JPH0455166B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は一般式(1) 〔式中、Ｒはアルデヒド基、ヒドロキシメチル
基、カルボキシル基、又はカルボメトキシ基を示
す〕 で表される化合物を有効成分とする肝障害改善剤
である。 和漢薬ゴミシ（五味子）はマツブサ科
（Schizandraceae）のチヨウセンゴミシ
（Schizandra chinensis Baillon）の乾燥果実で
あり、古来より強壮、強精、鎮咳などの目的で漢
方処方に配合されている。本発明者等は、このゴ
ミシ中に含まれるリグナン類が肝障害改善作用を
有することを見い出し発表した〔薬学雑誌、
102p579（1982）〕。 本発明者等は、その後、ゴミシ精油中の主成分
であり、リグナン類とは全く構造の異なる、一般
式(1)で表わされる化合物、すなわち一般式(1)にお
いてＲがアルデヒド基である７，７−ジメチル−
11−メチレンスピロ〔5.5〕ウンデカ−２−エン
−３−カルバルデヒド（以下、カミグレナールと
称する）、一般式(1)においてＲがヒドロキシメチ
ル基である７，７−ジメチル−11−メチレンスピ
ロ〔5.5〕ウンデカ−２−エン−３−メタノール
（以下、カミグレノールと称する）、一般式(1)にお
いてＲがカルボキシル基である７，７−ジメチル
−11−メチレンスピロ〔5.5〕ウンデカ−２−エ
ン−３−カルボキシリツクアシド（以下、カミグ
レニツクアシドと称する）、及び一般式(1)におい
てＲがカルボメトキシ基であるメチル７，７−ジ
メチル−11−メチレンスピロ〔5.5〕ウンデカ−
２−エン−３−カルボキシレイト（以下、メチル
カミグレネイトと称する）にもリグナン類と同様
の肝障害改善作用があることを見い出し本発明を
完成した。 カミグレナールはゴミシを石油エーテル等の有
機溶剤で抽出し、抽出液をシリカゲルクロマトグ
ラフイー、高速液体クロマトグラフイー等に付す
ことにより得られることが知られている〔Y.
Ohta and Y.Hirose，Tetrahedron Letters
No.20、P.2483（1968）〕。 また、ビヤクシン層のスクアマタ
（Juniperussquamata Lamb.）に含まれている
Widdringtoniaacid IIを、アセトン、ヘキサン等
の有機溶剤で抽出し、これにメタノール中でジア
ゾメタンを作用させて得られた油状のメチルエス
テルがメチルカミグレネイトであり、このメチル
エステルをLAH（リチウムアルミニウムヒドリ
ド）を用いて還元することによりカミグレノール
が得られ、またケン化することによりカミグレニ
ツクアシドが得られることが知られている〔Y.
H.Kuo and Y.T.Lin，J.Chinese Chem.Soc.，
27、P15（1980）〕。 更にまた、前述の如くして得られたカミグレナ
ールを、LAH（リチウムアルミニウムヒドリド）
等の還元剤を用いて還元することによりカミグレ
ノールを得ることができ、また酸化することによ
りカミグレニツクアシドを得ることができる。こ
のカミグレニツクアシドをジアゾメタンを用いて
メチル化することによりメチルカミグレネイトを
得ることができる。 カミグレナール、カミグレノール、カミグレニ
ツクアシド、メチルカミグレネイトの製造の具体
例を示すと次の如くである。 具体例 １ ゴミシの粉末4.67Kgに24の石油エーテルを加
え、38℃で８時間加熱還流し、その抽出液を過
した。抽出残渣に同様の操作を２回施し、得られ
た抽出液を合わせて乾固し、エキス516ｇを得た。
このエキスをシリカゲル５Kgを用いたカラムクロ
マトグラフイーに付し、ｎ−ヘキサン−酢酸エチ
ル（94：６）で展開し、500mlずつ溶出させてフ
ラクシヨンを得た。次に各フラクシヨンの一部を
薄層クロマトグラフイーで展開（展開溶媒ｎ−ヘ
キサン：酢酸エチル＝17：３）し、アニスアルデ
ヒド、モリブデン酸、硫酸試液を噴霧して加熱し
た場合、Rf値約0.75にスポツトが認められたフラ
クシヨンを合併し、溶媒を留去してから更に高速
液体クロマトグラフイー〔機種：ウオーターズ
Prep LC／システム500A、カラム：Prep PAK
−500／C₁₈（ウオーターズ社製）、溶媒：メタノー
ル：水＝８：３、流速：0.15／min、保持時
間：24分〕で精製することにより微黄色油状の性
状を呈する物質6.91ｇ（収率0.15％）を得た。こ
の物質の理化学的性質は文献に記されているカミ
グレナールのデータと一致した。 具体例 ２ ジエチルエーテル40mlとリチウムアルミニウム
ヒドリド174mgの混合物に具体例１で得られたカ
ミグレナール１ｇをジメチルエーテル10mlに溶解
した溶液を０℃で５分間かけて滴下した。この後
20分間０℃で撹拌した後、０℃で10mlの水を注意
深く滴下し、反応を終了させた。この反応混合物
を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層を水洗乾燥
し、溶剤を留去すると、無色の油状物を得た。こ
れを加圧下（約0.3Kg／cm²）シリカゲルカラムク
ロマトグラフイーに付し、ｎ−ヘキサン：酢酸エ
チル＝７：１の混合溶剤で500ml流出後、800ml分
取し、溶媒を留去し、カミグレノール960mg（収
率95.3％）を得た。この物質の理化学的性質は文
献記載のカミグレノールのデータと一致した。 具体例 ３ 具体例１で得られたカミグレナール1.16ｇとエ
タノール26mlの混合物に、硝酸銀6.80ｇと水13ml
の混合物を添加した。この混合物に氷冷化水酸化
ナトリウム2.0ｇと水13mlの混合物を少量づつ添
加し、室温で一夜撹拌した。反応終了後、反応混
合物を過し溶剤で留去して得られた残渣をエー
テルで１回洗浄した後、10％塩酸を加えて白色沈
澱物を得た。これを、エタノール−水の混合溶媒
を用いて再結晶させ、白色鱗片状晶の物質990mg
（収率79％）を得た。この物質の理化学的性質は
文献に記されているカミグレニツクアシドのデー
タと一致した。 具体例 ４ 具体例３で得られたカミグレニツクアシド130
mgをジエチルエーテル２mlに溶解させ、これを氷
冷下で撹拌しながら、ジアゾメタンのジエチルエ
ーテル溶液を発泡が止まるまで滴下した。この反
応溶液を室温で１時間撹拌した後、溶剤を留去
し、無色油状物を105mg（収率71％）得た。これ
を分離用薄層クロマトグラフイーに付し、酢酸エ
チル：ｎ−ヘキサン＝１：20の展開溶剤で展開し
た後、紫外線照射により識別されるメインバンド
を薄層プレート上より剥離し、酢酸エチルで抽出
することにより分離精製してメチルカミグレネイ
ト85mg（収率57％）を得た。この物質の理化学的
な性質は文献記載のデータと一致した。 次に本発明に用いられる一般式(1)で表わされる
化合物が肝障害改善作用を有し、医薬品として有
用性であることについて、実験例を示して説明す
る。 本発明に用いられる一般式(1)で表わされる化合
物の肝障害改善作用を調べるにあたり、本発明者
らは、ヒキノらの方法を用いた〔日本生薬学会第
29回年会（札幌）、講演要旨集、p22（1982）〕。 実施例 四塩化炭素肝細胞障害に対する作用 (1) 培地 イーグル（Eagle）最小必須培地〔デイフコ
社製、以下MEMと称する〕9.4ｇ、Ｌ−グルタ
ミン0.292ｇ、炭酸水素ナトリウム1.7ｇ、ペニ
シリンＧカリウム18mg、硫酸ストレプトマイシ
ン50mgを１リツトルの精製水に溶解し、インシ
ユリンを10^-8M、デキサメサゾンを10^-6Mの濃
度に混合して過滅菌した。これに非動化〔56
℃、30分間放置〕したコウシ血清（Calf
serum）を10％の濃度に混合することにより調
製した〔この培地を10％CS−MEM液と称す
る〕。 (2) 肝細胞の調製 ラツトをエーテル麻酔後開復し、カニユーレ
を門脈に挿入し、５％炭酸ガスと95％酸素ガス
の混合ガスを通気させながら37℃に保温した１
％ウシ血清アルプミンフラクシヨンＶ〔シグマ
社製〕及び0.5ｍＭのエチレングリコール−ビ
ス（β−アミノエチルエーテル）Ｎ，Ｎ，N′，
N′−テトラアセテイツクアシドを含む無カル
シウムハンクス液〔文献：J.H.Hanks and R.
E.Wallace，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.、71、
p196（1949）〕〔30ml／分〕を流し、肝臓下の下
大静脈を切断し十分に脱血した。切断した下大
静脈は結さつし、あらかじめ右心房から横隔膜
上部の下大静脈に挿入したカニユーレから潅流
液を流出させ、更に潅流液を37℃に加温したコ
ラゲナーゼ50mg、塩化カルシウム４ｍＭを含む
無カルシウムハンクス液〔30ml／分〕に換え、
10〜15分間循環させた。その後、肝臓を無カル
シウムハンクス液の入つたシヤーレに移し、２
本のピンセツトを使つて肝細胞を分散させた。
細胞分散液を３重のガーゼで過し、４℃で遠
心分離〔50G、１分間〕した。その後、上清を
除き無カルシウムハンクス液を加え遠心分離を
３〜４回繰り返し上清が透明になつたところで
10％CS−MEM液に細胞を懸濁させた。トリパ
ンブルー法〔細胞のトリパンブルー代謝能を指
標とし、トリパンブルーにより染色されない存
在細胞数（死細胞は染色される）を血球計算器
で計数し生存率を算出する〕による細胞の平均
生存率は85％、細胞数は２〜４×10⁸細胞／200
ｇ体重であつた。 (3) 培養 細胞懸濁液は10％CS−MEM液で５×10⁵細
胞／mlに希釈し、35mmシヤーレに１mlづつま
き、５％炭酸ガスインキユベーター中36.5℃で
培養した。 (4) 生物検定 四塩化炭素〔10ｍＭ、最終濃度〕をエタノー
ル〔１％、最終濃度〕に溶解させ、培地に混合
し、四塩化炭素培地とした後、これに被検薬剤
をジメチルスルホシキド
〔dimethylsulfoxide；以下DMSOと称する〕
〔１％、最終濃度〕に溶解し、四塩化炭素培地
に混合した〔被検薬剤の濃度は培地１ml中１mg
の濃度である〕。次に24時間培養した(3)に述べ
た初代培養細胞培地から培地を取り除き、かわ
りに被検薬剤の四塩化炭素培地１mlを加え、５
％炭酸ガスインキユベーター中36.5℃で１時間
培養し四塩化炭素による肝細胞障害を誘発させ
た後、培地0.5mlを取り４℃で遠心分離
〔1500G、10分間〕し、上清0.2mlを採取し、こ
の中のGPT〔Glutamic acid−Pyruvic acid−
Transaminase〕活性を測定した。 GPTは肝細胞中に含まれているアミノ酸転
位酵素の一つであり、培地中のGPT活性が低
いということは肝細胞の破壊が少ないことを意
味し、すなわち肝細胞障害の改善を意味する。 測定はカルメン（Karmen）法〔文献：A.
Karmen，F.Wroblewski and J.Ladue，J.
Clin.Invest.，34、p126（1955）〕により自動分
析計〔RaBA−SUPER〕を用いて行つた。結
果はすべて３回の実験の平均値±標準誤差で示
し、一次元分散法を用いて検定した。下記第１
表にその結果を示す。

【表】 コントロールは四塩化炭素の存在下で培養した
初代培養ラツト肝細胞の培地中GPT値を100とし
て示す。各数値は、培値１mlに１mgの薬剤を投与
した場合、薬剤が培地中のGPT値をコントロー
ルに比して、どの程度低下させているかを示す。 第１表に示したように、本発明に用いられる一
般式(1)で表される化合物が、それぞれ血清中の四
塩化炭素によるGPT値の上昇を抑えていること
より、肝障害改善作用を有することが確認され
た。 また上記一般式(1)で表される化合物の急性毒性
試験として、カミグレナール、カミグレノール、
カミグレニツクアシド、メチルカミグレネイトを
それぞれマウスに経口投与で2000mg／Kg、静脈内
投与で230mg／Kg投与しても死亡例がみられない
ことより、上記一般式(1)で表される化合物の安全
性は極めて高いことが確認された。 上記一般式(1)で表される化合物の有効投与量
は、肝障害改善作用についての実験データ及び急
性毒性試験の結果から考えて、患者の年令、体
重、疾患の程度によつて異なるが、通常経口投与
では成人に対して１日約50mg〜200mgであり、１
回または数回に分けて投与することができる。非
経口投与では、10mg〜50mgを製造法の常法に従つ
て注射剤とし、皮下注射、静脈注射、または筋肉
内注射することができる。経口投与形態として
は、上記一般式(1)で表される化合物をそのまま肝
障害改善剤として使用することができるが、これ
に通常の製剤に用いられる賦形剤、補助剤等を加
えて製剤製造の常法に従つて散剤、顆粒剤、錠
剤、カプセル剤等の製剤にして用いることができ
る。 次に実施例を示して本発明をさらに具体的に説
明するが、本発明はこれにより制限されるもので
はない。 実施例 １ カミグレナール10ｇを乳糖89ｇ及びステアリン
酸マグネシウム１ｇと混合し、この混合物を単発
式打錠機にて打錠して直径20mm、重量約23ｇのス
ラツグ錠をつくり、これをオシレーターにて粉砕
し、選別して20〜50メツシユの顆粒剤を得た。こ
の顆粒剤を１日0.5〜２ｇ服用する。 実施例 ２ カミグレノール50ｇをバレイシヨデンプン290
ｇと混合し、水を加えて練合し、１mm×１mmの網
目を有するスクリーンで造粒し顆粒錠とした後乾
燥させ、No.16メツシユのふるいで整流した。これ
にステアリン酸マグネシウム10ｇを混合し、打錠
機にて打錠して１錠350mgの錠剤を製造した。錠
剤１錠中にはカミグレノールが50mg含まれてお
り、症状に合せて１日１〜４錠服用する。 実施例 ３ カミグレニツクアシド50ｇに、乳糖190ｇ及び
ステアリン酸マグネシウム10ｇを混合し250mgず
つ硬カプセルに充填した。本カプセル１カプセル
中にはカミグレニツクアシドが50mg含まれてお
り、症状に合せて１日１〜４カプセル服用する。 実施例 ４ メチルカミグレネイト50ｇを結晶セルロース
170ｇ及びステアリン酸マグネシウム５ｇと混合
し、この混合物を単発式打錠機にて打錠して直径
７mm、225mgの錠剤を製造した。本錠剤１錠中に
はカミグレネイトが50mg含まれており、症状に合
せて１日１〜４錠服用する。 実施例 ５ カミグレナール５ｇを注射剤製造の常法に従つ
て60℃に加温した注射用蒸留水１に溶解し、塩
化ナトリウムにて等張化した後、アンプルに封入
した。本注射剤１mlは、カミグレナールを５mg含
有する。本注射剤は症状に合せて１日２〜10mlを
皮下注射、静脈注射または筋肉内注射する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式(1) 〔式中、Ｒはアルデヒド基、ヒドロキシメチル
   基、カルボキシル基、又はカルボメトキシ基を示
   す〕 で表される化合物を有効成分とする肝障害改善
   剤。