JPH05201937A - 新規トレハゾリン誘導体の製造法 - Google Patents
新規トレハゾリン誘導体の製造法Info
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- JPH05201937A JPH05201937A JP4281688A JP28168892A JPH05201937A JP H05201937 A JPH05201937 A JP H05201937A JP 4281688 A JP4281688 A JP 4281688A JP 28168892 A JP28168892 A JP 28168892A JP H05201937 A JPH05201937 A JP H05201937A
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- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【構成】化合物（ＩＩ）
【化６】
を加水分解することからなる、化合物（Ｉ）
【化７】
の製造法。
【効果】本発明の化合物（Ｉ）は顕著なβ−グルコシダ
ーゼ阻害活性を有しており、例えば抗腫瘍剤、抗エイズ
剤等として有用である。
ーゼ阻害活性を有しており、例えば抗腫瘍剤、抗エイズ
剤等として有用である。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、β−グルコシダーゼ阻
害活性を有する新規トレハゾリン誘導体の製造法に関す
る。
害活性を有する新規トレハゾリン誘導体の製造法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】従来、β−グルコシダーゼに対して強い
阻害活性を示す物質としては、カスタノスペルミン、デ
オキシノジリマイシン等が知られており、抗腫瘍、抗エ
イズ等に有用な物質として報告されている（R.A.Gruter
s et al.、 Nature 、330 巻、74-77 頁、（1987
年）；M.J.Humphries et al.、 Cancer Res.、 46 巻、
5215-5222 頁、（1986 年）等）。したがって、β−グ
ルコシダーゼ阻害活性を有する化合物は、抗腫瘍薬、抗
エイズ薬として有用であることが予想される。
阻害活性を示す物質としては、カスタノスペルミン、デ
オキシノジリマイシン等が知られており、抗腫瘍、抗エ
イズ等に有用な物質として報告されている（R.A.Gruter
s et al.、 Nature 、330 巻、74-77 頁、（1987
年）；M.J.Humphries et al.、 Cancer Res.、 46 巻、
5215-5222 頁、（1986 年）等）。したがって、β−グ
ルコシダーゼ阻害活性を有する化合物は、抗腫瘍薬、抗
エイズ薬として有用であることが予想される。
【０００３】なお、本発明のβ−グルコシダーゼ阻害活
性を有する下記の式（Ｉ）で示される化合物は、式（Ｉ
ＩＩ）
性を有する下記の式（Ｉ）で示される化合物は、式（Ｉ
ＩＩ）
【０００４】
【化３】
【０００５】で示される化合物を加水分解することによ
っても得られている（特願平 4−27901 号、EP 0499489
A ）。
っても得られている（特願平 4−27901 号、EP 0499489
A ）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは下記式
（ＩＩ）で示される化合物を加水分解することにより、
下記式（Ｉ）で示される化合物が得られることを見出し
て本発明を完成した。
（ＩＩ）で示される化合物を加水分解することにより、
下記式（Ｉ）で示される化合物が得られることを見出し
て本発明を完成した。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、式（ＩＩ）
【０００８】
【化４】
【０００９】で示される化合物を加水分解することから
なる、式（Ｉ）
なる、式（Ｉ）
【００１０】
【化５】
【００１１】で示される化合物の製造方法に関するもの
である。以下、式（Ｉ）で示される化合物を化合物
（Ｉ）と、式（ＩＩ）で示される化合物を化合物（Ｉ
Ｉ）という。
である。以下、式（Ｉ）で示される化合物を化合物
（Ｉ）と、式（ＩＩ）で示される化合物を化合物（Ｉ
Ｉ）という。
【００１２】本発明の加水分解反応は酸または塩基の存
在下で行なわれる。使用される酸または塩基としては、
通常の加水分解反応において使用されるものであれば特
に限定はない。
在下で行なわれる。使用される酸または塩基としては、
通常の加水分解反応において使用されるものであれば特
に限定はない。
【００１３】酸を使用する場合、使用される酸として
は、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸などのハロ
ゲン化水素酸；硫酸；過塩素酸；燐酸；硝酸；のような
無機酸または蟻酸、酢酸、蓚酸、トリフルオロ酢酸など
の低級アルキルカルボン酸；メタンスルホン酸、エタン
スルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸などの低級
アルカンスルホン酸；ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエ
ンスルホン酸などのアリールスルホン酸；のような有機
酸をあげることができる。好適には無機酸、特に塩酸で
ある。
は、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸などのハロ
ゲン化水素酸；硫酸；過塩素酸；燐酸；硝酸；のような
無機酸または蟻酸、酢酸、蓚酸、トリフルオロ酢酸など
の低級アルキルカルボン酸；メタンスルホン酸、エタン
スルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸などの低級
アルカンスルホン酸；ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエ
ンスルホン酸などのアリールスルホン酸；のような有機
酸をあげることができる。好適には無機酸、特に塩酸で
ある。
【００１４】反応は通常、溶剤の存在下で好適に行なわ
れる。使用される溶剤としては反応に影響を与えなけれ
ば特に限定はなく、例えばメタノール、エタノール、プ
ロパノール、 ブタノールのようなアルコール類；ジメチ
ルスルホキシド、スルホランのようなスルホキシド類；
酢酸、プロピオン酸のような有機酸類；水；などがあげ
られる。好適には水、および水と有機溶剤との混合溶剤
である。
れる。使用される溶剤としては反応に影響を与えなけれ
ば特に限定はなく、例えばメタノール、エタノール、プ
ロパノール、 ブタノールのようなアルコール類；ジメチ
ルスルホキシド、スルホランのようなスルホキシド類；
酢酸、プロピオン酸のような有機酸類；水；などがあげ
られる。好適には水、および水と有機溶剤との混合溶剤
である。
【００１５】酸の添加量は通常、原料化合物 1 モルに
対して 1 乃至 20 モル、好適には5 乃至 10 モルで
ある。反応温度は室温乃至 150 ℃で行なわれるが、好
適には、90 ℃乃至 110 ℃である。反応時間は、主に
反応温度、反応試薬または使用される溶剤の種類によっ
て異なるが、通常 1 時間乃至 2 日間であり、好適に
は 20 時間乃至 30 時間である。
対して 1 乃至 20 モル、好適には5 乃至 10 モルで
ある。反応温度は室温乃至 150 ℃で行なわれるが、好
適には、90 ℃乃至 110 ℃である。反応時間は、主に
反応温度、反応試薬または使用される溶剤の種類によっ
て異なるが、通常 1 時間乃至 2 日間であり、好適に
は 20 時間乃至 30 時間である。
【００１６】また、塩基を使用する場合、使用される塩
基としては、例えば水酸化リチウム、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウムなどのアルカリ金属水酸化物；水酸
化カルシウム、水酸化バリウムなどのアルカリ土類金属
水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどのアルカ
リ金属炭酸塩；ヨウ化ナトリウム、臭化ナトリウム、ヨ
ウ化カリウムなどのアルカリ金属ハロゲン化物；のよう
な無機塩基またはアンモニア；トリエチルアミンなどの
アルキルアミン類；モルホリン、N-エチルピペリジン、
ピリジンなどの複素環アミン類；のような有機塩基をあ
げることができる。
基としては、例えば水酸化リチウム、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウムなどのアルカリ金属水酸化物；水酸
化カルシウム、水酸化バリウムなどのアルカリ土類金属
水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどのアルカ
リ金属炭酸塩；ヨウ化ナトリウム、臭化ナトリウム、ヨ
ウ化カリウムなどのアルカリ金属ハロゲン化物；のよう
な無機塩基またはアンモニア；トリエチルアミンなどの
アルキルアミン類；モルホリン、N-エチルピペリジン、
ピリジンなどの複素環アミン類；のような有機塩基をあ
げることができる。
【００１７】反応は通常、溶剤の存在下で好適に行なわ
れる。使用される溶剤としては反応に影響を与えなけれ
ば特に限定はなく、例えばメタノール、エタノール、プ
ロパノール、 ブタノールのようなアルコール類；テトラ
ヒドロフラン、ジオキサンのようなエーテル類；ジメチ
ルスルホキシド、スルホランのようなスルホキシド類；
水；などがあげられる。好適には水、および水と有機溶
剤との混合溶剤である。
れる。使用される溶剤としては反応に影響を与えなけれ
ば特に限定はなく、例えばメタノール、エタノール、プ
ロパノール、 ブタノールのようなアルコール類；テトラ
ヒドロフラン、ジオキサンのようなエーテル類；ジメチ
ルスルホキシド、スルホランのようなスルホキシド類；
水；などがあげられる。好適には水、および水と有機溶
剤との混合溶剤である。
【００１８】塩基の添加量は通常、原料化合物 1 モル
に対して 0.01 乃至 10 モル、好適には 1 乃至 5 モ
ルである。反応温度は 0 ℃乃至 120 ℃で行なわれる
が、好適には、室温乃至 100 ℃である。反応時間は、
主に反応温度、反応試薬または使用される溶剤の種類に
よって異なるが、通常 0.5 時間乃至 2 日間であり、
好適には 1 時間乃至 20 時間である。
に対して 0.01 乃至 10 モル、好適には 1 乃至 5 モ
ルである。反応温度は 0 ℃乃至 120 ℃で行なわれる
が、好適には、室温乃至 100 ℃である。反応時間は、
主に反応温度、反応試薬または使用される溶剤の種類に
よって異なるが、通常 0.5 時間乃至 2 日間であり、
好適には 1 時間乃至 20 時間である。
【００１９】このようにして得られた反応液から化合物
（Ｉ）を純粋に単離するには、通常有機化合物の分離精
製に利用される方法、例えば各種担体を用いたクロマト
グラフィーを単独またはこれらの組み合わせで必要に応
じて繰り返し行なうことによって得られる。
（Ｉ）を純粋に単離するには、通常有機化合物の分離精
製に利用される方法、例えば各種担体を用いたクロマト
グラフィーを単独またはこれらの組み合わせで必要に応
じて繰り返し行なうことによって得られる。
【００２０】例えば、反応終了後、反応液をイオン交換
樹脂、例えばアンバーライト IRC−50、CG−50（ローム
・アンド・ハース社製）、ダウエックス 50W×4 、ダウ
エックス SBR−P （ダウ・エミカル社製）の層を通過さ
せて不純物を吸着させて取り除くか、または化合物
（Ｉ）を吸着させた後、アンモニア水または塩酸を用い
て溶出させることにより得られる。あるいは吸着剤とし
て、例えば活性炭または吸着用樹脂であるアンバーライ
ト XAD−2 、XAD −4(ローム・アンド・ハース社製)等
や、ダイヤイオンHP−10、HP−20、 CHP−20、HP−50
( 三菱化成（株）社製) 等が使用される。化合物（Ｉ）
を含む液を上記のごとき吸着剤の層を通過させて不純物
を吸着させて取り除くか、または化合物（Ｉ）を吸着さ
せた後、メタノール水、アセトン水等の水と有機溶剤と
の混合溶剤を用いて溶出させることにより得られる。
樹脂、例えばアンバーライト IRC−50、CG−50（ローム
・アンド・ハース社製）、ダウエックス 50W×4 、ダウ
エックス SBR−P （ダウ・エミカル社製）の層を通過さ
せて不純物を吸着させて取り除くか、または化合物
（Ｉ）を吸着させた後、アンモニア水または塩酸を用い
て溶出させることにより得られる。あるいは吸着剤とし
て、例えば活性炭または吸着用樹脂であるアンバーライ
ト XAD−2 、XAD −4(ローム・アンド・ハース社製)等
や、ダイヤイオンHP−10、HP−20、 CHP−20、HP−50
( 三菱化成（株）社製) 等が使用される。化合物（Ｉ）
を含む液を上記のごとき吸着剤の層を通過させて不純物
を吸着させて取り除くか、または化合物（Ｉ）を吸着さ
せた後、メタノール水、アセトン水等の水と有機溶剤と
の混合溶剤を用いて溶出させることにより得られる。
【００２１】このようにして得られた化合物（Ｉ）は、
更にシリカゲル、フロリジルのような担体を用いた吸着
カラムクロマトグラフィー、アビセル (旭化成工業
（株）社製) 、セファデックスLH−20( ファルマシア社
製) 等を用いた分配カラムクロマトグラフィーおよび順
相、逆相カラム、イオン交換カラムを用いた高速液体ク
ロマトグラフィー等で精製することができる。
更にシリカゲル、フロリジルのような担体を用いた吸着
カラムクロマトグラフィー、アビセル (旭化成工業
（株）社製) 、セファデックスLH−20( ファルマシア社
製) 等を用いた分配カラムクロマトグラフィーおよび順
相、逆相カラム、イオン交換カラムを用いた高速液体ク
ロマトグラフィー等で精製することができる。
【００２２】このようにして得られた化合物（Ｉ）は次
のような特性を有する。 １）色と形状：塩基性白色粉末 ２）溶解性：水に可溶。アセトン、クロロホルムに不
溶。 ３）呈色試験：ニンヒドリンに陽性 ４）分子式：Ｃ6 Ｈ13ＮＯ5 ５）分子量：179 （FAB −MSスペクトルにより測定） ６）比旋光度： [α]D 25 −3.7 °(c 0.51 、水） ７）紫外線吸収スペクトル：λmax nm(E(1cm,1％)) 水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは、210 nm以
上に特徴的な吸収を示さない。 ８）赤外線吸収スペクトル：νmax(KBr) cm-1 ＫＢｒディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは，次
の通りである。 3384、1582、1474、1380、1040 ９） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：δppm 重水中、外部基準にＴＭＳ（テトラメチルシラン）を使
用して測定した1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル(400 MHz)
は次の通りである。 3.12（1H、d 、 J＝7.1 Hz）、 3.56（1H、d 、 J＝
11.98 Hz）、3.62（1H、d 、 J＝12.2 Hz ）、 3.62
（1H、d 、 J＝6.8 Hz）、3.78（1H、dd、 J＝5.5 およ
び 6.8 Hz ）、3.90（1H、dd、 J＝5.5 および 7.1 Hz
） １０）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：δppm 重水中、外部基準にＴＭＳ（テトラメチルシラン）を使
用して測定した13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは次の通り
である。 57.8、 61.0 、 73.6 、 79.4 、 81.5 、 81.7 １１）薄層クロマトグラフィー： Ｒf 値；0.39 吸着剤；シリカゲルプレート Art 5715（メルク社製） 展開溶媒；アセトニトリル：酢酸：水＝6:1:3 。
のような特性を有する。 １）色と形状：塩基性白色粉末 ２）溶解性：水に可溶。アセトン、クロロホルムに不
溶。 ３）呈色試験：ニンヒドリンに陽性 ４）分子式：Ｃ6 Ｈ13ＮＯ5 ５）分子量：179 （FAB −MSスペクトルにより測定） ６）比旋光度： [α]D 25 −3.7 °(c 0.51 、水） ７）紫外線吸収スペクトル：λmax nm(E(1cm,1％)) 水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは、210 nm以
上に特徴的な吸収を示さない。 ８）赤外線吸収スペクトル：νmax(KBr) cm-1 ＫＢｒディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは，次
の通りである。 3384、1582、1474、1380、1040 ９） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：δppm 重水中、外部基準にＴＭＳ（テトラメチルシラン）を使
用して測定した1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル(400 MHz)
は次の通りである。 3.12（1H、d 、 J＝7.1 Hz）、 3.56（1H、d 、 J＝
11.98 Hz）、3.62（1H、d 、 J＝12.2 Hz ）、 3.62
（1H、d 、 J＝6.8 Hz）、3.78（1H、dd、 J＝5.5 およ
び 6.8 Hz ）、3.90（1H、dd、 J＝5.5 および 7.1 Hz
） １０）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：δppm 重水中、外部基準にＴＭＳ（テトラメチルシラン）を使
用して測定した13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは次の通り
である。 57.8、 61.0 、 73.6 、 79.4 、 81.5 、 81.7 １１）薄層クロマトグラフィー： Ｒf 値；0.39 吸着剤；シリカゲルプレート Art 5715（メルク社製） 展開溶媒；アセトニトリル：酢酸：水＝6:1:3 。
【００２３】本発明の化合物（Ｉ）は、常法にしたがっ
て塩にすることができる。そのような塩としては、例え
ば弗化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩
のようなハロゲン化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫
酸塩、燐酸塩等の無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリ
フルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のよ
うな低級アルカンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸
塩、p-トルエンスルホン酸塩のようなアリ−ルスルホン
酸塩、フマ−ル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸
塩、蓚酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩およびグルタミ
ン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩を挙げる
ことができる。好適には薬理上許容しうる塩である。
て塩にすることができる。そのような塩としては、例え
ば弗化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩
のようなハロゲン化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫
酸塩、燐酸塩等の無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリ
フルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のよ
うな低級アルカンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸
塩、p-トルエンスルホン酸塩のようなアリ−ルスルホン
酸塩、フマ−ル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸
塩、蓚酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩およびグルタミ
ン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩を挙げる
ことができる。好適には薬理上許容しうる塩である。
【００２４】なお、本発明の化合物（Ｉ）は、種々の異
性体を有する。化合物（Ｉ）においては、これらの異性
体およびこれらの異性体の混合物がすべて単一の式で示
されている。従って、本発明においてはこれらの異性体
およびこれらの異性体の混合物をもすべて含むものであ
る。
性体を有する。化合物（Ｉ）においては、これらの異性
体およびこれらの異性体の混合物がすべて単一の式で示
されている。従って、本発明においてはこれらの異性体
およびこれらの異性体の混合物をもすべて含むものであ
る。
【００２５】なお、本発明の原料化合物である化合物
（ＩＩ）は、微生物生産物として得られる。化合物（Ｉ
Ｉ）の製造において用いられる微生物としては、例えば
ミクロモノスポラ（Micromonospora）属に属するミクロ
モノスポラ エスピー （Micromonospora sp.）SANK 6
2390 株またはアミコラトプシス（Amycolatopsis)属に
属するアミコラトプシス エスピー （Amycolatopsis
sp.) SANK 60791 株等を挙げることができる。
（ＩＩ）は、微生物生産物として得られる。化合物（Ｉ
Ｉ）の製造において用いられる微生物としては、例えば
ミクロモノスポラ（Micromonospora）属に属するミクロ
モノスポラ エスピー （Micromonospora sp.）SANK 6
2390 株またはアミコラトプシス（Amycolatopsis)属に
属するアミコラトプシス エスピー （Amycolatopsis
sp.) SANK 60791 株等を挙げることができる。
【００２６】ミクロモノスポラ エスピー SANK 6239
0 株の菌学的性状は、次の通りである。 １．形態学的性状 SANK 62390 株は、菌株同定用寒天培地上 28 ℃、7 な
いし 14 日間の培養において普通もしくはやや貧弱に生
育する。基生菌糸は良好に伸長、分岐し、明るい橙、橙
ないし暗い茶味灰色を示すが、ノカルディア（Nocardi
a）属菌株様の断裂やジグザグ伸長は観察されない。気
菌糸は原痕跡的に僅かに形成し、白ないし茶味白色を示
す。胞子は基生菌糸上にのみ観察されるが、比較的短い
胞子柄の先端に 1 個ずつ形成し、球状である。胞子の
表面は平滑である。胞子のう、菌核、車軸分岐等の特殊
器官は認められない。
0 株の菌学的性状は、次の通りである。 １．形態学的性状 SANK 62390 株は、菌株同定用寒天培地上 28 ℃、7 な
いし 14 日間の培養において普通もしくはやや貧弱に生
育する。基生菌糸は良好に伸長、分岐し、明るい橙、橙
ないし暗い茶味灰色を示すが、ノカルディア（Nocardi
a）属菌株様の断裂やジグザグ伸長は観察されない。気
菌糸は原痕跡的に僅かに形成し、白ないし茶味白色を示
す。胞子は基生菌糸上にのみ観察されるが、比較的短い
胞子柄の先端に 1 個ずつ形成し、球状である。胞子の
表面は平滑である。胞子のう、菌核、車軸分岐等の特殊
器官は認められない。
【００２７】２．各種培養基上の諸性質 各種培養基上で 28 ℃、 14 日間培養後の性状は表１に
示した通りである。色調の表示は日本色彩研究所版「標
準色表」のカラーチップ・ナンバーをあらわす。
示した通りである。色調の表示は日本色彩研究所版「標
準色表」のカラーチップ・ナンバーをあらわす。
【００２８】
【表１】 ─────────────────────────────────── 培地の種類 項目 SANK 62390 株の性状 ─────────────────────────────────── シュクロース・ Ｇ： 余り良くない、平坦、薄橙（3-9-6 ） 硝酸塩寒天 ＡＭ： 形成せず Ｒ： 薄橙（3-9-6 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── グルコース・ Ｇ： 余り良くない、平坦、黄味橙（12-7-7） アスパラギン寒天 ＡＭ： 形成せず Ｒ： 薄橙（6-8-7 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── グリセリン・ Ｇ： 余り良くない、平坦、明るい橙（8-7-6 ） アスパラギン寒天 ＡＭ： 形成せず (ISP 5) Ｒ： 明るい茶味灰（2-6-6 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── 澱粉・無機塩寒天 Ｇ： 良好、平坦、明るい橙（8-7-6) (ISP 4) ＡＭ： 形成せず Ｒ： 灰（N-5 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── チロシン寒天 Ｇ： 余り良くない、平坦、鈍橙（6-8-6 ） (ISP 7) ＡＭ： 僅かに形成、原痕跡的、白 Ｒ： 茶味白（2-9-7 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── 栄養寒天 Ｇ： 余り良くない、平坦、黄橙（10-8-7） (DIFCO) ＡＭ： 形成せず Ｒ： 鈍黄味橙（8-8-7 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── イーストエキス・ Ｇ： 良好、平坦、暗い茶味灰（1-4-6 ） 麦芽エキス寒天 ＡＭ： 僅かに形成、原痕跡的、茶味白（1-8-6 ） (ISP 2) Ｒ： 茶味黒（1-2-6 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── オートミール寒天 Ｇ： 良好、平坦、橙（10-7-6) (ISP 3) ＡＭ： 僅かに形成、原痕跡的、白 Ｒ： 橙（12-7-6） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── 水寒天 Ｇ： 余り良くない、平坦、薄黄味橙（2-9-9 ） ＡＭ： 形成せず Ｒ： 灰（N-5 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── ポテトエキス・ Ｇ： 良好、平坦、黄味灰（1-9-10） 人参エキス寒天 ＡＭ： 僅かに形成、原痕跡的、白 Ｒ： 茶味白（2-9-7 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── Ｇ：生育，ＡＭ：気菌糸，Ｒ：裏面，ＳＰ：可溶性色素。
【００２９】３．生理学的性質 28 ℃で培養後、2 ないし 21 日間に観察した SANK 62
390 株の生理学的性質は表２に示した通りである。
390 株の生理学的性質は表２に示した通りである。
【００３０】
【表２】 ─────────────────────────────────── 澱粉の水解 陽 性 ゼラチンの液化 陽 性 硝酸塩の還元 陰 性 ミルクの凝固 陽 性 ミルクのペプトン化 陽 性 メラニン様色素生産性 (培地1)* 陰 性 (培地2)* 陰 性 (培地3)* 陰 性 基質分解性 カゼイン 陽 性 チロシン 陰 性 キサンチン 陰 性 生育温度範囲 (培地4)* 17-42 ℃ 生育適正温度 (培地4)* 27-32 ℃ 食塩耐性 2 ％ ─────────────────────────────────── ＊：培地１；トリプトン・イーストエキス・ブロス(ISP
1) 培地２；ペプトン・イーストエキス・鉄寒天(ISP 6) 培地３；チロシン寒天(ISP 7) 培地４；イーストエキス・麦芽エキス寒天(ISP 2) 。
1) 培地２；ペプトン・イーストエキス・鉄寒天(ISP 6) 培地３；チロシン寒天(ISP 7) 培地４；イーストエキス・麦芽エキス寒天(ISP 2) 。
【００３１】また、プリドハム・ゴトリーブ寒天培地(I
SP 9) を使用して、 28 ℃、 14 日間培養後に観察した
SANK 62390 株の炭素源の資化性は表３に示す通りであ
る。
SP 9) を使用して、 28 ℃、 14 日間培養後に観察した
SANK 62390 株の炭素源の資化性は表３に示す通りであ
る。
【００３２】
【表３】 ─────────────────────────────────── D-グルコース 利用する D-フルクトース 利用する L-アラビノース 利用する L-ラムノース 利用しない D-キシロース 利用する シュクロース 利用しない イノシトール 利用する ラフィノース 利用する D-マンニトール 利用しない 対照 利用しない ──────────────────────────────────。
【００３３】４．菌体成分について SANK 62390 株の細胞壁は、ビー・ベッカーらの方法
（B. Becker et al.、アプライド マイクロバイオロジ
ー（Applied Microbiology）、12巻、 421-423頁、1984
年）に従い検討した結果、メソージアミノピメリン酸お
よびグリシンが検出された。また、SANK 62390 株の全
細胞壁中の糖成分をエム・ピー・レシェバリエの方法
（M. P. Lechevalier 、ジャーナル オブ ラボラトリ
ー アンドクリニカル メディシン（ Journal of Labo
ratory & Clinical Medicine）、71巻、 834頁、1968
年）に従い検討した結果、アラビノースとキシロースが
検出された。ミコール酸の存在は確認されなかった。細
胞壁ペプチドグリカン中のアシル型はグリコリル型であ
った。また、主要メナキノン成分として MK-10(H6)、M
K-10(H4) 、MK-10(H8) が検出された。
（B. Becker et al.、アプライド マイクロバイオロジ
ー（Applied Microbiology）、12巻、 421-423頁、1984
年）に従い検討した結果、メソージアミノピメリン酸お
よびグリシンが検出された。また、SANK 62390 株の全
細胞壁中の糖成分をエム・ピー・レシェバリエの方法
（M. P. Lechevalier 、ジャーナル オブ ラボラトリ
ー アンドクリニカル メディシン（ Journal of Labo
ratory & Clinical Medicine）、71巻、 834頁、1968
年）に従い検討した結果、アラビノースとキシロースが
検出された。ミコール酸の存在は確認されなかった。細
胞壁ペプチドグリカン中のアシル型はグリコリル型であ
った。また、主要メナキノン成分として MK-10(H6)、M
K-10(H4) 、MK-10(H8) が検出された。
【００３４】以上から、本菌株は放線菌の中でもミクロ
モノスポラ属に属することが判明したので、ミクロモノ
スポラ エスピー( Micromonospora sp.) SANK 62390
株（寄託機関、工業技術院微生物工業技術研究所：寄託
番号、微工研条寄第 3521 号(FERM BP-3521): 原寄託
日、1990 年 7 月 26 日 ）と命名された。
モノスポラ属に属することが判明したので、ミクロモノ
スポラ エスピー( Micromonospora sp.) SANK 62390
株（寄託機関、工業技術院微生物工業技術研究所：寄託
番号、微工研条寄第 3521 号(FERM BP-3521): 原寄託
日、1990 年 7 月 26 日 ）と命名された。
【００３５】アミコラトプシス エスピー SANK 6079
1 株の菌学的性状は、次の通りである。 １．形態学的特徴 SANK 60791 株は菌株同定用寒天培地上、28 ℃、7 な
いし 14 日間の培養において普通もしくは、やや貧弱に
生育する。基生菌糸は良好に伸長、分岐し平坦もしくは
しわ状となり、茶白、薄黄味茶ないし鈍黄色を示す。気
菌糸はやや貧弱もしくは原痕跡的に僅かに形成し、白、
薄黄ないし薄橙色を示す。培養後期には基生菌糸や気菌
糸の分断が認められることもあり気菌糸では桿菌状構造
が観察されることもある。菌糸のノカルディア（ Nocar
dia ）様のジグザグ（ Zig-Zag）伸長は認められない。
胞子のう、菌核、車軸分岐等の特殊器官は認められな
い。
1 株の菌学的性状は、次の通りである。 １．形態学的特徴 SANK 60791 株は菌株同定用寒天培地上、28 ℃、7 な
いし 14 日間の培養において普通もしくは、やや貧弱に
生育する。基生菌糸は良好に伸長、分岐し平坦もしくは
しわ状となり、茶白、薄黄味茶ないし鈍黄色を示す。気
菌糸はやや貧弱もしくは原痕跡的に僅かに形成し、白、
薄黄ないし薄橙色を示す。培養後期には基生菌糸や気菌
糸の分断が認められることもあり気菌糸では桿菌状構造
が観察されることもある。菌糸のノカルディア（ Nocar
dia ）様のジグザグ（ Zig-Zag）伸長は認められない。
胞子のう、菌核、車軸分岐等の特殊器官は認められな
い。
【００３６】２．各種培養基上の諸性質 各種培養基上で 28 ℃、 14 日間培養後の性状は表４に
示した通りである。色調の表示は日本色彩研究所版「標
準色表」のカラーチップ・ナンバーをあらわす。
示した通りである。色調の表示は日本色彩研究所版「標
準色表」のカラーチップ・ナンバーをあらわす。
【００３７】
【表４】 ─────────────────────────────────── 培地の種類 項目 SANK 60791 株の性状 ─────────────────────────────────── シュクロース・ Ｇ： 良好、平坦、黄味灰（1-9-10） 硝酸塩寒天 ＡＭ： 余り良くない、白 Ｒ： 黄味灰（2-9-10） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── グルコース・ Ｇ： 余り良くない、平坦、薄橙（3-9-6 ） アスパラギン寒天 ＡＭ： 僅かに形成、黄味灰（2-9-10） Ｒ： 薄茶（3-8-6 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── グリセリン・ Ｇ： 良好、平坦、茶味白（2-9-7 ） アスパラギン寒天 ＡＭ： 原痕跡的に形成、白 (ISP 5) Ｒ： 薄黄味茶（6-8-8 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── 澱粉・無機塩寒天 Ｇ： 余り良くない、平坦、薄黄味茶（4-8-9) (ISP 4) ＡＭ： 原痕跡的に形成、薄黄（3-9-10） Ｒ： 薄黄味茶（6-8-9 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── チロシン寒天 Ｇ： 非常に良好、しわ状、茶味白（2-9-6 ） (ISP 7) ＡＭ： 僅かに形成、薄橙（3-9-6 ） Ｒ： 薄橙（6-8-7 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── 栄養寒天 Ｇ： 良好、平坦、薄黄味茶（4-8-8 ） (DIFCO) ＡＭ： 原痕跡的に形成、白 Ｒ： 薄黄（3-9-8 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── イーストエキス・ Ｇ： 良好、しわ状、鈍黄（10- 7-9 ） 麦芽エキス寒天 ＡＭ： 原痕跡的に形成、白 (ISP 2) Ｒ： 鈍黄味橙（10- 7-8 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── オートミール寒天 Ｇ： 余り良くない、平坦、薄黄味茶（4-8-9) (ISP 3) ＡＭ： 原痕跡的に形成、白 Ｒ： 薄黄（4-9-9 ） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── 水寒天 Ｇ： 余り良くない、平坦、黄味灰（1-9-10） ＡＭ： 余り良くない、白 Ｒ： 黄味灰（1-9-10） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── ポテトエキス・ Ｇ： 余り良くない、平坦、黄味灰（1-9-10） 人参エキス寒天 ＡＭ： 原痕跡的に形成、白 Ｒ： 黄味灰（2-9-11） ＳＰ： 産生せず ─────────────────────────────────── Ｇ：生育，ＡＭ：気菌糸，Ｒ：裏面，ＳＰ：可溶性色素。
【００３８】３．生理学的性質 28 ℃で培養後、2 ないし 21 日間に観察した SANK 60
791 株の生理学的性質は表５に示した通りである。
791 株の生理学的性質は表５に示した通りである。
【００３９】
【表５】 ─────────────────────────────────── 澱粉の水解 陰 性 ゼラチンの液化 陽 性 硝酸塩の還元 陽 性 ミルクの凝固 陽 性 ミルクのペプトン化 陰 性 メラニン様色素生産性 (培地1)* 陰 性 (培地2)* 陰 性 (培地3)* 陰 性 基質分解性 カゼイン 陰 性 チロシン 陽 性 キサンチン 陰 性 食塩耐性 (培地4)* 3 ％ ─────────────────────────────────── ＊：培地１；トリプトン・イーストエキス・ブロス(ISP
1) 培地２；ペプトン・イーストエキス・鉄寒天(ISP 6) 培地３；チロシン寒天(ISP 7) 培地４；イーストエキス・麦芽エキス寒天(ISP 2) 。
1) 培地２；ペプトン・イーストエキス・鉄寒天(ISP 6) 培地３；チロシン寒天(ISP 7) 培地４；イーストエキス・麦芽エキス寒天(ISP 2) 。
【００４０】また、プリドハム・ゴトリーブ寒天培地
（ISP 9 ）を使用して、28 ℃、14日間培養後に観察し
た SANK 60791 株の炭素源の資化性は表６に示す通りで
ある。
（ISP 9 ）を使用して、28 ℃、14日間培養後に観察し
た SANK 60791 株の炭素源の資化性は表６に示す通りで
ある。
【００４１】
【表６】 ─────────────────────────────────── D-グルコース 利用する D-フルクトース 利用する L-アラビノース 弱く利用する L-ラムノース 利用する D-キシロース 利用する シュクロース 利用する イノシトール 利用しない ラフィノース 利用する D-マンニトール 利用する 対 照 利用しない ──────────────────────────────────。
【００４２】４．菌体成分について SANK 60791 株の細胞壁はビー・ベッカーらの方法〔B.
Becker et al.、アプライド マイクロバイオロジー
（ Applied Microbiology）、 12 巻、 421〜423 頁、
1984年〕に従い検討した結果、メソ−ジアミノピメリン
酸が検出された。また、SANK 60791 株の全細胞壁中の
糖成分をエム・ピー・レシェバリエの方法〔M. P. Lech
evalier 、ジャーナル オブ ラボラトリー アンド
クリニカルメディシン（ Journal of Laboratory & Cli
nical Medicine）、 71 巻、834 頁、1968 年〕に従い
検討した結果、アラビノースが検出された。ミコール酸
の存在は確認されなかった。細胞壁ペプチドグリカン中
のアシル型はアセチル型であった。また、主要メナキノ
ン成分として MK −9 （H4）が検出された。
Becker et al.、アプライド マイクロバイオロジー
（ Applied Microbiology）、 12 巻、 421〜423 頁、
1984年〕に従い検討した結果、メソ−ジアミノピメリン
酸が検出された。また、SANK 60791 株の全細胞壁中の
糖成分をエム・ピー・レシェバリエの方法〔M. P. Lech
evalier 、ジャーナル オブ ラボラトリー アンド
クリニカルメディシン（ Journal of Laboratory & Cli
nical Medicine）、 71 巻、834 頁、1968 年〕に従い
検討した結果、アラビノースが検出された。ミコール酸
の存在は確認されなかった。細胞壁ペプチドグリカン中
のアシル型はアセチル型であった。また、主要メナキノ
ン成分として MK −9 （H4）が検出された。
【００４３】以上から、本菌株は放線菌の中でもアミコ
ラトプシス属に属する放線菌であると判断するのが妥当
であると考えられ、アミコラトプシス エスピー（ Amy
colatopsis sp.）SANK 60791 株（寄託機関、工業技術
院微生物工業技術研究所：寄託番号、微工研条寄第 351
3 号(FERM BP-3513): 原寄託日、1991 年 8 月 14
日）と命名された。
ラトプシス属に属する放線菌であると判断するのが妥当
であると考えられ、アミコラトプシス エスピー（ Amy
colatopsis sp.）SANK 60791 株（寄託機関、工業技術
院微生物工業技術研究所：寄託番号、微工研条寄第 351
3 号(FERM BP-3513): 原寄託日、1991 年 8 月 14
日）と命名された。
【００４４】なお、SANK 62390 株および SANK 60791
株の同定はＩＳＰ〔ジ・インターナショナル・ストレプ
トマイセス・プロジェクト（The International Strept
omyces Project）〕基準、バージーズ・マニュアル・オ
ブ・システマテック・バクテリオロジー（Bergey's Man
ual of Systematic Bacteriology）第 4 巻、ジ・アク
チノミセテス（The Actinomycetes ）第 2 巻および放
線菌に関する最近の文献によって行った。
株の同定はＩＳＰ〔ジ・インターナショナル・ストレプ
トマイセス・プロジェクト（The International Strept
omyces Project）〕基準、バージーズ・マニュアル・オ
ブ・システマテック・バクテリオロジー（Bergey's Man
ual of Systematic Bacteriology）第 4 巻、ジ・アク
チノミセテス（The Actinomycetes ）第 2 巻および放
線菌に関する最近の文献によって行った。
【００４５】周知のとおり、放線菌は自然界において、
または人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照
射、化学薬品処理等）により、変異を起こし易く、本発
明のSANK 62390 株および SANK 60791 株もこの点は同
じである。本発明にいう SANK 62390 株および SANK
60791 株はそのすべての変異株を包含する。また、これ
らの変異株の中には、遺伝学的方法、例えば、組み替
え、形質導入、形質転換等により得られたものも包含さ
れる。即ち、化合物（ＩＩ）を生産する、SANK62390 株
および SANK 60791 株、その変異株およびそれらと明確
に区別されない菌株は、すべて SANK 62390 株および
SANK 60791 株に包含されるものである。
または人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照
射、化学薬品処理等）により、変異を起こし易く、本発
明のSANK 62390 株および SANK 60791 株もこの点は同
じである。本発明にいう SANK 62390 株および SANK
60791 株はそのすべての変異株を包含する。また、これ
らの変異株の中には、遺伝学的方法、例えば、組み替
え、形質導入、形質転換等により得られたものも包含さ
れる。即ち、化合物（ＩＩ）を生産する、SANK62390 株
および SANK 60791 株、その変異株およびそれらと明確
に区別されない菌株は、すべて SANK 62390 株および
SANK 60791 株に包含されるものである。
【００４６】化合物（ＩＩ）を得るため、これらの微生
物の培養は、他の醗酵生成物を生産するために用いられ
るような培地中で行う。このような培地中には、微生物
が同化できる炭素源、窒素源及び無機塩を含有する。
物の培養は、他の醗酵生成物を生産するために用いられ
るような培地中で行う。このような培地中には、微生物
が同化できる炭素源、窒素源及び無機塩を含有する。
【００４７】一般に、炭素源としてグルコース、フラク
トース、マルトース、シュークロース、マンニトール、
グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウ
モロコシデンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆
粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸等を単一に、ある
いは併用して用いる事ができる。一般には、培地量の1
−10 重量％で変量する。
トース、マルトース、シュークロース、マンニトール、
グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウ
モロコシデンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆
粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸等を単一に、ある
いは併用して用いる事ができる。一般には、培地量の1
−10 重量％で変量する。
【００４８】窒素源としては、一般に蛋白質を含有する
物質を醗酵工程に用いる。適当な窒素源としては、大豆
粉、フスマ、落花生粉、綿実油、綿実粉、カゼイン加水
分解物、ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、
ペプトン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マル
トエキス、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム等である。窒素源は、単一または併用して培
地量の 0.2−6 重量％の範囲で用いる。
物質を醗酵工程に用いる。適当な窒素源としては、大豆
粉、フスマ、落花生粉、綿実油、綿実粉、カゼイン加水
分解物、ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、
ペプトン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マル
トエキス、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム等である。窒素源は、単一または併用して培
地量の 0.2−6 重量％の範囲で用いる。
【００４９】培地中にとり入れる栄養無機塩は、ナトリ
ウム、アンモニウム、カルシウム、フォスフェート、サ
ルフェート、クロライド、カーボネート等のイオンを得
ることのできる通常の塩類である。また、カリウム、カ
ルシウム、コバルト、マンガン、鉄、マグネシウム等の
微量の金属も含む。
ウム、アンモニウム、カルシウム、フォスフェート、サ
ルフェート、クロライド、カーボネート等のイオンを得
ることのできる通常の塩類である。また、カリウム、カ
ルシウム、コバルト、マンガン、鉄、マグネシウム等の
微量の金属も含む。
【００５０】液体培養に際しては、シリコン油、植物
油、界面活性剤等が、消泡剤として使用される。
油、界面活性剤等が、消泡剤として使用される。
【００５１】SANK 62390 株または SANK 60791 株を培
養し、化合物（ＩＩ）を生産する培地の pH は、 5.0−
8.0 に変化できる。
養し、化合物（ＩＩ）を生産する培地の pH は、 5.0−
8.0 に変化できる。
【００５２】菌の生育は 22 ℃から 38 ℃の範囲が良好
であり、更に化合物（ＩＩ）の生産には 22 ℃から 28
℃が好適である。化合物（ＩＩ）は、好気的に培養して
得られるが、通常用いられる好気的培養法、例えば固体
培養法、振盪培養法、通気撹拌培養法等が用いられる。
であり、更に化合物（ＩＩ）の生産には 22 ℃から 28
℃が好適である。化合物（ＩＩ）は、好気的に培養して
得られるが、通常用いられる好気的培養法、例えば固体
培養法、振盪培養法、通気撹拌培養法等が用いられる。
【００５３】小規模な培養においては、 28 ℃で数日間
振盪培養を行うのが良好である。
振盪培養を行うのが良好である。
【００５４】培養は、バッフル( 水流調節壁) のついた
三角フラスコ中で、 1−2 段階の種の発育工程により開
始する。種発育段階の培地は、炭素源および窒素源を併
用できる。種フラスコは定温インキュベーター中で 28
℃、 7 日間振盪するか、または充分に成長するまで振
盪する。成長した種は第二の種培地または生産培地に接
種するのに用いる。中間の発育工程を用いる場合には、
本質的に同様の方法で成長させ生産培地に接種するため
に、それを部分的に用いる。接種したフラスコを一定温
度で数日間振盪し、インキュベーションが終わったらフ
ラスコの含有物を遠心分離またはろ過する。
三角フラスコ中で、 1−2 段階の種の発育工程により開
始する。種発育段階の培地は、炭素源および窒素源を併
用できる。種フラスコは定温インキュベーター中で 28
℃、 7 日間振盪するか、または充分に成長するまで振
盪する。成長した種は第二の種培地または生産培地に接
種するのに用いる。中間の発育工程を用いる場合には、
本質的に同様の方法で成長させ生産培地に接種するため
に、それを部分的に用いる。接種したフラスコを一定温
度で数日間振盪し、インキュベーションが終わったらフ
ラスコの含有物を遠心分離またはろ過する。
【００５５】大量培養の場合には、撹拌機、通気装置を
付けた適当なタンクで培養するのが好ましい。この方法
によれば、栄養培地をタンクの中で作成できる。栄養培
地を125 ℃ まで加熱して滅菌し、冷却後、滅菌培地に
あらかじめ成長させてあった種を接種する。培養は 28
℃で通気撹拌して行う。この方法は、多量の化合物を得
るのに適している。
付けた適当なタンクで培養するのが好ましい。この方法
によれば、栄養培地をタンクの中で作成できる。栄養培
地を125 ℃ まで加熱して滅菌し、冷却後、滅菌培地に
あらかじめ成長させてあった種を接種する。培養は 28
℃で通気撹拌して行う。この方法は、多量の化合物を得
るのに適している。
【００５６】培養の経過に伴って生産される化合物（Ｉ
Ｉ）の量の経時変化を知るには、例えば培養ろ液中の化
合物（ＩＩ）をアンバーライト IRC−50(NH4 +)に吸着さ
せ、水洗後、0.5 N アンモニア水溶液で溶出し、濃縮
し、凍結乾燥した粉末中の化合物（ＩＩ）の量を高速液
体クロマトグラフィーに付して測定するか、または化合
物（ＩＩ）をアセチル化後、ガスクロマト−マススペク
トロメトリー（ＧＣ／ＭＳ）により測定する。通常は 9
6 時間から 168 時間の培養で化合物（ＩＩ）の生産量
は最高値に達する。
Ｉ）の量の経時変化を知るには、例えば培養ろ液中の化
合物（ＩＩ）をアンバーライト IRC−50(NH4 +)に吸着さ
せ、水洗後、0.5 N アンモニア水溶液で溶出し、濃縮
し、凍結乾燥した粉末中の化合物（ＩＩ）の量を高速液
体クロマトグラフィーに付して測定するか、または化合
物（ＩＩ）をアセチル化後、ガスクロマト−マススペク
トロメトリー（ＧＣ／ＭＳ）により測定する。通常は 9
6 時間から 168 時間の培養で化合物（ＩＩ）の生産量
は最高値に達する。
【００５７】培養終了後、培養液中の液体部分 (および
菌体内) に存在する化合物（ＩＩ）は、菌体、その他の
固形部分を珪藻土をろ過助剤とするろ過操作または遠心
分離によって分別し、そのろ液または上清中に存在する
化合物（ＩＩ）を、その物理化学的性状を利用し抽出精
製することにより得られる。
菌体内) に存在する化合物（ＩＩ）は、菌体、その他の
固形部分を珪藻土をろ過助剤とするろ過操作または遠心
分離によって分別し、そのろ液または上清中に存在する
化合物（ＩＩ）を、その物理化学的性状を利用し抽出精
製することにより得られる。
【００５８】例えば、ろ液または上清中に存在する化合
物（ＩＩ）をイオン交換樹脂、例えばアンバーライト I
RC−50、CG−50、ダウエックス 50W×4 、ダウエックス
SBR−P の層を通過させて不純物を吸着させて取り除く
か、または化合物（ＩＩ）を吸着させた後、アンモニア
水または塩酸を用いて溶出させることにより得られる。
あるいは吸着剤として、例えば活性炭または吸着用樹脂
であるアンバーライトXAD−2 、XAD −4 等や、ダイヤ
イオンHP−10、HP−20、 CHP−20、HP−50 等が使用さ
れる。化合物（ＩＩ）を含む液を上記のごとき吸着剤の
層を通過させて不純物を吸着させて取り除くか、または
化合物（ＩＩ）を吸着させた後、メタノール水、アセト
ン水等の水と有機溶剤との混合溶剤を用いて溶出させる
ことにより得られる。
物（ＩＩ）をイオン交換樹脂、例えばアンバーライト I
RC−50、CG−50、ダウエックス 50W×4 、ダウエックス
SBR−P の層を通過させて不純物を吸着させて取り除く
か、または化合物（ＩＩ）を吸着させた後、アンモニア
水または塩酸を用いて溶出させることにより得られる。
あるいは吸着剤として、例えば活性炭または吸着用樹脂
であるアンバーライトXAD−2 、XAD −4 等や、ダイヤ
イオンHP−10、HP−20、 CHP−20、HP−50 等が使用さ
れる。化合物（ＩＩ）を含む液を上記のごとき吸着剤の
層を通過させて不純物を吸着させて取り除くか、または
化合物（ＩＩ）を吸着させた後、メタノール水、アセト
ン水等の水と有機溶剤との混合溶剤を用いて溶出させる
ことにより得られる。
【００５９】このようにして得られた化合物（ＩＩ）
は、更にシリカゲル、フロリジルのような担体を用いた
吸着カラムクロマトグラフィー、アビセル、セファデッ
クスLH−20 等を用いた分配カラムクロマトグラフィー
および順相、逆相カラム、イオン交換カラムを用いた高
速液体クロマトグラフィー等で精製することができる。
は、更にシリカゲル、フロリジルのような担体を用いた
吸着カラムクロマトグラフィー、アビセル、セファデッ
クスLH−20 等を用いた分配カラムクロマトグラフィー
および順相、逆相カラム、イオン交換カラムを用いた高
速液体クロマトグラフィー等で精製することができる。
【００６０】なお、化合物（ＩＩ）の生産菌であるミク
ロモノスポラ エスピー SANK 62390 株の培養におい
て、化合物（ＩＩ）と共にトレハゾリン（Trehazolin）
（特開平 4−99792 号）も生産される。
ロモノスポラ エスピー SANK 62390 株の培養におい
て、化合物（ＩＩ）と共にトレハゾリン（Trehazolin）
（特開平 4−99792 号）も生産される。
【００６１】
【作用】本発明の製造法によって得られる化合物（Ｉ）
は、文献未載の新規化合物であり、β−グルコシダーゼ
阻害活性を有する。従って、本化合物は抗腫瘍薬、抗エ
イズ薬等として有用である。本発明の製造法によって得
られる化合物（Ｉ）を医薬として用いる場合、常法に従
ってそれ自体または適宜の薬学的に許容される担体、賦
形剤、希釈剤と混合し、粉末、顆粒、錠剤、カプセル
剤、注射剤などの形態で経口的または非経口的に安全に
投与することが出来る。投与量は対象疾患、投与経路お
よび投与回数などにより異なるが、例えば成人に対して
は 1 日 1 mg から 1000 mg を、症状に応じて 1 回
または数回に分けて投与するのが好ましい。
は、文献未載の新規化合物であり、β−グルコシダーゼ
阻害活性を有する。従って、本化合物は抗腫瘍薬、抗エ
イズ薬等として有用である。本発明の製造法によって得
られる化合物（Ｉ）を医薬として用いる場合、常法に従
ってそれ自体または適宜の薬学的に許容される担体、賦
形剤、希釈剤と混合し、粉末、顆粒、錠剤、カプセル
剤、注射剤などの形態で経口的または非経口的に安全に
投与することが出来る。投与量は対象疾患、投与経路お
よび投与回数などにより異なるが、例えば成人に対して
は 1 日 1 mg から 1000 mg を、症状に応じて 1 回
または数回に分けて投与するのが好ましい。
【００６２】
【実施例】次に、実施例および参考例を挙げて本発明を
更に詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるもの
ではない。
更に詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるもの
ではない。
【００６３】実施例 １．化合物（Ｉ）の製造 化合物（ＩＩ）の粉末 16 mg を 6N 塩酸 2 ml に溶解
しアンプルに入れ密封し 100 ℃で 24 時間加水分解を
行なった。加水分解液に水を加え、減圧下濃縮乾固を繰
り返し行ない、塩酸を留去後、水 20 ml に溶解し、pH
を 6.0 に調整してアンバーライトCG-50(NH4 +) 20 m
l のカラムに通し反応溶液中の化合物（Ｉ）を吸着さ
せ、脱イオン水 60 ml で洗浄後、0.2 N アンモニア水
で溶出を行なった。溶出液を減圧下濃縮すると、濃縮液
5 ml が得られた。得られた濃縮液をダウエックス 1×
2(OH-) 50 ml を充填したカラムに付し、200 ml の脱
イオン水で水洗した。次いで 20 ％メタノール水で 5 m
l づつ分画して溶出した。β−グルコシダーゼ阻害活性
を有するフラクション番号 5 から 23 を集め、減圧下
で濃縮し凍結乾燥することにより白色粉末の化合物
（Ｉ）6.2 mg が得られた。
しアンプルに入れ密封し 100 ℃で 24 時間加水分解を
行なった。加水分解液に水を加え、減圧下濃縮乾固を繰
り返し行ない、塩酸を留去後、水 20 ml に溶解し、pH
を 6.0 に調整してアンバーライトCG-50(NH4 +) 20 m
l のカラムに通し反応溶液中の化合物（Ｉ）を吸着さ
せ、脱イオン水 60 ml で洗浄後、0.2 N アンモニア水
で溶出を行なった。溶出液を減圧下濃縮すると、濃縮液
5 ml が得られた。得られた濃縮液をダウエックス 1×
2(OH-) 50 ml を充填したカラムに付し、200 ml の脱
イオン水で水洗した。次いで 20 ％メタノール水で 5 m
l づつ分画して溶出した。β−グルコシダーゼ阻害活性
を有するフラクション番号 5 から 23 を集め、減圧下
で濃縮し凍結乾燥することにより白色粉末の化合物
（Ｉ）6.2 mg が得られた。
【００６４】
参考例 １．化合物（ＩＩ）の製造 （Ａ）培養 アミコラトプシス エスピー SANK 60791 株を培地組
成−1 で示される培地80 ml を含む 500 ml 容三角フラ
スコ( バッフル付) 2 本にスラントより一白金耳接種
し、 210 rpm の回転振盪培養機で 28 ℃で 96 時間培養
した。 培地組成−1 グルコース 1 ％ シュクロース 1 ％ グリセリン 1 ％ オートミール 0.5 ％ 生イースト 1 ％ 大豆粉 2 ％ カザミノ酸 0.5 ％ ＣａＣＯ3 0.1 ％ ＣＢ−４４２ 0.01 ％ ─────────────────────────── 滅菌前 pH 7.0 。
成−1 で示される培地80 ml を含む 500 ml 容三角フラ
スコ( バッフル付) 2 本にスラントより一白金耳接種
し、 210 rpm の回転振盪培養機で 28 ℃で 96 時間培養
した。 培地組成−1 グルコース 1 ％ シュクロース 1 ％ グリセリン 1 ％ オートミール 0.5 ％ 生イースト 1 ％ 大豆粉 2 ％ カザミノ酸 0.5 ％ ＣａＣＯ3 0.1 ％ ＣＢ−４４２ 0.01 ％ ─────────────────────────── 滅菌前 pH 7.0 。
【００６５】培地組成−2 で示される培地を 30 リット
ル容ジャーファーメンター 2基に各 15 リットルづつ仕
込み、 120 ℃で 30 分間加熱滅菌した。次いで、これ
を28 ℃に冷却した後に、 種培養液 75 ml を接種し
た。次いで、これを溶存酸素濃度を 2 ppm に保持する
ように回転数を 100−400 rpm の範囲で調整し、 通気量
7.5 リットル／分、 28 ℃ で 144 時間攪拌培養し
た。 培地組成−2 グルコース 2 ％ 可溶性デンプン 1 ％ 生イースト 0.9 ％ 極東肉エキス 0.5 ％ ポリペプトン 0.5 ％ ＮａＣｌ 0.5 ％ ＣａＣＯ3 0.3 ％ ＣＢ−４４２ 0.01 ％ ─────────────────────────── 滅菌前 pH 7.2。
ル容ジャーファーメンター 2基に各 15 リットルづつ仕
込み、 120 ℃で 30 分間加熱滅菌した。次いで、これ
を28 ℃に冷却した後に、 種培養液 75 ml を接種し
た。次いで、これを溶存酸素濃度を 2 ppm に保持する
ように回転数を 100−400 rpm の範囲で調整し、 通気量
7.5 リットル／分、 28 ℃ で 144 時間攪拌培養し
た。 培地組成−2 グルコース 2 ％ 可溶性デンプン 1 ％ 生イースト 0.9 ％ 極東肉エキス 0.5 ％ ポリペプトン 0.5 ％ ＮａＣｌ 0.5 ％ ＣａＣＯ3 0.3 ％ ＣＢ−４４２ 0.01 ％ ─────────────────────────── 滅菌前 pH 7.2。
【００６６】（Ｂ）単離 得られた培養液 25 リットルにろ過助剤としてセライト
545（ジョンズ マンビル プロダクト コーポレーシ
ョン製) を 1.5 kg 加えてろ過しろ液 23 リットルを得
た。 塩酸を用いて pH 6.0 に調整したろ液をアンバーラ
イト IRC-50(NH4 +) 3リットルを充填したカラムに通じ
て化合物（ＩＩ）を吸着させ、 脱イオン水 15 リットル
で洗浄後 0.5 N アンモニア水溶液で溶出を行った。 溶
出液のpH がアルカリ性になってから 4.5 リットルを
集め、減圧下濃縮し、 200 mlとした。 次いで濃縮液を
ダウエックス 1×2 (OH-) を 450 ml 充填したカラムに
通し脱イオン水で展開溶出した。 最初の流出液 800 ml
を除いた後、 続く流出液を 20 mlづつ分画した。 後述の
定量法により分析を行い化合物（ＩＩ）の認められたフ
ラクション番号 60 から 90 を集めた。 得られた画分を
減圧下で濃縮、 凍結乾燥すると白色粉末の化合物（Ｉ
Ｉ） 16.6 mg が得られた。
545（ジョンズ マンビル プロダクト コーポレーシ
ョン製) を 1.5 kg 加えてろ過しろ液 23 リットルを得
た。 塩酸を用いて pH 6.0 に調整したろ液をアンバーラ
イト IRC-50(NH4 +) 3リットルを充填したカラムに通じ
て化合物（ＩＩ）を吸着させ、 脱イオン水 15 リットル
で洗浄後 0.5 N アンモニア水溶液で溶出を行った。 溶
出液のpH がアルカリ性になってから 4.5 リットルを
集め、減圧下濃縮し、 200 mlとした。 次いで濃縮液を
ダウエックス 1×2 (OH-) を 450 ml 充填したカラムに
通し脱イオン水で展開溶出した。 最初の流出液 800 ml
を除いた後、 続く流出液を 20 mlづつ分画した。 後述の
定量法により分析を行い化合物（ＩＩ）の認められたフ
ラクション番号 60 から 90 を集めた。 得られた画分を
減圧下で濃縮、 凍結乾燥すると白色粉末の化合物（Ｉ
Ｉ） 16.6 mg が得られた。
【００６７】化合物（ＩＩ）の定量は次の方法で行なっ
た。 高速液体クロマトグラフィーによる定量法 分離カラム；アサヒパック ES−502 C （旭化成工業
（株）社製） 移動相； 20 mM 酢酸アンモニウム(pH 8.5) + 50 mM
食塩水 流速； 1 ml ／分 検出波長； 210 nm 温度； 25 ℃ 保持時間； 8.39 分。
た。 高速液体クロマトグラフィーによる定量法 分離カラム；アサヒパック ES−502 C （旭化成工業
（株）社製） 移動相； 20 mM 酢酸アンモニウム(pH 8.5) + 50 mM
食塩水 流速； 1 ml ／分 検出波長； 210 nm 温度； 25 ℃ 保持時間； 8.39 分。
【００６８】ＧＣ／ＭＳによる定量法 サンプルを一定の液量にした後、 その 10 μl をアセチ
ル化するために反応用のバイアルにとり、乾固した。 残
渣に無水酢酸 30 μl とピリジン 50 μlを加え 60 ℃
で 40 分間加熱した。 窒素ガスで過剰の試薬を留去し、
内部標準物質（ペンタアセチル−1 −アミノ−1 −デ
オキシ−β−D −グルコース）を一定量加え、酢酸エチ
ル 100 μl に溶かしてＧＣ／ＭＳに注入するサンプル
とした。 分析条件は、 ガスクロマトグラフィ−カラムに
ヒューズドシリカキャピラリカラム DB-5 （ 15 m x φ
0.25 mm 、0.25 μm 薄膜、J & W SCIENTIFIC社製）
を用い、 キャリアーガスとしてヘリウムを用い 5 psi
で流した。 インジェクターとインターフェースの温度を
250 ℃に設定した。 サンプル 2 μl をスプリットレ
スで注入し、 カラム温度を 60 ℃ から 25 ℃/ 分で 2
80 ℃まで昇温した。
ル化するために反応用のバイアルにとり、乾固した。 残
渣に無水酢酸 30 μl とピリジン 50 μlを加え 60 ℃
で 40 分間加熱した。 窒素ガスで過剰の試薬を留去し、
内部標準物質（ペンタアセチル−1 −アミノ−1 −デ
オキシ−β−D −グルコース）を一定量加え、酢酸エチ
ル 100 μl に溶かしてＧＣ／ＭＳに注入するサンプル
とした。 分析条件は、 ガスクロマトグラフィ−カラムに
ヒューズドシリカキャピラリカラム DB-5 （ 15 m x φ
0.25 mm 、0.25 μm 薄膜、J & W SCIENTIFIC社製）
を用い、 キャリアーガスとしてヘリウムを用い 5 psi
で流した。 インジェクターとインターフェースの温度を
250 ℃に設定した。 サンプル 2 μl をスプリットレ
スで注入し、 カラム温度を 60 ℃ から 25 ℃/ 分で 2
80 ℃まで昇温した。
【００６９】四重極型質量分析計 Trio-1 (VG 社製) を
用い、 メタンガスを用いる化学イオン化法で負イオンを
検出した。 即ち、 イオン源温度 180 ℃、 イオン化エネ
ルギー70 eV、 イオン源圧力 1x10-4 トールで検出され
る保持時間 約 8.8 分のm/z 388 の内部標準物質、 約
9.6 分の m/z 413 の化合物（ＩＩ）( 共にペンタア
セテート) の負イオンピークを定量に用いた。 内部標準
法により化合物（ＩＩ）の含有量を算出した。
用い、 メタンガスを用いる化学イオン化法で負イオンを
検出した。 即ち、 イオン源温度 180 ℃、 イオン化エネ
ルギー70 eV、 イオン源圧力 1x10-4 トールで検出され
る保持時間 約 8.8 分のm/z 388 の内部標準物質、 約
9.6 分の m/z 413 の化合物（ＩＩ）( 共にペンタア
セテート) の負イオンピークを定量に用いた。 内部標準
法により化合物（ＩＩ）の含有量を算出した。
【００７０】得られた化合物（ＩＩ）は次のような特性
を有する。 １）色と形状：塩基性白色粉末 ２）溶解性：水に可溶。アセトン、クロロホルムに不
溶。 ３）分子式：Ｃ7 Ｈ12Ｎ2 Ｏ5 ４）分子量： 204（FAB-MSスペクトルにより測定） ５）比旋光度： [α]D 25 ＋10.0°(c 0.51,水） ６）紫外線吸収スペクトル：λmax nm(E(1cm,1%)) 水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは、210 nmよ
り長波長側には特徴的な吸収を示さない。 ７）赤外線吸収スペクトル：νmax(KBr) cm-1 3358、1668、1528、1398、1066 ８） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：δppm 重水中、内部基準にＴＳＰ（トリメチルシリルプロピオ
ン酸ナトリウム）を使用して測定した核磁気共鳴スペク
トル（500 MHz ）は、次の通りである。 3.73(1H,d,J=11.72Hz)、3.82(1H,d,J=12.21Hz)、3.97(1
H,d,J=4.4Hz)、4.23(1H,dd,J=4.4 および 2.44Hz)、4.
37(1H,d,J=8.79Hz) 、5.03(1H,dd,J=8.79 および ２．
４４Ｈｚ） ９）高速液体クロマトグラフィー 分離カラム；アサヒパック ＥＳ−502 C （旭化成工業
（株）製） 移動相； 20 mM 酢酸アンモニウム(pH 8.5) + 50 mM
食塩水 流速； 1 ml ／分 検出波長； 210 nm 温度； 25 ℃ 保持時間； 8.39 分。
を有する。 １）色と形状：塩基性白色粉末 ２）溶解性：水に可溶。アセトン、クロロホルムに不
溶。 ３）分子式：Ｃ7 Ｈ12Ｎ2 Ｏ5 ４）分子量： 204（FAB-MSスペクトルにより測定） ５）比旋光度： [α]D 25 ＋10.0°(c 0.51,水） ６）紫外線吸収スペクトル：λmax nm(E(1cm,1%)) 水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは、210 nmよ
り長波長側には特徴的な吸収を示さない。 ７）赤外線吸収スペクトル：νmax(KBr) cm-1 3358、1668、1528、1398、1066 ８） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：δppm 重水中、内部基準にＴＳＰ（トリメチルシリルプロピオ
ン酸ナトリウム）を使用して測定した核磁気共鳴スペク
トル（500 MHz ）は、次の通りである。 3.73(1H,d,J=11.72Hz)、3.82(1H,d,J=12.21Hz)、3.97(1
H,d,J=4.4Hz)、4.23(1H,dd,J=4.4 および 2.44Hz)、4.
37(1H,d,J=8.79Hz) 、5.03(1H,dd,J=8.79 および ２．
４４Ｈｚ） ９）高速液体クロマトグラフィー 分離カラム；アサヒパック ＥＳ−502 C （旭化成工業
（株）製） 移動相； 20 mM 酢酸アンモニウム(pH 8.5) + 50 mM
食塩水 流速； 1 ml ／分 検出波長； 210 nm 温度； 25 ℃ 保持時間； 8.39 分。
【００７１】参考例 ２．化合物（ＩＩ）の製造 （Ａ）培養 ミクロモノスポラ エスピー SANK 62390 株のスラント
1 本を生理食塩水10 ml でホモゲナイズし、 菌の懸濁
液を調製して、 その 1ml を培地組成−3 で示される培
地 500 ml を含む 2リットル容三角フラスコ 2 本に接
種して、210 rpm の回転振盪培養機により 28 ℃ で 96
時間培養して初代種培養液とした。
1 本を生理食塩水10 ml でホモゲナイズし、 菌の懸濁
液を調製して、 その 1ml を培地組成−3 で示される培
地 500 ml を含む 2リットル容三角フラスコ 2 本に接
種して、210 rpm の回転振盪培養機により 28 ℃ で 96
時間培養して初代種培養液とした。
【００７２】 培地組成−3 グルコース 2 ％ イーストエキス(difco) 0.5 ％ ポリペプトン 0.5 ％ ＣａＣＯ3 0.1 ％ ＣＢ−４４２ 0.01 ％ ─────────────────────────── 滅菌前 pH 7.2。
【００７３】培地組成−3 で示される培地 30 リットル
を 60 リットル容ジャーファーメンターに仕込み、 120
℃ で 30 分間加熱滅菌した。次いで、これを 28 ℃
に冷却した後に、 初代種培養液 600 ml を接種した。次
いで、これを回転数 165rpm、 通気量 15 リットル／分
で 28 ℃、 48 時間攪拌培養して、 第 2 代種培養液を
調製した。培地組成−4 で示される培地 300 リットル
を 600 リットル容タンクに仕込み、 120 ℃で 35 分間
加熱滅菌した。次いで、これを 28 ℃に冷却した後に、
第2 代種培養液 15 リットルを接種した。次いで、こ
れを溶存酸素濃度を 2 ppmに保つように回転数を 82ー14
2 rpm の範囲で調整し、 通気量 150 リットル／分、 内
圧 0.5 kg ／cm2 、 28℃ で 144 時間攪拌培養した。
を 60 リットル容ジャーファーメンターに仕込み、 120
℃ で 30 分間加熱滅菌した。次いで、これを 28 ℃
に冷却した後に、 初代種培養液 600 ml を接種した。次
いで、これを回転数 165rpm、 通気量 15 リットル／分
で 28 ℃、 48 時間攪拌培養して、 第 2 代種培養液を
調製した。培地組成−4 で示される培地 300 リットル
を 600 リットル容タンクに仕込み、 120 ℃で 35 分間
加熱滅菌した。次いで、これを 28 ℃に冷却した後に、
第2 代種培養液 15 リットルを接種した。次いで、こ
れを溶存酸素濃度を 2 ppmに保つように回転数を 82ー14
2 rpm の範囲で調整し、 通気量 150 リットル／分、 内
圧 0.5 kg ／cm2 、 28℃ で 144 時間攪拌培養した。
【００７４】 培地組成−4 グルコース 8 ％ （別滅菌 120 ℃、15 分） ラスターゲンＦＫ 2 ％ 生イースト 1.8 ％ 極東肉エキス 1 ％ ポリペプトン 1 ％ ＮａＣｌ 0.5 ％ ＣａＣＯ3 0.3 ％ Ｋ2 ＨＰＯ4 0.25 ％ ＣＢ−４４２ 0.02 ％ ─────────────────────────── 滅菌前 pH 7.2。
【００７５】（Ｂ）単離 得られた培養液 300リットルにろ過助剤としてセライト
545(ジョンズ マンビル プロダクト コーポレーショ
ン製) を 15 kg 加えてろ過することによりろ液 290
リットルを得た。 そのうち 20 リットルを塩酸で pH 6.
0 に調整し、 アンバーライト IRC-50 (NH4 +) 3リットル
を充填したカラムに通じて化合物（ＩＩ）を吸着させ、
脱イオン水 15 リットルで洗浄後 0.5 N アンモニア水
溶液で溶出を行った。 溶出液の pH がアルカリ性になっ
てから 4.5リットルを集め減圧下濃縮し 150 ml とし
た。 次いで、濃縮液をダウエックス 1 X 2 (OH-) 500 m
l を充填したカラムに通し脱イオン水で展開溶出した。
最初の流出液 1 リットルを除いた後、 続く流出液を 2
0 ml づつ分画した。 参考例 １．に記載の定量法によ
り分析を行い、化合物（ＩＩ）の認められるフラクショ
ン番号 58 から 80 を集めた。 活性画分を減圧下で濃
縮、 凍結乾燥すると化合物（ＩＩ）の粗粉末 9.6mg が
得られた。 この粉末を再度、 ダウエックス 1 X 2 (OH-)
100 ml のカラムで精製すると白色粉末の化合物（Ｉ
Ｉ） 4.8 mg が得られた。得られた化合物（ＩＩ）の特
性は、参考例 １．で得られたものと同じであった。
545(ジョンズ マンビル プロダクト コーポレーショ
ン製) を 15 kg 加えてろ過することによりろ液 290
リットルを得た。 そのうち 20 リットルを塩酸で pH 6.
0 に調整し、 アンバーライト IRC-50 (NH4 +) 3リットル
を充填したカラムに通じて化合物（ＩＩ）を吸着させ、
脱イオン水 15 リットルで洗浄後 0.5 N アンモニア水
溶液で溶出を行った。 溶出液の pH がアルカリ性になっ
てから 4.5リットルを集め減圧下濃縮し 150 ml とし
た。 次いで、濃縮液をダウエックス 1 X 2 (OH-) 500 m
l を充填したカラムに通し脱イオン水で展開溶出した。
最初の流出液 1 リットルを除いた後、 続く流出液を 2
0 ml づつ分画した。 参考例 １．に記載の定量法によ
り分析を行い、化合物（ＩＩ）の認められるフラクショ
ン番号 58 から 80 を集めた。 活性画分を減圧下で濃
縮、 凍結乾燥すると化合物（ＩＩ）の粗粉末 9.6mg が
得られた。 この粉末を再度、 ダウエックス 1 X 2 (OH-)
100 ml のカラムで精製すると白色粉末の化合物（Ｉ
Ｉ） 4.8 mg が得られた。得られた化合物（ＩＩ）の特
性は、参考例 １．で得られたものと同じであった。
【００７６】
試験例 １．化合物（Ｉ）のβ−グルコシダーゼに対す
る阻害活性 β−グルコシダーゼ(From Almonds)、p-ニトロフェニル
−β-D- グルコピラノシド、デオキシノジリマイシン、
カスタノスペルミンはシグマ社より購入した。β−グル
コシダーゼ 0.01 Unit／ml、および化合物（Ｉ）、デオ
キシノジリマイシン、カスタノスペルミンの各試料を含
んだ 20 mM クエン酸−40 mM リン酸二ナトリウム緩衝
液(pH 5.6) 100 μl を 37 ℃で 15 分保持した後、p-
ニトロフェニル−β-D- グルコピラノシド 3 mg ／mlを
含む緩衝液 50 μl を加え、37℃で 20 分間反応させ
た。これに 1 M グリシン・ NaOH 緩衝液（pH 10.4 ）
を20μl 加え、遊離した p- ニトロフェノール量を 405
nm の吸光度で測定した。各試料の反応液中の 50 ％
阻害濃度を表７に示す。
る阻害活性 β−グルコシダーゼ(From Almonds)、p-ニトロフェニル
−β-D- グルコピラノシド、デオキシノジリマイシン、
カスタノスペルミンはシグマ社より購入した。β−グル
コシダーゼ 0.01 Unit／ml、および化合物（Ｉ）、デオ
キシノジリマイシン、カスタノスペルミンの各試料を含
んだ 20 mM クエン酸−40 mM リン酸二ナトリウム緩衝
液(pH 5.6) 100 μl を 37 ℃で 15 分保持した後、p-
ニトロフェニル−β-D- グルコピラノシド 3 mg ／mlを
含む緩衝液 50 μl を加え、37℃で 20 分間反応させ
た。これに 1 M グリシン・ NaOH 緩衝液（pH 10.4 ）
を20μl 加え、遊離した p- ニトロフェノール量を 405
nm の吸光度で測定した。各試料の反応液中の 50 ％
阻害濃度を表７に示す。
【００７７】
【表７】 ─────────────────────────────────── 阻害剤 β−グルコシダーゼ 50 ％ 阻害濃度 ─────────────────────────────────── 化合物(I) 1.0 μg ／ml デオキシノジリマイシン 15 μg ／ml カスタノスペルミン 4.3 μg ／ml ─────────────────────────────────── 以上から、本発明の化合物（Ｉ）は顕著なβ−グルコシ
ダーゼ阻害活性を有しており、例えば抗腫瘍剤、抗エイ
ズ剤等として有用である。
ダーゼ阻害活性を有しており、例えば抗腫瘍剤、抗エイ
ズ剤等として有用である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/13 ＡＥＤ 8413−4Ｃ (72)発明者 高橋 秀次 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 佐藤 章 福島県いわき市泉町下川字大剱389−４ 三共株式会社内 (72)発明者 高松 安行 福島県いわき市泉町下川字大剱389−４ 三共株式会社内 (72)発明者 榎田 竜三 茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社 内
Claims (1)
- 【請求項１】式（ＩＩ） 【化１】 で示される化合物を加水分解することからなる、式
（Ｉ） 【化２】 で示される化合物の製造法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27241291 | 1991-10-21 | ||
| JP3-272412 | 1991-10-21 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05201937A true JPH05201937A (ja) | 1993-08-10 |
| JP3109923B2 JP3109923B2 (ja) | 2000-11-20 |
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ID=17513548
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04281688A Expired - Fee Related JP3109923B2 (ja) | 1991-10-21 | 1992-10-20 | 新規トレハゾリン誘導体の製造法 |
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|---|---|
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-
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