JPH04320677A - シュードモナス属微生物の培養方法 - Google Patents
シュードモナス属微生物の培養方法Info
- Publication number
- JPH04320677A JPH04320677A JP8859691A JP8859691A JPH04320677A JP H04320677 A JPH04320677 A JP H04320677A JP 8859691 A JP8859691 A JP 8859691A JP 8859691 A JP8859691 A JP 8859691A JP H04320677 A JPH04320677 A JP H04320677A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture
- pseudomonas
- fumaric acid
- genus pseudomonas
- aspartate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はシュードモナス属に属し
、Ｌ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素を含有する微生物
の培養方法に関するものであり、さらに詳しくは、該酵
素活性の高い菌体を簡便に培養取得する方法に関するも
のである。 【０００２】 【従来の技術】Ｌ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素（Ｅ
Ｃ ４．１．１．１２）は、Ｌ−アスパラギン酸の４位
のカルボキシル基を脱炭酸して、Ｌ−アラニンを生成す
る酵素であり、Ｌ−アラニンの製造のために産業上有用
なものである。該酵素を含有する微生物の培養法として
は、培地中に乳酸、ピルビン酸を添加する方法（特公昭
６０−１９９９７号公報）、培地中にＬ−グルタミン酸
を添加する方法（特公昭５３−２７３５５号公報）等が
提案されている。さらに、本発明者らも、フマル酸を主
炭素源とする培地で培養した菌体を用いて、Ｌ−アラニ
ンを製造する方法を提案した（特開平２−２４２６９０
号公報）。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
の方法は、添加する有機酸、アミノ酸が高価であったり
、得られる菌体の収量が十分でない等の欠点があり、工
業上使用する方法としては不満足なものであった。本発
明は、上記した課題を解決し、高いアスパラギン酸β−
脱炭酸酵素を含有するシュードモナス属に属する微生物
を高収量で培養取得する方法の提供を目的としてなされ
たものである。 【０００４】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意検討を行った結果、該微生物の培養を
、主炭素源のフマル酸を１重量％以下の濃度に維持して
行うことにより、その課題が解決されることを見いだし
、本発明を完成した。かくして本発明によれば、シュー
ドモナス属に属し、Ｌ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素
を含有する微生物を培養する方法において、主炭素源の
フマル酸を１重量％以下の濃度に維持することを特徴と
するシュードモナス属微生物の培養方法が提供される。 【０００５】本発明に使用する微生物としては、シュー
ドモナス属に属し、Ｌ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素
を含有するものであれば特に限定されないが、例えば、
シュードモナス・ダクネー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｄａｃｕｎｈａｅ）ＩＡＭ １１５２、同ＡＴＣＣ２１
１９２、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ ｐｕｔｉｄａ）ＩＡＭ １５０６、同ＡＴＣＣ
２１８１２、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＩＦＯ
３０８１、シュードモナス・アエルギノーサ（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＩＡＭ １０
５４、シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ）ＩＦＯ ３３１０等が挙げ
られる。 【０００６】Ｌ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素を含有
する微生物菌体の調製に使用される培地の主炭素源とし
ては、フマル酸が用いられ、その濃度は１重量％以下、
好ましくは０．３重量％以下に維持することが重要であ
る。培地へのフマル酸の添加は、上記濃度の範囲内に維
持可能であれば、連続的に行っても、間欠的に行っても
よい。培地の窒素源としては、アンモニア、塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素な
どの無機塩を用いることができ、またペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、コーンスティープリカー、カザミノ酸
等の有機栄養源を使用することができる。培地の無機塩
としては、リン酸一水素カリウム、リン酸二水素カリウ
ム、硫酸マグネシウムなどが用いられる。 【０００７】Ｌ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素を含有
する微生物菌体の培養は、通気撹拌、振盪などの好気的
条件下で行い、培養温度は２０〜４０℃、好ましくは２
８〜３２℃である。培養中のｐＨは５〜１０、好ましく
は７〜８付近である。培養時間は８時間〜４日間、好ま
しくは１０時間〜２日間である。 【０００８】培養終了後、遠心分離により集菌し、該菌
体のＬ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素活性を下記の方
法で測定した。培養液１００ｍｌから集菌した菌体全量
を反応液（アスパラギン酸１５００ｍＭ，ピリドキサル
５’−リン酸０．０４ｍＭ，ピルビン酸ナトリウム５ｍ
Ｍ，ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート０．
１容量％及びアンモニア０．６Ｍ含有；ｐＨ４．８）２
００ｍｌに懸濁し、３０℃にて１時間振とうした後の生
成アラニン量をシリカゲル薄層クロマトグラフィーまた
は高速液体クロマトグラフィーにて測定することにより
求めた。なお、活性はブロス１ｍｌ当たり１時間に生成
するＬ−アラニン量（μｍｏｌｅ）で示した。 【０００９】以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体
的に説明する。 【実施例】［実施例］培地（フマル酸アンモニウム０．
５％、酵母エキス０．５％、リン酸二水素カリウム０．
０５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ０．０５％含有；ｐＨ７
．０）１００ｍｌを５００ｍｌ容三角フラスコに分注し
、１２０℃で、２０分滅菌した後、シュードモナス・ダ
クネー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｄａｃｕｎｈａｅ）
ＡＴＣＣ ２１１９２を一白金耳植菌し、３０℃にて１
日間振盪培養を行った（前培養）。 【００１０】次に、フマル酸（アンモニアでｐＨ７に中
和したもの）を各々第１表に示した濃度になるように添
加し、本培養を行った。即ち、酵母エキス０．５％、リ
ン酸二水素カリウム０．０５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ
０．０５％含有（ｐＨ７．０）からなる培地１ｌを２ｌ
容通気撹拌槽に仕込み、１２０℃で２０分間滅菌した後
、前培養物液２０ｍｌ及び第１表に示した濃度となるよ
うにフマル酸を加え、回転数１０００ｒｐｍ、通気量１
ｖｖｍ、温度３０℃、ｐＨ７．３にて１日間培養を行っ
た。なお、フマル酸は各々第１表の濃度を越えないよう
に添加し、ともに最終添加総量が約４％となるようにし
た。 【００１１】なお、比較例として、フマル酸を最初に１
．５ｗ／ｖ％、以降フマル酸消費後１．２ｗ／ｖ％づつ
２回（合計３．９％）となるように添加した実験を行っ
た。。培養終了後、１００ｍｌから遠心分離した集菌体
を０．９ｗ／ｖ％食塩水で洗浄後、菌体全量を用いて、
前記の方法でＬ−アスパラギン酸脱炭酸酵素活性を測定
した。 結果を第１表に示した。 【００１２】 【表１】
第１表
フマル酸添加
方法 Ｌ−アスパ
ラギン酸脱炭酸酵素活性
（μｍｏｌｅ／ｍｌブロス／ｈｒ）
１％ × ４回
１２００
０．５％ × ８回
１２５０ ０．２
５％×１６回
１３００ 比較例 （１．５％＋１．２％＋１．２％）
１０００
【００１３】 【発明の効果】本発明によれば、Ｌ−アスパラギン酸β
−脱炭酸酵素活性を有するシュードモナス属に属する微
生物を高収量で得ることができる。
、Ｌ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素を含有する微生物
の培養方法に関するものであり、さらに詳しくは、該酵
素活性の高い菌体を簡便に培養取得する方法に関するも
のである。 【０００２】 【従来の技術】Ｌ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素（Ｅ
Ｃ ４．１．１．１２）は、Ｌ−アスパラギン酸の４位
のカルボキシル基を脱炭酸して、Ｌ−アラニンを生成す
る酵素であり、Ｌ−アラニンの製造のために産業上有用
なものである。該酵素を含有する微生物の培養法として
は、培地中に乳酸、ピルビン酸を添加する方法（特公昭
６０−１９９９７号公報）、培地中にＬ−グルタミン酸
を添加する方法（特公昭５３−２７３５５号公報）等が
提案されている。さらに、本発明者らも、フマル酸を主
炭素源とする培地で培養した菌体を用いて、Ｌ−アラニ
ンを製造する方法を提案した（特開平２−２４２６９０
号公報）。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
の方法は、添加する有機酸、アミノ酸が高価であったり
、得られる菌体の収量が十分でない等の欠点があり、工
業上使用する方法としては不満足なものであった。本発
明は、上記した課題を解決し、高いアスパラギン酸β−
脱炭酸酵素を含有するシュードモナス属に属する微生物
を高収量で培養取得する方法の提供を目的としてなされ
たものである。 【０００４】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意検討を行った結果、該微生物の培養を
、主炭素源のフマル酸を１重量％以下の濃度に維持して
行うことにより、その課題が解決されることを見いだし
、本発明を完成した。かくして本発明によれば、シュー
ドモナス属に属し、Ｌ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素
を含有する微生物を培養する方法において、主炭素源の
フマル酸を１重量％以下の濃度に維持することを特徴と
するシュードモナス属微生物の培養方法が提供される。 【０００５】本発明に使用する微生物としては、シュー
ドモナス属に属し、Ｌ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素
を含有するものであれば特に限定されないが、例えば、
シュードモナス・ダクネー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｄａｃｕｎｈａｅ）ＩＡＭ １１５２、同ＡＴＣＣ２１
１９２、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ ｐｕｔｉｄａ）ＩＡＭ １５０６、同ＡＴＣＣ
２１８１２、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＩＦＯ
３０８１、シュードモナス・アエルギノーサ（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＩＡＭ １０
５４、シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ）ＩＦＯ ３３１０等が挙げ
られる。 【０００６】Ｌ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素を含有
する微生物菌体の調製に使用される培地の主炭素源とし
ては、フマル酸が用いられ、その濃度は１重量％以下、
好ましくは０．３重量％以下に維持することが重要であ
る。培地へのフマル酸の添加は、上記濃度の範囲内に維
持可能であれば、連続的に行っても、間欠的に行っても
よい。培地の窒素源としては、アンモニア、塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素な
どの無機塩を用いることができ、またペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、コーンスティープリカー、カザミノ酸
等の有機栄養源を使用することができる。培地の無機塩
としては、リン酸一水素カリウム、リン酸二水素カリウ
ム、硫酸マグネシウムなどが用いられる。 【０００７】Ｌ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素を含有
する微生物菌体の培養は、通気撹拌、振盪などの好気的
条件下で行い、培養温度は２０〜４０℃、好ましくは２
８〜３２℃である。培養中のｐＨは５〜１０、好ましく
は７〜８付近である。培養時間は８時間〜４日間、好ま
しくは１０時間〜２日間である。 【０００８】培養終了後、遠心分離により集菌し、該菌
体のＬ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素活性を下記の方
法で測定した。培養液１００ｍｌから集菌した菌体全量
を反応液（アスパラギン酸１５００ｍＭ，ピリドキサル
５’−リン酸０．０４ｍＭ，ピルビン酸ナトリウム５ｍ
Ｍ，ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート０．
１容量％及びアンモニア０．６Ｍ含有；ｐＨ４．８）２
００ｍｌに懸濁し、３０℃にて１時間振とうした後の生
成アラニン量をシリカゲル薄層クロマトグラフィーまた
は高速液体クロマトグラフィーにて測定することにより
求めた。なお、活性はブロス１ｍｌ当たり１時間に生成
するＬ−アラニン量（μｍｏｌｅ）で示した。 【０００９】以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体
的に説明する。 【実施例】［実施例］培地（フマル酸アンモニウム０．
５％、酵母エキス０．５％、リン酸二水素カリウム０．
０５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ０．０５％含有；ｐＨ７
．０）１００ｍｌを５００ｍｌ容三角フラスコに分注し
、１２０℃で、２０分滅菌した後、シュードモナス・ダ
クネー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｄａｃｕｎｈａｅ）
ＡＴＣＣ ２１１９２を一白金耳植菌し、３０℃にて１
日間振盪培養を行った（前培養）。 【００１０】次に、フマル酸（アンモニアでｐＨ７に中
和したもの）を各々第１表に示した濃度になるように添
加し、本培養を行った。即ち、酵母エキス０．５％、リ
ン酸二水素カリウム０．０５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ
０．０５％含有（ｐＨ７．０）からなる培地１ｌを２ｌ
容通気撹拌槽に仕込み、１２０℃で２０分間滅菌した後
、前培養物液２０ｍｌ及び第１表に示した濃度となるよ
うにフマル酸を加え、回転数１０００ｒｐｍ、通気量１
ｖｖｍ、温度３０℃、ｐＨ７．３にて１日間培養を行っ
た。なお、フマル酸は各々第１表の濃度を越えないよう
に添加し、ともに最終添加総量が約４％となるようにし
た。 【００１１】なお、比較例として、フマル酸を最初に１
．５ｗ／ｖ％、以降フマル酸消費後１．２ｗ／ｖ％づつ
２回（合計３．９％）となるように添加した実験を行っ
た。。培養終了後、１００ｍｌから遠心分離した集菌体
を０．９ｗ／ｖ％食塩水で洗浄後、菌体全量を用いて、
前記の方法でＬ−アスパラギン酸脱炭酸酵素活性を測定
した。 結果を第１表に示した。 【００１２】 【表１】
第１表
フマル酸添加
方法 Ｌ−アスパ
ラギン酸脱炭酸酵素活性
（μｍｏｌｅ／ｍｌブロス／ｈｒ）
１％ × ４回
１２００
０．５％ × ８回
１２５０ ０．２
５％×１６回
１３００ 比較例 （１．５％＋１．２％＋１．２％）
１０００
【００１３】 【発明の効果】本発明によれば、Ｌ−アスパラギン酸β
−脱炭酸酵素活性を有するシュードモナス属に属する微
生物を高収量で得ることができる。
Claims (1)
- 【請求項１】シュードモナス属に属し、Ｌ−アスパラギ
ン酸β−脱炭酸酵素を含有する微生物を培養する方法に
おいて、主炭素源のフマル酸を１重量％以下の濃度に維
持することを特徴とするシュードモナス属微生物の培養
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8859691A JPH04320677A (ja) | 1991-04-19 | 1991-04-19 | シュードモナス属微生物の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8859691A JPH04320677A (ja) | 1991-04-19 | 1991-04-19 | シュードモナス属微生物の培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04320677A true JPH04320677A (ja) | 1992-11-11 |
Family
ID=13947213
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8859691A Pending JPH04320677A (ja) | 1991-04-19 | 1991-04-19 | シュードモナス属微生物の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04320677A (ja) |
-
1991
- 1991-04-19 JP JP8859691A patent/JPH04320677A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0559709B2 (ja) | ||
| US5783428A (en) | Method of producing fumaric acid | |
| US5116743A (en) | L-alanine production with two microorganisms having fumarase inactivity in a single reaction tank | |
| Chibata et al. | Amino acid isomerization in the production of l-phenylalanine from d-phenylalanine by bacteria | |
| US5149651A (en) | Process for culturing microorganisms of the genus pseudomonas and process for producing l-alanine using said microorganisms | |
| JPH04320677A (ja) | シュードモナス属微生物の培養方法 | |
| JPH04320678A (ja) | シュードモナス属微生物の培養方法 | |
| JPH02242690A (ja) | Ｌ―アラニンの製造法 | |
| JP2942995B2 (ja) | Ｌ―アラニンの製造法 | |
| JP3003966B2 (ja) | Ｄｌ−アラニンの製造法 | |
| JPH0549469A (ja) | シユードモナス属微生物の培養方法 | |
| JP2521095B2 (ja) | Ｌ−イソロイシンの製造法 | |
| JPS6117475B2 (ja) | ||
| JPH04197190A (ja) | Ｌ―アラニンの製造法 | |
| JPH04299979A (ja) | シュードモナス属微生物の培養方法 | |
| EP0212972A2 (en) | Bioconversion process | |
| CN1089807C (zh) | 生产l－天冬氨酸的方法 | |
| JPH0468906B2 (ja) | ||
| JPH04349879A (ja) | ブレビバクテリウム属微生物の培養法 | |
| JPH0579A (ja) | シユードモナス属微生物の培養方法 | |
| JPH0449997B2 (ja) | ||
| JPH02207794A (ja) | フマラーゼ活性の除去方法 | |
| JP2721989B2 (ja) | Ｌ―イソロイシンの製造法 | |
| JP2899071B2 (ja) | Ｌ―α―アラニンの製造法 | |
| JPS6057833B2 (ja) | Ｌ−トリプトフアンの製造方法 |