JPH0489496A - 新規物質ｌ５３―１８ｂおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ　　ｓｐ、）　
Ｌ　５３−１８によって産生される新規な物質Ｌ５３−
１８Ｂ及びその製造法に関するものである。

従来の　術、発明が解決しようとする課題細菌によって
惹起される疾病は、抗生物質の投与による治療法の発達
によってかなり克服されている。しかし、従来−の抗生
物質を長期間あるいは大量に投与することによる起因菌
の変化は、現在の感染症治療医薬分野で大きな問題とさ
れている。

このような問題を克服するために、当分野では常に新規
骨格を有し、新しい生物活性を示す抗生物質、あるいは
これを合成するための中間原料が求められている。

本発明者らは、先に、このような要請を満たすべく、鋭
意研究を重ね、土壌中から分離された多数の微生物につ
いて、それらが産生ずる抗生物質を単離して、これを探
索した処、有用な新規な物質を発見し、これを「抗生物
質Ｌ５３−１８ＡＪと命名した（特願平１−９６４７号
、米国特許出願番号０７／４５７２５５）。

なお、この新規な物質と同様な物質の化学的合成法につ
いては”Ｔｗｅｎｔｙ−Ｎｉｎｔｈ　Ｉｎｔｅｒｓｃｉ
ｅｎｃｅＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ　Ａｎｔｉｍｉｃ
ｒｏｂｉａｌ　Ａｇｅｎｔ　ａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒ
ａｐｙ　（１９８９年９月１７−２０日）パにおいてエ
リスロマイシンＡを出発原料として多工程にて合成する
方法が発表されている。

本発明者らは、このＬ５３−１８Ａ物質についての研究
をさらに続行している間で、このＬ５３１８Ａ物質とは
異る新規物質が、微生物学的方法によって得られること
を見い出し、本新規物質をＬ５３−１８Ｃと命名し、こ
のＬ５３−１８Ｃ物質は単工程にてＬ５３−１８Ａ物質
を合成し得る有用な中間体であることを見い出し、これ
らの新知見に基いて才発明を完成しすでに特許出願した
（特願平２−１１７５２）。

しかして、前記の抗生物質Ｌ５３−１８Ａは下記の構造
式で示される物質である。

本発明者らは、どれらの物質について、鋭意研究を続行
した結果、Ｌ５３−１８ＡおよびＬ５３−１８Ｃと異る
新規物質が微生物学的方法によって得られることを見出
し、この新規物質Ｌ５３−１８Ｂと命名した。

問題点を解決するための手　ミ作用 本発明は新規物質Ｌ５３−１８Ｂまたはその医す・ンカ
ロポリスポラ・エスピー（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓ
ｐｏｒａ肚、）Ｌ５３−１８株（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２
２３１）を培地に培養し、培養物中に該物質（以下Ｌ５
３−１８Ｂと記す）を生成蓄積せしめ、採取することを
特徴とする新規物質Ｌ５３−１８Ｂまたはその医薬的に
許容される塩の製造方法に関するものである。

本発明抗生物質Ｌ５３−１８Ｂは下記の物理化学的性質
を有する。

（１）色・性状：白色粉末 （２）推定分子式：　Ｃｓ６Ｈｔｈ＋ＮＯ＋□（３）元
素分析値（％）： 実測値　　　計算値 Ｃ６１，６Ｂ　　、　　６１．７８ Ｈ８，５７８，７８ Ｎ　　　２．０４　　　　２．００ （４）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）　　ニア００　（Ｍ＋
Ｈ）”（５）酸・塩基性の区別　：塩基性 （６）比旋光度：（ｃｘ）２２・−一２９・　　、１０
゜（Ｃ＝　０．７％、クロロホルム） （７）紫外線吸収スペクトル：第１図参照メタノール溶
液において極大吸収は、 λ、、、　＝２７６±２ｎｍ　（Ｅ′″＝１４０±２０
）（８）赤外線吸収スペクトル：第２図参照臭化カリウ
ム錠中の主な波数（ｃｍ　−’　）は次のとおりである
。

３４５０、２９８０．２９４０．１７４０．１６９０．
１６２０．１４６０．１３８０．１１７０．１１１５．
１０９０．１０７５．１０５０（９）核磁気共鳴（’Ｈ
−Ｎ？ｌＲ）スペクトル：第３図参照（重クロロホルム
中、３００　ＭＨｚ）ＧＯ）　　核磁気共鳴（Ｉ３Ｃ−
ＮＭＲ）スペクトル二重クロロホルム中、１／’ＯＯＭ
）ｌｚでのシグナル（δｐｐｍ）は、下記に認められる
。

２０４．７８　（ｓ）　　　　７７．９９　（ｄ）　　
４２．５０　（ｄ）　　２１．０４　軸）１９２．５３
　（ｓ）　　　　７６．４４　（ｄ）　　４１．６１　
（ｔ）　　２０．７７　（ｑ）１７５．６１　（ｓ）　
　　　７４．７７　（ｓ）　　４０．６４　（ｔ）　　
２０．５５　（ｑ）１０８．６７　（ｓ）　　　　７０
．４８　（ｄ）　　４０．３８　（ｑ）　　１８．０８
　（ｑ）１０６．０１　（ｄ）　　　　７０．１０　（
ｄ）　　３１．９２　（ｄ）　　１４．０７　（ｑ）９
８．３３　　（ｄ） ８７．２２（Ｓ）または（ｄ） ８７．１３　（ｄ）または（ｓ） ８０．７４−（ｄ） ６９．５４　　（ｓ）　　２８゜８１ ６６．３６　　（ｄ）　　２６．４９ ６５．１７　　（ｄ）　　２５．６８ ４６．３０　　（ｄ）　　２１．３０ （ｔ）　　１０．８７　　（ｑ） （ｑ）　　１０．６１　　（ｑ） （ｑ）　　　５．９２　　（ｑ） （ｓ：シングレット、ｄ：ダブレット、ｔニトリプレッ
ト、ｑ：クワルテット）００　　溶解性：メタノール、
エタノール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、ベ
ンゼン、酸性水に可溶。

０２）呈色反応： 陽性　過マンガン酸カリウム反応、ヨード反応、濃硫酸
反応、モーリッシュ反応、ドラーゲンドルフ反応； 陰性　ニンヒドリン反応、坂口反応、塩化第２鉄反応 ■薄膜クロマトグラフィー（ＴＬＣ）ニスポットフィル
ム、シリカゲルｆ（東京化成工業株式会社製）。

溶媒系　　　　　　　　　　　　　Ｒｆ値り四ロホルム
ーメタノールー 濃アンモニア水（１０：　０．５　：　０．０５）　　
０．１８酢酸エチル−メタノール 濃アンモニア水（１０：　０．５　：　０．１）　　　
０．１２ベンゼン−アセトン− 濃アンモニア水（５：　５　：　０．１）　　　　０．
１４（１４）　　高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）　　：担体：日立ゲル＃３０５６（日立製作断裂）
移動相ニアセトニトリル−メタノール−１／１５Ｍ酢酸
アンモニウム （５０：　２５　：　３５） 流速：　０．８　ｔｄ　／　ｗｉｎ 検出：２７５ｎｗｌ Ｔｏ＝　５．０３　（ｍｉｎ） ０５）構造式 ％式％（） 各種微生物に対する抗菌スペクトルは第１表に示すとお
りである。

０７）急性毒性 ３００■／ｋｇ（ｉｐ）マウス生存（１群３匹）Ｃ：＋
ＪｂＪＯ＋□の分子式を有するマクロライド系抗生物質
は今までに報告されていない。また分子量６９９を示す
物質として、ＭＡ−１４４３、（アンスラサイクリン系
物質）（Ｊ、八ｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ３０　：６８３−
６８７．１９７７年）およびＡｎｔｒｉｍｙｃｉｎＢ（
Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　３５　：　３７８　３
８０．１９８２年）が知られているが、何れの化合物も
２７６ｎｍ近辺には、紫外部極大吸収がなく、本化合物
Ｌ５３−１８Ｂとはこれらの構造を明らかに区別できる
。

さらに、本発明の化合物Ｌ５３−１８Ｂも、配糖体であ
り、前記のＬ５３−１８ＡおよびＬ５３−１８０とは同
一のアグリコンを有してはいるが、これに結合している
糖が異る点で、両者とは相違する。すなわち、アグリコ
ンに結合する糖は本発明のＬ５３−１８ＢではＤ−デソ
サミン（Ｄｄｅｓｏｓａｍｉｎｅ）およびＬ−マイカロ
ース（Ｌ−ｍｙｃａｒｏｓｅ）であるのに対し、Ｌ５３
−１８ＡではＤ−デソサミンおよびＬ−クラデイノース
（Ｌ−ｃｌａｄｉｎｏｓｅ。

３−０−Ｍｅｔｈｙｌｍｙｃａｒｏｓｅ）である。また
、Ｌ５３１８Ｃは本発明化合物におけるＤ−デソサミン
の−Ｎ（ＣＨ３）Ｚを−ＮＨＣＨ：ｌに、またＬ−マイ
カロースの第３位のヒドロキシル基をメトキシ基に変え
たものである。

以上により、本発明の化合物Ｌ　５３−１８　Ｂは新規
な化合物であると判断した。

本Ｌ５３−１８Ｂ産生に使用するに好適な微生物は放線
菌Ｌ５３−１８株は鹿児島県大島郡瀬戸内町（奄美大島
）の畑土壌より分離されたもので、菌株同定の結果、サ
ツカロポリスポラ （Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓ　ｏｒａ　）属に属する
ものと同定した。その形態的性状、各培地における生育
状態、及び生理的性質を以−下に示す。

■、形態的性状 スターチ無機塩寒天培地（ＩＳＰ４）　　（Ｉｎｔｅｒ
。

Ｊ、Ｓｙｓｔｅｍ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　　１６　
：　３１３−３４０（１９６６））上で、３０°Ｃ１１
０−１４日間培養し観察した所見を示す。グリセリンア
スパラギン寒天、チロシン寒天、オートミール寒天又は
イースト麦芽エキス寒天の各培地上でも、はぼ同様の形
態が観察された。

基生菌糸は曲線状又は直線状で分岐を伴って伸長し、菌
糸の部分により、あるいは培養後期に分断を生じ、直径
０．４〜０．６μｍであり、胞子は着生しない。

基生菌糸より生じた気菌糸は曲線状又は直線状で単純分
岐をなし、直径０．５〜０．７μｍであり、のとがある
、気菌糸は分節してビーズ様に多数連鎖（通常１０個以
上）した胞子、を形成し、しばしば胞子と胞子との間に
空の部分が認められる。

胞子は卵形又は短円筒形で、大きさは（０，５〜０．７
）Ｘ（０，７〜１．３）μｍであり、透過型電子顕微鏡
で観察すると、表面に長い刺状突起の多数生えた殻によ
り覆われている。

基生菌糸又は気菌糸に胞子のう、菌核又は鞭毛胞子を形
成しない。

■、染色性 ダラム染色は陽性で、抗酸性染色は陰性。

■、菌体成分 １）ジアミノピメリン酸及び糖 ５ｔａｎｅｃｋ等の方法（Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ、　２８　：２２６−２３１　（１９７４））に従
って分析した。ジアミノピメリン酸はメソ−型が検出さ
れ、ＬＬ−型は検出されなかった。糖の分析においては
アラビノース及びガラクトースが検出され、キシロース
は検出されなかったことより、環パターン（Ｉｎｔｅｒ
、　Ｊ、　Ｓｙｓｔｅｍ。

Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、２０　：　４３５−４４３　（１
９７０）　）はＡタイプに属する。

２）リン脂質 Ｍｉｎｎｉｋｉｎ等の一方法（Ｉｎｔｅｒ、　　Ｊ、　
　Ｓｙｓｔｅｍ。

Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、２７　：　１０４−１１７　（１
９７７）　）に従って分析した。ホスファチジルコリン
が検出されたことより、リン脂質タイプ （Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓｙｓｔｅｍ、Ｅｃｏｌ　　５　：
　２４９　２６０（１９７７））はｐｍ型に属する。

３）ミコール酸 Ｍｏｒｄａｒｓｋａ等の方法（Ｊ、　Ｇｅｎ、　Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ。

１土：１７−８６　（１９７２））による脂質の分析に
おいて、ＬＣＮ−Ａは検出されず、又、Ｍｉｎｎｉｋｉ
ｎ等の方法〔Ｊ、　Ｇｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。

８８：２００−２０４　（１９７５））による分析にお
いて、ノカルドミコール酸又はミコール酸は検出されな
かった。

４）メナキノン Ｃｏ１１ｉｎｓ等の方法（Ｊ、　Ａｐｐｌ、　Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌ。

４８：２７７−２８２　（１９８０））により分析した
。メナキノン（ＭＫ）はＭＫ−９（Ｈ４）及びＭＫ−１
０（Ｈ，）が主成分として検出された。

■、培養性状 各種培地上で、３０°Ｃｌ２Ｏ日間培養し観察した所見
を第２表に示す。ただし、色の表示はカラーハーモニー
マニュアル（Ｃｏｌｏｒ　ｈａｒｍｏｎｙ　ｍａｎｕａ
ｌ）第４版１９５８年（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐ
ｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆＡｍｅｒｉｃａ）に従った。

■、生理的性状 １）　生育温度範囲：２４〜４５″Ｃ１至適２８〜３５
°Ｃ ２）　ゼラチンの液化：陽性 ３）　スターチの加水分解：陽性 メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地上：陰性 ペプトン・イーストエキス・鉄寒天培地上：陰性 酸素の要求性：好気性 硫化水素の生成：陽性 リゾチームに対する耐性度：感受性 （Ｉｎｔｅｒ、　Ｊ、　Ｓｙｓｔｅｍ、　Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌ、　２７　：塩化ナトリウムに対する耐性度：０
−１０％で生育し、１１％以上では生育しない。

〔基礎培地としてＩＳＰ培地２を用いた〕抗生物質に対
する耐性度：第３表参照 （Ｇｒａｙ等編、Ｅｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　５ｏｉｌ　ｂ
ａｃｔｅｒｉａ。

ｐ２９３−３２１、Ｌｉｖｅｒｐｏｏｌ　　Ｕｎｉｖｅ
ｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ、　１９６７、Ｊ、　Ｇｅｎ、　
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　６９　：３３−３８　（１９７
１）及びＪ、　Ｇｅｎ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、８８ニア５　　８５　　（１９７
５）に従った〕 炭素源の利用性： 糖類（基礎培地としてＩＳＰ培地９を 用いた） ａ） （Ｊ、＾ｎｔｉｂｉｏｔ、　３２　：　１８０　１８６
（１９７９）に従った〕 各種物質の分解能： ｂ）有機酸（Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ。

（１９５７）に従った〕 ７３： 第６表 前記の様に、Ｌ５３−１８株の特徴は、■　形態におい
て、分断性のある基体菌糸より多数の胞子連鎖を形成す
る気菌糸を生じ、鞭毛胞子や胞子のうを形成せず、 ■　菌体成分において、ジアミノピメリン酸はメソ−型
、垢パターンはＡ型、リン脂質はＰ■型、ノカルドミコ
ール酸又はミコール酸を含有せず、メナキノン（ＭＫ）
はＭＫ−９（Ｈ４）及びＭＫ−１０（Ｉ（４）が主成分
である。

なお、糖パターンおよびリン脂質は、それぞれＬｅｃｈ
ｅｖａ　ｌ　ｉｅ等（Ｉｎｔｅｒ、　Ｊ、　Ｓｙｓｔｅ
ｍ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、。

２０　：　４３５−４４３　（１９７０）″）の分類お
よびＬｅｃｈｅｖａ　１　ｉｅ等（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　
５ｙｓｔ−Ｅｃｏｌ、、　５　：２４９−２６０　（１
９７７）〕の分類に準拠した。

これらの特徴より、Ｌ５３−１８株はサツカロポリスポ
ラ属（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ　　Ｌａｎ
ｃｙ　ａｎｄＧｏｏｄｆｅｌｌｏｗ）　　（Ｊ、　Ｇｅ
ｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　８　Ｂ、７５８５　（１
９７５））に属するものと判断し、サッカロポリスポラ
・エスピー（Ｓａｃｃｈａｒｏ　ｏｌ　ｓ　ｏｒａ肚、
）Ｌ　５３−１８と命名した。尚本菌株は微工研に微工
研条寄第２２３１号（ＦＥＲＭ　　ＢＰ２２３１）とし
て寄託されている。

本物質Ｌ５３−１８Ｂは下記の如くして得られる。即ち
、一般抗生−物質の製造法に準じて、サツカロポリスポ
ラ属に属し、物質Ｌ５３−１８Ｂを生産する能力を有す
る微生物で、採取しうる量で本物質Ｌ５３−１８Ｂを生
産し得る能力を有する変異株または変種を、通常の微生
物の培養に使用する培地成分を含む培地中で好気的に培
養すればよく、培養の形式は通常液体培養でよく、工業
的には深部通気撹拌培養を行うのが有利であり、その培
養物中に上記物質を生成蓄積せしめ、培養液より該物質
を採取する。液体培養の場合には、静置培養、撹拌培養
、振盪培養および通気培養のいずれにすることができる
が、就中、通気撹拌培養が好ましい。

また、固体培養することを妨げない。

培地の栄養源としては微生物の培養に通常用いられるも
のが広く使用され、例えば炭素源としてはグルコース、
デキストリン、シュークロース、澱粉、グリセリン、フ
ラクトース、マルトース、廃糖蜜、油脂類、有機酸類な
どを使用できる。油脂類の代表例として大豆油およびオ
リーブ油などが挙げられる。また−１有機酸類の代表例
としてはクエン酸、コハク酸、プロピオン酸および酢酸
などが挙げられる。窒素源としては大豆粉、綿実粉、コ
ーンステイープリカー、グルテンミール、陶工塩化ナト
リウム、塩化カリウム、炭酸カルシウム、硫酸マグネシ
ウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二ナトリウム
、硫酸（第一）鉄、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化コバルトな
どの塩類、重金属類、ビタミンＢ１およびビオチンなど
のビタミン類、その他、シリコンオイルやポリアルキレ
ングリコールエーテルなどの消泡剤、界面活性剤、アミ
ノ酸類などを必要に応じて使用しても良い。

培養条件は、本菌が発育して上記物質を生産しる う鐙範囲内で適宜選択し得るが、例えば培養温度は２４
°Ｃ乃至４５°Ｃ程度、好ましくは２８°Ｃ乃至３５°
Ｃ程度であり、ｐＨは通常は５乃至９．５程度、７付近
が好ましく、培養日数は２日乃至１０日程度で、通常４
日乃至７日である。

本発明の物質Ｌ５３−１８Ｂを培養物から分離、採取す
る一態様は、本物質が塩基性、脂溶性で、場ゝう 主として濾液中に含まれるので、先ず培養液壱濾過又は
遠心分離などの通常の固液分離手段によって菌体を除去
し、得られた濾液を非水溶性溶媒でアルカリ性下で抽出
物が得られる。なお、濾過による菌体分離の際には、た
とえばケイソウ土のような濾過助剤を使用することがで
き、かつ、好ましい。この抽出に用いる非水溶性溶媒と
しては、酢酸エチル、酢酸ブチル、ブタノール、クロロ
ホルムなどを使用する。

この抽出物を酸性下で水および水性緩衝液などの水性液
に転溶させ、次いでアルカリ性下で前記のような非水溶
性溶媒にて再転溶し、得られた溶媒層を回収し、これを
濃縮して粗物質が得られる。

また前記のようにして得られた培養液中の物質Ｌ５３−
１８Ｂを合成吸着剤、例えばダイヤイオンＨＰ−２０（
商品名　三菱化成■）等の樹脂に吸着させた後、含水ア
ルコール、含水アセトン等で溶出し、濃縮することによ
って粗物質が得られる。

更に精製する場合−には、シリカゲル、活性アルミナ、
ダイヤイオンＨＰ−２０（商品名　三菱化成株）および
アンバーライトＸＡＤＩＩおよび同ＬＨ−２０（廓＝＃
＃商品名　ロームアンドハース社）等を用いるカラムク
ロマトグラフィーが好適である。溶出溶媒としては、ク
ロロホルム、酢酸エチル、ベンゼン、メタノール、アセ
トン、アンモニア水および水等を単独あるいは適宜組み
合わせて使用する。

さらに精製する場合には、分取用高速液体クロマトグラ
フィ（ＨＰＬＣ）が好適に使用される。

このときに担体としては、たとえば、ＴＳＫゲル（商品
名　東ソー■）およびＹＭＣゲル（商品名山村化学研究
所）などの逆相系樹脂などが使用される。また、移動相
としては、緩衝液と、たとえばメタノールおよびアセト
ニトリルなどの水？容性有機溶媒との混合物などが使用
される。

本物質Ｌ５３−１８Ｂ物質の検定法は、本物質が抗菌活
性を有するため、一般の抗生物質に用いられるごとく適
当な検定菌、例えばサルシナ・ルティアを用いるバイオ
アッセイによって抗菌活性を測定し、その定量を実施す
ることができる。必要により、常法に従って医薬的に許
容し得る無毒性の塩、例えば塩酸、硫酸等の無機酸、酢
酸、リンゴ酸、グルコン酸、クエン酸、グルタミン酸、
アスパラギン酸等の有機酸との塩とすることができる。

本発明の新規物質Ｌ５３−１８Ｂおよびその薬理的に許
容し得る塩は、それぞれグラム陽性細菌に強い抗菌活性
を示すので、一般の抗生物質と同様に常法によって製剤
して、たとえば人、家畜、家禽、魚類等に経口的または
非経口的に投与することにより、これらの細菌感染症の
治療用薬剤として使用することができる。

さらに本発明の新規物質Ｌ５３−１８Ｂは医薬として使
用される可能性があるほかに、本発明者がさきに発見し
た抗生物質Ｌ５３−１８Ａの中間原料として使用するこ
ともできる。

ｚ旌炎 以下の実施例で本発明をさらに具体的に説明するが、本
発明はこれらによって回答限定されるものではない。

実施例において、％は特に記さない限り重量％である。

実施例１゜ 種培地として、グルコース１．０％、デキストリン１．
０％、カゼイン氷解物０．５％、イーストエキス０．５
％、炭酸カルシウム０．１％を含む培地（殺菌前ｐＨ６
，５）を用いた。また、生産培地としてグルコース３．
０％、コーンステイープリカー１．０％、乾燥酵母０．
６％、塩化コバルト（ＣｏＣｌ　２　　・６ＨｚＯ）０
、０　Ｏ１％および消泡剤ＦＳ−アンチフオーム０２８
０．０４％を含む培地（殺菌前ｐＨ７，０）を用いた。

オートミール寒天スラント上で充分生育したサッカロポ
リスポラ・エスピーＬ５３−１８株（ＦＥＲＭ　　ＢＰ
−２２３１）を、前記殺菌済の種培地１００−を分注し
た５００ｄ容三角フラスコ２本にそれぞれ１白金耳接種
し、２８°Ｃで３日間振盪し第一「種培養液」とした。

ついで２Ｏｆの殺−菌済種培地を含む３０！容のジャー
ファーメンタ−１基に、前記の第一「種培養液Ｊ２００
１ｎｌを接種し、２８°Ｃで２日間通気撹拌培養（通気
量２０１！、／分、回転数２０Ｏｒｐｍ）し、これを第
二「種培養液」とした。

ついで、この第二「種培養液」５１．を２００！の殺菌
済生産培地を含む２５０１容培養タンク１培養終了後、
ケイソウ土を用いて濾過し、培養濾液１８０１を得た。

実施例２゜ 実施例１で得られた濾液１８０１を水酸化ナトリウム溶
液でｐＨ９，０に調整し、９０ｆの酢酸エチルで目的物
を抽出した。この抽出液にｐＨ４，０の０．１Ｍリン酸
緩衝液４５！を加え、目的物を水層に転溶した。ついで
この水溶液にクロロホルム２４！を加え、濃アンモニア
水でｐＨ９，０に調整して撹拌すると、目的物は、クロ
ロホルム層に転溶された。

これを減圧濃縮し、黄褐色粗粉末約６０ｇを得た。

実施例３゜ 実施例２で得られた粗粉末６０ｇを２０ｔｄのクロロホ
ルムに溶解後、ヘキサン１８０戚を加えると沈澱物が生
じた。

この沈澱物を濾過により除き、濾液を濃縮後、酢酸エチ
ルを添加すると、Ｌ５３−１８Ａ物質を含有する白色結
晶が生じた。この結晶を濾過により除き、濾液を濃縮し
、この濃縮物を約２０ｄのクロロホルムに溶解し、さら
にヘキサン約１３０ｄを加えて放置すると沈澱物が生じ
た。

この沈澱物を濾過により除き、濾液を濃縮すると淡黄色
粉末１８．３　ｇが得られた。この粉末を少量のクロロ
ホルムに溶解し、予めクロロホルムメタノール−濃アン
モニア水（１０：　０．３　：　０．０２）にて作製し
たシリカゲルカラム（４００ｄ）に付し、前記の混合溶
媒で展開を行ない５０ｄずつ分画を行なった。

サルシナ・ルティアＡＴＣＣ９３４１を用いた抗菌活性
及びクロロホルム−メタノール−濃アンモニア水（１０
：　０．５　：　０．０５）を展開溶媒としたシリカゲ
ルＴＬＣにて目的物を確認し、Ｌ５３１８Ｂ物質を含有
する画分Ｎα５５〜Ｎｏ、　７９を集め減圧濃縮し、４
．８ｇの粉末を得た。

この粉末を少量の酢酸エチルに溶解し、予め酢酸エチル
−濃アンモニア水（１０：０．２）にて作製したシリカ
ゲルカラム（３００ｄ）に付し、同混合溶媒で溶出し、
２０ｄずつ分画した。

抗菌活性及び酢酸エチル−メタノール−濃アンモニア水
（１０：１．５：０．１）を展開溶媒としたシリカゲル
ＴＬＣにて目的物を確認し、Ｌ５３−１８Ｂ物質を含有
する両分Ｎｏ、　９１〜Ｎｏ、１５０（なお画分ＮαＬ
５１〜Ｎｏ、　２３０はＬ５３−１８Ｃが多く含まれて
いる）を集め減圧濃縮（約５０ｍｆりすると、白色結晶
が生じた。この結晶を濾過により除き濾液を濃縮乾固し
てＬ５３−１８Ｂを含有する白色粗粉末２６０■を得た
。

実施例４゜ 実施例３で得られた粗粉末２６０■を少量のメタノール
に溶解し、予め１／２０Ｍリン酸−力リーアセトニトリ
ルーメタノール（７：２：１）混合溶液で充填した逆相
ＯＤＳ分取カラム（東ソー社製、ＴＳＫゲル１２０Ｔ）
１００戚に供給した。

カラムを前記の混合溶媒を用いて溶出し、溶出液を２０
ｄずつ分取し、フラクションＮｏ、４５〜Ｎα７９を集
め、減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。アンモニア水で
ｐＨ９，０に調整し、クロロホルム抽出を行ない脱塩し
、クロロホルム層を減圧濃縮乾固して８０■のＬ５３−
１８Ｂ物質の白色粉末を単一物として得た。

又里■四果 本発明の新規物質Ｌ５３−１８Ｂおよびその薬理的に許
容し得る塩はそれぞれグラム陽性細菌に強い抗菌活性を
示すので、一般抗生物質と同様に製剤の上、例えば、人
、家畜、家禽等に経口的又は非経口的に投与することに
よってこれら細菌感染症の治療用抗生物質として利用で
き、また、抗生物質Ｌ５３−１８Ａの原料とてし使用す
ることができる。

【図面の簡単な説明】

図面は本発明の新−親物質Ｌ５３−１８Ｂの物性を示す
ものであって、第１〜３図はそれぞれ紫外吸収スペクト
ル線図、赤外吸収スペクトル線区および核磁気共鳴スペ
クトル線図（’ＨＮＭＲスペクトル線図）である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記構造式にて示される新規物質Ｌ５３−１８Ｂ
   またはその医薬的に許容される塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼
2. （２）サッカロポリスポラ属に属する物質Ｌ５３−１８
   Ｂ生産菌を培養し、次いでその培養物から物質Ｌ５３−
   １８Ｂを採取することを特徴とする物質Ｌ５３−１８Ｂ
   の製造法。
3. （３）サッカロポリスポラ属に属する物質Ｌ５３−１８
   Ｂ生産菌が、サッカロポリスポラ・エスピー（Ｓａｃｃ
   ｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ　ｓｐ．）Ｌ５３−１８微
   工研条寄第２２３１号（ＦＥＲＭＢＰ−２２３１）であ
   る請求項（２）記載の製造法。