JPH0445771A - コレステロールの除去方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は卵に含まれるコレステロールの除去方法に関す
る。さらに詳しくは、卵生に存在するコレステロールを
多量に含む低密度リポ蛋白（ＬＤＬ）の選択的な除去方
法に関する。

〔従来の技術および発明が解決しようとする課題〕

卵は蛋白をはじめ種々の栄養を含む重要な食品であるが
、主として卵黄に大量に含まれるコレステロールは、多
量に摂取すると動脈硬化、ひいては狭心症などの重篤な
虚血性心疾患発症のリスクが高まることが知られている
。従って卵や卵を使用した食品のコレステロールを低下
させることは、成人病の予防、進行防止の観点から注目
され、この目的のために種々の技術が開発されている。

そのうち最も一般的な方法は、エーテル、塩素化炭化水
素、アルコールなどの有機溶媒による光質成分の抽出で
ある。しかしながら用いる有機溶媒は毒性の高いものが
多く、抽出処理されたものを食用に供するには不都合な
ばあいが多い、あるいは卵の成分が溶媒により変性され
風味が変化するなどの問題点があった。さらに有機溶媒
による抽出においては、分離を容易に行うため水と混合
しにくい溶媒を用いるのが通常であるが、食用に供する
もののばあいは使用できる溶媒が事実上エチルアルコー
ルに限定され、エチルアルコールは水と自由な割合で混
合するため溶媒と卵成分の分離、溶剤の回収、精製に複
雑な工程を必要とし、いきおい抽出に要する費用も高く
ならざるをえないという経済上の問題点を有する。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者はこれらの問題点を解消すべく鋭意研究の結果
、卵生のコレステロールの大部分が卵、特に卵黄中の低
密度リボ蛋白に含有されていることに着目し、低密度リ
ボ蛋白に親和性を有する吸着体を用い、これに低密度リ
ボ蛋白を含む卵成分を接触させることによって低密度リ
ボ蛋白を選択的に除去し、他の卵成分をほとんど変性、
損失することなく卵成分に含まれるコレステロールを効
果的かつ選択的に除去しうろことを見出し、本発明を完
成するに至った。

すなわち、本発明は低密度リボ蛋白に親和性を有する吸
着体に卵成分を接触させることを特徴とする卵成分から
のコレステロールの除去方法に関する。

吸着体として、水不溶性担体に低密度リボ蛋白に親和性
を有する物質を固定してなる吸着体が好適に使用される
。

〔実施例〕

本発明で言う卵とは、鳥類、は生類、魚類、甲殻類など
の卵を指し、なかでも鶏卵を中心とする鳥類の卵は食用
に供されることが多く、本発明の実施対象として好適で
ある。さらに本発明で言う卵成分とは、卵殻などの固形
物をのぞいた卵生に含まれる卵黄、卵白などの諸成分の
少なくとも一部を含む液性混合物を意味する。

本発明で言う低密度リボ蛋白（ＬＤＬ）とは、例えば渡
辺乾二、ニュー・フード・インダストリー　（Ｎｅｗ　
Ｆｏｏｄ　Ｉｎｃｌｕｓｔｒｙ）　、２４、（６）　、
２９頁、（１９８２）などに記載されているごとく、卵
から遠心分離などにより分離される低密度画分に多量に
含まれる蛋白−脂質複合体をいう。

本発明に用いる吸着体は、低密度リボ蛋白に親和性を有
するものであればいかなるものでも用いることが出来る
。低密度リボ蛋白に親和性を有する吸着体は、吸着体を
構成する主成分そのものが低密度リボ蛋白に親和性を有
するものと、低密度リボ蛋白に実質的に親和性を示さな
い担体に低密度リボ蛋白に親和性を有する物質を固定し
てなるものとに大別される。

前者の代表例としては、多孔質ガラスなどのシラノール
基含有無機多孔体；架橋セルロース硫酸、架橋デキスト
ラン硫酸、架橋ポリスチレンスルフォン酸、架橋ポリス
チレンリン酸、架橋、ポリアクリル酸、架橋ポリメタク
リル酸、架橋ポリビニル硫酸、架橋ポリビニル、スルフ
ォン酸、架橋ポリビニルリン酸、架橋ポリグルタミン酸
、架橋ポリアスパラギン酸などのアニオン性官能基含有
重合体；架橋スチレン−マレイン酸共重合体に代表され
るアニオン性官能基含有七ツマ−を含む共重合体などが
あげられるがこれらに限定されるものではない。

後者はＬＤＬ以外の卵成分に実質的な親和性を有さない
担体に、低密度リボ蛋白に親和性を有する物質を固定し
てなるものである。

低密度リボ蛋白に親和性を有する物質の代表例としては
、低密度リボ蛋白に対する抗体およびそのフラグメント
、ＬＤＬレセプターおよびそのフラグメントなどの特異
性の高い生物学的アフィニティを有するものがまずあげ
られる。

さらに、低密度リボ蛋白に親和性を有する物質として、
非生物学的なアフィニティを有するものが使用でき、そ
のようなものとしては、アニオン性官能基を含有する化
合物があげられる。

アニオン性官能基は、ｐ）ｌが中性付近で負に帯電する
ような官能基であればいかなるものであってもよく、こ
れらの代表例としては、カルボキシル基、スルホン酸基
、スルホン基、硫酸エステル基、シラノール基、リン酸
エステル基、フェノール性水酸基などがあげられるがこ
れらに限定されるものではない。これらの官能基を有す
る化合物は単独で用いてもよいし、２種以上混合して用
いてもよい。

アニオン性官能基を有する化合物としては、１分子あた
り１つのアニオン性官能基を有する化合物であっても、
また複数のアニオン性官能基を有するポリアニオン化合
物であってもよい。

ポリアニオン化合物は低密度リボ蛋白に対する親和性が
大きく、また単位量の担体に多くのアニオン性官能基を
導入できるので好適である。

なかでも分子量が１０００以上の化合物は親和性、アニ
オン性官能基導入量′の点で好ましい。

ポリアニオン化合物が有するアニオン性官能基は１種類
であってもよいし、２種以上であってもよい。

本発明に用いるポリアニオン化合物の代表例としては、
ポリアクリル酸、ポリビニル硫酸、ポリビニルスルホン
酸、ポリビニルリン酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリ
スチレンリン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン
酸、ポリメタクリル酸、ポリリン酸、スチレン−マレイ
ン酸共重合体などの合成ポリアニオン化合物、およびヘ
パリン、デキストラン硫酸、コンドロイチン、コンドロ
イチン硫酸、ヘパラン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリチン
硫酸、キシラン硫酸、カロニン硫酸、セルロース硫酸、
キチン硫酸、キトサン硫酸、ペクチン硫酸、イヌリン硫
酸、グリコーゲン硫酸、ポリラクトース硫酸、カラゲニ
ン硫酸、デンプン硫酸、ラミナリン硫酸、ガラクタン硫
酸、レバン硫酸、メベサルフエート硫酸、アルギン酸、
ホスホマンナンなどのアニオン性官能基含有多糖類など
があげられるがこれらに限定されるものではない。

本発明において用いられる、ＬＤＬに親和性を有する化
合物を固定するための水不溶性担体としては、実質的に
ＬＤＬ以外の卵成分を吸着せず、ＬＤＬに親和性を有す
る化合物を固定することができ、水性溶媒中で溶解する
ことなく一定の形状を保ちうるものであればいかなるも
のでも用いることができる。

本発明に用いる水不溶性担体の形状は粒状、球状、繊維
状、板状、中空糸状、布状、不一織布状など、処理の形
態にあわせていかなる形状のものも使用しうる。

より大きな吸着容量をうるためには、水不溶性担体が多
孔構造を有することが好ましい。同じ観点から水不溶性
担体の多孔構造については表面多孔性よりも全多孔性が
好ましく、空孔率が２０％以上であることが望ましい。

さらに水不溶性担体は大きな径の連続した細孔を有する
ものが好ましい。すなわちＬＤＬは、分子量が１００万
以上の巨体分子であるために、これを効率よく吸着する
ためにはＬＤＬが容易に多孔質体内に侵入しうろことが
必要である。

細孔径の測定方法には種々の方法があり、水銀圧入法が
もっともよく用いられているが、親水性多孔質体のばあ
いには適用が難しい。これに代わる細孔径の目安として
排除限界分子量がよく用いられ、親水性多孔質体、疎水
性多孔質体いずれにも適用できる。排除限界分子量とは
底置（たとえば波多野博之、花卉俊彦著、実験高速液体
クロマトグラフィー、化学同人発行）などに述べられて
いるごとく、ゲル浸透クロマトグラフィーにおいて細孔
内に侵入できない（排除される）分子のうちもっとも小
さい分子量をもつ物の分子量をいう。排除限界分子量は
、一般に球状蛋白質、デキストラン、ポリエチレングリ
コールについてよく調べられているが、本発明に用いる
担体のばあい、ＬＤＬにもっとも類似していると思われ
る球状タンパク質およびウィルスを用いてえられた値を
用いるのが適当である。

水不溶性担体の好ましい排除限界分子量は、１００万以
上１億以下である。すなわち１００万未満の排除限界分
子量をもつ水不溶性担体を用いたばあいにはＬＤＬの吸
着量は小さく、排除限界分子量が大きくなるにつれてＬ
ＤＬの吸着量は増加するがやがて頭打ちとなり、排除限
界分子量が１億以上になると表面積が小さすぎ、吸着量
は著しく低下する。

本発明に用いる水不溶性多孔質担体は有機性、無機性い
ずれであってもよいが、目的とするＬＤＬ以外の卵成分
の吸着（いわゆる非特異吸着）の少ないものが好ましい
。親水性であるほうが非特異吸着が少ないので、水不溶
性多孔質物質は疎水性であるよりも親水性であるほうが
好ましい。

さらに、担体表面には、ＬＤＬに親和性を有する物質の
固定化反応に利用しうる官能基が存在しているとより好
都合である。かかる官能基の代表例としては、水酸基、
アミノ基、アルデヒド基、カルボキシル基、チオール基
、シラノール基、アミド基、エポキシ基、ハロゲン基、
スクシニルイミド基、酸無水物基などがあげられる。

本発明に用いる水不溶性多孔質担体の代表例としては、
アガロース、デキストラン、ポリアクリルアミドなどの
軟質多孔質体、多孔質ガラス、多孔質シリカゲルなどの
無機多孔質体、ポリメチルメタクリレート、ポリビニル
アルコール、スチレン、ジビニルベンゼン共重合体など
の合成高分子および（または）セルロースなどの天然高
分子を原料とする多孔質ポリマーハードゲルなどがあげ
られるがこれらに限定されるものではない。

ＬＤＬに親和性を有する化合物を担体に固定する方法と
しては、物理的吸着による方法、イオン結合による方法
、共有結合により固定する方法などがあり、いかなる方
法を用いてもよいが、ＬＤＬに親和性を有する化合物が
脱離して、処理された卵成分に混入することを防ぐため
に、強固な固定が可能な共有結合法が望ましい。

共有結合によりアニオン性官能基含有化合物を固定させ
るばあい、アニオン性官能基含有化合物がアニオン性官
能基以外に固定に利用できる官能基を有するのが好まし
い。固定に利用できる官能基の代表例としては、アミノ
基、アミド基、カルボキシル基、酸無水物基、スクシニ
ルイミド基、水酸基、チオール基、アルデヒド基、ハロ
ゲン基、エポキシ基、シラノール基などがあげられるが
これらに限定されない。

本発明の吸着体を用いて卵成分からコレステロール除去
を行なうには種々の方法があり、いかなる方法を用いて
もよい。

吸着体が粒状のばあいは、吸着体と卵成分とを混合し、
ＬＤＬを吸着除去した後、遠心分離、濾過などの方法に
より吸着体を分離除去する方法、吸着体をカラムに充填
し、これに卵成分を通過させＬＤＬを除去する方法など
を用いることができる。吸着体が不織布状のばあいはフ
ィルタープレスなどの装置に装着し、これに卵成分を通
過させることにより実施できる。吸着体が繊維状である
ばあいについても、これをカラムに充填することにより
粒状のばあいと同様にして実施することができる。

本発明のコレステロール除去方法を実施するにあたり、
用いる卵成分は全卵を用いてもよいし、大半のＬＤＬが
含有されている卵黄のみを用いてもよい。さらに卵成分
は生理食塩水、水などで希釈して用いてもよいし、その
まま用いてもよい。

また吸着効率あるいは吸着選択性を制御したり向上させ
る目的で、卵成分や吸着体以外の成分を添加してＬＤＬ
の除去を行ってもよい。

添加成分の代表例としてはＣａ、　Ｍｇなどの多価金属
イオン、酸、アルカリなどがあげられるが、これらに限
定されるわけではない。

さらに卵成分からのコレステロール除去に用いた吸着体
は、処理を加えることにより吸着したＬＤＬを脱離させ
再びＬＤＬの吸着除去に用いることもできる。吸着した
ＬＤＬの脱離は、たとえば高イオン強度溶液による処理
などで行うことができる。

つぎに、製造例および実施例をあげて本発明をさらに詳
しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものでは
ない。

製造例１ 多孔質セルロールゲルであるＣＫゲルＡ−８（商品名、
チッソ■製、球状蛋白質の排除限界分子量５０００万、
粒径４５〜１０５　、ｉｎ）１００ｍｌに２０％（重量
％、以下同様）　ＮａＯＨ４０ｇ　、ヘプタン１２０ｇ
およびノニオン系界面活性剤トウイーン２０（商品名：
花王アトラス■製）を１０滴加えた。４０℃で２時間撹
拌後、エピクロルヒドリン５０ｇを加えて２時間撹拌し
て反応させた後、ゲルを水洗濾過し、エポキシ基の導入
されたセルロースゲル（以下、エポキシ化ゲルという）
をえた。

製造例２ ＣＫゲルＡ−３（チッソ銖製）　１０ｉ１を水洗後吸引
濾過し、これにジメチルスルホキシド１３ｍ１．２Ｎ−
ＮａＯＨ２，６ｍｌ、エピクロルヒドリン１．５１を加
えて４０℃で２時間撹拌した。反応後ゲルを濾別し、水
洗してエポキシ基の導入されたセルロースゲルをえた。

これに濃アンモニア水６１を加え４０℃で２時間反応さ
せてアミノ化セルロースゲルをえた。

このゲル７１にアルギン酸０，５ｇを２０１の水に溶解
したものを加えｐＨ４，５に調整後、さらにｌ−エチル
−３−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド０．
８ｇを加え、ｐＨ４，０に調整して室温で６時間振盪後
、室温で一晩放置した。反応後ゲルを濾別し、水洗して
アルギン酸の導入されたセルロースゲルをえた。

製造例３ アルギン酸の代りにポリアクリル酸を使用した以外は製
造例２と同様にしてポリアクリル酸の固定されたセルロ
ースゲルをえた。

製造例４ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５１に分子ｍｌ約５００
０、イオウ含量１５％のデキストラン硫酸ナトリウム４
ｇおよび水５１を加えｐＨ９に調整して４５℃で１６時
間振盪した。その後、ゲルを濾別Ｌ７て、２Ｍ食塩水溶
液および水を用いてこの順に洗浄し、０．５％モノエタ
ノールアミン水溶液を加えて振盪し未反応のエポキシ基
を封止してデキストラン硫酸ナトリウムが固定されたセ
ルロースゲルをえた。

製造例５ 分子量２００，０００、−イオン含量１５％のデキスト
ラン硫酸を用いた他は製造例４と同様にしてデキストラ
ン硫酸の固定されたセルロースゲルをえた。

製造例６ よく乾燥した綿花１０ｇを脱水したピリジン中に浸漬し
水冷した。これにクロルスルフォン酸２１１を撹拌下に
滴下し、滴下終了後１０分間撹拌を続けた。反応終了後
綿花を濾別し、ピリジンついで水で洗浄して、表面に硫
酸基が導入された綿花をえた。

実施例１ 鶏卵の卵黄を分離し、卵黄膜を除去した後生理食塩水で
２倍に希釈した。製造例２．３．４および５でえられた
吸着偉容１　ｍｌを試験管にとり、これに上記卵黄希釈
液４ｍｌをそれぞれ添加して撹拌した。１時間経過後４
０００回転で１５分間遠心分離して吸着体を分離し、卵
黄希釈液中のコレステロール濃度を測定した。卵黄中の
コレステロールはそのほとんどがＬＤＬ中に含まれてい
るので、コレステロール濃度の変化からＬＤＬ吸着量を
推定することができる。結果を第１表に示す。

［以下余白］ さらに製造例４の吸着体を用いて処理された卵黄液を１
０％ＮａＣｌ溶液中で遠心分離したところ、ＬＤＬを主
要成分とする低密度画分は吸着前のおよそ８０％に減少
していた。

実施例２ 製造例２．３．４．５で調製した吸着偉容１ｍｌおよび
製造例６で調製した硫酸基を導入した綿花０．５ｇをそ
れぞれポリプロピレン製ミニカラムに充填し、これに実
施例１と同様にして調製した２倍希釈卵黄液４　ｍｌを
それぞれ負荷し、重力により約１時間かけてカラムを通
過させた。

カラムを通過した卵黄液のコレステロール濃度を測定し
た結果を第２表に示す。

［以下余白コ 実施例３ 実施例１と同様にして調製した２倍希釈卵黄溶液４　ｍ
ｌに塩化カルシウム水溶液を添加してカルシウム濃度を
４０１ｇ／ｄＮに調整した。これに製造例４で調製した
吸着体１　ｍｌを添加し撹拌した。

１時間経過後４０００回転で１５分間遠心分離して吸着
体を分離し、卵黄希釈液中のコレステロールを測定した
結果、吸着前は９１５ｍｇ　／ｄｉ！であったコレステ
ロール濃度が４６２Ｂ　／ｄＤに減少していた。コレス
テロール吸着量は２２．６５１ｇ／ｍｌ−ゲルであった
。

実施例４ 製造例４で調製した吸着体４　ｍｌをステンレス製ミニ
カラムに充填した。これに未希釈の卵黄８　ｎ＋１を高
圧プランジャーポンプにより流速０．０８ｍ１７分で送
液した。カラム通過前１２４０ｍｇ／ｄＮであったコレ
ステロール濃度がカラム通過後６９７■ｇ／ｄｉｌに減
少していた。吸着体１　ｍｌあたりのコレステロール吸
着量は１０．９Ｂであった。

実施例５ 製造例４で調製した吸着体１　ｍｌをポリプロピレン製
ミニカラムに充填し、これに実施例２と同様にして卵黄
の２倍希釈液４ｍｌを通過させてコレステロールの吸着
除去を行った。除去されたコレステロール量は１５　、
２ｉ＋ｇであった。次にこのカラムに２Ｍ食塩液５　ｍ
ｌを流しカラム流出液中のコレステロール量を測定した
ところ、１４．５ｍｇのコレステロールが回収されてい
た。

さらにこのカラムを生理食塩水１０ｍ１を用いて洗浄し
た後、再び上記と同条件で卵黄の２倍希釈液４　ｍｌを
通過させたところ１４．８ｍｇのコレステロールが吸着
された。

［発明の効果］ 低密度リボ蛋白に親和性を有する吸着体に卵成分を接触
させることにより、卵の風味を損なうことなく容易にコ
レステロールが除去できる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　低密度リポ蛋白に親和性を有する吸着体に卵成分を
   接触させることを特徴とする卵成分からのコレステロー
   ルの除去方法。 ２　低密度リポ蛋白に親和性を有する吸着体が、水不溶
   性担体に低密度リポ蛋白に親和性を有する物質を固定し
   たものである請求項１記載の卵成分からのコレステロー
   ルの除去方法。 ３　低密度リポ蛋白に親和性を有する物質がアニオン性
   官能基を有する化合物である請求項２記載の卵成分から
   のコレステロールの除去方法。 ４　アニオン性官能基を有する化合物がポリアニオンで
   ある請求項３記載の卵成分からのコレステロールの除去
   方法。