JPS59192095A - Ｌ−カルニチンの製造法 - Google Patents
Ｌ−カルニチンの製造法Info
- Publication number
- JPS59192095A JPS59192095A JP58065009A JP6500983A JPS59192095A JP S59192095 A JPS59192095 A JP S59192095A JP 58065009 A JP58065009 A JP 58065009A JP 6500983 A JP6500983 A JP 6500983A JP S59192095 A JPS59192095 A JP S59192095A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carnitine
- crotonbetaine
- bacterial cells
- aqueous medium
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/007—Carnitine; Butyrobetaine; Crotonobetaine
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- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
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- Health & Medical Sciences (AREA)
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- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は１、−力ルニチンの製造ｔ１モに関する。
１、− ノノルニチンは通常生体内に存在し、子供の成
長を促進することか知られている。
長を促進することか知られている。
Ｉ、−力ルニチ／を直接製造する方法としては、７ ラ
：／ ７． 特ｉｔ 出Ｄｊ ｉ ７７２２１８３号と
、日本ＩＴ１特開昭５７−３０７３１ 吃か知られてい
る。
：／ ７． 特ｉｔ 出Ｄｊ ｉ ７７２２１８３号と
、日本ＩＴ１特開昭５７−３０７３１ 吃か知られてい
る。
フラノス特許出願７７２２１８３号の方法は、ＮＡ ｌ
）を使用し、またＮＡＤかバクテリアの細胞壁を通過て
きるような処理を必要とするために＝１スト高になる。
）を使用し、またＮＡＤかバクテリアの細胞壁を通過て
きるような処理を必要とするために＝１スト高になる。
また日本国特開昭５７−３９７３１号の方法は反応に、
基質であるβ−ブチロベタイノの他に２−オキソグルタ
ミン酸、還元剤、第一・鉄イオノカタラーゼ等を必要と
し、反応系が複雑になり、その結果り一カルニチンの精
製工程も複雑となり、コスト高となる。
基質であるβ−ブチロベタイノの他に２−オキソグルタ
ミン酸、還元剤、第一・鉄イオノカタラーゼ等を必要と
し、反応系が複雑になり、その結果り一カルニチンの精
製工程も複雑となり、コスト高となる。
本発明者らは、この様な従来の１７−カルニチンの製造
法に対し、より効率の良い方法を見い出すべく研究した
結果、従来の技術的および経済的な問題点を一挙に解決
する全く新規な方法を見い出すに至った。即ち、この発
明は、クロト／ベタインをＬ−カルニチンに変換せしめ
る能力をイｊする微生物の作用により、水性媒体中にて
りｌ：Ｊ ドアベタインをＬ−カルニチンに変換せしめ
ることを特徴とするＬ−カルニチンの製造法である。
法に対し、より効率の良い方法を見い出すべく研究した
結果、従来の技術的および経済的な問題点を一挙に解決
する全く新規な方法を見い出すに至った。即ち、この発
明は、クロト／ベタインをＬ−カルニチンに変換せしめ
る能力をイｊする微生物の作用により、水性媒体中にて
りｌ：Ｊ ドアベタインをＬ−カルニチンに変換せしめ
ることを特徴とするＬ−カルニチンの製造法である。
クロトンベタインをＬ−カルニチンに変換せしめる能力
を存する微生物の作用により、水性媒体中ニてクロトン
ベタインをり、−カルニチンに変換せしめる方法は、水
溶性媒体中にて、りｒ＋ ｌンベタインと上記微生物の
菌体、培篠液あるいは菌体処理物とを接触せしめれば良
０゜ 本発明において用いるクロトンベタインをＬ−ｈルニチ
／に変換せしめる能力を有する微生物としては、例えば アルカリゲネス マーシャーリボ ＡＴＣＣ２１
０３０アシネトバククー ルオーフイ ＡＴＣ
Ｃ９０３６アグ０／＜タデリウム ンメフ７シエンス
ＡＴＣＣ４４５２アースロバクター パラフイネウス
ＡＴＣＣ１５５９０アクロモバクタ−ビスコサス
ＡＴＣＣ１２４４８アツトハクター りＩｊ１
１アコクム ＡＴＣＣ９０４３エアロモナス バ
ンクタータ ＡＴＣＣ１１１Ｅｌｉ３バチル
ス ラデロスボラス ＡＴＣＣ６４ブレビ
バクプリウム リネンス ＡＴＣＣ８３７７フ
リネバクデリウム キセｌノシス ＡＴＣＣ３７
３シトロバクタ−インターメゾウス ＩＦＯ１
３５３９セル口モリ−ス フラビゲナ Ａ
ＴＣＣ１５７２４エルビニア カロトボーラ
ＩＦｏ ３３０８エノテロバタター アグロ
メランス ＡＴＣＣ１２２８７エシユリヒア コリ
ＡＴＣＣ１０７９８フラボバクゾ
リウム フェルギニウム ＡＴＣ−Ｃ１３５２４ハフ
ニア アルベイ ＡＴＣＣ０７６０
クルデア シフイー ＡＴＣＣＧ
９００タレブシエア ニューモニアエ ＡＴＣ
Ｃ００２１タルイヘラ シトロフィラ ＾
Ｊ−２０２８（ＦＥＲＭ−Ｐ３１４９）ミコプラナ ブ
ラータ ＡＴＣＣ４２７８ミクロコ
ツカス パリアンス ＡＴＣＣ３り丁）ミク
ロバクテリウム アンモニアフィルム ＡＴＣＣ１５３
５４モラキセラ ノンリクエフ７シェノス 八Ｊ−１
１２２１（ＦＥＲＭ−１’４３４８）ンユートモナス
りロロラフィス ＡＴＣＣ！１４４Ｅｉプロテウ
ス ミラビリス ＡＴＣＣ１５２≦）０
ザルモネラ ガリナルム ＡＴＣＣ０１
８，！１セラチア リクエフ７シェンス ＡＴ
ＣＣ１４／１（ｉ０スタフィロフッカス アウレウス
Ｉ Ｆ Ｏ３０Ｅｉ Ｏビブリ」 メヂュニコ
ビ ＡＴＣＣ７７０８キサントモナス
コンペストリス ＡＴＣＣ８７２１ズグレアラミ
ゲｔ ＡＴＣＣＩＣ）５４４プ【
フタミノバクター アルボフラブム ＩＦｏ
３７０７ヂオバチルス ペロメクボリス ＡＴ
ＣＣ２３３７０ストレプトミセス オリバセウス
Ｉ Ｐ ０ ３２ Ｇ Ｏ／力ルディア コラリ
ーナ Ｉ Ｆ ０ ３３３８キヤンデ
イダ リボリティカ ＩＦＯ０７４６ク
リプトコツカス ネオフォルマンス ＩＦＯ０６０
８デバリ」ミセス ハンセニイ ＩＦＯ０
０８０ジオトリクム キャンディダム Ｉ
Ｉ”０ ４６０２ハンセヌラ アノマラ
ＩＩ”０ ０１２２ハンセニアスボラ バル
ビエンシス ＩＦｏ ０６８３クルイヘロミ
セス フラジリス ＩＦＯ０５４１リポミセ
ス リボフェルス ＩＦｏ ０８
７３リードンニア エリ／ガータ Ｉ
ＦＯ１００７クロエツケラ ジャポニカ
ＩＦＯ０１５１ピヒア メンブレンファシェンス
ＩＦｏ ０４６０パキンレン タンノフィ
ルス ＩＩ”０ １００７０ドトルラ
ピリマネ ＩＦｏ ０３９５０
グロヌイセス エロ／ギスボラス ＩＦＯＩＥ３
７Ｂザッカ口ミセス セレビシェ ＩＦＯ
２００３トリグノブシス パリアビリス Ｉ
ＦＯ０７５５トレメラ フォリアセ
ＩＦＯ１４１５７トルロプシス フッマーク
ＡＴＣＣ１２７９０等かある。
を存する微生物の作用により、水性媒体中ニてクロトン
ベタインをり、−カルニチンに変換せしめる方法は、水
溶性媒体中にて、りｒ＋ ｌンベタインと上記微生物の
菌体、培篠液あるいは菌体処理物とを接触せしめれば良
０゜ 本発明において用いるクロトンベタインをＬ−ｈルニチ
／に変換せしめる能力を有する微生物としては、例えば アルカリゲネス マーシャーリボ ＡＴＣＣ２１
０３０アシネトバククー ルオーフイ ＡＴＣ
Ｃ９０３６アグ０／＜タデリウム ンメフ７シエンス
ＡＴＣＣ４４５２アースロバクター パラフイネウス
ＡＴＣＣ１５５９０アクロモバクタ−ビスコサス
ＡＴＣＣ１２４４８アツトハクター りＩｊ１
１アコクム ＡＴＣＣ９０４３エアロモナス バ
ンクタータ ＡＴＣＣ１１１Ｅｌｉ３バチル
ス ラデロスボラス ＡＴＣＣ６４ブレビ
バクプリウム リネンス ＡＴＣＣ８３７７フ
リネバクデリウム キセｌノシス ＡＴＣＣ３７
３シトロバクタ−インターメゾウス ＩＦＯ１
３５３９セル口モリ−ス フラビゲナ Ａ
ＴＣＣ１５７２４エルビニア カロトボーラ
ＩＦｏ ３３０８エノテロバタター アグロ
メランス ＡＴＣＣ１２２８７エシユリヒア コリ
ＡＴＣＣ１０７９８フラボバクゾ
リウム フェルギニウム ＡＴＣ−Ｃ１３５２４ハフ
ニア アルベイ ＡＴＣＣ０７６０
クルデア シフイー ＡＴＣＣＧ
９００タレブシエア ニューモニアエ ＡＴＣ
Ｃ００２１タルイヘラ シトロフィラ ＾
Ｊ−２０２８（ＦＥＲＭ−Ｐ３１４９）ミコプラナ ブ
ラータ ＡＴＣＣ４２７８ミクロコ
ツカス パリアンス ＡＴＣＣ３り丁）ミク
ロバクテリウム アンモニアフィルム ＡＴＣＣ１５３
５４モラキセラ ノンリクエフ７シェノス 八Ｊ−１
１２２１（ＦＥＲＭ−１’４３４８）ンユートモナス
りロロラフィス ＡＴＣＣ！１４４Ｅｉプロテウ
ス ミラビリス ＡＴＣＣ１５２≦）０
ザルモネラ ガリナルム ＡＴＣＣ０１
８，！１セラチア リクエフ７シェンス ＡＴ
ＣＣ１４／１（ｉ０スタフィロフッカス アウレウス
Ｉ Ｆ Ｏ３０Ｅｉ Ｏビブリ」 メヂュニコ
ビ ＡＴＣＣ７７０８キサントモナス
コンペストリス ＡＴＣＣ８７２１ズグレアラミ
ゲｔ ＡＴＣＣＩＣ）５４４プ【
フタミノバクター アルボフラブム ＩＦｏ
３７０７ヂオバチルス ペロメクボリス ＡＴ
ＣＣ２３３７０ストレプトミセス オリバセウス
Ｉ Ｐ ０ ３２ Ｇ Ｏ／力ルディア コラリ
ーナ Ｉ Ｆ ０ ３３３８キヤンデ
イダ リボリティカ ＩＦＯ０７４６ク
リプトコツカス ネオフォルマンス ＩＦＯ０６０
８デバリ」ミセス ハンセニイ ＩＦＯ０
０８０ジオトリクム キャンディダム Ｉ
Ｉ”０ ４６０２ハンセヌラ アノマラ
ＩＩ”０ ０１２２ハンセニアスボラ バル
ビエンシス ＩＦｏ ０６８３クルイヘロミ
セス フラジリス ＩＦＯ０５４１リポミセ
ス リボフェルス ＩＦｏ ０８
７３リードンニア エリ／ガータ Ｉ
ＦＯ１００７クロエツケラ ジャポニカ
ＩＦＯ０１５１ピヒア メンブレンファシェンス
ＩＦｏ ０４６０パキンレン タンノフィ
ルス ＩＩ”０ １００７０ドトルラ
ピリマネ ＩＦｏ ０３９５０
グロヌイセス エロ／ギスボラス ＩＦＯＩＥ３
７Ｂザッカ口ミセス セレビシェ ＩＦＯ
２００３トリグノブシス パリアビリス Ｉ
ＦＯ０７５５トレメラ フォリアセ
ＩＦＯ１４１５７トルロプシス フッマーク
ＡＴＣＣ１２７９０等かある。
これらの微生物の菌体を得るには、通常の培地を用いて
、培養の初めから、あるいは培養の途中でクロトンベタ
インを添加して培養すればよい。
、培養の初めから、あるいは培養の途中でクロトンベタ
インを添加して培養すればよい。
本微生物の培養のために用いられる培地はり「１トンベ
タインを含むほかは通常の炭素源、窒素源、無機イオン
を含有する通常の培地である。
タインを含むほかは通常の炭素源、窒素源、無機イオン
を含有する通常の培地である。
更にビタミン、アミノ酸等の有機機ｈｋ栄養素を添加す
ると望ましい結果が得られる場合か多い。
ると望ましい結果が得られる場合か多い。
炭素源としては、グルコース、シュツ【」−ス等の炭水
化物、酢酸等の存機酸、アルコール類、その他が適宜使
用される。窒素源としては、）′ンモニアガス、アンモ
ニア水、アンモニウム塩、その他が用いられる。無機イ
オンとしては、マグネシウムイオン、燐酸イオン、カリ
イオン、鉄イＡン、その他が必要に応じ適宜使用される
。
化物、酢酸等の存機酸、アルコール類、その他が適宜使
用される。窒素源としては、）′ンモニアガス、アンモ
ニア水、アンモニウム塩、その他が用いられる。無機イ
オンとしては、マグネシウムイオン、燐酸イオン、カリ
イオン、鉄イＡン、その他が必要に応じ適宜使用される
。
培養は好気的条件下に、 Ｉ）Ｈ４ないし８、温度２５
ないみ４０°Ｃの適当な範囲に制御しつつｌないし１０
日培養を行えば望ましい結果が得られる。
ないみ４０°Ｃの適当な範囲に制御しつつｌないし１０
日培養を行えば望ましい結果が得られる。
菌体としては、培養終了後の培養液そのまま、培養液よ
り分離された菌体、洗浄された菌体など、いずれも使用
可能である。菌体処理物としては凍結乾燥菌体、アセト
ン乾燥菌体、トルエン、界面活性剤等と接触せしめた菌
体、リゾチー１５て処理した菌体、超音波にさらした菌
体、機械的に摩砕した菌体等のほか、これら菌体処理物
から得られた、り「ＪトンベタインをＬ−カルニチンに
変換せしめる酵素活性を有する酵素蛋白区分、更には、
これらの菌体の固定化物、菌体処理物の不溶化物、その
他いずれも使用できる。
り分離された菌体、洗浄された菌体など、いずれも使用
可能である。菌体処理物としては凍結乾燥菌体、アセト
ン乾燥菌体、トルエン、界面活性剤等と接触せしめた菌
体、リゾチー１５て処理した菌体、超音波にさらした菌
体、機械的に摩砕した菌体等のほか、これら菌体処理物
から得られた、り「ＪトンベタインをＬ−カルニチンに
変換せしめる酵素活性を有する酵素蛋白区分、更には、
これらの菌体の固定化物、菌体処理物の不溶化物、その
他いずれも使用できる。
水溶性媒体としては、水、バッファーおよび土タノール
等のイ１機溶媒を含むものが使用できる。更に必要に応
じて、微生物の生育に必要な栄養素、抗酸化剤、界面活
性剤、補酵素、ヒドロキシルアミンおよび金属イオン等
を水性媒体に添加することもできる。
等のイ１機溶媒を含むものが使用できる。更に必要に応
じて、微生物の生育に必要な栄養素、抗酸化剤、界面活
性剤、補酵素、ヒドロキシルアミンおよび金属イオン等
を水性媒体に添加することもできる。
」二記微生物の菌体を水溶性媒体中で培養しながら、菌
体とりｃｙ）ンベタインを接触せしめて作用せしめる場
合には、クロトンベタインを含み、かつ微小物の生育に
必要な炭素源、窒素源、無機イ オ ンなどの栄養素を
含む水性媒体が用いられる。更にビタミン、ア ミ ノ
酸等のイ１″機微量栄養素を添加すると望ましい結果
か得られる場合が多い。
体とりｃｙ）ンベタインを接触せしめて作用せしめる場
合には、クロトンベタインを含み、かつ微小物の生育に
必要な炭素源、窒素源、無機イ オ ンなどの栄養素を
含む水性媒体が用いられる。更にビタミン、ア ミ ノ
酸等のイ１″機微量栄養素を添加すると望ましい結果
か得られる場合が多い。
炭素源としては、グルコース、シュツ「１〜ス等の炭水
化物、酢酸等の有機酸、アルニＪ−ル類、その他か適宜
使用される。窒素源としては、アノモニアガス、アンモ
ニア水、アンモニウムｌｋ 、その他が用いられる。無
機イオンとしては、マグネンウムイオン、燐酸イオン、
カリイオン、鉄イオノ、その他が必要に応じ適宜使用さ
れる。
化物、酢酸等の有機酸、アルニＪ−ル類、その他か適宜
使用される。窒素源としては、アノモニアガス、アンモ
ニア水、アンモニウムｌｋ 、その他が用いられる。無
機イオンとしては、マグネンウムイオン、燐酸イオン、
カリイオン、鉄イオノ、その他が必要に応じ適宜使用さ
れる。
培養は好気的条件下に、ｐｉ−１４ないし８、高度２５
ないし４０“Ｃの適当な範囲に制御しつつ行えば望まし
い結果か得られる。
ないし４０“Ｃの適当な範囲に制御しつつ行えば望まし
い結果か得られる。
かくしてＩないし１０日間も培養を行えば、りｕトンベ
タインはＬ−力ルニチンのみに効率よく変換される。
タインはＬ−力ルニチンのみに効率よく変換される。
これに対し、上記微生物の培６ ｉ＆をそのまま、培養
菌体あるいは菌体処理物をりＬｌ ）ンベクィ／と接触
せしめて作用せしめる場合には、クロベタインと培養ｄ
ｋ１培養菌体あるいは菌体処理物を溶解またはけん濁し
た水性媒体を１０’Ｃないし７゜Ｃの適当な高度に調節
し、ｐＩ］を４ないし８に保ちつつ、暫時静置または撹
拌すればよい。かくして５ないし１００時間も経過すれ
ば水性媒体中に多量の１．−力ルニヂンが生成Ｍ ４７
（される。
菌体あるいは菌体処理物をりＬｌ ）ンベクィ／と接触
せしめて作用せしめる場合には、クロベタインと培養ｄ
ｋ１培養菌体あるいは菌体処理物を溶解またはけん濁し
た水性媒体を１０’Ｃないし７゜Ｃの適当な高度に調節
し、ｐＩ］を４ないし８に保ちつつ、暫時静置または撹
拌すればよい。かくして５ないし１００時間も経過すれ
ば水性媒体中に多量の１．−力ルニヂンが生成Ｍ ４７
（される。
このようにして得られた１、−カルニチンを培養液又は
水溶液より採取する方法は、本発明の方法によれば、Ｄ
−カルニチンが副生じないので、イオン交換樹脂を用い
る方法、等電点にて沈ｌうせしめる方法等、通常の方法
が採用される。
水溶液より採取する方法は、本発明の方法によれば、Ｄ
−カルニチンが副生じないので、イオン交換樹脂を用い
る方法、等電点にて沈ｌうせしめる方法等、通常の方法
が採用される。
生成した１、−力ルニチンの定量は、デビット自シェイ
・ピアスン（Ｄａｖｉｄ Ｊ、Ｐｏａｒｓｏｎ）らの方
法で分析した（ Ｍｏｔｈｏｄ ｏｆ Ｅｎｚｙ＋＋ａ
ｔｉｃ 八ｎａｌｙｓｉｓ”）、第４巻（第２版）、１
９７４年、１７５８頁、＾ｃａｄｃｗｉｃ ＰｒＣｓ５
Ｉｎｃ、参照）。
・ピアスン（Ｄａｖｉｄ Ｊ、Ｐｏａｒｓｏｎ）らの方
法で分析した（ Ｍｏｔｈｏｄ ｏｆ Ｅｎｚｙ＋＋ａ
ｔｉｃ 八ｎａｌｙｓｉｓ”）、第４巻（第２版）、１
９７４年、１７５８頁、＾ｃａｄｃｗｉｃ ＰｒＣｓ５
Ｉｎｃ、参照）。
以下実施例にて説明する。
実施例１
グリセロール２ｇ／ｃ１１、硫酸アンモニウム０．３ｇ
／ｄ Ｊ、Ｋ）Ｉｙ ＰＯイ ０．Ｉ ｋ：、／’ｄ
ｌ、Ｋ ９ＨＰ Ｏｈ ０ 、 ３ ｇ ／ ｄ ｌ
、 Ｍ ＨＳ Ｏ４’７１１２０ ０．０５ｇ／ｄｉ
、 Ｆｃ５Ｏ＋ ・７Ｈ２０１ｍｇ／ｄ １１ Ｍ
ｎ５Ｏ，” ４１１２０１ ｍｇ／ ｄ ｌ 、酵母エ
キス１ ｇ／ａ １１ペプトン１ｇ／ｄ １、フル）エ
キスＱ、５ ｇ／ｄ ］、り■Ｊ）ンベタイン硫酸塩０
．３ｇ／ｄｌ、炭酸カルンウム４．０ｇ／ｄ’ｌ （
別殺菌） （ＰＩＩ７．０）を５００ｍ１容７ ラフ
、 ：ｆｆ ニ５０ ｍ Ｉ入れ１２０″ｃて１５分間
殺菌した。
／ｄ Ｊ、Ｋ）Ｉｙ ＰＯイ ０．Ｉ ｋ：、／’ｄ
ｌ、Ｋ ９ＨＰ Ｏｈ ０ 、 ３ ｇ ／ ｄ ｌ
、 Ｍ ＨＳ Ｏ４’７１１２０ ０．０５ｇ／ｄｉ
、 Ｆｃ５Ｏ＋ ・７Ｈ２０１ｍｇ／ｄ １１ Ｍ
ｎ５Ｏ，” ４１１２０１ ｍｇ／ ｄ ｌ 、酵母エ
キス１ ｇ／ａ １１ペプトン１ｇ／ｄ １、フル）エ
キスＱ、５ ｇ／ｄ ］、り■Ｊ）ンベタイン硫酸塩０
．３ｇ／ｄｌ、炭酸カルンウム４．０ｇ／ｄ’ｌ （
別殺菌） （ＰＩＩ７．０）を５００ｍ１容７ ラフ
、 ：ｆｆ ニ５０ ｍ Ｉ入れ１２０″ｃて１５分間
殺菌した。
これにブイヨン寒天培地で３ｏ′ｃにて３０時間培養し
たアシネトバクタールオーフィ ＡＴＣＣ９０：ｌ（ｉ
あるいはプロテウス ミラビリスΔＴＣＣ＋５２９０ヲ
−白金耳接種し、３０”Ｃで１６時間振？ｌｆ ’＋Ｙ
養した。
たアシネトバクタールオーフィ ＡＴＣＣ９０：ｌ（ｉ
あるいはプロテウス ミラビリスΔＴＣＣ＋５２９０ヲ
−白金耳接種し、３０”Ｃで１６時間振？ｌｆ ’＋Ｙ
養した。
この培養液より菌体を遠心分離により採取し、培養液と
同量の生理食塩水で一１ｆ１Ｊ洗序し、菌体を集めた。
同量の生理食塩水で一１ｆ１Ｊ洗序し、菌体を集めた。
この菌体をクロベタイン塩酸塩１ ５１；／ｄｌを含ム
０． １ Ｍ ！Ｊ ７ｆｆｔｒＪ）衝ｒ＆ （１）Ｉ
Ｉ Ｆ３． ０）（終末１．００ｍ１）になる様に添加
し、３０°Ｃに１６時間保持反応した。
０． １ Ｍ ！Ｊ ７ｆｆｔｒＪ）衝ｒ＆ （１）Ｉ
Ｉ Ｆ３． ０）（終末１．００ｍ１）になる様に添加
し、３０°Ｃに１６時間保持反応した。
反応液中に生成するカルニチンは、前記の６？ ｍ的分
析法でｆｌｌｌ＋定した。この結果、アシネバクタール
オーフィ ＡＴＣＣ９０３６を用いた場合には、０．５
８ｇ／ｄｉ、プロテウス ミラビリス ＡＴＣＣ１５’
２９０ の場合には０．５３ｇ／ｃ３１のＬ−カルニ
チンか生成していた。これらの反応液より菌体を遠心分
離により除去した上ｍ−を分子量５０００の股を用いた
限外濾過を行い、この濾過液をＤＯＷＯＸ ５０ Ｘ
１２を用いたカラムクロマトグラフィーを行った。この
分画物のカルニチン画分より、ノＪルニチン塩酸塩とし
て、カルニチンを採取した。これらの比旋光度を測定し
た結果、Ｌ体である事か確かめられた。
析法でｆｌｌｌ＋定した。この結果、アシネバクタール
オーフィ ＡＴＣＣ９０３６を用いた場合には、０．５
８ｇ／ｄｉ、プロテウス ミラビリス ＡＴＣＣ１５’
２９０ の場合には０．５３ｇ／ｃ３１のＬ−カルニ
チンか生成していた。これらの反応液より菌体を遠心分
離により除去した上ｍ−を分子量５０００の股を用いた
限外濾過を行い、この濾過液をＤＯＷＯＸ ５０ Ｘ
１２を用いたカラムクロマトグラフィーを行った。この
分画物のカルニチン画分より、ノＪルニチン塩酸塩とし
て、カルニチンを採取した。これらの比旋光度を測定し
た結果、Ｌ体である事か確かめられた。
実施例２
表−１に示した微生物を用いる事以外は実施例１と全く
同じ方法でＬ−カルニチンを生成させた。この時のし一
カルニヂンの生成量を表−１に示した。
同じ方法でＬ−カルニチンを生成させた。この時のし一
カルニヂンの生成量を表−１に示した。
表 −１
実施例３
実施例１に示した培地からクロトンベタインを除いた培
地にブイヨン寒天培地で３０℃にて３０時間培養したア
シネトバクタ−ルオーフィＡＴＣＣ９０３６を一白金耳
接種し、３０°Ｃで１２時間振盪培培養たのち、１５ｇ
／ｄｌのクロト／ベタイン硫酸塩（Ｋ ＯＩ−１でｐ１
４６．０になる様Ｊｌｌ＋和）溶液を５ｍｌ加えて更に
１０時間培養した。この培養液中のＬ−カルニチンを実
施例１と同様にして測定したところ０．４３ｇ／ｄｉの
Ｌ−カルニチンが生成していた。
地にブイヨン寒天培地で３０℃にて３０時間培養したア
シネトバクタ−ルオーフィＡＴＣＣ９０３６を一白金耳
接種し、３０°Ｃで１２時間振盪培培養たのち、１５ｇ
／ｄｌのクロト／ベタイン硫酸塩（Ｋ ＯＩ−１でｐ１
４６．０になる様Ｊｌｌ＋和）溶液を５ｍｌ加えて更に
１０時間培養した。この培養液中のＬ−カルニチンを実
施例１と同様にして測定したところ０．４３ｇ／ｄｉの
Ｌ−カルニチンが生成していた。
実施例４
実施例１と同様に培養したアシネトバクタールオーフィ
ＡＴＣＣ９０３６を実施例１と同様の方法て洗浄分離
し菌体を集めた。この菌体を生理食塩水に２０．ｇ／ｄ
ｉになる様に懸濁した菌液５ｍｌに４％アルギ／酸ナナ
トリウム溶液５ｌを加え混合した後、１５４／ｄｉ塩化
カルシウム溶液にこの混合液を徐々に滴下し、ビ ーズ状の固定化菌体を作成した。
ＡＴＣＣ９０３６を実施例１と同様の方法て洗浄分離
し菌体を集めた。この菌体を生理食塩水に２０．ｇ／ｄ
ｉになる様に懸濁した菌液５ｍｌに４％アルギ／酸ナナ
トリウム溶液５ｌを加え混合した後、１５４／ｄｉ塩化
カルシウム溶液にこの混合液を徐々に滴下し、ビ ーズ状の固定化菌体を作成した。
この固定化物全量をクロトンベタイン硫酸塩１５ｇ／ｄ
ｌを含むＯ，１Ｍリン酸緩衝液（ｒｌ ＩＩＧ、Ｏ）２
０ｍｌに投入し、３０°Ｃに５時間保持反応させた。こ
の結果反応液中にはｏ、ｓ４＋ｒ／ｄｌのＬ−カルニチ
ンが生成していた。
ｌを含むＯ，１Ｍリン酸緩衝液（ｒｌ ＩＩＧ、Ｏ）２
０ｍｌに投入し、３０°Ｃに５時間保持反応させた。こ
の結果反応液中にはｏ、ｓ４＋ｒ／ｄｌのＬ−カルニチ
ンが生成していた。
実施例５
アシネトバクタ−ルオーフィ 八ＴＣＣ９０３（ｉを月
１い、反応液に表−２に示した金属イ１）を添加する以
外は実施例１と全く同様に行った。その１．＋１．Ｊを
表−２に示す。
１い、反応液に表−２に示した金属イ１）を添加する以
外は実施例１と全く同様に行った。その１．＋１．Ｊを
表−２に示す。
表 −２
手続補正ｐ）
昭和！１ＪＢＩ ５１１１３１１
９７許庁艮自 ン’Ｔ （ユ 和 夫 殿１、事イ′
１の表示 昭和５３８年！１６’Ｖｆ駈１第 ６５００９
シ；？１発明の名利１ １−ツノルーチンの製造法 ３、偏走をづる石 ’ｌｌ’ｌどの関係 特泊出願人 （１−ｊすｉ 東京都中史１拘：ミ）、（シ ｌ”
ＩＩ ！＋２１ｉ ｉｆシ；６、補正の対重： 明
細ｉりの発明の詳細な説明の欄７、補ｉＥの内容 （１）明細書第２頁、２行目「β−ブチロベタイン１を
［β−ブチ［１ベタインＪに古］正しま１．。
１の表示 昭和５３８年！１６’Ｖｆ駈１第 ６５００９
シ；？１発明の名利１ １−ツノルーチンの製造法 ３、偏走をづる石 ’ｌｌ’ｌどの関係 特泊出願人 （１−ｊすｉ 東京都中史１拘：ミ）、（シ ｌ”
ＩＩ ！＋２１ｉ ｉｆシ；６、補正の対重： 明
細ｉりの発明の詳細な説明の欄７、補ｉＥの内容 （１）明細書第２頁、２行目「β−ブチロベタイン１を
［β−ブチ［１ベタインＪに古］正しま１．。
（２）ＩＩＩ話Ｉｎ’ｉＪ＃第２Ｌ′（，３行・〜４行
目「第一鉄イオン、カタラーげ」を「り）−υ、イΔン
、カタラーぎＪに訂正しまり′。
目「第一鉄イオン、カタラーげ」を「り）−υ、イΔン
、カタラーぎＪに訂正しまり′。
〈３）明細１．１（り′；６貞、１行へ・２イ仕１［通
常のＪ８地を用いて、１を「通常の培地が用いられるが
、ＪにＭ丁正しまり。
常のＪ８地を用いて、１を「通常の培地が用いられるが
、ＪにＭ丁正しまり。
＜ ｌ＞明細、１：第ｆｉ’ｊ；”、ｉ、３行［１［添
加して培養づればよい。」を「添加し’ｊ：’ Ｊ２）
ｆｋりるど活性のよい菌体がｉｑられる事かある。」と
泪正しＪ、す。
加して培養づればよい。」を「添加し’ｊ：’ Ｊ２）
ｆｋりるど活性のよい菌体がｉｑられる事かある。」と
泪正しＪ、す。
（５）明１１１１Ｎ！誉１＞ ９真、１７ｆｉｌＴｌｆ
’△ｃａｄａｗ’＋ｃ ｐｒＣｓｓ Ｊｎｃ、
ｌを［△ｃａ＋ｌ０ｍ１ｃ ｌ’ｒｃｓｓ Ｉｎｃ
、 」と訂正しまり１゜（０）明細円筒４２．ｊ’、ｉ
、人 １中の−１からＣ１１目［ノノゾ１ヘハタターク
［１１巧仁Ｊクウ１を「アゾ［へバクター り［ＩＩ］
アコクム」ど訂ｉ、Ｉ： Ｌまり１゜ （７）明１１１Ｊ１１書第１３頁、ｔｉ＋ｐ４’Ｑ中の
十から７行［１［スタフィロ］ツ力スアウスクスｊを［
スタフィロコッカス アウレウス］と訂正しまり。
’△ｃａｄａｗ’＋ｃ ｐｒＣｓｓ Ｊｎｃ、
ｌを［△ｃａ＋ｌ０ｍ１ｃ ｌ’ｒｃｓｓ Ｉｎｃ
、 」と訂正しまり１゜（０）明細円筒４２．ｊ’、ｉ
、人 １中の−１からＣ１１目［ノノゾ１ヘハタターク
［１１巧仁Ｊクウ１を「アゾ［へバクター り［ＩＩ］
アコクム」ど訂ｉ、Ｉ： Ｌまり１゜ （７）明１１１Ｊ１１書第１３頁、ｔｉ＋ｐ４’Ｑ中の
十から７行［１［スタフィロ］ツ力スアウスクスｊを［
スタフィロコッカス アウレウス］と訂正しまり。
（８）明゛ａ鼎第１３頁、同表中の１２行目「アΔバチ
ルス ペロメタポリス」を「ヂΔバチルス ペロメタポ
リス」と訂正しまづ。
ルス ペロメタポリス」を「ヂΔバチルス ペロメタポ
リス」と訂正しまづ。
（９）明細円節１３貞、Ｉｉ１表中の１８行目「ジΔト
リクム ギｔ・ンアーｒタム」を「ジノ［トリクム ヤ
ヤンディタム」と訂正しまり”。
リクム ギｔ・ンアーｒタム」を「ジノ［トリクム ヤ
ヤンディタム」と訂正しまり”。
（１０） Ｉ！１．１ａｌｌＲＩ’ｌ’＋７４頁、ＩＩ
′ｉ１表中の土からＢ’ｊ Ｉ−］の「］１−リグ５メ
ゾシスパリアビリスを［［−リグノ−ｆシス ハ’Ｉ＞
Ｊニリ、＜１と５１ ｉ’ｌ” ｌ。
′ｉ１表中の土からＢ’ｊ Ｉ−］の「］１−リグ５メ
ゾシスパリアビリスを［［−リグノ−ｆシス ハ’Ｉ＞
Ｊニリ、＜１と５１ ｉ’ｌ” ｌ。
より。
（１１）明？ＩＩＬ’！ｊ第１４０、同表中１・から２
ｉ−ｉ ｌ−１ｒ ｌ−Ｌノノノ ノＡ ’、１ ／・
ｌ・する１１−レメシ ノイリアし・ｊと、Ｊｉｌシ、
ｉ、す、。
ｉ−ｉ ｌ−１ｒ ｌ−Ｌノノノ ノＡ ’、１ ／・
ｌ・する１１−レメシ ノイリアし・ｊと、Ｊｉｌシ、
ｉ、す、。
（＋２）明細Ｌａｌ；１４Ｋｔ、ｌｉ’ｉル表中ＥａＵ
ｊ（１） ｌ Ａ ｌ に（： １２７０４ も「Δ
王ＣＣ１２７９０，１と８１）ｌし、）、す３、Ｘ
ｈ
ｊ（１） ｌ Ａ ｌ に（： １２７０４ も「Δ
王ＣＣ１２７９０，１と８１）ｌし、）、す３、Ｘ
ｈ
Claims (1)
- り１ノトンベタインをＬ−カルニチンに変換せしめる能
力をイｌする微生物の作用により水性媒体中にてり１１
）ンベタイ／をＬ−力ルニチンに変換せしめることを特
徴とするＩ、−カルニチンの！０造法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58065009A JPS59192095A (ja) | 1983-04-13 | 1983-04-13 | Ｌ−カルニチンの製造法 |
| ES531557A ES531557A0 (es) | 1983-04-13 | 1984-04-12 | Un metodo de producir l-carnitina |
| US06/599,923 US4650759A (en) | 1983-04-13 | 1984-04-13 | Method of producing L-carnitine |
| EP84302539A EP0122794B1 (en) | 1983-04-13 | 1984-04-13 | Method for producing l-carnitine |
| DE8484302539T DE3479040D1 (en) | 1983-04-13 | 1984-04-13 | Method for producing l-carnitine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58065009A JPS59192095A (ja) | 1983-04-13 | 1983-04-13 | Ｌ−カルニチンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59192095A true JPS59192095A (ja) | 1984-10-31 |
| JPH0559709B2 JPH0559709B2 (ja) | 1993-08-31 |
Family
ID=13274553
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58065009A Granted JPS59192095A (ja) | 1983-04-13 | 1983-04-13 | Ｌ−カルニチンの製造法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4650759A (ja) |
| EP (1) | EP0122794B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59192095A (ja) |
| DE (1) | DE3479040D1 (ja) |
| ES (1) | ES531557A0 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60137295A (ja) * | 1983-11-03 | 1985-07-20 | シグマ−タウ・インダストリエ・フアルマシウテイシエ・リウニテ・ソシエタ・ペル・アチオ−ニ | Ｌ−カルニチンおよびその誘導体の製造法 |
| JPS60224488A (ja) * | 1984-03-29 | 1985-11-08 | ロンザ リミテツド | 微生物学的手段によるｌ−カルニチンの製造 |
| JPS61199793A (ja) * | 1985-02-27 | 1986-09-04 | ロンザ リミテツド | Ｌ‐カルニチンの連続製造方法 |
| JP2012526802A (ja) * | 2009-05-14 | 2012-11-01 | コーロン ライフ サイエンス インク | アルキルアミン誘導体の製造方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59183694A (ja) * | 1983-04-05 | 1984-10-18 | Hamari Yakuhin Kogyo Kk | 光学活性なカルニチンの生化学的製造法 |
| IT1189070B (it) * | 1986-03-14 | 1988-01-28 | Donegani Guido Ist | Processo per la preparazione della l(-)-carnitina cloruro a partire da esteri 3,4-epossibutirrici |
| US5248601A (en) * | 1986-03-14 | 1993-09-28 | Franco Francalanci | Process for preparing L(-)-carnitine chloride |
| IT1189069B (it) * | 1986-03-14 | 1988-01-28 | Donegani Guido Ist | Processo per la preparazione biotecnologica della l(-)-carnitina cloruro |
| GB2195630B (en) * | 1986-08-26 | 1990-07-18 | Chuo Kaseihin Co Inc | Method for producing carnitine, l-carnitineamide hydrolase and method for producing same |
| EP0320460B1 (en) * | 1987-10-26 | 1994-04-27 | Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.p.A. | Process for isolating the enzyme carnitinehydrolyase from strains belonging to the family enterobacteriaceae and use of the immobilized enzyme for producing L(-)-carnitine |
| JPH0291049A (ja) * | 1988-09-21 | 1990-03-30 | Lonza Ag | ｒ―ブチロベタインの製造方法 |
| CA2021869C (en) * | 1989-07-28 | 2000-09-05 | Frans Hoeks | Process for microbiological batch production of l-carnitine |
| JPH0673478B2 (ja) * | 1990-01-11 | 1994-09-21 | 旭化成工業株式会社 | Ｌ―カルニチンの高感度測定法および測定用組成物 |
| IT1240833B (it) * | 1990-05-14 | 1993-12-17 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Procedimento biocatalitico per la produzione di l-(-)- carnitina da crotonilbetaina e ceppi di proteeae per l'uso in tale procedimento |
| IT1261230B (it) * | 1993-04-08 | 1996-05-09 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Procedimento migliorato per la preparazione di l-(-)-carnitina a partire da suoi precursori aventi opposta configurazione. |
| WO1995010613A1 (de) * | 1993-10-08 | 1995-04-20 | Lonza Ag | Gene für den butyrobetain/crotonobetain-l-carnitin-stoffwechsel und ihre verwendung zur mikrobiologischen herstellung von l-carnitin |
| CN1058995C (zh) * | 1996-11-08 | 2000-11-29 | 江苏省微生物研究所 | L-肉碱或其盐的制备方法 |
| KR100255039B1 (ko) | 1997-07-28 | 2000-05-01 | 박영구 | L-카르니틴의제조방법 |
| FR2775420B1 (fr) * | 1998-02-27 | 2000-05-05 | Texel | Composition pour l'aromatisation de fromages |
| US7700074B2 (en) * | 2002-02-07 | 2010-04-20 | Pettegrew Jay W | Method and system for diagnosis of neuropsychiatric disorders including chronic alcoholism |
| US7407778B2 (en) | 2002-02-07 | 2008-08-05 | Pettegrew Jay W | Compounds, compositions and methods for treating neuropsychiatric disorders |
| US20060257842A1 (en) * | 2003-05-29 | 2006-11-16 | Pettegrew Jay W | Cryopreservation media and molecules |
| US7815894B2 (en) * | 2003-05-29 | 2010-10-19 | Jay W. Pettegrew | Compounds, compositions and methods for medical imaging of neuropsychiatric disorders |
| KR100713103B1 (ko) * | 2005-07-07 | 2007-05-02 | 씨제이 주식회사 | 뉴로스포라 크라사 유래 ｌ-카르니틴 생합성 관련 유전자를포함하는 엔테로박테리아세 속 미생물 및 이를 이용한ｌ-카르니틴의 제조방법 |
| CN101705258B (zh) * | 2009-09-30 | 2012-09-19 | 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 | 一种发酵生产辅酶q10的方法 |
Family Cites Families (7)
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|---|---|---|---|---|
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| FR2398046A1 (fr) * | 1977-07-18 | 1979-02-16 | Inst Francais Du Petrole | Synthese enzymatique de la l-carnitine |
| IT1142201B (it) * | 1980-06-24 | 1986-10-08 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Procedimento per la produzione enzimatica di l-carnitina |
| IT1136945B (it) * | 1981-03-18 | 1986-09-03 | Anic Spa | Processo per la preparazione di l-carnitina |
| JPS59183694A (ja) * | 1983-04-05 | 1984-10-18 | Hamari Yakuhin Kogyo Kk | 光学活性なカルニチンの生化学的製造法 |
| DD221905B1 (de) * | 1983-11-03 | 1987-03-18 | Univ Leipzig | Verfahren zur herstellung von l(-)-carnitin und seinen derivaten |
| FI86889C (fi) * | 1984-03-29 | 1992-10-26 | Lonza Ag | Foerfarande foer framstaellning av av l-karnitin pao mikrobiologiskt saett |
-
1983
- 1983-04-13 JP JP58065009A patent/JPS59192095A/ja active Granted
-
1984
- 1984-04-12 ES ES531557A patent/ES531557A0/es active Granted
- 1984-04-13 US US06/599,923 patent/US4650759A/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-04-13 DE DE8484302539T patent/DE3479040D1/de not_active Expired
- 1984-04-13 EP EP84302539A patent/EP0122794B1/en not_active Expired
Cited By (5)
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| JPS60137295A (ja) * | 1983-11-03 | 1985-07-20 | シグマ−タウ・インダストリエ・フアルマシウテイシエ・リウニテ・ソシエタ・ペル・アチオ−ニ | Ｌ−カルニチンおよびその誘導体の製造法 |
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| US8779192B2 (en) | 2009-05-14 | 2014-07-15 | Kolon Life Science, Inc. | Process of preparing an alkylamine derivative |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES8506803A1 (es) | 1985-07-16 |
| JPH0559709B2 (ja) | 1993-08-31 |
| DE3479040D1 (en) | 1989-08-24 |
| US4650759A (en) | 1987-03-17 |
| EP0122794A2 (en) | 1984-10-24 |
| EP0122794B1 (en) | 1989-07-19 |
| ES531557A0 (es) | 1985-07-16 |
| EP0122794A3 (en) | 1986-07-02 |
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