
ァート、ｐＨ５．４ ）：陰性 酸性ホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ５．４
）：陽性 アルカリホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ８
．５）：陽性 エステラーゼ（酪酸β−ナフチル）：陰性エステラーゼ
（カプリル酸β−ナフチル）：陰性リパーゼ（ミリスチ
ン酸β−ナフチル）：陰性ツイーン２０（商標）の加水
分解：陽性ツイーン８０（商標）の加水分解：陰性アル
ギニンジヒドロラーゼ：陰性 アルギニン利用（モラー培地）：陰性 オルニチンデカルボキシラーゼ：陰性 リジンデカルボキシラーゼ：陰性 インドールの産生：陰性 トリプトファンデアミナーゼ：陽性（弱）フェニルアラ
ニンデアミナーゼ：陽性 ウレアーゼ：陽性 トリプシン：陰性 キモトリプシン：陰性 シスチンアリルアミダーゼ：陰性 ロイシンアリルアミダーゼ：陽性 バリンアリルアミダーゼ：陰性 カタラーゼ：陽性 オキシダーゼ：陰性 硝酸塩から亜硝酸塩への還元：陽性 ＫＣＮ存在下での生長：陽性 Ｏ−Ｆグルコース、酸化性：陽性 Ｏ−Ｆグルコース、発酵性：陽性 α−ガラクトシダーゼ：陰性 β−ガラクトシダーゼ：陰性 β−グルクロニダーゼ：陰性 α−グルクロニダーゼ：陰性 β−グルコシダーゼ：陰性 Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ：陰性α−フコ
シダーゼ：陰性 α−マンノシダーゼ：陰性 炭水化物からの酸およびガスの産生（２４時間、３７℃
） 炭水化物＊
酸 ガス
ｍｅｓｏ−アドニトール
− −
エスクリン
− −
アミグダリン
− − Ｄ−
アラビノース
＋（弱） − Ｌ−アラビノー
ス −
− Ｄ−アラビトール
−
− Ｌ−アラビトール
−
− アルブチン
−
− セロビオース
− −
ｍｅｓｏ−ズルシトール
− −
ｍｅｓｏ−エリスリトール
− − フルクト
ース
− − Ｄ−フコース
−
− Ｌ−フコース
−
− ガラクトース
＋
− ゲンチオビオース
−
− グルコース
＋
− α−メチルグルコシド
− −
グルコナート
＋ −
２−ケトグルコナート
− − ５−ケトグル
コナート −
− Ｎ−アセチルグルコサミン
＋
− グリセリン
＋（弱） −
グリコーゲン
− −
ｍｙｏ−イノシトール
− − イヌ
リン
− − ラク
トース
− − リキソ
ース
− − マルトー
ス
− − マンニトー
ル
− − マンノース
−
− α−メチルマンノ
シド −
− メレジトース
−
− メリビオース
−
− ラフィノース
−
− Ｌ−ラムノース
− −
リボース
＋ −
サリシン
− −
ソルビトール
− −
Ｌ−ソルボース
− − 澱粉
− − ス
クロース
＋（弱） − タガト
ース
− − トレハロ
ース
＋ − ツラノース
− − ｍｅｓｏ−キシ
リトール −
− Ｄ−キシロース
−
− Ｌ−キシロース
−
− β−メチル−Ｄ−キシロース
− −＊特に断
らなければ、これらの試験に使用した不斉炭水化物はす
べてＤ−立体配置である。
【００１０】抗生物質感度
アンチバイオグラムは０．５％澱粉で補足［オルセン、
Ｍ．Ａ．およびスコット、Ｗ．Ｊ．、「加熱細菌胞子検
知用培地における澱粉の影響」（ネイチュア（Ｎａｔｕ
ｒｅ）１５７：３３７（１９４６）］したミユーラー−
ヒントン寒天［ミユーラー、Ｊ．Ｈ．およびヒントン、
Ｊ．、「淋菌および髄膜菌の一次分離のための蛋白含有
培地」（プロシージング・オブ・ソサイエティ・フォア
・エクスペリメンタル・バイオロジー・アンド・メディ
シン（Ｐｒｏｃ． Ｓｏｃ． Ｅｘｐ． Ｂｉｏｌ．
Ｍｅｄ．）４８：３３０（１９４１））］上で、カービ
ィ−バウアー法［バウアー、Ａ．Ｗ．、カービィ、Ｗ．
Ｍ．Ｍ．、シェリス、Ｋ．Ｃ．およびツルク、Ｍ．、「
標準化単一ディスク法による抗生物質感受率試験」（ア
メリカン・ジヤーナル・オブ・クリニカル・パトロジー
（Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．）４５：４
９３（１９６６））］により、オキソイド抗生物質感受
率ディスクを用いて得たものである。 抗生物質（量）
阻害範囲の直径（ｍｍ） 判定アミカシ
ン（３０μｇ）
１７ 感受性有
りアンピシリン（１０μｇ）
２３
感受性有りベンジルペニシリン（１０ＩＵ）
２２
感受性有りセフロキシム（３０μｇ）
２８
感受性有りセファロチン（３０μｇ）
１８
感受性有りクロラムフェニコール
（３０μｇ） ２０
感受性有りコリスチン（１０μｇ
） １１
感受性有りゲンタマイ
シン（１０μｇ） １
７ 感受性有りこれ
らの結果に基づいて、単離物はＡＴＣＣの分類法によれ
ばプロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ Ｍｉｒａ
ｂｉｌｉｓ）の菌株に該当し、さらにＡＴＣＣによれば
、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒｑ
ｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８０（シグマ−タウＳ
Ｐ２３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１）は新規なもので
あってカルチャーコレクション中に該当するものがない
。ウレアーゼ−陽性（ｕｒｅ＋）であるプロテウス・ミ
ラビリス（Ｐ． ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１
８４８０の高度に精製された単一のクローンは低い頻度
でウレアーゼ−陰性（ｕｒｅ−）クローンを発生させる
のが観察された。これらのｕｒｅ−変異体の形態学的−
生理学的像および抗生物質像は特に断らなければそれら
のｕｒｅ＋始原細胞の像に一致している［ファルマー、
Ｊ．Ｊ．、ＩＩＩ、ヒックマン、Ｆ．Ｗ．、ブレナー、
Ｄ．Ｊ．、シュライバー、Ｍ．およびリッケンバック、
Ｄ．Ｇ．、「特異的腸内細菌科類：プロビデンシア・ス
ツアリチイ（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ｓｔｕａｒｔｉ
ｉ）に変化するプロテウス・レトゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ
ｒｅｔｔｇｅｒｉ）」ジヤーナル・オブ・クリニカル
・ミクロビオロジイ（Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ．）６：３７３（１９７７）；コリンズ、Ｃ．Ｍ
．およびフォルカウ、Ｓ．、「エシェリキア・コリ（Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）のウレアーゼ遺伝子
座の遺伝学的分析：ＤＮＡ配列の解明」、ジヤーナル・
オブ・バクテリオロジイ（Ｊ． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．
）１７０：１０４１（１９８１）参照］。さらに、ｕｒ
ｅ−変異体のクロトノベタインのＬ−（−）−カルニチ
ンへの変換能力は不変である。逆の表現型変換、すなわ
ち、ｕｒｅ−始原体からのプロテウス・ミラビリスＮＲ
ＲＬＢ−１８４８０のｕｒｅ＋株の自然発生的出現は観
察されなかった（ルイス、Ａ．Ｄ．およびローゼン、Ｉ
．Ｇ．「ウレアーゼ産生およびラクトース発酵のための
遺伝子を変換するプロテウス・レトゲリ（Ｐｒｏｔｅｕ
ｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ）、アメリカン・ソサイエティ・
フォア・ミクロビオロジイ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃ
ｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、１９
７３年会、要旨Ｇ２１８」参照）。
Ｍ．Ａ．およびスコット、Ｗ．Ｊ．、「加熱細菌胞子検
知用培地における澱粉の影響」（ネイチュア（Ｎａｔｕ
ｒｅ）１５７：３３７（１９４６）］したミユーラー−
ヒントン寒天［ミユーラー、Ｊ．Ｈ．およびヒントン、
Ｊ．、「淋菌および髄膜菌の一次分離のための蛋白含有
培地」（プロシージング・オブ・ソサイエティ・フォア
・エクスペリメンタル・バイオロジー・アンド・メディ
シン（Ｐｒｏｃ． Ｓｏｃ． Ｅｘｐ． Ｂｉｏｌ．
Ｍｅｄ．）４８：３３０（１９４１））］上で、カービ
ィ−バウアー法［バウアー、Ａ．Ｗ．、カービィ、Ｗ．
Ｍ．Ｍ．、シェリス、Ｋ．Ｃ．およびツルク、Ｍ．、「
標準化単一ディスク法による抗生物質感受率試験」（ア
メリカン・ジヤーナル・オブ・クリニカル・パトロジー
（Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．）４５：４
９３（１９６６））］により、オキソイド抗生物質感受
率ディスクを用いて得たものである。 抗生物質（量）
阻害範囲の直径（ｍｍ） 判定アミカシ
ン（３０μｇ）
１７ 感受性有
りアンピシリン（１０μｇ）
２３
感受性有りベンジルペニシリン（１０ＩＵ）
２２
感受性有りセフロキシム（３０μｇ）
２８
感受性有りセファロチン（３０μｇ）
１８
感受性有りクロラムフェニコール
（３０μｇ） ２０
感受性有りコリスチン（１０μｇ
） １１
感受性有りゲンタマイ
シン（１０μｇ） １
７ 感受性有りこれ
らの結果に基づいて、単離物はＡＴＣＣの分類法によれ
ばプロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ Ｍｉｒａ
ｂｉｌｉｓ）の菌株に該当し、さらにＡＴＣＣによれば
、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒｑ
ｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８０（シグマ−タウＳ
Ｐ２３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１）は新規なもので
あってカルチャーコレクション中に該当するものがない
。ウレアーゼ−陽性（ｕｒｅ＋）であるプロテウス・ミ
ラビリス（Ｐ． ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１
８４８０の高度に精製された単一のクローンは低い頻度
でウレアーゼ−陰性（ｕｒｅ−）クローンを発生させる
のが観察された。これらのｕｒｅ−変異体の形態学的−
生理学的像および抗生物質像は特に断らなければそれら
のｕｒｅ＋始原細胞の像に一致している［ファルマー、
Ｊ．Ｊ．、ＩＩＩ、ヒックマン、Ｆ．Ｗ．、ブレナー、
Ｄ．Ｊ．、シュライバー、Ｍ．およびリッケンバック、
Ｄ．Ｇ．、「特異的腸内細菌科類：プロビデンシア・ス
ツアリチイ（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ｓｔｕａｒｔｉ
ｉ）に変化するプロテウス・レトゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ
ｒｅｔｔｇｅｒｉ）」ジヤーナル・オブ・クリニカル
・ミクロビオロジイ（Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ．）６：３７３（１９７７）；コリンズ、Ｃ．Ｍ
．およびフォルカウ、Ｓ．、「エシェリキア・コリ（Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）のウレアーゼ遺伝子
座の遺伝学的分析：ＤＮＡ配列の解明」、ジヤーナル・
オブ・バクテリオロジイ（Ｊ． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．
）１７０：１０４１（１９８１）参照］。さらに、ｕｒ
ｅ−変異体のクロトノベタインのＬ−（−）−カルニチ
ンへの変換能力は不変である。逆の表現型変換、すなわ
ち、ｕｒｅ−始原体からのプロテウス・ミラビリスＮＲ
ＲＬＢ−１８４８０のｕｒｅ＋株の自然発生的出現は観
察されなかった（ルイス、Ａ．Ｄ．およびローゼン、Ｉ
．Ｇ．「ウレアーゼ産生およびラクトース発酵のための
遺伝子を変換するプロテウス・レトゲリ（Ｐｒｏｔｅｕ
ｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ）、アメリカン・ソサイエティ・
フォア・ミクロビオロジイ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃ
ｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、１９
７３年会、要旨Ｇ２１８」参照）。
【００１１】（ｉｉ）プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏ
ｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８
２（シグマ−タウＧＰ１ＡＶＩ）この生物体はシグマ−
タウ・インドゥストリエ・ファルマチェウチケ・リウニ
テ・ソシエタ・ペル・アチオニのアニマルコレクション
中のモルモットのふん便から分離された。新鮮なふん便
（０．５−１．０ｇ）を、滅菌脳−心臓浸出液（ｂｒａ
ｉｎ−ｈｅａｒｔ ｉｎｆｕｓｉｏｎ）（ＢＨＩ）（デ
ィフコ）＋１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和
物（ｐＨ６．８、３７℃）の４ｍＬ中で撹拌せずに２４
時間インキュベートした。１白金耳のブイヨンをメニス
カスの真下から採取し、キシリナス、Ｍ．Ｅ．、パパビ
シリウ、Ｊ．Ｔ．およびレガキス、Ｎ．Ｊ．［「プロテ
ウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）の生長のための選択的培地」、
ジャーナル・オブ・クリニカル・ミクロビオロジイ（Ｊ
．Ｃｌｉｎ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．）２：４５９（１
９７５）］に記載の培地、以下、ギリシャ寒天という、
に線条接種した。３７℃にて４８時間後、単一のコロニ
ーを採取し、ギリシャ寒天＋１．５％（ｗ／ｖ）クロト
ノベタイン一水和物のプレート（ｐＨ６．８、３７℃、
４８時間）およびマッコンケイ寒天ＣＳ（ディフコ）＋
１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物（ｐＨ６
．８、３７℃、２４時間）上の単一のコロニーの線条接
種を繰り返して精製した。生物体はギリシャ寒天＋１．
５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物に毎日移し維
持した（３７℃）。シグマ−タウ・インドゥストリエ・
ファルマチェウチケ・リウニテ・ソシエタ・ペル・アチ
オニのインダストリアル・マイクロバイオロジー・ラボ
ラトリーにおいて、ＡＰＩ２０Ｅ、ＡＰＩＺＹＭおよび
ＡＰＩ５０ＣＨＥのストリップを組み合わせた形態学的
試験を用い、さらに必要とみなされたその他の生化学的
／生理学的試験によって型を決定した。 形態学的性質 グラム染色：陰性 形態：桿菌 大きさ：０．８×２μ べん毛：周毛性 運動性（ＮＡＣｉｔ＋ｃｂ；ＢＨＩ＋１．５％クロトノ
ベタイン一水和物＋ ２％寒天、ｐＨ６．８）：有り、スウォーミング性色素
形成：陰性 胞子形成：陰性 生理学的／生化学的性質（３７℃） ＞ＣＯ２要求性：陰性 フォーゲス−プロスカウア反応：弱 Ｈ２Ｓの産生（トリプル糖（ｔｒｉｐｌｅ ｓｕｇａｒ
）鉄寒天）：陽性 シモンズくえん酸培地中での生長：陰性マックコンケイ
寒天上での生長：陽性 ゼラチンの液化：陰性 アミノ酸栄養要求性：無し 酸性ホスファターゼ（ナフトール−ＡＳ−ＢＩ−ホスフ
ァート、ｐＨ５．４ ）：陽性（弱） 酸性ホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ５．４
）：陽性 アルカリホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ８
．５）：陽性 エステラーゼ（酪酸β−ナフチル）：陽性（弱）エステ
ラーゼ（カプリル酸β−ナフチル）：陰性リパーゼ（ミ
リスチン酸β−ナフチル）：陰性アルギニンジヒドロラ
ーゼ：陰性 オルニチンデカルボキシラーゼ：陽性 リジンデカルボキシラーゼ：陰性 インドールの産生：陰性 トリプトファンデアミナーゼ：陽性 フェニルアラニンデアミナーゼ：陽性 ウレアーゼ：陽性 トリプシン：陰性 キモトリプシン：陰性 シスチンアリルアミダーゼ：陰性 ロイシンアリルアミダーゼ：陽性 バリンアリルアミダーゼ：陰性 オキシダーゼ：陰性 Ｏ−Ｆグルコース、酸化性：陽性 Ｏ−Ｆグルコース、発酵性：陽性 α−ガラクトシダーゼ：陰性 β−ガラクトシダーゼ：陰性 β−グルクロニダーゼ：陰性 α−グルコシダーゼ：陰性 β−グルコシダーゼ：陰性 Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ：陰性α−フコ
シダーゼ：陰性 α−マンノシダーゼ：陰性 炭水化物からの酸およびガスの産生（２４時間、３７℃
） 炭水化物＊
酸 ガス
ｍｅｓｏ−アドニトール
− −
エスクリン
− −
アミグダリン
− − Ｄ−
アラビノース
＋（弱） − Ｌ−アラビノー
ス −
− Ｄ−アラビトール
−
− Ｌ−アラビトール
−
− アルブチン
−
− セロビオーズ
− −
ｍｅｓｏ−ズルシトール
− −
ｍｅｓｏ−エリスリトール
− − フルクト
ース
− − Ｄ−フコース
−
− Ｌ−フコース
−
− ガラクトース
＋
− ゲンチオビオース
−
− グルコース
＋
− α−メチルグルコシド
− −
グルコナート
＋ −
２−ケトグルコナート
＋（弱） − ５−ケトグルコ
ナート −
− Ｎ−アセチルグルコサミン
＋ −
グリセリン
＋（弱） −
グリコーゲン
− −
ｍｙｏ−イノシトール
− − イヌリ
ン
− − ラクト
ース
− − リキソー
ス
− − マルトース
− − マンニトール
−
− マンノース
−
− α−メチルマンノシ
ド −
− メレジトース
−
− メリビオース
−
− ラフィノース
− −
Ｌ−ラムノース
− −
リボース
＋ −
サリシン
− −
ソルビトール
− − Ｌ
−ソルボース
− − 澱粉
− − スク
ロース
− − タガト
ース
− − トレハロ
ース
＋ − ツラノース
− − ｍｅｓｏ−キシ
リトール −
− Ｄ−キシロース
＋
− Ｌ−キシロース
−
− β−メチル−Ｄ−キシロース
− −＊特に断
らなければ、これらの試験に使用した不斉炭水化物はす
べてＤ−立体配置である。
ｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８
２（シグマ−タウＧＰ１ＡＶＩ）この生物体はシグマ−
タウ・インドゥストリエ・ファルマチェウチケ・リウニ
テ・ソシエタ・ペル・アチオニのアニマルコレクション
中のモルモットのふん便から分離された。新鮮なふん便
（０．５−１．０ｇ）を、滅菌脳−心臓浸出液（ｂｒａ
ｉｎ−ｈｅａｒｔ ｉｎｆｕｓｉｏｎ）（ＢＨＩ）（デ
ィフコ）＋１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和
物（ｐＨ６．８、３７℃）の４ｍＬ中で撹拌せずに２４
時間インキュベートした。１白金耳のブイヨンをメニス
カスの真下から採取し、キシリナス、Ｍ．Ｅ．、パパビ
シリウ、Ｊ．Ｔ．およびレガキス、Ｎ．Ｊ．［「プロテ
ウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）の生長のための選択的培地」、
ジャーナル・オブ・クリニカル・ミクロビオロジイ（Ｊ
．Ｃｌｉｎ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．）２：４５９（１
９７５）］に記載の培地、以下、ギリシャ寒天という、
に線条接種した。３７℃にて４８時間後、単一のコロニ
ーを採取し、ギリシャ寒天＋１．５％（ｗ／ｖ）クロト
ノベタイン一水和物のプレート（ｐＨ６．８、３７℃、
４８時間）およびマッコンケイ寒天ＣＳ（ディフコ）＋
１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物（ｐＨ６
．８、３７℃、２４時間）上の単一のコロニーの線条接
種を繰り返して精製した。生物体はギリシャ寒天＋１．
５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物に毎日移し維
持した（３７℃）。シグマ−タウ・インドゥストリエ・
ファルマチェウチケ・リウニテ・ソシエタ・ペル・アチ
オニのインダストリアル・マイクロバイオロジー・ラボ
ラトリーにおいて、ＡＰＩ２０Ｅ、ＡＰＩＺＹＭおよび
ＡＰＩ５０ＣＨＥのストリップを組み合わせた形態学的
試験を用い、さらに必要とみなされたその他の生化学的
／生理学的試験によって型を決定した。 形態学的性質 グラム染色：陰性 形態：桿菌 大きさ：０．８×２μ べん毛：周毛性 運動性（ＮＡＣｉｔ＋ｃｂ；ＢＨＩ＋１．５％クロトノ
ベタイン一水和物＋ ２％寒天、ｐＨ６．８）：有り、スウォーミング性色素
形成：陰性 胞子形成：陰性 生理学的／生化学的性質（３７℃） ＞ＣＯ２要求性：陰性 フォーゲス−プロスカウア反応：弱 Ｈ２Ｓの産生（トリプル糖（ｔｒｉｐｌｅ ｓｕｇａｒ
）鉄寒天）：陽性 シモンズくえん酸培地中での生長：陰性マックコンケイ
寒天上での生長：陽性 ゼラチンの液化：陰性 アミノ酸栄養要求性：無し 酸性ホスファターゼ（ナフトール−ＡＳ−ＢＩ−ホスフ
ァート、ｐＨ５．４ ）：陽性（弱） 酸性ホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ５．４
）：陽性 アルカリホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ８
．５）：陽性 エステラーゼ（酪酸β−ナフチル）：陽性（弱）エステ
ラーゼ（カプリル酸β−ナフチル）：陰性リパーゼ（ミ
リスチン酸β−ナフチル）：陰性アルギニンジヒドロラ
ーゼ：陰性 オルニチンデカルボキシラーゼ：陽性 リジンデカルボキシラーゼ：陰性 インドールの産生：陰性 トリプトファンデアミナーゼ：陽性 フェニルアラニンデアミナーゼ：陽性 ウレアーゼ：陽性 トリプシン：陰性 キモトリプシン：陰性 シスチンアリルアミダーゼ：陰性 ロイシンアリルアミダーゼ：陽性 バリンアリルアミダーゼ：陰性 オキシダーゼ：陰性 Ｏ−Ｆグルコース、酸化性：陽性 Ｏ−Ｆグルコース、発酵性：陽性 α−ガラクトシダーゼ：陰性 β−ガラクトシダーゼ：陰性 β−グルクロニダーゼ：陰性 α−グルコシダーゼ：陰性 β−グルコシダーゼ：陰性 Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ：陰性α−フコ
シダーゼ：陰性 α−マンノシダーゼ：陰性 炭水化物からの酸およびガスの産生（２４時間、３７℃
） 炭水化物＊
酸 ガス
ｍｅｓｏ−アドニトール
− −
エスクリン
− −
アミグダリン
− − Ｄ−
アラビノース
＋（弱） − Ｌ−アラビノー
ス −
− Ｄ−アラビトール
−
− Ｌ−アラビトール
−
− アルブチン
−
− セロビオーズ
− −
ｍｅｓｏ−ズルシトール
− −
ｍｅｓｏ−エリスリトール
− − フルクト
ース
− − Ｄ−フコース
−
− Ｌ−フコース
−
− ガラクトース
＋
− ゲンチオビオース
−
− グルコース
＋
− α−メチルグルコシド
− −
グルコナート
＋ −
２−ケトグルコナート
＋（弱） − ５−ケトグルコ
ナート −
− Ｎ−アセチルグルコサミン
＋ −
グリセリン
＋（弱） −
グリコーゲン
− −
ｍｙｏ−イノシトール
− − イヌリ
ン
− − ラクト
ース
− − リキソー
ス
− − マルトース
− − マンニトール
−
− マンノース
−
− α−メチルマンノシ
ド −
− メレジトース
−
− メリビオース
−
− ラフィノース
− −
Ｌ−ラムノース
− −
リボース
＋ −
サリシン
− −
ソルビトール
− − Ｌ
−ソルボース
− − 澱粉
− − スク
ロース
− − タガト
ース
− − トレハロ
ース
＋ − ツラノース
− − ｍｅｓｏ−キシ
リトール −
− Ｄ−キシロース
＋
− Ｌ−キシロース
−
− β−メチル−Ｄ−キシロース
− −＊特に断
らなければ、これらの試験に使用した不斉炭水化物はす
べてＤ−立体配置である。
【００１２】抗生物質感度
アンチバイオグラムはプロテウス・ミラビリス（Ｐ．
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１４８４０（シクマ
−タウＳＰ２３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１）に記載
と全く同様にして得た。 抗生物質（量）
阻害範囲の直径（ｍｍ） 判定アミカシ
ン（３０μｇ）
１７ 感受性有
りアンピシリン（１０μｇ）
２２
感受性有りベンジルペニシリン（１０ＩＵ）
１８
感受性有りセフロキシム（３０μｇ）
２２
感受性有りセファロチン（３０μｇ）
２１
感受性有りクロラムフェニコール
（３０μｇ） ２０
感受性有りコリスチン（１０μｇ
） ／
抵抗ゲンタマイシン
（１０μｇ） １７
感受性有りこれらの
結果に基づき、分離された生物体はＡＰＩ式の分類法に
よりプロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒ
ａｂｉｌｉｓ）株に該当した。
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１４８４０（シクマ
−タウＳＰ２３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１）に記載
と全く同様にして得た。 抗生物質（量）
阻害範囲の直径（ｍｍ） 判定アミカシ
ン（３０μｇ）
１７ 感受性有
りアンピシリン（１０μｇ）
２２
感受性有りベンジルペニシリン（１０ＩＵ）
１８
感受性有りセフロキシム（３０μｇ）
２２
感受性有りセファロチン（３０μｇ）
２１
感受性有りクロラムフェニコール
（３０μｇ） ２０
感受性有りコリスチン（１０μｇ
） ／
抵抗ゲンタマイシン
（１０μｇ） １７
感受性有りこれらの
結果に基づき、分離された生物体はＡＰＩ式の分類法に
よりプロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒ
ａｂｉｌｉｓ）株に該当した。
【００１３】（ｉｉｉ）プロテウス・ミラビリス（Ｐｒ
ｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４
８１（シグマ−タウＢＴ１ＩＶ）この生物体はシグマ−
タウ・インドゥストリエ・ファルマチェウチケ・リウニ
テ・ソシエタ・ペル・アチオニのアニマルコレクション
中のウサギのふん便からプロテウス・ミラビリス（Ｐ．
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１４８４２（シグ
マ−タウＧＰ１ＡＶＩ）に記載したと全く同様に分離さ
れた。この生物体はギリシャ寒天＋１．５％（ｗ／ｖ）
クロトノベタイン一水和物に毎日移し替え維持した（３
７℃）。シグマ−タウ・インドゥストリエ・ファルマチ
ェウチケ・リウニテ・ソシエタ・ペル・アチオニのイン
ダストリアル・マイクロバイオロジー・ラボラトリーに
おいて、ＡＰＩ２０Ｅ、ＡＰＩＺＹＭおよびＡＰＩ５０
ＣＨＥのストリップを組み合わせた形態学的試験を用い
、さらに必要とみなされたその他の生化学的／生理学的
試験によって型を決定した。 形態学的性質 グラム染色：陰性 形態：桿菌 大きさ：０．８×２μ べん毛：周毛性 運動性（ＮＡＣｉｔ＋ｃｂ：ＢＨＩ＋１．５％（ｗ／ｖ
）クロトノベタイン 一水和物＋２％寒天、ｐＨ６．８）：有り、スウォーミ
ング性 色素形成：陰性 胞子形成：陰性 生理学的／生化学的性質（３７℃） ＞ＣＯ２要求性：陰性 フォーゲス−プロスカウア反応：陰性 Ｈ２Ｓの産生（トリプル糖鉄寒天（ｔｒｉｐｌｅ ｓｕ
ｇａｒ ｉｒｏｎ ａｇａｒ））：陽性 シモンズくえん酸培地中での生長：陰性マックコンケイ
寒天上での生長：陽性 ゼラチンの液化：陽性 アミノ酸栄養要求性：無し 酸性ホスファターゼ（ナフトール−ＡＳ−ＢＩ−ホスフ
ァート、ｐＨ５．４ ）：陽性（弱） 酸性ホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ５．４
）：陽性 アルカリホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ８
．５）：陽性 エステラーゼ（酪酸β−ナフチル）：陽性（弱）エステ
ラーゼ（カプリル酸β−ナフチル）：陰性リパーゼ（ミ
リスチン酸β−ナフチル）：陰性アルギニンジヒドロラ
ーゼ：陰性 オルニチンデカルボキシラーゼ：陽性 リジンデカルボキシラーゼ：陰性 インドールの産生：陰性 トリプトファンデアミナーゼ：陽性 フェニルアラニンデアミナーゼ：陽性 ウレアーゼ：陽性 トリプシン：陽性 キモトリプシン：陰性 シスチンアリルアミダーゼ：陰性 ロイシンアリルアミダーゼ：陽性 バリンアリルアミダーゼ：陰性 オキシダーゼ：陰性 Ｏ−Ｆグルコース、酸化性：陽性 Ｏ−Ｆグルコース、発酵性：陽性 α−ガラクトシダーゼ：陰性 β−ガラクトシダーゼ：陰性 β−グルクロニダーゼ：陰性 α−グルコシダーゼ：陰性 β−グルコシダーゼ：陰性 Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ：陰性α−フコ
シダーゼ：陰性 α−マンノシダーゼ：陰性 炭水化物からの酸およびガスの産生（２４時間、３７℃
） 炭水化物
酸 ガ
ス ｍｅｓｏ−アドニトール
− −
エスクリン
− −
アミグダリン
− − Ｄ
−アラビノース
＋（弱） − Ｌ−アラビノ
ース −
− Ｄ−アラビトール
−
− Ｌ−アラビトール
−
− アルブチン
−
− セロビオース
− −
ｍｅｓｏ−ズルシトール
− −
ｍｅｓｏ−エリスリトール
− − フルク
トース
− − Ｄ−フコー
ス
− − Ｌ−フコース
−
− ガラクトース
＋
− ゲンチオビオース
−
− グルコース
＋
− α−メチルグルコシド
− −
グルコナート
＋ −
２−ケトグルコナート
＋（弱） − ５−ケトグル
コナート −
− Ｎ−アセチルグルコサミン
＋
− グリセリン
＋（弱） −
グリコーゲン
− −
ｍｙｏ−イノシトール
− − イヌ
リン
− − ラク
トース
− − リキソ
ース
− − マルトー
ス
− − マンニトー
ル
− − マンノース
−
− α−メチルマンノ
シド −
− メレジトース
−
− メリビオース
−
− ラフィノース
−
− Ｌ−ラムノース
− −
リボース
＋ −
サリシン
− −
ソルビトール
− −
Ｌ−ソルボース
− − 澱粉
− − ス
クロース
− − タガ
トース
− − トレハ
ロース
＋ − ツラノース
− − ｍｅｓｏ−キ
シリトール −
− Ｄ−キシロース
＋
− Ｌ−キシロース
−
− β−メチル−Ｄ−キシロース
− −＊特に
断らなければ、これらの試験に使用した不斉炭水化物は
すべてＤ−立体配置である。
ｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４
８１（シグマ−タウＢＴ１ＩＶ）この生物体はシグマ−
タウ・インドゥストリエ・ファルマチェウチケ・リウニ
テ・ソシエタ・ペル・アチオニのアニマルコレクション
中のウサギのふん便からプロテウス・ミラビリス（Ｐ．
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１４８４２（シグ
マ−タウＧＰ１ＡＶＩ）に記載したと全く同様に分離さ
れた。この生物体はギリシャ寒天＋１．５％（ｗ／ｖ）
クロトノベタイン一水和物に毎日移し替え維持した（３
７℃）。シグマ−タウ・インドゥストリエ・ファルマチ
ェウチケ・リウニテ・ソシエタ・ペル・アチオニのイン
ダストリアル・マイクロバイオロジー・ラボラトリーに
おいて、ＡＰＩ２０Ｅ、ＡＰＩＺＹＭおよびＡＰＩ５０
ＣＨＥのストリップを組み合わせた形態学的試験を用い
、さらに必要とみなされたその他の生化学的／生理学的
試験によって型を決定した。 形態学的性質 グラム染色：陰性 形態：桿菌 大きさ：０．８×２μ べん毛：周毛性 運動性（ＮＡＣｉｔ＋ｃｂ：ＢＨＩ＋１．５％（ｗ／ｖ
）クロトノベタイン 一水和物＋２％寒天、ｐＨ６．８）：有り、スウォーミ
ング性 色素形成：陰性 胞子形成：陰性 生理学的／生化学的性質（３７℃） ＞ＣＯ２要求性：陰性 フォーゲス−プロスカウア反応：陰性 Ｈ２Ｓの産生（トリプル糖鉄寒天（ｔｒｉｐｌｅ ｓｕ
ｇａｒ ｉｒｏｎ ａｇａｒ））：陽性 シモンズくえん酸培地中での生長：陰性マックコンケイ
寒天上での生長：陽性 ゼラチンの液化：陽性 アミノ酸栄養要求性：無し 酸性ホスファターゼ（ナフトール−ＡＳ−ＢＩ−ホスフ
ァート、ｐＨ５．４ ）：陽性（弱） 酸性ホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ５．４
）：陽性 アルカリホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ８
．５）：陽性 エステラーゼ（酪酸β−ナフチル）：陽性（弱）エステ
ラーゼ（カプリル酸β−ナフチル）：陰性リパーゼ（ミ
リスチン酸β−ナフチル）：陰性アルギニンジヒドロラ
ーゼ：陰性 オルニチンデカルボキシラーゼ：陽性 リジンデカルボキシラーゼ：陰性 インドールの産生：陰性 トリプトファンデアミナーゼ：陽性 フェニルアラニンデアミナーゼ：陽性 ウレアーゼ：陽性 トリプシン：陽性 キモトリプシン：陰性 シスチンアリルアミダーゼ：陰性 ロイシンアリルアミダーゼ：陽性 バリンアリルアミダーゼ：陰性 オキシダーゼ：陰性 Ｏ−Ｆグルコース、酸化性：陽性 Ｏ−Ｆグルコース、発酵性：陽性 α−ガラクトシダーゼ：陰性 β−ガラクトシダーゼ：陰性 β−グルクロニダーゼ：陰性 α−グルコシダーゼ：陰性 β−グルコシダーゼ：陰性 Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ：陰性α−フコ
シダーゼ：陰性 α−マンノシダーゼ：陰性 炭水化物からの酸およびガスの産生（２４時間、３７℃
） 炭水化物
酸 ガ
ス ｍｅｓｏ−アドニトール
− −
エスクリン
− −
アミグダリン
− − Ｄ
−アラビノース
＋（弱） − Ｌ−アラビノ
ース −
− Ｄ−アラビトール
−
− Ｌ−アラビトール
−
− アルブチン
−
− セロビオース
− −
ｍｅｓｏ−ズルシトール
− −
ｍｅｓｏ−エリスリトール
− − フルク
トース
− − Ｄ−フコー
ス
− − Ｌ−フコース
−
− ガラクトース
＋
− ゲンチオビオース
−
− グルコース
＋
− α−メチルグルコシド
− −
グルコナート
＋ −
２−ケトグルコナート
＋（弱） − ５−ケトグル
コナート −
− Ｎ−アセチルグルコサミン
＋
− グリセリン
＋（弱） −
グリコーゲン
− −
ｍｙｏ−イノシトール
− − イヌ
リン
− − ラク
トース
− − リキソ
ース
− − マルトー
ス
− − マンニトー
ル
− − マンノース
−
− α−メチルマンノ
シド −
− メレジトース
−
− メリビオース
−
− ラフィノース
−
− Ｌ−ラムノース
− −
リボース
＋ −
サリシン
− −
ソルビトール
− −
Ｌ−ソルボース
− − 澱粉
− − ス
クロース
− − タガ
トース
− − トレハ
ロース
＋ − ツラノース
− − ｍｅｓｏ−キ
シリトール −
− Ｄ−キシロース
＋
− Ｌ−キシロース
−
− β−メチル−Ｄ−キシロース
− −＊特に
断らなければ、これらの試験に使用した不斉炭水化物は
すべてＤ−立体配置である。
【００１４】抗生物質感度アンチバイオグラムはプロテ
ウス・ミラビリス（Ｐ． ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲ
ＬＢ−１８４８０（シグマ−タウＳＰ２３７サブクロー
ンＮＡＣｉｔＩ１）についての記載と全く同様にして得
た。 抗生物質（量）
阻害範囲の直径（ｍｍ） 判定アミカシ
ン（３０μｇ）
１７ 感受性有
りアンピシリン（１０μｇ）
２０
感受性有りベンジルペニシリン（１０ＩＵ）
１６
中間セフロキシム（３０μｇ）
２０
感受性有りセファロチン（３０μｇ）
２１
感受性有りクロラムフェニコール（３０
μｇ） １８
感受性有りコリスチン（１０μｇ）
／
抵抗ゲンタマイシン（１０
μｇ） １７
感受性有りこれらの結果に
基づき、分離された微生物はＡＰＩ式の分類法によりプ
ロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉ
ｌｉｓ）株に該当した。
ウス・ミラビリス（Ｐ． ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲ
ＬＢ−１８４８０（シグマ−タウＳＰ２３７サブクロー
ンＮＡＣｉｔＩ１）についての記載と全く同様にして得
た。 抗生物質（量）
阻害範囲の直径（ｍｍ） 判定アミカシ
ン（３０μｇ）
１７ 感受性有
りアンピシリン（１０μｇ）
２０
感受性有りベンジルペニシリン（１０ＩＵ）
１６
中間セフロキシム（３０μｇ）
２０
感受性有りセファロチン（３０μｇ）
２１
感受性有りクロラムフェニコール（３０
μｇ） １８
感受性有りコリスチン（１０μｇ）
／
抵抗ゲンタマイシン（１０
μｇ） １７
感受性有りこれらの結果に
基づき、分離された微生物はＡＰＩ式の分類法によりプ
ロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉ
ｌｉｓ）株に該当した。
【００１５】（ｉＶ）プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏ
ｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８
３（シグマ−タウＲ２ＡＩＸ） この生物体はシグマ−タウ・インドゥストリエ・ファル
マチェウチケ・リウニテ・ソシエタ・ペル・アチオニの
アニマルコレクション中のラットのふん便から、プロテ
ウス・ミラビリス（Ｐ． ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲ
ＬＢ−１４８４２（シグマ−タウＧＰ１ＡＶＩ）に記載
したと全く同様に分離された。この生物体はギリシャ寒
天＋１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物に毎
日移し替え維持した（３７℃）。シグマ−タウ・インド
ゥストリエ・ファルマチェウチケ・リウニテ・ソシエタ
・ペル・アチオニのインダストリアル・マイクロバイオ
ロジー・ラボラトリーにおいて、ＡＰＩ２０Ｅ、ＡＰＩ
ＺＹＭおよびＡＰＩ５０ＣＨＥのストリップの組み合わ
せた形態学的試験を用い、さらに必要とみなされたその
他の生化学的／生理学的試験によって型を決定した。 形態学的性質 グラム染色：陰性 形態：桿菌 大きさ：０．８×３μ 運動性（ＮＡＣｉｔ＋ｃｂ：ＢＨＩ＋１．５％（ｗ／ｖ
）クロトノベタイン 一水和物＋２％寒天、ｐＨ６．８）：有り、スウォーミ
ング性 色素形成：陰性 胞子形成：陰性 生理学的／生化学的性質（３７℃） ＞ＣＯ２要求性：陰性 フォーゲス−プロスカウア反応：陰性 Ｈ２Ｓの産生（トリプル糖鉄寒天）：陽性シモンズくえ
ん酸培地中での生長：陰性マックコンケイ寒天上での生
長：陽性 ゼラチンの液化：陽性 アミノ酸栄養要求性：無し 酸性ホスファターゼ（ナフトール−ＡＳ−ＢＩ−ホスフ
ァート、ｐＨ５．４）：陰性 酸性ホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ５．４
）：陽性 アルカリホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ８
．５）：陽性 エステラーゼ（酪酸β−ナフチル）：陽性（弱）エステ
ラーゼ（カプリル酸β−ナフチル）：陰性リパーゼ（ミ
リスチン酸β−ナフチル）：陰性アルギニンジヒドロラ
ーゼ：陰性 オルニチンデカルボキシラーゼ：陽性 リジンデカルボキシラーゼ：陰性 インドールの産生：陰性 トリプトファンデアミナーゼ：陽性 フェニルアラニンデアミナーゼ：陽性 ウレアーゼ：陽性 トリプシン：陰性 キモトリプシン：陰性 シスチンアリルアミダーゼ：陰性 ロイシンアリルアミダーゼ：陽性 バリンアリルアミダーゼ：陰性 オキシダーゼ：陰性 Ｏ−Ｆグルコース、酸化性：陽性 Ｏ−Ｆグルコース、発酵性：陽性 α−ガラクトシダーゼ：陰性 β−ガラクトシダーゼ：陰性 β−グルクロニダーゼ：陰性 α−グルコシダーゼ：陰性 β−グルコシダーゼ：陰性 Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ：陰性α−フコ
シダーゼ：陰性 α−マンノシダーゼ：陰性 炭水化物からの酸およびガスの産生（２４時間、３７℃
） 炭水化物＊
酸 ガス
ｍｅｓｏ−アドニトール
− −
エスクリン
− −
アミグダリン
− − Ｄ−
アラビノース
＋（弱） − Ｌ−アラビノー
ス −
− Ｄ−アラビトール
−
− Ｌ−アラビトール
−
− アルブチン
−
− セロビオース
− −
ｍｅｓｏ−ズルシトール
− −
ｍｅｓｏ−エリスリトール
− − フルクト
ース
− − Ｄ−フコース
−
− Ｌ−フコース
−
− ガラクトース
＋
− ゲンチオビオース
−
− グルコース
＋
− α−メチルグルコシド
− −
グルコナート
＋ −
２−ケトグルコナート
− − ５−ケトグル
コナート −
− Ｎ−アセチルグルコサミン
＋
− グリセリン
＋（弱） −
グリコーゲン
− −
ｍｙｏ−イノシトール
− − イヌ
リン
− − ラク
トース
− − リキソ
ース
− − マルトー
ス
− − マンニトー
ル
− − マンノース
−
− α−メチルマンノ
シド −
− メレジトース
−
− メリビオース
−
− ラフィノース
−
− Ｌ−ラムノース
− −
リボース
＋ −
サリシン
− −
ソルビトール
− −
Ｌ−ソルボース
− − 澱粉
− − ス
クロース
− − タガ
トース
− − トレハ
ロース
＋ − ツラノース
− − ｍｅｓｏ−キ
シリトール −
− Ｄ−キシロース
＋
− Ｌ−キシロース
−
− β−メチル−Ｄ−キシロース
− −＊特に
断らなければ、これらの試験に使用した不斉炭水化物は
すべてＤ−立体配置である。
ｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８
３（シグマ−タウＲ２ＡＩＸ） この生物体はシグマ−タウ・インドゥストリエ・ファル
マチェウチケ・リウニテ・ソシエタ・ペル・アチオニの
アニマルコレクション中のラットのふん便から、プロテ
ウス・ミラビリス（Ｐ． ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲ
ＬＢ−１４８４２（シグマ−タウＧＰ１ＡＶＩ）に記載
したと全く同様に分離された。この生物体はギリシャ寒
天＋１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物に毎
日移し替え維持した（３７℃）。シグマ−タウ・インド
ゥストリエ・ファルマチェウチケ・リウニテ・ソシエタ
・ペル・アチオニのインダストリアル・マイクロバイオ
ロジー・ラボラトリーにおいて、ＡＰＩ２０Ｅ、ＡＰＩ
ＺＹＭおよびＡＰＩ５０ＣＨＥのストリップの組み合わ
せた形態学的試験を用い、さらに必要とみなされたその
他の生化学的／生理学的試験によって型を決定した。 形態学的性質 グラム染色：陰性 形態：桿菌 大きさ：０．８×３μ 運動性（ＮＡＣｉｔ＋ｃｂ：ＢＨＩ＋１．５％（ｗ／ｖ
）クロトノベタイン 一水和物＋２％寒天、ｐＨ６．８）：有り、スウォーミ
ング性 色素形成：陰性 胞子形成：陰性 生理学的／生化学的性質（３７℃） ＞ＣＯ２要求性：陰性 フォーゲス−プロスカウア反応：陰性 Ｈ２Ｓの産生（トリプル糖鉄寒天）：陽性シモンズくえ
ん酸培地中での生長：陰性マックコンケイ寒天上での生
長：陽性 ゼラチンの液化：陽性 アミノ酸栄養要求性：無し 酸性ホスファターゼ（ナフトール−ＡＳ−ＢＩ−ホスフ
ァート、ｐＨ５．４）：陰性 酸性ホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ５．４
）：陽性 アルカリホスファターゼ（りん酸β−ナフチル、ｐＨ８
．５）：陽性 エステラーゼ（酪酸β−ナフチル）：陽性（弱）エステ
ラーゼ（カプリル酸β−ナフチル）：陰性リパーゼ（ミ
リスチン酸β−ナフチル）：陰性アルギニンジヒドロラ
ーゼ：陰性 オルニチンデカルボキシラーゼ：陽性 リジンデカルボキシラーゼ：陰性 インドールの産生：陰性 トリプトファンデアミナーゼ：陽性 フェニルアラニンデアミナーゼ：陽性 ウレアーゼ：陽性 トリプシン：陰性 キモトリプシン：陰性 シスチンアリルアミダーゼ：陰性 ロイシンアリルアミダーゼ：陽性 バリンアリルアミダーゼ：陰性 オキシダーゼ：陰性 Ｏ−Ｆグルコース、酸化性：陽性 Ｏ−Ｆグルコース、発酵性：陽性 α−ガラクトシダーゼ：陰性 β−ガラクトシダーゼ：陰性 β−グルクロニダーゼ：陰性 α−グルコシダーゼ：陰性 β−グルコシダーゼ：陰性 Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ：陰性α−フコ
シダーゼ：陰性 α−マンノシダーゼ：陰性 炭水化物からの酸およびガスの産生（２４時間、３７℃
） 炭水化物＊
酸 ガス
ｍｅｓｏ−アドニトール
− −
エスクリン
− −
アミグダリン
− − Ｄ−
アラビノース
＋（弱） − Ｌ−アラビノー
ス −
− Ｄ−アラビトール
−
− Ｌ−アラビトール
−
− アルブチン
−
− セロビオース
− −
ｍｅｓｏ−ズルシトール
− −
ｍｅｓｏ−エリスリトール
− − フルクト
ース
− − Ｄ−フコース
−
− Ｌ−フコース
−
− ガラクトース
＋
− ゲンチオビオース
−
− グルコース
＋
− α−メチルグルコシド
− −
グルコナート
＋ −
２−ケトグルコナート
− − ５−ケトグル
コナート −
− Ｎ−アセチルグルコサミン
＋
− グリセリン
＋（弱） −
グリコーゲン
− −
ｍｙｏ−イノシトール
− − イヌ
リン
− − ラク
トース
− − リキソ
ース
− − マルトー
ス
− − マンニトー
ル
− − マンノース
−
− α−メチルマンノ
シド −
− メレジトース
−
− メリビオース
−
− ラフィノース
−
− Ｌ−ラムノース
− −
リボース
＋ −
サリシン
− −
ソルビトール
− −
Ｌ−ソルボース
− − 澱粉
− − ス
クロース
− − タガ
トース
− − トレハ
ロース
＋ − ツラノース
− − ｍｅｓｏ−キ
シリトール −
− Ｄ−キシロース
＋
− Ｌ−キシロース
−
− β−メチル−Ｄ−キシロース
− −＊特に
断らなければ、これらの試験に使用した不斉炭水化物は
すべてＤ−立体配置である。
【００１６】抗生物質感度
アンチバイオグラムはプロテウス・ミラビリス（Ｐ．
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８０（シグマ
−タウＳＰ２３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１）に記載
と全く同様にして得た。 抗生物質（量）
阻害範囲の直径（ｍｍ） 判定アミカシ
ン（３０μｇ）
＞３０ 感受性有り
アンピシリン（１０μｇ）
＞３０ 感受
性有りベンジルペニシリン（１０ＩＵ）
２５
感受性有りセフロキシム（３０μｇ）
＞３０
感受性有りセファロチン（３０μｇ）
＞３０
感受性有りクロラムフェニコール（３０μ
ｇ） ／
抵抗コリスチン（１０μｇ）
／
抵抗ゲンタマイシン（１０μｇ）
＞３０
感受性有りこれらの結果に基づき、
分離された微生物はＡＰＩ式の分類法によりプロテウス
・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）
株に該当した。
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８０（シグマ
−タウＳＰ２３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１）に記載
と全く同様にして得た。 抗生物質（量）
阻害範囲の直径（ｍｍ） 判定アミカシ
ン（３０μｇ）
＞３０ 感受性有り
アンピシリン（１０μｇ）
＞３０ 感受
性有りベンジルペニシリン（１０ＩＵ）
２５
感受性有りセフロキシム（３０μｇ）
＞３０
感受性有りセファロチン（３０μｇ）
＞３０
感受性有りクロラムフェニコール（３０μ
ｇ） ／
抵抗コリスチン（１０μｇ）
／
抵抗ゲンタマイシン（１０μｇ）
＞３０
感受性有りこれらの結果に基づき、
分離された微生物はＡＰＩ式の分類法によりプロテウス
・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）
株に該当した。
【００１７】しんとうフラスコ中におけるプロテウス・
ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）単
離物によるクロトノベタインからのＬ−（−）−カルニ
チンの合成のため生体内変換比較データ プロテウス・ミラビリス（Ｐ．Ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）Ｎ
ＲＲＬＢ−１８４８０（シグマ−タウＳＰ２３７サブク
ローンＮＡＣｉｔＩ１）は毎日、ＮＡＣｉｔ＋ｃｂに移
し替えて維持した。インキュベート温度は３７℃である
。プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａ
ｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８１（シグマ−タウＢ
Ｔ１ＩＶ）、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８２（シグマ
−タウＧＰ１ＡＶＩ）およびプロテウス・ミラビリス（
Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１
８４８３（シグマ−タウＲ２ＡＩＸ）はギリシャ寒天＋
１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物に毎日移
し替え維持し、インキュベート温度は３７℃であった。 前記の株の１白金耳を２５０ｍＬエルレンマイヤーフラ
スコに接種した。各フラスコは、脳−心臓浸出液＋１．
５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物の５０ｍＬ、
ｐＨ６．８を含む。このフラスコを、１７時間しんとう
する（２００ｒｐｍ、軌道偏心距離１インチ、３７℃）
し、ついで細胞を遠心分離して集め（１０分、１２００
０ｘｇ、４℃）、１回生理食塩水（５０ｍＬ）にて洗浄
する。洗浄した細胞ペレットを２５ｍＭりん酸カリウム
＋１％（ｗ／ｖ）グセリン＋１２％（ｗ／ｖ）クロトノ
ベタイン一水和物、ｐＨ６．０からなる非滅菌生体内変
換用培地に再懸濁した。生体内変換反応は上記と同様に
３３℃にて９６時間しんとうして行った。この間、一部
（１００μＬ）を取り出し、パーソン、Ｄ．Ｊ．、チェ
イス、Ｊ．Ａ．Ｆ．およびタブ、Ｐ．Ｋ．［「Ｌ−（−
）−カルニチンおよびＯ−アシル誘導体の測定」メソッ
ド・オブ・エンチモロジイ（Ｍｅｔｈ． Ｅｎｚｙｍｏ
ｌ．）、９：６１２（１９６６）］の方法によりＬ−（
−）−カルニチンを酵素学的に測定した。下記の結果を
得た（０−９６時間かかり蒸留して集めた）。 Ｌ−（−）−カルニチン蓄積量（ｍＭ） フ゜ロ
テウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉ
ｌｉｓ） フ゜ロテウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏｔｅ
ｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）時間 ＮＲＲＬ
Ｂ−１８４８０ ＮＲＲＬＢ−１８
４８２ （ＳＰ２３
７サフ゛クローンＮＡＣｉｔＩ１）
（ＧＰ１ＡＶＩ） ５
１０４
８０２４
２６０
１８４４８
２８５ ２５７
７２ ２
９９ ２８６９６
３４０
３１５ フ゜ロテ
ウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌ
ｉｓ） フ゜ロテウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏｔｅｕ
ｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）時間 ＮＲＲＬＢ
−１８４８１ ＮＲＲＬＢ−１８４
８３
（ＢＴ１ＩＶ） （Ｒ
２ＡＩＸ） ５
８４
１０２２４
２２９ ２５８４
８ ２５
４ ２９５７２
３０７
２９２９６
３１１
２９６外来性クロトノベタインのＬ
−（−）−カルニチンへの代謝性転換（％） フ
゜ロテウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａ
ｂｉｌｉｓ） フ゜ロテウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏ
ｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）時間 ＮＲ
ＲＬＢ−１８４８０ ＮＲＲＬＢ−
１８４８２ （ＳＰ
２３７サフ゛クローンＮＡＣｉｔＩ１）
（ＧＰ１ＡＶＩ） ５
１４
１１２４
３５
２５４８
３８
３４７２
４０
３９９６
４６ ４２
フ゜ロテウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏｔｅｕｓ
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ） フ゜ロテウス・ミラヒ゛リ
ス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）時間
ＮＲＲＬＢ−１８４８１ Ｎ
ＲＲＬＢ−１８４８３
（ＢＴ１ＩＶ）
（Ｒ２ＡＩＸ） ５
１１
１４２４
３１
３５４８
３５
４０７２
４１
３９９６
４２
４０＊１００％＝７４４．４ｍＭ
ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）単
離物によるクロトノベタインからのＬ−（−）−カルニ
チンの合成のため生体内変換比較データ プロテウス・ミラビリス（Ｐ．Ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）Ｎ
ＲＲＬＢ−１８４８０（シグマ−タウＳＰ２３７サブク
ローンＮＡＣｉｔＩ１）は毎日、ＮＡＣｉｔ＋ｃｂに移
し替えて維持した。インキュベート温度は３７℃である
。プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａ
ｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８１（シグマ−タウＢ
Ｔ１ＩＶ）、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８２（シグマ
−タウＧＰ１ＡＶＩ）およびプロテウス・ミラビリス（
Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１
８４８３（シグマ−タウＲ２ＡＩＸ）はギリシャ寒天＋
１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物に毎日移
し替え維持し、インキュベート温度は３７℃であった。 前記の株の１白金耳を２５０ｍＬエルレンマイヤーフラ
スコに接種した。各フラスコは、脳−心臓浸出液＋１．
５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物の５０ｍＬ、
ｐＨ６．８を含む。このフラスコを、１７時間しんとう
する（２００ｒｐｍ、軌道偏心距離１インチ、３７℃）
し、ついで細胞を遠心分離して集め（１０分、１２００
０ｘｇ、４℃）、１回生理食塩水（５０ｍＬ）にて洗浄
する。洗浄した細胞ペレットを２５ｍＭりん酸カリウム
＋１％（ｗ／ｖ）グセリン＋１２％（ｗ／ｖ）クロトノ
ベタイン一水和物、ｐＨ６．０からなる非滅菌生体内変
換用培地に再懸濁した。生体内変換反応は上記と同様に
３３℃にて９６時間しんとうして行った。この間、一部
（１００μＬ）を取り出し、パーソン、Ｄ．Ｊ．、チェ
イス、Ｊ．Ａ．Ｆ．およびタブ、Ｐ．Ｋ．［「Ｌ−（−
）−カルニチンおよびＯ−アシル誘導体の測定」メソッ
ド・オブ・エンチモロジイ（Ｍｅｔｈ． Ｅｎｚｙｍｏ
ｌ．）、９：６１２（１９６６）］の方法によりＬ−（
−）−カルニチンを酵素学的に測定した。下記の結果を
得た（０−９６時間かかり蒸留して集めた）。 Ｌ−（−）−カルニチン蓄積量（ｍＭ） フ゜ロ
テウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉ
ｌｉｓ） フ゜ロテウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏｔｅ
ｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）時間 ＮＲＲＬ
Ｂ−１８４８０ ＮＲＲＬＢ−１８
４８２ （ＳＰ２３
７サフ゛クローンＮＡＣｉｔＩ１）
（ＧＰ１ＡＶＩ） ５
１０４
８０２４
２６０
１８４４８
２８５ ２５７
７２ ２
９９ ２８６９６
３４０
３１５ フ゜ロテ
ウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌ
ｉｓ） フ゜ロテウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏｔｅｕ
ｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）時間 ＮＲＲＬＢ
−１８４８１ ＮＲＲＬＢ−１８４
８３
（ＢＴ１ＩＶ） （Ｒ
２ＡＩＸ） ５
８４
１０２２４
２２９ ２５８４
８ ２５
４ ２９５７２
３０７
２９２９６
３１１
２９６外来性クロトノベタインのＬ
−（−）−カルニチンへの代謝性転換（％） フ
゜ロテウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａ
ｂｉｌｉｓ） フ゜ロテウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏ
ｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）時間 ＮＲ
ＲＬＢ−１８４８０ ＮＲＲＬＢ−
１８４８２ （ＳＰ
２３７サフ゛クローンＮＡＣｉｔＩ１）
（ＧＰ１ＡＶＩ） ５
１４
１１２４
３５
２５４８
３８
３４７２
４０
３９９６
４６ ４２
フ゜ロテウス・ミラヒ゛リス（Ｐｒｏｔｅｕｓ
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ） フ゜ロテウス・ミラヒ゛リ
ス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）時間
ＮＲＲＬＢ−１８４８１ Ｎ
ＲＲＬＢ−１８４８３
（ＢＴ１ＩＶ）
（Ｒ２ＡＩＸ） ５
１１
１４２４
３１
３５４８
３５
４０７２
４１
３９９６
４２
４０＊１００％＝７４４．４ｍＭ
【００１８】プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８０（シグ
マ−タウＳＰ２３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１）にお
けるクロトノベタイン・ヒドラターゼ高活性を維持する
別法複合培地プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８０（シグ
マ−タウＳＰ２３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１）をＮ
ＡＣｉｔ＋ｃｂに毎日移し替え培養した。インキュベー
ト温度は３７℃である。１白金耳のこの株をダイバース
培地５０ｍＬを含む２５０ｍＬエルレンマイヤーフラス
コに接種した。 （ａ）脳−心臓浸出液（ディフコ）＋１．５％（ｗ／ｖ
）クロトノベタイン一水和物、ｐＨ６．８（ｂ）０．９
％栄養ブイヨン（ディフコ）＋０．９％酵素抽出液（デ
ィフコ）＋０．９％ソイトン（Ｓｏｙｔｏｎｅ）（ディ
フコ）＋０．２％グルコース＋０．５％塩化ナトリウム
＋０．２５％りん酸二塩基酸ナトリウム（無水）＋１．
５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、ｐＨ６．８
。 （ｃ）１．３５％栄養ブイヨン＋１．３５％ソイトン（
ｓｏｙｔｏｎｅ）＋０．２％グルコース＋０．５％塩化
ナトリウム＋０．２５％りん酸二塩基酸ナトリウム（無
水）＋１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、
ｐＨ６．８。 （ｄ）１．３５％ソイトン（ｓｏｙｔｏｎｅ）＋１．３
５％酵素抽出液＋０．２％グルコース＋０．５％塩化ナ
トリウム＋０．２５％りん酸二塩基酸ナトリウム（無水
）＋１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、ｐ
Ｈ６．８。 （ｅ）１．３５％栄養ブイヨン＋１．３５％酵素抽出液
＋０．２％グルコース＋０．２５％塩化ナトリウム＋０
．２５％りん酸二塩基酸ナトリウム（無水）＋１．５％
（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、ｐＨ６．８。 （ｆ）０．９％栄養ブイヨン＋０．９％ソイトン（ｓｏ
ｙｔｏｎｅ）＋０．９％酵素抽出液＋０．５％塩化ナト
リウム＋０．２５％りん酸二塩基酸ナトリウム（無水）
＋１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、ｐＨ
６．８。 （ｇ）０．９％栄養ブイヨン＋０．９％ソイトン（ｓｏ
ｙｔｏｎｅ）＋０．９％酵素抽出液＋０．２％グルコー
ス＋０．２５％りん酸二塩基酸ナトリウム（無水）＋１
．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、ｐＨ６．
８。 （ｈ）０．９％栄養ブイヨン＋０．９％ソイトン（ｓｏ
ｙｔｏｎｅ）＋０．９％酵素抽出液＋０．２％グルコー
ス＋０．５％塩化ナトリウム＋１．５％（ｗ／ｖ）クロ
トノベタイン−水和物、ｐＨ６．８。 （ｉ）脳−心臓浸出液、ｐＨ６．８フラスコを１７時間
しんとう（２００ｒｐｍ、軌道偏心距離１インチ、３７
℃）し、ついで、細胞を各フラスコから、遠心分離によ
り（１０分、１２０００ｘｇ、４℃）別々に採取し、１
回生理食塩水（５０ｍＬ）にて洗浄する。洗浄した細胞
ペレットを２５ｍＭりん酸カリウム＋１％（ｗ／ｖ）グ
セリン＋１２％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、
ｐＨ６．０に再懸濁した。生体内変換反応混合物を３３
℃にて９６時間しんとうして行った。この間、一部（１
００μＬ）を取り出し、前記と同様の方法によりＬ−（
−）−カルニチンを酵素学的に測定した。下記の結果を
得た（０−９６時間かかり蒸留して集めた）。 Ｌ−（−）−カルニチン蓄積量（ｍＭ）時間
（ａ） （ｂ） （ｃ） （ｄ）
（ｅ） （ｆ） （ｇ） （ｈ） （
ｉ） ５ ８５ １３０ ８
０ １４０ １６４ ９１ １３０
１０４ １８２４ ２３２ ２４
４ １７３ ２５６ ２５６ ２３２
２１７ ２４４ ７１４８
２７８ ２８５ ２４３ ２７９
２６６ ２７２ ２２２ ２７１ １
１３７２ ３３４ ３２３ ２５５
２９９ ２９９ ３１７ ２５２
２８３ １２５９６ ３３８
３４７ ２６８ ３１５ ３２３ ３
２３ ２５９ ２９７ １２９外来性クロ
トノベタインのＬ−（−）−カルニチンへの代謝性転換
（％）時間 （ａ） （ｂ） （ｃ
） （ｄ） （ｅ） （ｆ） （ｇ）
（ｈ） （ｉ） ５ １１
１７ １１ １９ ２２
１２ １７ １４ ２２４
３１ ３３ ２３ ３
４ ３４ ３１ ２９ ３３
１０４８ ３７ ３８
３３ ３７ ３６ ３７
３０ ３６ １５７２ ４
５ ４３ ３４ ４０ ４０
４３ ３４ ３８ １７９
６ ４５ ４７ ３６
４２ ４３ ４３ ３５
４０ １７ ＊１００％＝７４４．４ｍＭ
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８０（シグ
マ−タウＳＰ２３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１）にお
けるクロトノベタイン・ヒドラターゼ高活性を維持する
別法複合培地プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８０（シグ
マ−タウＳＰ２３７サブクローンＮＡＣｉｔＩ１）をＮ
ＡＣｉｔ＋ｃｂに毎日移し替え培養した。インキュベー
ト温度は３７℃である。１白金耳のこの株をダイバース
培地５０ｍＬを含む２５０ｍＬエルレンマイヤーフラス
コに接種した。 （ａ）脳−心臓浸出液（ディフコ）＋１．５％（ｗ／ｖ
）クロトノベタイン一水和物、ｐＨ６．８（ｂ）０．９
％栄養ブイヨン（ディフコ）＋０．９％酵素抽出液（デ
ィフコ）＋０．９％ソイトン（Ｓｏｙｔｏｎｅ）（ディ
フコ）＋０．２％グルコース＋０．５％塩化ナトリウム
＋０．２５％りん酸二塩基酸ナトリウム（無水）＋１．
５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、ｐＨ６．８
。 （ｃ）１．３５％栄養ブイヨン＋１．３５％ソイトン（
ｓｏｙｔｏｎｅ）＋０．２％グルコース＋０．５％塩化
ナトリウム＋０．２５％りん酸二塩基酸ナトリウム（無
水）＋１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、
ｐＨ６．８。 （ｄ）１．３５％ソイトン（ｓｏｙｔｏｎｅ）＋１．３
５％酵素抽出液＋０．２％グルコース＋０．５％塩化ナ
トリウム＋０．２５％りん酸二塩基酸ナトリウム（無水
）＋１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、ｐ
Ｈ６．８。 （ｅ）１．３５％栄養ブイヨン＋１．３５％酵素抽出液
＋０．２％グルコース＋０．２５％塩化ナトリウム＋０
．２５％りん酸二塩基酸ナトリウム（無水）＋１．５％
（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、ｐＨ６．８。 （ｆ）０．９％栄養ブイヨン＋０．９％ソイトン（ｓｏ
ｙｔｏｎｅ）＋０．９％酵素抽出液＋０．５％塩化ナト
リウム＋０．２５％りん酸二塩基酸ナトリウム（無水）
＋１．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、ｐＨ
６．８。 （ｇ）０．９％栄養ブイヨン＋０．９％ソイトン（ｓｏ
ｙｔｏｎｅ）＋０．９％酵素抽出液＋０．２％グルコー
ス＋０．２５％りん酸二塩基酸ナトリウム（無水）＋１
．５％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、ｐＨ６．
８。 （ｈ）０．９％栄養ブイヨン＋０．９％ソイトン（ｓｏ
ｙｔｏｎｅ）＋０．９％酵素抽出液＋０．２％グルコー
ス＋０．５％塩化ナトリウム＋１．５％（ｗ／ｖ）クロ
トノベタイン−水和物、ｐＨ６．８。 （ｉ）脳−心臓浸出液、ｐＨ６．８フラスコを１７時間
しんとう（２００ｒｐｍ、軌道偏心距離１インチ、３７
℃）し、ついで、細胞を各フラスコから、遠心分離によ
り（１０分、１２０００ｘｇ、４℃）別々に採取し、１
回生理食塩水（５０ｍＬ）にて洗浄する。洗浄した細胞
ペレットを２５ｍＭりん酸カリウム＋１％（ｗ／ｖ）グ
セリン＋１２％（ｗ／ｖ）クロトノベタイン一水和物、
ｐＨ６．０に再懸濁した。生体内変換反応混合物を３３
℃にて９６時間しんとうして行った。この間、一部（１
００μＬ）を取り出し、前記と同様の方法によりＬ−（
−）−カルニチンを酵素学的に測定した。下記の結果を
得た（０−９６時間かかり蒸留して集めた）。 Ｌ−（−）−カルニチン蓄積量（ｍＭ）時間
（ａ） （ｂ） （ｃ） （ｄ）
（ｅ） （ｆ） （ｇ） （ｈ） （
ｉ） ５ ８５ １３０ ８
０ １４０ １６４ ９１ １３０
１０４ １８２４ ２３２ ２４
４ １７３ ２５６ ２５６ ２３２
２１７ ２４４ ７１４８
２７８ ２８５ ２４３ ２７９
２６６ ２７２ ２２２ ２７１ １
１３７２ ３３４ ３２３ ２５５
２９９ ２９９ ３１７ ２５２
２８３ １２５９６ ３３８
３４７ ２６８ ３１５ ３２３ ３
２３ ２５９ ２９７ １２９外来性クロ
トノベタインのＬ−（−）−カルニチンへの代謝性転換
（％）時間 （ａ） （ｂ） （ｃ
） （ｄ） （ｅ） （ｆ） （ｇ）
（ｈ） （ｉ） ５ １１
１７ １１ １９ ２２
１２ １７ １４ ２２４
３１ ３３ ２３ ３
４ ３４ ３１ ２９ ３３
１０４８ ３７ ３８
３３ ３７ ３６ ３７
３０ ３６ １５７２ ４
５ ４３ ３４ ４０ ４０
４３ ３４ ３８ １７９
６ ４５ ４７ ３６
４２ ４３ ４３ ３５
４０ １７ ＊１００％＝７４４．４ｍＭ
【００１９】クロトノベタイン分子内円のＬ−（−）−
カルニチンへの生体内変換をプロテウス・ミラビリス（
Ｐ． ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８０に
より２Ｌ台留発酵容器中で下記のようにして行った。細
菌は脳−心臓浸出液寒天（ディフコ）＋１．５％クロト
ノベタイン分子内塩の斜面に毎日移して培養した。イン
キュベート温度は３７℃であった。２４時間培養斜面の
内容物を脳−心臓浸出液＋１．５％クロトノベタイン分
子内塩の２５０ｍＬを含む１０００ｍＬのじゃま板つき
エルレンマイヤーフラスコ中に接種した。このフラスコ
を継続して６時間しんとうし（１７０ｒｐｍ、軌道偏心
距離２インチ、３７℃）、その後、ブイヨンを、通常の
６個の脳−心臓浸出液＋１．５％クロトノベタイン分子
内塩の２５０ｍＬを含む１０００ｍＬのじゃま板つきエ
ルレンマイヤーフラスコ中第２段階培養に接種した。こ
れらのフラスコは上記と同様に約１５時間しんとうした
。ついで、細胞を遠心分離により（２０分、８５００ｘ
ｇ、４℃）回収し、２５ｍＭりん酸カリウム＋０．５％
（ｗ／ｖ）グリセリン＋１０％（ｗ／ｖ）クロトノベタ
イン分子内塩からなる生体内変換用培地（１Ｌ）中に再
懸濁した。 ２Ｌバイオラヒテ（Ｂｉｏｌａｆｉｒｔｅ）発酵容器に
細胞含有生体内変換培地に入れ、下記の条件で２４時間
操作した：撹拌速度：１５０ｒｐｍ 空気流入量：１ｖ／ｖ／ｍ 初期ｐＨ：６．８ 操作容量：１Ｌ 温度：３５℃ １０％（ｗ／ｖ）グリセリン溶液を連続して５ｍＬ／時
で発酵槽中にポンプを用いてを吹き込んだ。未反応クロ
トノベタインおよびＬ−（−）−カルニチンの濃度を高
速液体クロマトグラフィーで連続観察した。 カラム： １０−μパートジルＳＣＸ，４ｍｍ×２５
０ｍｍ（ポリコンサルト・サイエンチヒカ・ソシエタ・
リスポンサビリタ・リ ミタータ、ローマ、イタリー） カラム温度：３５℃ 注入量：１０μｌ 移動層：７５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４−ＣＨ３ＣＮ（４：
６），ｐＨ調整せず 検知器：屈折率 保持時間（分）：Ｌ−（−）−カルニチン、８．５２ク
ロトノベタイン、９．８１ ガンマ−ブチロベタイン、１２．０８。 ２２時間後、生体内変換培地を集め、濾過した。濾液に
つき前記同様にＬ−（−）−カルニチンを測定し、４８
．０ｍｇ／ｍＬのＬ−（−）−カルニチンおよび５７．
３ｍｇ／ｍＬの未反応クロトノベタインを含むことが判
明した。クロトノベタインのＬ−（−）−カルニチンへ
のモル変換：４３％、Ｌ−（−）−カルニチン収率：１
００％
カルニチンへの生体内変換をプロテウス・ミラビリス（
Ｐ． ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８０に
より２Ｌ台留発酵容器中で下記のようにして行った。細
菌は脳−心臓浸出液寒天（ディフコ）＋１．５％クロト
ノベタイン分子内塩の斜面に毎日移して培養した。イン
キュベート温度は３７℃であった。２４時間培養斜面の
内容物を脳−心臓浸出液＋１．５％クロトノベタイン分
子内塩の２５０ｍＬを含む１０００ｍＬのじゃま板つき
エルレンマイヤーフラスコ中に接種した。このフラスコ
を継続して６時間しんとうし（１７０ｒｐｍ、軌道偏心
距離２インチ、３７℃）、その後、ブイヨンを、通常の
６個の脳−心臓浸出液＋１．５％クロトノベタイン分子
内塩の２５０ｍＬを含む１０００ｍＬのじゃま板つきエ
ルレンマイヤーフラスコ中第２段階培養に接種した。こ
れらのフラスコは上記と同様に約１５時間しんとうした
。ついで、細胞を遠心分離により（２０分、８５００ｘ
ｇ、４℃）回収し、２５ｍＭりん酸カリウム＋０．５％
（ｗ／ｖ）グリセリン＋１０％（ｗ／ｖ）クロトノベタ
イン分子内塩からなる生体内変換用培地（１Ｌ）中に再
懸濁した。 ２Ｌバイオラヒテ（Ｂｉｏｌａｆｉｒｔｅ）発酵容器に
細胞含有生体内変換培地に入れ、下記の条件で２４時間
操作した：撹拌速度：１５０ｒｐｍ 空気流入量：１ｖ／ｖ／ｍ 初期ｐＨ：６．８ 操作容量：１Ｌ 温度：３５℃ １０％（ｗ／ｖ）グリセリン溶液を連続して５ｍＬ／時
で発酵槽中にポンプを用いてを吹き込んだ。未反応クロ
トノベタインおよびＬ−（−）−カルニチンの濃度を高
速液体クロマトグラフィーで連続観察した。 カラム： １０−μパートジルＳＣＸ，４ｍｍ×２５
０ｍｍ（ポリコンサルト・サイエンチヒカ・ソシエタ・
リスポンサビリタ・リ ミタータ、ローマ、イタリー） カラム温度：３５℃ 注入量：１０μｌ 移動層：７５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４−ＣＨ３ＣＮ（４：
６），ｐＨ調整せず 検知器：屈折率 保持時間（分）：Ｌ−（−）−カルニチン、８．５２ク
ロトノベタイン、９．８１ ガンマ−ブチロベタイン、１２．０８。 ２２時間後、生体内変換培地を集め、濾過した。濾液に
つき前記同様にＬ−（−）−カルニチンを測定し、４８
．０ｍｇ／ｍＬのＬ−（−）−カルニチンおよび５７．
３ｍｇ／ｍＬの未反応クロトノベタインを含むことが判
明した。クロトノベタインのＬ−（−）−カルニチンへ
のモル変換：４３％、Ｌ−（−）−カルニチン収率：１
００％
【００２０】生体内変換溶液からのＬ−（−）−カルニ
チンの分離 濾過生体内変換溶液は連続してアンバーライトイオン交
換樹脂、すなわちＩＲＡ−４０２塩基性樹脂（ＯＨ−型
）およびＩＲＣ−５０酸性樹脂（Ｈ＋型）を通して無機
カチオンおよびアニオンを除いた。溶出液を真空下で濃
縮し、濃縮液をイソブタノールで３回処理し、水分含有
率を５−１０％（ｗ／ｗ）に低下させた。 得られた
混合物をイソブタノール３部（ｗ／ｖ）を用いて再結晶
し、Ｌ−（−）−カルニチン４部およびクロトノベタイ
ン１部（ｗ／ｗ）を含む沈澱物を得た［ＨＰＬＣ］。 連続３回再結晶した後、Ｌ−（−）−カルニチンと＜０
．５％（ｗ／ｗ）のクロトノベタインからなる固体が得
られた。この方法により、生体内変換培地中に存在する
Ｌ−（−）−カルニチン約５０％（ｗ／ｗ）を回収した
。［α］２５＝−３１．５°。母液を集め、次の生体内
変換に再利用した。
チンの分離 濾過生体内変換溶液は連続してアンバーライトイオン交
換樹脂、すなわちＩＲＡ−４０２塩基性樹脂（ＯＨ−型
）およびＩＲＣ−５０酸性樹脂（Ｈ＋型）を通して無機
カチオンおよびアニオンを除いた。溶出液を真空下で濃
縮し、濃縮液をイソブタノールで３回処理し、水分含有
率を５−１０％（ｗ／ｗ）に低下させた。 得られた
混合物をイソブタノール３部（ｗ／ｖ）を用いて再結晶
し、Ｌ−（−）−カルニチン４部およびクロトノベタイ
ン１部（ｗ／ｗ）を含む沈澱物を得た［ＨＰＬＣ］。 連続３回再結晶した後、Ｌ−（−）−カルニチンと＜０
．５％（ｗ／ｗ）のクロトノベタインからなる固体が得
られた。この方法により、生体内変換培地中に存在する
Ｌ−（−）−カルニチン約５０％（ｗ／ｗ）を回収した
。［α］２５＝−３１．５°。母液を集め、次の生体内
変換に再利用した。
Claims (17)
- 【請求項１】 プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅ
ｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８０ま
たはその子孫、変異体または派生体（Ｄｅｒｉｖａｔｉ
ｖｅｓ）。 - 【請求項２】 プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅ
ｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８１ま
たはその子孫、変異体または派生体。 - 【請求項３】 プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅ
ｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８２ま
たはその子孫、変異体または派生体。 - 【請求項４】 プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅ
ｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８３ま
たはその子孫、変異体または派生体。 - 【請求項５】 クロトノベタインからＬ−（−）−カ
ルニチンへ変換する祖先の能力を維持するプロテウス・
ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）Ｎ
ＲＲＬＢ−１８４８０またはその子孫、変異体または派
生体。 - 【請求項６】 クロトノベタインからＬ−（−）−カ
ルニチンへ変換する祖先の能力を維持するプロテウス・
ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）Ｎ
ＲＲＬＢ−１８４８１またはその子孫、変異体または派
生体。 - 【請求項７】 クロトノベタインからＬ−（−）−カ
ルニチンへ変換する祖先の能力を維持するプロテウス・
ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）Ｎ
ＲＲＬＢ−１８４８２またはその子孫、変異体または派
生体。 - 【請求項８】 クロトノベタインからＬ−（−）−カ
ルニチンへ変換する祖先の能力を維持するプロテウス・
ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）Ｎ
ＲＲＬＢ−１８４８３またはその子孫、変異体または派
生体。 - 【請求項９】 遊離細胞または固定化細胞のいずれか
でクロトノベタインからＬ−（−）−カルニチンへの変
換する祖先の能力を維持するプロテウス・ミラビリス（
Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１
８４８０、ＮＲＲＬＢ−１８４８１、ＮＲＲＬＢ−１８
４８２またはＮＲＲＬＢ−１８４８３またはその子孫、
変異体または派生体。 - 【請求項１０】 （ａ）クロトノベタインをＬ−（−
）−カルニチンに選択的に水和し得る微生物の固体培地
上表面培養物を製造し； （ｂ）クロトノベタインと工程（ａ）で得られた培養物
を含む液体培地に接種することにより触媒活性バイオマ
スを生産し； （ｃ）液体培地からバイオマスを分離し；（ｄ）分離し
たバイオマスを、少なくとも１０％（ｗ／ｖ）のクロト
ルベタイン分子内塩を含有する生体内変換用培地中に懸
濁し； （ｅ）生体内変換液体培地からＬ−（−）−カルニチン
を採取すること；を含むＬ−（−）−カルニチンの微生
物学的製法であり、上記微生物がプロテウス・ミラビリ
ス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ
−１８４８０、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕ
ｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８１、プ
ロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉ
ｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８２およびプロテウス・ミ
ラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲ
ＲＬＢ−１８４８３からなる群から選択されるものであ
る方法。 - 【請求項１１】 生体内変換用培地が１０−２０％（
ｗ／ｖ）クロトノベタイン分子内塩を含むものである、
請求項１０記載の方法。 - 【請求項１２】 工程（ａ）の固体培地がクロトノベ
タインを含むものである、請求項１０記載の方法。 - 【請求項１３】 分離工程（ｃ）が遠心分離によって
行われるものである、請求項１０記載の方法。 - 【請求項１４】 分離工程（ｃ）が限外濾過によって
行われるものである、請求項１０記載の方法。 - 【請求項１５】 プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔ
ｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８０
、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓｍｉｒａｂ
ｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４８１、プロテウス・ミラ
ビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲ
ＬＢ−１８４８２またはプロテウス・ミラビリス（Ｐｒ
ｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＮＲＲＬＢ−１８４
８３、またはそれらの子孫、変異体、または派生体から
分離されたクロトノベタイン・ヒドラターゼ酵素。 - 【請求項１６】 遊離酵素または固定化酵素のいずれ
かである、請求項１５記載のクロトノベタイン・ヒドラ
ターゼ酵素。 - 【請求項１７】 請求項１５記載のクロトノベタイン
・ヒドラターゼ酵素を含むベクターまたは微生物。
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|---|---|---|---|
| IT47953A90 | 1990-05-14 | ||
| IT47953A IT1240833B (it) | 1990-05-14 | 1990-05-14 | Procedimento biocatalitico per la produzione di l-(-)- carnitina da crotonilbetaina e ceppi di proteeae per l'uso in tale procedimento |
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| JP3167739B2 JP3167739B2 (ja) | 2001-05-21 |
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|---|---|---|---|
| JP10748591A Expired - Fee Related JP3167739B2 (ja) | 1990-05-14 | 1991-05-13 | クロトノベタインからｌ−（−）−カルニチンの製法 |
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| IT1261230B (it) * | 1993-04-08 | 1996-05-09 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Procedimento migliorato per la preparazione di l-(-)-carnitina a partire da suoi precursori aventi opposta configurazione. |
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