JPH0436276A - 抗生物質ｍａ―６３８―２―ｂ、その製造方法および抗生物質ｍａ―６３８―２―ｂを有効成分とする抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な抗生物質、その製造方法およびそれを有
効成分とする抗腫瘍剤に関する。

〔従来の技術〕

従来から、各種の抗生物質が発見、開発されているが、
抗生物質は、使用を継続すると、被使用菌に使用抗生物
質に対する耐性が生しるという問題がある。また、癌（
がん）などの腫瘍も、抗生物質の使用を継続すると、使
用抗生物質に対して耐性が生じるようになる。

〔発明が解決しようとする課題〕

そのため、常に新しい抗生物質の出現が望まれている。

特に抗腫瘍活性を有し、毒性が少ない新規抗生物質の出
現が望まれている。

したがって、本発明は、抗腫瘍活性を有し、毒性が少な
い新規な抗生物質を提供することを目的とする。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｓ）　ＭＡ
　−６３８−２が、抗腫瘍活性を有し、かつダラム陽性
菌およびダラム陰性菌に対して抗菌力を有し、しかも毒
性が少ない新規な抗生物質ＭＡ−６３８２−Ｂを生産す
ることを見出し、本発明を完成するにいたった。

上記フザリウムＭＡ−６３８−２は、本発明者らが大阪
府高槻市で採取した土壌試料中より発見した微生物であ
り、通商産業省工業技術院微生物工業試験所に寄託され
ていて、その微生物寄託番号は、微工研菌寄第１１４８
０号である。

本発明の抗生物質ＭＡ−６３８−２−Ｂを生産するフザ
リウムＭＡ−６３８−２株は次のような菌学的性質を有
している。

（１）及皿学カ称量 培養は通常３０°Ｃで行う、フザリウムＭＡ−６３８−
２株の形態学的特徴は、気中菌糸を形成し、胞子を形成
することである。

（２）　　　　立　上の　　　ヒ 麦芽エキス寒天培地、あるいは、でんぷん（殿粉）酵母
エキス培地上の成育状態は良好であり、白色気菌糸がフ
ェルト状に生じ、紫色の気菌糸がフェルト状に成育する
。可溶性赤色色素を生産する。

（３）注１１１侃１！ フザリウムＭＡ、−６３８−２株の生理学的性質を第１
表に、炭素源の資化性を第２表に示す。

第 表 第 表 ＋　：利用する ＋十：かなり利用する フザリウムＭＡ−６３８−２株の菌学的性質は上記のと
おりであるが、このフザリウムＭＡ−６３８−２株の自
然的および遺伝子工学的方法も含む人工的変異株も抗生
物質ＭＡ−６３８−２−Ｂを生産でき、これらも抗生物
１ｊＭＡ−６３８−２Ｂの生産菌として使用することが
できる。

本発明において、抗生物質ＭＡ−６３８−２Ｂの生産に
あたり、抗生物質ＭＡ−６３８−２Ｂ生産菌の培養は、
−Ｇのかび（黴）における培養方法に準して行われる。

これを詳しく説明すると、次のとおりである。

本発明の抗生物質ＭＡ−６３８−２−Ｂは、フザリウム
属に属する抗生物質ＭＡ−６３８−２Ｂ生産菌、たとえ
ばフザリウムＭＡ−６３８−２株を好気的条件下に利用
しうる炭素源および窒素源を含有する栄養培地中で生育
させることにより生産される。その具体的手段としては
、液体培地中での振盪培養、深部培養あるいは通気攪拌
培養などによるのが好ましい、工業的に有利に培養すル
ニハ、前記抗生物ｊｉＭＡ−６３８−２−Ｂ生産菌の胞
子懸濁液または培養液を培地に接種し、通気攪拌培養を
行うのが好ましい。

培地の栄養源としては、特に限定されることはなく、微
生物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源、その他を
培地中に含有させ、これらを栄養源とすることができる
。培地成分としては、炭素源として、たとえばグルコー
ス、ガラクトース、シュクロース、マルトース、ラクト
ース、ラフィノース、イノシトール、マンニット、糖蜜
、グリセリン、デキストリン、でんぷん、大豆油、綿実
油などが用いられ、特にグルコース、でんぷんが好まし
い。また、窒素源としては、たとえば大豆粉、落花生粉
、綿実油、魚粉、コーンステイープリカー、ペプトン、
肉エキス、酵母、酵母エキス、麦芽、米ぬか、ふすま、
アスパラギン、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム、硫酸ア
ンモニウムなどが用いられ、特に大豆粉、ペプトンが好
ましい、また、無機塩として、食塩、燐酸塩、炭酸カル
シウム、塩化カルシウム、微量金属塩（たとえば、マン
ガン、亜鉛、銅、モリブデン、鉄、ホウ素、コバルト、
セレン、バナジウム、ヨウ素などのＶ：Ｌ酸塩、リン酸
塩、塩酸塩、硝酸塩など）などが必要に応して適宜添加
される。液体培養に際しては、シリコン油、植物油、動
物油、鉱油、液体パラフィン、界面活性側などが消泡剤
として適宜使用される。

培地のｐＨは、中性ないし微酸性、特にｐＨ５，５付近
が好ましく、培養温度は２５〜３３°Ｃ１特に３０℃前
後が好ましい。

培養の経過に伴って生産される抗生物質ＭＡ６３８−２
−Ｂの力価の経時的変化は、枯草菌を被検菌としたペー
パーディスク［たとえば、東洋濾紙社製またはアドバン
テソク東洋社製の直径６閤の濾紙Ｔｈ１ｎＣ薄）タイプ
を使用］検定法により測定することができる。通常７２
〜２１６時間の培養で抗生物ＷＭＡ−６３８−２−Ｂ　
（以下、簡略化して、単にｒＭＡ−６３８−２−ＢＪと
いう）の生産量は最高値に達する。

ＭＡ−６３８−２−Ｂは、培養終了後、菌体その他の固
形部分を珪藻土などを濾過助剤とする濾過操作あるいは
遠心分離によって除去し、その濾液あるいは上清中から
抽出、精製することによって得られる。

また、ＭＡ−６３８−２−Ｂの物理化学的性状を利用す
ることにより、たとえば吸着剤を用いてＭＡ−６３８−
２−Ｂを採取することができる。

咬着剤としては、たとえば活性炭、あるいは吸着用樹脂
であるアンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ４、ＸＡＤ−
７など（いずれもローム・アンド・ハース社製）または
ダイヤイオンＨＰＩＯ１ＨＰ２０、ＨＰ２０ＡＧ、ＨＰ
５０など（いずれも、三菱化成工業社製）が使用される
。

このような吸着剤を用いる場合、ＭＡ−６３８２−Ｂは
、ＭＡ−６３８−２−Ｂを含む液を上記の吸着剤の層を
通過させて該ＭＡ−６３８−２Ｂを含む液に含まれる不
純物を吸着させて取り餘くか、またはＭＡ−６３８−２
−Ｂを吸着させた後、メタノール水、アセトン水、ｎ−
ブタノール水などを用いて溶出することによって得られ
る。

また、ＭＡ−６３８−２−Ｂは、中性脂溶性物質を培養
液から採取する方法に準し、たとえば水と混和しないク
ロロホルム、酢酸エチル、ｎ−フタノールなどの有機溶
媒により、ＭＡ−６３８２−Ｂを培養濾液、または水溶
液から抽出することも可能である。さらに抗生物質ＭＡ
−６３８２−Ｂを含む有機溶媒層を、希アルカリ水、希
酸性水などで洗浄することにより、混在する酸性特質あ
るいは塩基性物質を除去することも可能である。

このようにして得られたＭＡ−６３８−２−Ｂの精製に
あたっては、たとえばアビセル（旭化成工業社製）など
のセルロースまたはセファデックスＬＨ−２０（ファル
マソア社製）などを用いた分配カラムクロマトグラフィ
ー、シリカゲル、アルミナ、フロリジルのような担体を
用いた吸着カラムクロマトグラフィー、逆相用担体を用
いた逆相カラムクロマトグラフィー、あるいはＭＡ−６
３８−２−Ｂと混在する不純物との溶媒に対する分配率
の差を利用した抽出法、あるいは向流分配法などを精製
手段として採用し、これらの精製手段を単独あるいは適
宜組み合わせ、要すれば反復して用いることにより、Ｍ
Ａ−６３８−２−Ｂを精製することができる。

また、ＭＡ−６３８−２−Ｂは、一般の脂溶性抗生物質
と同じく培養条件によっては培養液中の菌体部分に存在
する。この場合は、アルコール類、アセトンなどの親水
性有機溶媒を用いて抽出し、抽出液より溶媒を除去し、
ついで水溶液とした後、培養濾液からと同様の方法で抽
出、精製することができる。

このようにして得られたＭＡ−６３８−２−Ｂは、次の
理化学的および生物学的性状を有する。

（１）物質の性状 中性の白色粉末 （２）比旋光度 〔α）　”、’−３２２，７゜ Ｃ＝　０．０２２ｇ／〆　ＣＨ，０Ｈ （３）分子式　　Ｃ１ｓ　Ｈ＋　４０５（４）分子量　
　ｍ／ｚ　　２５０ （５）紫外線吸収スペクトル メチルアルコール中（ＭＡ−６３８−２Ｂの濃度７０．
０２■／ｄ）で測定した紫外線吸収スペクトルは、第１
図に示すとおり２１４．５ｎ　ｍ　（ｔ　＝８３００ｆ
　／ｍｏｌ　ｃｍ）に極大吸収を示す。

（６）赤外線吸収スペクトル ＫＢｒＢｒ法で測定した赤外線吸収スペクトルは、第２
図に示すとおりである。

（７）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルＣＤＣ＋、ｉ液
中でテトラメチルシランを基準物質として測定した。　
′Ｈ−核磁気共鳴スベクトルを第３図に、′３ｃ−核磁
気共鳴スベクトルを第４図に示す、第４図における化学
シフト値は次のとおりである。

＋３ｃｍ　　〜北　スペクトル δ（ｐｐｍ） １８．６０４ ２９．４５０ ２９．７３３ ３０．０１７ ３０、　３００ ３０．５Ｂ３ ３０、　８６７ ３１、　１５０ ４１．５１０ ６２；７１７ ６９、　９７５ ７３、　０７８ ８７．９０４ １２７、　３６３ １２Ｂ、　　２２６ １３２、　５４３ １４９、　８６５ １５９、　５６４ １７２、　５４２ １９７、　７４２ ２０６、　９０２ ２０７、　０９１ （８）元素分析 炭素 ６２．３５％ 水素　　　５．５９％ 酸素　　３２．０６％ （９）融点　　１２８〜１３０°Ｃ Ｏω溶解性 酢酸エチル、アセトン、メタノールに易’Ｒ１水に難溶 ｔｍ呈色反応 ヨーソガスに陽性、ＫＭｎＯ，試薬に陽性０２）薄層ク
ロマトグラフィー 吸着剤　シリカゲル 展開溶媒系　ベンゼン：アセトン−２：ｌＲｆ　＝０．
６３ 側抗菌スペクトル ダラム陽性菌として枯草菌Ｂａ５ｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔ
ｉｌｉｓを選び、ダラム陰性菌として大腸菌Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉを選び、それらに対するＭＡ−
６３８−２−Ｂの抗菌スペクトルをアガーダイリューシ
ョン法によって測定した。その結果は第３表に示すとお
りである。

第 表 （ロ）抗腫瘍作用 ＭＡ−６３８−２−ＢのマウスにおけるＰ３８８白血病
に対する治療効果を下記方法により試験した。その試験
方法は下記に示すとおりであり、結果は第４表に示すと
おりである。

なお、使用したマウスは各投与量ごとに６匹ずつであり
、第４表中の抗腫瘍活性は無処置群の平均生存日数（Ｃ
）に対する治療群の生存日数の中間値（Ｔ）の比を百分
率をもって表した。また、第４表中の生存区数は、使用
したマウス中の生存区数が理解しやすいように、使用し
たマウス数を分母に、生存したマウス数を分子に示す態
様で表した。

拭辰方広 Ｂ　Ｄ　Ｆ　＋マウス（♀、５週齢、日本タレア）６匹
の腹腔内に、ＤＢＡ／２マウスで継代培養したＰ３８８
白血病細胞Ｉ　ＸＩＯ’個を接種し、２４時間後より、
ＭＡ−６３８−２−Ｂを１日１回、連続５日間、計５回
腹腔内に投与した。

第　　　　４　　　　表 抗腫瘍活性（Ｔ／Ｃ）は、一般に１２５〜１３０あれば
、抗腫瘍活性があると判断されるが、第４表に示すよう
に、ＭＡ−６３８−２−Ｂは抗腫瘍活性（Ｔ／Ｃ）が上
記数値を越えており、抗腫瘍活性があると認められる。

また、被験マウス中、３０日以上生存するものが認めら
れたことから、ＭＡ６３８−２−Ｂの精製方法、使用方
法などについて、さらに研究を進めることによって、よ
り以上の抗腫瘍活性を発揮させることができるものと期
待できる。

０ω急性毒性 ＢＤＦ、マウス（♀、５週齢、日本タレア）への腹腔内
投与でのＬＤ、。は、２００ａ／ｋｇであり、低毒性で
あると判断できる。

以上のデータの解析により（比旋光度値、分子式、分子
量、元素分析値などに加え、紫外線吸収スペクトルによ
るカルボニル基などの二重結合の存在確認、赤外線吸収
スペクトルによる官能基の類推、核磁気共鳴スペクトル
による水酸基の特定、メチル基の数、全カーボン数の特
定など）により、ＭＡ−６３８−２−Ｂの平面構造は、 と決定した。また、これを既知物質と比較した結果、Ｍ
Ａ−６３８−２−Ｂは新規物質であると判定された。

つぎに、ＭＡ−６３８−２−Ｂを有効成分とする抗腫瘍
剤について述べる。

上記ＭＡ−６３８−２−Ｂを有効成分とする抗腫瘍剤は
、経口投与、非経口投与のいずれにも適用可能である。

経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤または錠剤、顆
粒剤、細粒剤、散剤、腸溶剤、懸濁剤として使用するこ
とができる。非経口投与する場合は、注射剤、点滴剤、
半割、乳剤、懸濁側として使用することができ、また軟
膏剤、クリーム剤、液剤、パップ剤、テープ剤として粘
膜吸収または経皮吸収が維持できるような剤型で使用す
ることができる。

ＭＡ−６３８−２−Ｂを有効成分とする抗腫瘍剤の裂開
化は、医学的に許容しうる界面活性側、賦形剤、滑沢側
、佐剤、その他を用いて適宜行うことができ、固体、半
固体、液体などの裂開を得ることができる。さらに、安
定化剤、着色剤、香料などを使用してもよい。製剤中の
ＭＡ−６３８−２−Ｂ量は、対象腫瘍、使用方法などに
応じて適宜決定すればよい。

このＭＡ−６３８−２−Ｂを有効成分として含有する抗
腫瘍剤をヒト（人間）に使用する場合、静脈内、筋肉内
、経口または経皮投与により使用することが望ましい、
投与量は、対象腫瘍を治療するのに充分な量であればよ
く、腫瘍の症状、投与経路、剤型などによって若干異な
るが、マウスのＬＤｓ。値から考えて、一般に経口投与
の場合、ＭＡ−６３８−２−Ｂが１日あたり０．０００
１〜２００ｗｇ／ｋｇ体重の範囲、特に上限は約５０ｔ
ｇ／ｋｇ体重程度にするのが好ましい、非経口投与の場
合は、ＭＡ−６３８−２−Ｂが１日あたり０．０００１
〜１００■／ｋｇ体重の範囲、特に上限は約５ａ／ｋｇ
体里程度にするのが好ましい。

〔実施例〕

つぎに、ＭＡ−６３８−２−Ｂの製造例を実施例として
示す、なお、実施例は、単に本発明の例示目的に提供さ
れるものであって、本発明の範囲を限定するものではな
い。

実施例１ フザリウムＭＡ−６３８−２株を下記の培地組成−１で
示される培地１０１に接種し、３０℃で５日間振盪培養
した。

羞旦を戒二土 可溶性でんぷん　　　　　　　３０　ｇ大豆粉　　　　
　　　　　　　　５ｇ ＫＨｔ　Ｐ　Ｏａ　　　　　　　　　　１　ｇＭ　ｇ　
Ｓ　Ｏａ　　・７ＨｔＯＩｇ ＮａＣＩ　　　　　　　　　　　　　　　０．５ｇＣａ
Ｃ１ｔ−２Ｈ，ＯＯ，５ｇ 酵母エキス　　　　　　　　　０．５ｇＦｅＣｌ＋　　
・６Ｈｚ　Ｏ２■ Ｚｎ５ｊ）ａ　　・ＩＨｚ　０　　　　　３　ｇ蒸留水
　　　　　　　　　　１，０００　ｄ培養終了後、培養
液を遠心分離し、得られた上清部分（液剤部分）１０！
に６１の酢酸エチルを加え、３回抽出した。

一方、菌体部分（固形分側部分）にはメチルアルコール
６Ｎを加え、攪拌後、濾過した。この濾液のメチルアル
コールを減圧濃縮した後、残渣に水６１を加え、これを
６１！、の酢酸エチルで３回抽出した。

得られた抽出液を前記上清部分からの抽出液と合わせ、
溶媒を減圧濃縮し、得られた油状残渣にベンゼンを加え
、不溶物を除去した後、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーに供した。

すなわち、上記ベンゼン溶液をあらかじめベンゼンを充
填したシリカゲル（和光純薬社製）３ＣＩＸ　４５Ｃ１
１のカラムに通導し、ベンゼン：アセトン−９５：５で
溶出し、ＭＡ−６３８−２−Ｂの含まれる両分を集め、
減圧濃縮することによってＭＡ６３８−２−Ｂ　　２ｇ
を得た。

この実施例１で得られたＭＡ−６３８−２−Ｂの理化学
的および生物学的性状は、前記したＭＡ６３８−２−Ｂ
の理化学的および生物学的性状と一致した。

実施例２ フザリウムＭＡ−６３８−２株を培地組成−２で示され
る培地１０１に接種し、３０″Ｃで５日間振盪培養した
。

培ｍ二４ グルコース　　　　　　　　　　３０　ｇペプトン　　
　　　　　　　　　２ｇ ＫＨｚＰＯａ　　　　　　　　　　ＩｇＭ　ｇ　Ｓ　Ｏ
ａ　　・ＩＨｚＯＩｇ ＮａＣｌ　　　　　　　　　　　Ｏ，５ｇＣａＣＬ　　
−２Ｈｚ　ＯＯ，５ｇ 酵母エキス　　　　　　　　　０．５ｇＦｅＣｌ５　　
・　６Ｈｚ　　Ｏ２［ Ｚｎ５Ｏａ　　・　７Ｈｚ　　０　　　　　　　３　ｇ
蒸留水　　　　　　　　　　１，０００　ｍ培養終了後
、実施例１と同様の操作により、ＭＡ−６３８−２−８
１，９ｇを得た。

この実施例２で得られたＭＡ−６３８−２−Ｂの理化学
的および生物学的性状も、前記したＭＡ６３Ｂ−２−Ｂ
の理化学的および生物学的性状と一致した。

〔発明の効果〕

以上説明したように、本発明の抗生物質ＭＡ−６３８−
２−Ｂは、新規物質であり、抗腫瘍活性を有し、毒性が
少ない。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質ＭＡ−６３８−２−Ｂの紫外線吸収ス
ペクトル（メチルアルコール溶液中）である、第２図は
抗生物質ＭＡ−６３８−２−Ｂの赤外線吸収スペクトル
（ＫＢｒ錠削１である。第３図は抗生物質ＭＡ−６３８
−２−Ｂの′Ｈ−核磁気共鳴スベクトルであり、第４図
は抗生物質ＭＡ−６３８−２ ルである。 Ｂの１２０−核磁気共鳴スペクト

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の平面構造式で表わされる抗生物質ＭＡ−６
   ３８−２−Ｂ。 ▲数式、化学式、表等があります▼
2. （２）フザリウム属に属する抗生物質ＭＡ−６３８−２
   −Ｂ生産菌を培養し、その培養物から抗生物質ＭＡ−６
   ３８−２−Ｂを分離、採取することを特徴とする抗生物
   質ＭＡ−６３８−２−の製造方法。
3. （３）抗生物質ＭＡ−６３８−２−Ｂ生産菌がフザリウ
   ムＭＡ−６３８−２株である請求項２記載の抗生物質Ｍ
   Ａ−６３８−２−Ｂの製造方法。
4. （４）抗生物質ＭＡ−６３８−２−Ｂ生産菌がフザリウ
   ムＭＡ−６３８−２株の通常手法による変異株である抗
   生物質ＭＡ−６３８−２−Ｂの製造方法。
5. （５）抗生物質ＭＡ−６３８−２−Ｂを有効成分として
   含有することを特徴とする抗腫瘍剤。