JPH043394B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、新規な７，７−ジメチル−２，３−
エポキシ−11−メチレンスピロ〔5.5〕ウンデカ
−３−カルバルデヒド、その製造方法、及び該化
合物を有効成分とする肝障害改善剤に関するもの
である。 和漢薬ゴミシ（五味子）は、マツブサ
（Schizandraceae）のチヨウセンゴミシ
（Schizandrachinensis Baillon）の乾燥果実であ
り、古来より強壮、強精、鎮咳などの目的で漢方
処方に配合されている。本発明者等は、このゴミ
ン中に含まれるリグナン類が肝障害改善作用を有
することを見い出し発表した〔薬学雑誌，102，
p579（1982）〕。 本発明者等は、その後、ゴミシ精油中の主成分
であり、リグナン類とは全く構造の異なる、カミ
グレナール（７，７−ジメチル−11−メチレンス
ピロ〔5.5〕ウンデカ−２−エン−３−カルバル
デヒド）にもリグナン類と同様の肝障害改善作用
があることを見い出し、さらにこのカミグレナー
ルを化学的に変換することにより、カミグレナー
ル関係の文献にも発表されたことのない新規な肝
障害改善作用を有する化合物である７，７−ジメ
チル−２，３−エポキシ−11−メチレンスピロ
〔5.5〕ウンデカ−３−カルバルデヒドを製造する
ことに成功し、本発明を完成した。 本発明の化合物は、式(1) で表される新規な７，７−ジメチル−２，３−エ
ポキシ−11−メチレンスピロ〔5.5〕ウンデカ−
３−カルバルデヒド〔以下、式(1)の化合物とい
う〕である。 式(1)の化合物は、式(2) で表されるカミグレナールに、溶剤中でアルカリ
条件下で過酸化水素を作用させることにより製造
することができる。 上記の式(1)の化合物の製造法に於て、原料とし
て用いる式(2)で表されるカミグレナールは、例え
ばゴミシを石油エーテル等の有機溶剤で抽出し、
抽出液をシリカゲルクロマトグラフイー、高速液
体クロマトグラフイー等に付すことにより得られ
る〔Y.Ohta and Y.Hirose，Tetrahedron
Letters No.20，p2483（1968）〕。 このカミグレナールの製造の具体例を示すと、
次の如くである。 具体例 ゴミシの粉末4.67Kgに24の石油エーテルを加
え、38℃で８時間加熱還流し、その抽出液を過
した。抽出残渣に同様の操作を２回施し、得られ
た抽出液を合わせて乾固し、エキス516ｇを得た。
このエキスをシリカゲル５Kgを用いたカラムクロ
マトグラフイーに付し、ｎ−ヘキサン−酢酸エチ
ル（94：６）で展開し、500mlずつ溶出させてフ
ラクシヨンを得た。次に各フラクシヨンの一部を
薄層クロマトグラフイーで展開（展開溶媒ｎ−ヘ
キサン：酢酸エチル＝17：３）し、アニスアルデ
ヒド、モリブデン酸、硫酸試液を噴霧して加熱し
た場合、Rf値約0.75にスポツトが認められたフラ
クシヨンを合併し、溶媒を留去してから更に高速
液体クロマトグラフイー〔機種：ウオーターズ
prep LC／システム500A、カラム：prep PAK
−500／C₁₈（ウオーターズ社製）、溶媒：メタノー
ル：水＝８：３、流速：0.15／min、保持時
間：24分〕で精製することにより微黄色油状の性
状を呈する物質6.91ｇ（収率0.15％）を得た。こ
の物質の理化学的性質は文献に記されているカミ
グレナールのデータと一致した。 式(2)で表されるカミグレナールと過酸化水素と
の反応は、溶剤（例えばメタノール、エタノール
などのアルコール類）中でアルカリ性条件下で過
酸化水素を０〜30℃、30分〜５時間作用させるこ
とにより行われる。 アルカリ性条件にするために溶剤に加えるアル
カリの具体例としては、水酸化ナトリウム、水酸
化カリウム等を挙げられる。 この反応終了後、反応混合物を水中に注入し、
エーテル、酢酸エチル等の有機溶剤で抽出し、該
有機溶剤層をそのまま、または水洗した後、飽和
食塩水と共に振とうし、飽和食塩水を除去、乾燥
し、更に有機溶剤を留去して粗生成物を得、この
粗生成物をｎ−ヘキサンで再結晶して式(1)の化合
物を得る。 次に本発明に用いられる式(1)の化合物が肝障害
改善作用を有し、医薬品として有用性であること
について、実験例を示して説明する。 本発明に用いられる式(1)の化合物の肝障害改善
作用を調べるにあたり、本発明者らは、ヒキノら
の方法を用いた〔日本生薬学会第29回年会（札
幌），講演要旨集，p22（1982）〕。 実験例 四塩化炭素肝細胞障害に対する作用 (1) 培地 イーグル（Eagle）最小必須培地〔デ
イフコ社製，以下MEMと称する〕9.4ｇ、Ｌ−
グルタミン0.292ｇ、炭酸水素ナトリウム1.7
ｇ、ペニシリンＧカリウム18mg、硫酸ストレプ
トマイシン50mgを１リツトルの精製水に溶解
し、インシユリンを10^-8M、デキサメサゾンを
10^-6Mの濃度に混合して過滅菌した。これに
非動化〔56℃，30分間放置〕したコウシ血清
（Calf serum）を10％の濃度に混合することに
より調製した〔この培地を１％CS−MEM液と
称する〕。 (2) 肝細胞の調製 ラツトをエーテル麻酔後開腹
し、カニユーレを門脈に挿入し、５％炭酸ガス
と95％酸素ガスの混合ガスを通気させながら37
℃に保温した１％ウシ血清アルブミンフラクシ
ヨンＶ〔シグマ社製〕及び0.5mMのエチレング
リコール−ビス（β−アミノエチルエーテル）
Ｎ，Ｎ，N′，N′−テトラアセテイツクアシド
を含む無カルシウムハンクス液〔文献：J.H.
Hanks and R.E.Wallace，Proc.Soc.Exp.
Biol.Med.，71，p196（1949）〕〔30ml／分〕を
流し、肝臓下の下大静脈を切断し十分に脱血し
た。切断した下大静脈は結さつし、あらかじめ
右心房から横隔膜上部の下大静脈に挿入したカ
ニユーレから潅流液を流出させ、更に潅流液を
37℃に加温したコラゲナーゼ50mg、塩化カルシ
ウム4mMを含む無カルシウムハンクス液〔30
ml／分〕に換え、１〜15分間循環させた。その
後、肝臓を無カルシウムハンクス液の入つたシ
ヤーレに移し、２本のピンセツトを使つて肝細
胞を分散させた。細胞分散液を３重のガーゼで
過し、４℃で遠心分離〔50G，１分間〕し
た。その後上清を除き無カルシウムハンクス液
を加えて遠心分離を３〜４回繰り返し上清が透
明になつたところで10％CS−MEM液に細胞を
懸濁させた。トリパンブルー法〔細胞のトリパ
ンブルー代謝能を指標とし、トリパンブルーに
より染色されない生存細胞数（死細胞は染色さ
れる）を血球計算器で計数し生存率を算出す
る〕による細胞の平均生存率は85％、細胞数は
２〜４×10⁸細胞／200ｇ体重であつた。 (3) 培養 細胞懸濁液は10％CS−MEM液で５×
10⁵細胞／mlに希釈し、35mmシヤーレに１mlづ
つまき、５％炭酸ガスインキユベーター中36.5
℃で培養した。 (4) 生物検定 四塩化炭素〔10mM，最終濃度〕
をエタノール〔１％，最終濃度〕に溶解させ、
培地に混合し、四塩化炭素培地とした後、被検
薬剤をジメチルスルホキシド
〔dimethylsulfoxide；以下DMSOと称する〕
〔１％，最終濃度〕に溶解したものを上記四塩
化炭素培地に混合した〔被検薬剤の濃度は培地
１ml中の１mgの濃度である〕。次に24時間培養
した(3)に述べた初代培養細胞培地から培地を取
り除き、かわりに被検薬剤の四塩化炭素培地１
mlを加え、５％炭素ガスインキユベーター中
36.5℃で１時間培養し四塩化炭素による肝細胞
障害を誘発させた後、培地0.5mlを取り４℃で
遠心分離〔1500G，10分間〕し、上清0.2mlを
採取し、この中のGPT〔Glutamic acid−
Pyruvic acid−Transaminase〕活性を測定し
た。 GPTは肝細胞中に含まれているアミノ酸転位
酵素の一つであり、培地中のGPT活性が低いと
いうことは肝細胞の破壊が少ないことを意味し、
すなわち肝細胞障害の改善を意味する。 測定はカルメン（Karmen）法〔文献：A.
Karmen，F.Wroblewski and J.Ladue，J.Clin.
Invest.，34，p126（1955）〕により自動分析計
〔RaBA−SUPER〕を用いて行つた。結果はすべ
て３回の実験の平均値±標準誤差で示し、一次元
分散法を用いて検定した。下記第１表にその結果
を示す。

【表】 コントロールは四塩化炭素の存在下で培養した
初代培養ラツト肝細胞の培地中のGPT値を100と
して示す。そして数値は、培地１mlに１mgの薬剤
を投与した場合、薬剤が培地中のGPT値をコン
トロールに比べて、どの程度低下させているかを
示す。 第１表に示したように、本発明の化合物である
式(1)の化合物が、血清中の四塩化炭素による
GPT値の上昇を抑えていることより、肝障害改
善作用を有することが確認された。 また式(1)の化合物の急性毒性試験として、これ
をマウスに経口投与で2000mg／Kg、静脈内投与で
240mg／Kg投与しても死亡例がみられないことよ
り、本発明に用いられる式(1)の化合物の安全性は
極めて高いことが確認された。 式(1)の化合物の有効投与量は、肝障害改善作用
についての実験データ及び急性毒性試験の結果か
ら考えて、患者の年令、体重、疾患の程度によつ
て異なるが、通常経口投与では成人に対して１日
約50mg〜200mgであり、１回または数回に分けて
投与することができる。非経口投与では、10mg〜
50mgを製造法の常法に従つて注射剤とし、皮下注
射、静脈注射、または筋肉内注射することができ
る。経口投与形態としては、式(1)の化合物とその
まま肝障害改善剤として使用することができる
が、これに通常の製剤に用いられる賦形剤、補助
剤等を加えて製剤製造の常法に従つて散剤、顆粒
剤、錠剤、カプセル剤等の製剤にして用いること
ができる。 次に実施例を示して本発明をさらに具体的に説
明するが、本発明はこれにより制限されるもので
はない。 実施例 １ 上記具体例で得られたカミグレナール300mg、
30％過酸化水素0.4ml及びメタノール２mlの混合
物に、６規定水酸化ナトリウム0.11mlを添加し、
これを20〜25℃で２時間撹拌した。反応終了後、
この反応混合物を水中に注入し、ジエチルエーテ
ルで抽出し、このジエチルエーテル層を水洗した
後、飽和食塩水と共に振とうし、更に飽和食塩水
を除去、無水硫酸ナトリウムで乾燥、溶媒を留去
して粗生成物を得た。この粗生成物をｎ−ヘキサ
ンを用いて再結晶して式(1)の化合物110mgを得た。 式(1)の化合物の理化学的性質は次の通りであ
る。 融 点：92〜93℃ 旋光度：＋17.5（c.0.8，CHCl₃） 赤外吸収スペクトル（IR）： ν^CHCl3 _nax cm^-1：1715，1623，895 プロトン核磁気共鳴スペクトル（ ¹H−NMR）： δppm（CDCl₃）：0.80（3H，ｓ），0.85（3H，
ｓ），1.0〜2.4（12H，ｍ），3.43（1H，bd，Ｊ＝
５），4.35（1H，bs），4.87（1H，bs），8.83（1H，
ｓ） 質量スペクトル（Ms）： ｍ／ｚ（％）：234（m⁺82），216（43），205（88）
，
173（73），109（98），69（100） 実施例 ２ 実施例１で得られた式(1)の化合物10ｇを乳糖89
ｇ及びステアリン酸マグネシウム１ｇと混合し、
この混合物を単発式打錠機にて打錠して直径20
mm、重量約23ｇのスラツグ錠をつくり、これをオ
シレーターにて粉砕し、選別して20〜50メツシユ
の顆粒剤を得た。この顆粒剤を１日0.5〜２ｇ服
用する。 実施例 ３ 実施例１で得られた式(1)の化合物50ｇをバレイ
シヨデンプン290ｇと混合し、水を加えて練合し、
１mm×１mmの網目を有するスクリーンで造粒し顆
粒錠とした後乾燥させ、No.16メツシユのふるいで
整粒した。これにステアリン酸マグネシウム10ｇ
を混合し、打錠機にて打錠して１錠350mgの錠剤
を製造した。本錠剤１錠中には実施例１で得られ
た式(1)の化合物が50mg含まれており、症状に合せ
て１日１〜４錠服用する。 実施例 ４ 実施例１で得られた式(1)の化合物50ｇに、乳糖
190ｇ及びステアリン酸マグネシウム10ｇを混合
し250mgずつ硬カプセルに充填した。本カプセル
１カプセル中には実施例１で得られた式(1)の化合
物が50mg含まれており、症状に合せて１日１〜４
カプセル服用する。 実施例 ５ 実施例１で得られた式(1)の化合物50ｇを結晶セ
ルロース170ｇ及びステアリン酸マグネシウム５
ｇと混合し、この混合物を単発式打錠機にて打錠
して直径７mm、225mgの錠剤を製造した。本錠剤
１錠中には実施例１で得られた式(1)の化合物が50
mg含まれており、症状に合せて１日１〜４錠服用
する。 実施例 ６ 実施例１で得られた式(1)の化合物５ｇを注射剤
製造の常法に従つて60℃に加温した注射用蒸留水
１に溶解し、塩化ナトリウムにて等張化した
後、アンプルに封入した。本注射剤１mlは、実施
例１で得られた式(1)の化合物を５mg含有する。本
注射剤は症状に合わせて１日２〜10mlを皮下注
射、静脈注射または筋肉内注射する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式(1) で表される７，７−ジメチル−２，３−エポキシ
   −11−メチレンスピロ〔5.5〕ウンデカ−３−カ
   ルバルデヒド。 ２ 式(2) で表されるカミグレナールに、溶剤中でアルカリ
   性条件下で過酸化水素を作用させることを特徴と
   する式(1) で表される７，７−ジメチル−２，３−エポキシ
   −11−メチレンスピロ〔5.5〕ウンデカ−３−カ
   ルバルデヒドの製造方法。 ３ 式(1) で表される７，７−ジメチル−２，３−エポキシ
   −11−メチレンスピロ〔5.5〕ウンデカ−３−カ
   ルバルデヒドを有効成分とする肝障害改善剤。