JPH0560828B2

JPH0560828B2 -

Info

Publication number: JPH0560828B2
Application number: JP61074511A
Authority: JP
Inventors: Kinji Iizuka; Tetsukyo Kamijo; Tetsuhiro Kubota; Kenji Akaha; Hideaki Umeyama; Yoshiaki Kiso
Original assignee: Kissei Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Kissei Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1986-04-01
Filing date: 1986-04-01
Publication date: 1993-09-03
Also published as: JPS62234071A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は医薬品として有用なアミノ酸誘導体お
よびそれらの薬理学的に許容される酸付加塩に関
するものである。

さらに詳しく述べれば、本発明はヒトレニン
（human renin）阻害作用を有し、経口投与可能
な高血圧症治療剤として有用な、新規なアミノ酸
誘導体およびそれらの薬理学的に許容される酸付
加塩を提供するものである。

〔従来の技術〕

レニンは肝臓の傍糸球体細胞から遊離する蛋白
分解酵素であり、血漿のα₂グロブリン分画中にあ
るレニン基質に反応してアンジオテンシン
（angiotensin ）を生成させる。生成したアン
ジオテンシンはアンジオテンシン変換酵素によ
りアンジオテンシン（angiotensin ）に変
換されるが、このアンジオテンシンは、血管収
縮作用を有するとともに、副腎皮質に働き、ナト
リウムや水の代謝に影響するアルドステロン
（aldosterone）を分泌させる、高血圧症の一つの
因子である。

このような、レニンとレニン基質との反応を阻
害し、アンジオテンシンの生成を抑制する化合
物は、新しい作用機作による高血圧治療剤として
注目され、その開発が強く要望されている。

今までにレニンとレニン基質との反応を阻害、
すなわちレニン活性阻害作用を有する化合物とし
て、多くのペプチド誘導体が知られている。（日
本特許公告公報昭58−39149号、日本特許公開公
報昭59−110661号、ヨーロツパ特許公開公報
77029号、同77028号、同81783号）しかしながら、これらの特許出願等に開示され
ている化合物群はほとんどポリペプチド類で、そ
の合成が厄介であり、かつ体内の蛋白分解酵素、
例えばキモトリプシン（chymotrypsin）などで
分解され、経口投与においてはその薬理効果を発
揮することが期待できないものである。

また、構造が簡単で製造が比較的容易なペプチ
ド類でレニン活性阻害作用を有するものも見出さ
れている。（日本特許公開公報昭59−155345号、
同昭59−227851号）これらの特許出願に開示れて
いる化合物はジ、トリまたはテトラペプチド誘導
体であり、上記のポリペプチド類に比べ製造は容
易であるが、なお蛋白分解酵素に対しては不安定
であり、経口投与においてその薬理効果を発揮す
ることが期待し難いものである。

〔発明が解決しようとする問題〕

従来より知られているレニン活性阻害作用を有
するペプチド誘導体はいずれも蛋白分解酵素に対
し、不安定で、経口投与においてその薬理効果を
発揮することが期待し難いものである。

本発明の目的は、このような問題を解決しうる
ような強いレニン活性阻害作用を有し、しかも経
口投与可能なアミノ酸誘導体およびそれらの薬理
学的に許容される酸付加塩を提供することであ
る。

〔問題点を解決するための手段〕本発明者らは強いレニン活性阻害作用を有し、
かつ経口投与においてもその薬理効果を発揮でき
る化合物を見出すべく種々研究を重ねた結果、一
般式（式中のHisはＬ−ヒスチジル基であり、Ｘは
−Ｏ−または−NH−であり、Ｒは炭素数１〜７
の直鎖状または枝分かれ状のアルキル基である）
で表されるアミノ酸誘導体およびそれらの薬理学
的に許容される酸付加塩が良好な作用を有してお
り、問題点が解決できることを見出し、本発明を
成すに至つた。

本発明の一般式（）で表されるアミノ酸誘導
体およびそれらの薬理学的に許容される酸付加塩
は、ヒトレニン−羊レニン基質系およびヒト高レ
ニン血漿で強いレニン活性阻害作用を示す。また
キモトリプシン、ペプシンのような蛋白分解酵素
に対し安定であり、高レニン状態のサルに経口投
与した場合、顕著なしかも持続性の、血漿中レニ
ン活性低下作用を発揮する。

従つて、本発明の一般式（）で表されるアミ
ノ酸誘導体およびそれらの薬理学的に許容される
酸付加塩は、経口投与可能な高血圧症治療剤とし
て有用である。

本発明者らは先に、一般式（式中のHis，ＸおよびＲは前記と同じ意味を
もつ）で表される化合物を含む一連のアミノ酸誘
導体およびそれらの薬理学的に許容される酸付加
塩が強いレニン活性阻害作用を有し、しかも蛋白
分解酵素に対し安定で、経口投与可能な高血圧症
治療剤として有用であることを見出し、既に特許
出願している。（日本特許出願昭60−79726号）本発明者らは、この一般式（）の化合物より
さらに優れた化合物を見出すべく研究を重ねた結
果、側鎖のイソブチル基をシクロヘキシルメチル
基に変換することによつて、レニン活性阻害作用
が増大し、しかも持続性が高まることを見出し、
本発明を完成させた。

本発明の一般式（）の化合物は対応する一般
式（）の化合物に比べ、ヒトレニン−羊レニン
基質系でのレニン活性阻害作用が強い。また、高
レニン状態のサルに経口投与した場合の血漿中レ
ニン活性阻害作用および作用時間においても優れ
た効果を示す。

本発明の前記一般式（１）で表されるアミノ酸
誘導体は、式（式中のＣ(L)はＬ−配置を示す）で表される
化合物と、一般式（式中のＸおよびＲは前記と同じ意味をもつ）
で表される化合物とを反応させるか、あるいはま
た、式（式中のＣ(L)は前記と同じ意味をもつ）で表
される化合物と前記一般式（）で表される化合
物とを縮合剤を用いて縮合させることなどにより
製造することができる。

これらの反応で出発原料として用いられる式
（）および式（）で表される化合物は前記日
本特許出願昭60−79726号に記載した方法あるい
はそれに準じた方法に従つて製造することができ
る。

すなわち、コハク酸エチルと１−ナフトアルデ
ヒドを塩基、例えば水素化ナトリウムの存在下に
反応させ、次いで水酸化ナトリウムで加水分解し
て２−（１−ナフチルメチレン）コハク酸を得る。
これを無水酢酸で処理して、２−（１−ナフチル
メチレン）無水コハク酸を得、次いでモルホリン
と反応させて２−（１−ナフチルメチル）−３−
（モルホリノカルボニル）プロピオン酸を得、さ
らにパラジウム炭素を用いて水添を行い、２−
（１−ナフチルメチレン）−３−（モルホリノカル
ボニル）プロピオン酸を得る。得られたカルボン
酸とＬ−ヒスチジンメチルエステル２塩酸塩と
を、例えば、ジフエニルリン酸アジドとトリエチ
ルアミンの存在下に反応させて、Ｎ−〔２−（１−
ナフチリメチル）−３−（モルホリノカルボニル）
プロピオニル〕−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル
を得る。これを常法に従い、ヒドラジンと反応さ
せるかあるいは加水分解することにより目的物を
得る。

また、もう一方の出発原料として用いられる一
般式（）で表される化合物は、以下のようにし
て製造することができる。例えばＮ−（tert−ブ
チルオキシカルボニル）−Ｌ−フエニルアラニン
を適当な触媒、例えば５％ロジウムアルミナ等の
存在下に水添して、Ｎ−（tert−ブチルオキシカ
ルボニル）−Ｌ−シクロヘキシルアラニンを得、
これを適当な還元剤、例えばボラン等を用いて還
元して、Ｎ−（tert−ブチルオキシカルボニル）−
Ｌ−シクロヘキシルアラニノールを得る。次い
で、これを塩基、例えばトリエチルアミン中、ジ
メチルスルホキシドおよび三酸化イオウピリジン
錯塩と処理することによつて、Ｎ−（tert−ブチ
ルオキシカルボニル）−Ｌ−シクロヘキシルアラ
ニナールを得る。これをシアン化カリウムと反応
させた後塩酸等を用いて加水分解して、式で表されるアミノカルボン酸を得る。このカルボ
ン酸（）を常法によりエステル化あるいはアミ
ド化することにより目的物を得る。

本発明の前記式（）で表される化合物と一般
式（）で表される化合物との反応は常法に従つ
て行うことができる。本反応を好適に実施するに
は式（）で表される化合物をＮ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミドに懸濁し、これに３〜５倍モルの塩
化水素を加え、この溶液に一般式（）で表され
る化合物に対して、１〜３モル量の亜硝酸イソア
ミルを加え５〜30分間−20〜−５℃で反応させ
る。この反応液にトリエチルアミンを加え、PH８
〜９にし、この溶液を式（）で表される化合物
に対して等モル量の前記一般式（）の化合物お
よびトリエチルアミンのＮ，Ｎ−ジメチルホルム
アミド溶液に冷却下、好ましくは−20〜０℃で加
え、次いで５〜20時間０℃ないし室温で反応さ
せ、反応物を常法に従い処理し、目的物を得るこ
とができる。

また、本発明の前記式（）で表される化合物
と一般式（）で表される化合物との反応を好適
に実施するには、式（）で表される化合物と、
これと等モル量の一般式（）で表される化合物
とをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、こ
の溶液に必要量の１−ヒドロキシベンゾトリアゾ
ールおよびジシクロヘキシルカルボジイミドを加
え、室温で10〜20時間反応させる。反応終了後、
常法に従い処理して目的物を得ることができる。

本発明の一般式（）で表されるアミノ酸誘導
体にはＬ−ヒスチジン部分の不斉炭素を含め４個
の不斉炭素があり、個々の不斉炭素における置換
基の立体配置により種々の異性体が存在する。こ
れらの不斉炭素における置換基の立体配置は一般
式（）で表される化合物のもつレニン阻害活性
に対し影響を与えるが、本発明においてはこれら
の異性体についてＬ−ヒスチジン部分以外の不斉
炭素の立体配置を特に限定するものではない。

本発明の一般式（）で表されるアミノ酸誘導
体中、一般式（）で表される化合物部分におい
てはアミノ基が置換されている炭素原子の立体配
置はＳ配置であることが好ましい。水酸基が置換
されている炭素原子の立体配置も活性に影響を与
え、Ｒ配置が好ましいが、Ｓ配置とＲ配置の混合
物でもよい。

このような光学活性化合物の製造に用いられる
光学活性出発原料は常法により光学分割するか、
または光学活性な化合物を用いることにより製造
される。

本発明の前記一般（）で表される化合物は常
法に従い、薬理学的に許容される酸付加塩とする
ことができ、これらの塩としては塩酸塩、スルホ
ン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、酢酸塩、ク
エン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマール酸塩
等をあげることができる。これらの酸付加塩も強
いレニン活性阻害作用を有し、蛋白分解酵素に安
定であり、経口投与によつて高レニン状態のサル
の血漿中のレニン活性を低下させる。

本発明の一般式（）で表されるアミノ酸誘導
体およびその薬理学的に許容される酸付加塩は常
法に従い医薬品組成物とすることができる。その
ような医薬品組成物として例えば、錠剤、カプセ
ル剤、顆粒剤、注射剤、貼付剤、坐剤等をあげる
ことができる。

本発明の前記一般式（）で表されるアミノ酸
誘導体またはその薬理学的に許容できる酸付加塩
を含有する医薬品組成物を治療に用いる場合、そ
の投与量は疾病の程度、患者の性、年齢、体重等
により調整されるが、経口投与では概ね成人１日
当たり５mg〜5000mg、非経口投与では１日当たり
１mg〜1000mgの範囲内で投与することができる。

〔発明の効果〕

本発明の一般式（）で表されるアミノ酸誘導
体およびその薬理学的に許容される酸付加塩は強
いレニン活性阻害作用を有し、しかも蛋白分解酵
素に対し安定であり、経口可能な高血圧症治療剤
として有用である。

例えば、（2RS，3S）−３−｛Ｎ−〔２−（１−ナ
フチルメチル）−３−（モルホリノカルボニル）プ
ロピオニル〕−Ｌ−ヒスチジル｝アミノ−４−シ
クロヘキシル−２−ヒドロキシ酪酸イソプロピル
はヒトレニン−羊レニン基質系およびヒト高レニ
ン血漿での50％阻害活性値（IC₅₀）はそれぞれ
6.5×10^-9モル濃度および1.0×10^-8モル濃度であ
つた。

さらに、本化合物をコモンマーモセツトに体重
１Kg当たり30mg経口投与した後の血漿中のレニン
活性の阻害効果は、１時間後で約87％、５時間後
でも約50％であつた。

〔実施例〕

本発明をさらに詳述するために以下に参考例お
よび実施例をあげる。なお、各参考例および実施
例中の化合物の融点は未補正である。また、各化
合物のNMRスペクトルは日本電子JNM−
GX270型高分解能核磁気共鳴装置を用いて測定
した。Massスペクトルは日本電子JMS−DX300
型マススペクトロメーターを用いてFAB法によ
り測定した。薄層クロマトグラフイーはメルク社
のプレコートプレートシリカゲル（precoated
plates silica gel）60F₂₅₄を、カラムクロマトグ
ラフイーはメルク社のキーゼル・ゲル
（Kieselgel）60（230−400メツシユ）を用いて行
つた。また薄層クロマトグラフイーの展開溶媒は
クロロホルム／メタノール／水＝８／３／１の混
合液の下層およびクロロホルム／メタノール＝
５／１の混合液の２種類を用い、Rf値（Rf₁およ
びRf₂）を算出した。

参考例１２−（１−ナフチルメチル）−３−（モルホリノ
カルボニル）プロピオン酸コハク酸エチル32.3gと１−ナフトアルデヒド
29.0gを無水エタノール320mlに溶解し、氷冷下に
50％水素化ナトリウム（油性）10.7gを加えたの
ち、30分加熱還流する。この溶液に１規定水酸化
ナトリウム水溶液230mlを加え、１時間加熱還流
する。減圧下に溶媒を留去し、残留物に水を加え
中性部をエーテルで抽出除去したのち、水層に濃
塩酸を加え酸性とし、エーテルで抽出する。エー
テル層を飽和食塩水で洗つたのち、無水硫酸マグ
ネシウムで乾燥する。減圧下に溶媒を留去し、残
留物にベンゼンを加え、析出結晶をろ取し、黄色
結晶の２−（１−ナフチルメチレン）コハク酸
26.5gを得る。

２−（１−ナフチルメチレン）コハク酸24.5gに
無水酢酸260mlを加え、60℃で１時間加熱する。
減圧下に溶媒を留去し、残留物にベンゼン／ヘキ
サン＝１／１の混液を加え、析出結晶をろ取し、
橙黄色結晶の２−（１−ナフチルメチレン）無水
コハク酸16.0gを得る。

２−（１−ナフチルメチレン）無水コハク酸
1.00gとモルホリン0.37gを乾燥塩化メチレン31ml
に溶解し、室温で２時間攪拌する。減圧下に溶媒
を留去し、残留物を酢酸エチル／ベンゼン／ヘキ
サン＝１／１／１の混液から結晶化し、無色結晶
の２−（１−ナフチルメチレン）−３−（モルホリ
ノカルボニル）プロピオン酸1.10gを得る。この
プロピオン酸1.00gをメタノール40mlに溶解し、
10％パラジウム炭素0.1gを加えて常圧で水添す
る。触媒をろ去後減圧下に溶媒を留去する。残留
物にヘキサンを加え結晶化し、白色粉末状の２−
（１−ナフチルメチル）−３−（モルホリノカルボ
ニル）プロピオン酸0.90gを得る。

Rf₁：0.67 MS：MH⁺，328 融点：64〜68℃ IR（KBr）：νco 1720，1640 cm^-1 NMR（CDCl₃） δ：2.35〜2.7（ｍ，2H），3.05〜3.85（ｍ，
11H），7.25〜8.2（ｍ，7H）参考例２Ｎ−〔２−（１−ナフチルメチル）−３−（モルホ
リノカルボニル）プロピオニル〕−Ｌ−ヒスチ
ジンヒドラジド２−（１−ナフチルメチル）−３−（モルホリノ
カルボニル）プロピオン酸0.89gとＬ−ヒスチジ
ンメチルエステル２塩酸塩0.79gをＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド23mlに懸濁し、氷冷攪拌下にジ
フエニルリン酸アジド0.70mlとトリエチルアミン
1.50mlを加え、そのまま16時間攪拌する。減圧下
に溶媒を留去し、残留物に５％炭酸水素ナトリウ
ム水溶液を加えて、酢酸エチルで抽出後、水で洗
い、無水硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下に
溶媒を留去し、残留物にエーテルを加え、析出結
晶をろ取し、白色粉末状のＮ−〔２−（ナフチルメ
チル）−３−（モルホリノカルボニル）プロピオニ
ル〕−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル1.25gを得
る。このエステル0.98gをメタノール10mlに溶解
し、ヒドラジン１水和物0.52gを加え、室温で４
時間攪拌する。減圧下に溶媒を留去し、残留物を
シリカゲルカラムクロマトグラフイー（溶出溶
媒：クロロホルム／メタノール＝10／１）でRf₁
が0.49に相当する部分に単離精製して、白色粉末
状のＮ−〔２−（１−ナフチルメチル）−３−（モル
ホリノカルポニル）プロピオニル〕−Ｌ−ヒスチ
ジンヒドラジド0.23gを得る。

融点：115〜119℃ Rf₁：0.49 MS：MH⁺，479 IR（KBr）：νco 1620 cm^-1 参考例３（2RS，3S）−３−アミノ−４−シクロヘキシ
ル−２−ヒドロキシ酪酸イソプロピル塩酸塩Ｎ−（tert−ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−フ
エニルアラニン13.25gをメタノール25mlに溶解
し、５％ロジウムアルミナ1.2gを加え、3.5Kg／
cm²の加圧下で水添する。触媒をろ去後減圧下に溶
媒を留去し、白色粉末状のＮ−（tert−ブチルオ
キシカルボニル）−Ｌ−シクロヘキシルアラニン
13.4gを得る。

Ｎ−（tert−ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−シ
クロヘキシルアラニン2.71gを乾燥テトラヒドロ
フラン５mlに溶かし、この混合物をアルゴン気流
中1Mボランテトラヒドロフラン溶液20mlに、内
温５〜８℃を保ちつつ滴下し、そのまま３時間攪
拌する。反応液に10％酢酸メタノール溶液を加え
てPH４とし、減圧下に溶媒を留去する。残留物に
エーテルを加え、この溶液をクエン酸水溶液、炭
酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗
い、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下に溶
媒を留去し、Ｎ−（tert−ブチルオキシカルボニ
ル）−Ｌ−シクロヘキシルアラニノール2.42gを得
る。

Ｎ−（tert−ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−シ
クロヘキシルアラニノール2.4g、乾燥トリエチル
アミン6.5ml、乾燥ベンゼン３mlおよび乾燥ジメ
チルスルホキシド6.6mlの混合物を15℃（内温）
に冷却し、この混合物に、三酸化イオウピリジン
錯塩7.4gを内温15〜25℃を保ちつつ加え、そのま
ま10分間攪拌する。反応液を水にあけ、酢酸エチ
ルで抽出し、酢酸エチル層を飽和炭酸水素ナトリ
ウム水溶液および水で洗い、無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去して、Ｎ−
（tert−ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−シクロヘ
キシルアラニナール2.9gを得る。

Ｎ−（tert−ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−シ
クロヘキシルアラニナール2.9gに亜硫酸水素ナト
リウム2.9gの水20ml溶液を加え氷冷下に14時間攪
拌する。この反応液にシアン化カリウム1.82gの
水５ml溶液と酢酸エチル40mlを加え室温で４時間
攪拌する。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗つたの
ち、無水硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下に
溶媒を留去し、残留物に23％塩酸21mlを加え、12
時間加熱還流する。反応液をエーテルで洗い、水
層を減圧下に濃縮し、白色粉末状の（2RS，3S）
−３−アミノ−４−シクロヘキシル−２−ヒドロ
キシ酪酸塩酸塩2.5gを得る。次いで、（2RS，3S）
−３−アミノ−４−シクロヘキシル−２−ヒドロ
キシ酪酸塩酸塩100mgをイソプロパノール12mlに
溶解し、氷冷攪拌下に塩化水素ガスを吹き込み、
２時間加熱還流する。反応液を減圧下に濃縮乾固
し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフイ
ー（溶出溶媒：クロロホルム／メタノール＝15／
１）で精製し、塩酸酸性とした後濃縮乾固し、白
色粉末状の（2RS，3S）−３−アミノ−４−シク
ロヘキシル−２−ヒドロキシ酪酸イソプロピル塩
酸塩108mgを得る。

IR（KBr）：ν_cp 1735 cm^-1 NMR（D₂Ｏ） δ：0.8〜1.8（ｍ，19H），3.6〜3.8（ｍ，IH）， 4.3〜4.6（ｍ，1H），5.0〜5.2（ｍ，IH）参考例４（2RS，3S）−３−アミノ−４−シクロヘキシ
ル−２−ヒドロキシ−Ｎ−イソブチルブチルア
ミド塩酸塩（2RS，3S）−３−アミノ−４−シクロヘキシ
ル−２−ヒドロキシ酪酸塩酸塩1.4gとトリエチル
アミン1.64mlを水10mlとジオキサン10mlに溶解
し、ジ−tert−ブチルジカルボネイト3.2gを加え
たのち室温で16時間攪拌する。反応液に水20mlを
加え、中性部をエーテルで抽出除去したのち、水
層にクエン酸水溶液を加え酸性とし、エーテルで
抽出する。エーテル層を飽和食塩水で洗つたのち
無水硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下に溶媒
を留去し、無色油状の（2RS，3S）−３−tert−
ブチルオキシカルボニルアミノ−４−シクロヘキ
シル−２−ヒドロキシ酪酸0.9gを得る。

この酪酸400mg、イソブチルアミン塩酸塩175
mg、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール270mgお
よびトリエチルアミン0.22mlを酢酸エチル20mlに
溶かし、氷冷攪拌下にジシクロヘキシルカルボジ
イミド300mgを加え、室温で16時間攪拌する。反
応液を氷冷し、不溶物をろ去したのち、クエン酸
水溶液、５％炭酸水素ナトリウム水溶液および飽
和食塩水で順次洗つたのち、無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥する。減圧下に溶媒を留去し、（2RS，
3S）−３−（tert−ブチルオキシカルボニル）アミ
ノ−４−シクロヘキシル−２−ヒドロキシ−Ｎ−
イソブチルブチルアミド595mgを得る。

上記アミド590mgをメタノール10mlに溶解し、
２規定塩酸3.3mlを加え、60℃で２時間加熱還流
する。減圧下に溶媒を留去し、白色粉末状の
（2RS，3S）−３−アミノ−４−シクロヘキシル−
２−ヒドロキシブチリルイソブチルアミド塩酸塩
254mgを得る。

IR（KBr）：ν_cp 1640 cm^-1 NMR（D₂Ｏ） δ：0.8〜2.0（ｍ，20H），2.9〜3.2（ｍ，2H）， 3.5〜3.7（ｍ，1H），4.2〜4.5（ｍ，1H）実施例１（2RS，3S）−３−｛Ｎ−〔２−（１−ナフチルメ
チル）−３−（モノホリノカルボニル）プロピオ
ニル〕−Ｌ−ヒスチジル｝アミノ−４−シクロ
ヘキシル−２−ヒドロキシ酪酸イソプロピルＮ−〔２−（１−ナフチルメチル）−３−（モルホ
リノカルボニル）プロピオニル〕−Ｌ−ヒスチジ
ンヒドラジド100mgをＮ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド５mlに溶かし、−20℃で5.95規定乾燥塩化水
素／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド0.12ml、続い
て亜硝酸イソアミル0.043mlを加えて攪拌する。
ヒドラジドの消失を確認した後、反応液の温度を
−30℃まで下げてトリエチルアミン0.10mlで中和
し、Ｎ−〔２−（１−ナフチルメチル）−３−（モル
ホリノカルボニル）プロピニオル〕−Ｌ−ヒスチ
ジンアジド溶液を調整する。別に（2RS，3S）−
３−アミノ−４−シクロヘキシル−２−ヒドロキ
シ酪酸イソプロピル塩酸塩58mgとトリエチルアミ
ン0.064mlのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ml
溶液に氷冷下、先のアジド冷溶液に滴下し、その
まま16時間攪拌する。反応液に５％炭酸水素ナト
リウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出し、飽和
食塩水で洗い、無水硫酸マグネシウムで乾燥す
る。減圧下に溶媒を留去し、残留物をプレパラテ
イブシリカゲル薄層クロマトグラフイー（展開溶
媒：クロロホルム／メタノール＝５／１）で、
Rf₂が0.50に相当する部分を単離精製し、白色粉
末状の（2RS，3S）−３−｛Ｎ−〔２−（１−ナフチ
ルメチル）−３−（モルホリノカルボニル）プロピ
オニル〕−Ｌ−ヒスチジル｝アミノ−４−シクロ
ヘキシル−２−ヒドロキシ酪酸イソプロピル55mg
を得る。

融点：103〜106℃ Rf₁：0.60 Rf₂：0.50 MS：MH⁺，690 実施例２（2RS，3S）−３−｛Ｎ−〔２−（１−ナフチルメ
チル）−３−（モルホリノカルボニル）プロピニ
オル〕−Ｌ−ヒスチジル｝アミノ−４−シクロ
ヘキシル−２−ヒドロキシ−Ｎ−イソブチルブ
チルアミドＮ−〔２−（１−ナフチルメチル）−３−（モルホ
リノカルボニル）プロピルオニル〕−Ｌ−ヒスチ
ジルメチルエステル100mgをメタノール５mlに溶
解し、氷冷下１規定水酸化ナトリウム水溶液0.42
mlを加え、室温で16時間攪拌する。減圧下に溶媒
を留去し、残留物と（2RS，3S）−３−アミノ−
４−シクロヘキシル−２−ヒドロキシ−Ｎ−イソ
ブチルブチルアミド塩酸塩61mgおよび１−ヒドロ
キシベンゾトリアゾール43mgをＮ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミド５mlに溶かし、氷冷攪拌下にジシク
ロヘキシルカルボジイミド48mgを加え、室温で16
時間攪拌する。減圧下に溶媒を留去し、残留物に
５％炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチ
ルで抽出し、飽和食塩水で洗い、無水硫酸マグネ
シウムで乾燥する。減圧下に溶媒を留去し、残留
物をプレパラテイブシリカゲル薄層クロマトグラ
フイー（展開溶媒：クロロホルム／メタノール＝
５／１）で、Rf₂が0.41に相当する部分を単離精
製し、白色粉末状の（2RS，3S）−３−｛Ｎ−〔２
−（１−ナチフルメチル）−３−（モルホリノカル
ボニル）プロピオニル〕−Ｌ−ヒスチジル｝アミ
ノ−４−シクロヘキシル−２−ヒドロキシ−Ｎ−
イソブチルブチルアミド6.5mgを得る。

融点：119〜125℃ Rf₁：0.54 Rf₂：0.41 MS：MH⁺，703 実施例３ヒトレニン−羊レニン基質でのレニン活性阻害
作用 PH7.4の125mMピロフオスフエート緩衝液
（pyrophosphate buffer）200μとアンジオテン
シン変換酵素阻害剤として20mMのＬ−フエニル
アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリンの水溶液
25μ、2000ngアンジオテンシンＩ当量／mlの部
分精製羊レニン基質50μ、脱イオン水150μと
本発明の化合物のジメチルスルホキシド溶液50μ
またはコントロール群としてジメチルスルホキ
シド50μの溶液中に20〜30ngアンジオテンシン
Ｉ／ml／時間の精製ヒトレニン25μを加え、37
℃の水浴中で15分間インキユベート（incubate）
したのち、この反応液を100℃の水浴中に５分間
入れ、反応を停止する。冷却後200μを分取し、
レニン添加によつて生成されたアンジオテンシン
Ｉの量をラジオイムノアツセイ（radioimmuno
assay）法で定量し、下式により阻害活性を求め
た。

阻害活性（％）＝コントロール値−本発明の化合物存
在下の値／コントロール値×100 上式により求められた阻害活性から50％阻害活
性モル濃度（IC₅₀）を求めた。

（2RS，3S）−３−｛Ｎ−〔２−（１−ナフチルメ
チル）−３−（モルホリノカルボニル）プロピオニ
ル〕−Ｌ−ヒスチジル｝アミノ−４−シクロヘキ
シル−２−ヒドロキシ酪酸イソプロピル 6.5×10^-9 （2RS，3S）−３−｛Ｎ−〔２−（１−ナフチルメ
チル）−３−（モルホリノカルボニル）プロピオニ
ル〕−Ｌ−ヒスチジル｝アミノ−４−シクロヘキ
シル−２−ヒドロキシ−Ｎ−イソブチルブチルア
ミド 2.9×10^-7 実施例４ヒト高レニン血漿におけるレニン活性阻害作用ヒト高レニン血漿500μに14mM EDTA・
2Naと0.3％ネオマイシン硫酸を含むPH7.0の0.5M
リン酸緩衝液（phosphate buffer）350μ、ア
ンジオテンシン変換酵素阻害剤として20mMのＬ
−フエニルアラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリ
ンの水溶液50μ、および本発明の化合物のジメ
チルスルホキシド溶液100μまたはコントロー
ル群としてのジメチルスルオキシド100μを加
える。この反応液のうち、200μを４℃の氷浴
中に入れ、残つた800μを37℃の水浴中で60分
間インキユベートする。37℃でインキユベートし
た反応液より200μを分取し、ただちに氷冷し、
氷浴中でインキユベートした反応液と共にアンジ
オテンシンＩ量をラジオイムノアツセイ法で定量
する。

血漿レニン活性は37℃でインキユベートした反
応液中のアンジオテンシンＩ量から４℃でインキ
ユベートした反応液中のアンジオテンシンＩ量を
差し引くことにより算出する。阻害活性（％）は
下式により求めた。

（2RS，3S）−３−｛Ｎ−〔２−（１−ナフチルメ
チル）−３−（モルホリノカルボニル）プロピオニ
ル〕−Ｌ−ヒスチジル｝アミノ−４−シクロヘキ
シル−２−ヒドロキシ酪酸イソプロピル 1.0×10^-8 （2RS，3S）−３−｛Ｎ−〔２−（１−ナフチルメ
チル）−３−（モルホリノカルボニル）プロピオニ
ル〕−Ｌ−ヒスチジル｝アミノ−４−シクロヘキ
シル−２−ヒドロキ−Ｎ−イソブチルブチルアミ
ド 2.6×10^-7 実施例５コモンマーモセツトの血漿レニン活性（PRA）
低下作用ホフバウアー（K.G.Hofbauer）らによりクリ
ニカルアンドエクスペリメンタルハイパー
テンシヨン〔（Clin.Exp.Hypertens.）A5巻、７
＆８号、1237〜1247ページ、1983年〕に報告され
ているコモンマーモセツト（common
marmoset）を用い、減塩食下で経口的にフロセ
ミド15mg／Kg／dayを１日おきに３回投与して人
為的な高レニン状態を作り出す。フロセミド投与
中止後３日目に実験を行う。

測定方法体重335〜375gのコモンマーモセツトを雌雄の
別なく用い、小型サル用の固定台に有意識下に固
定し、大腿動脈に挿入したカテーテルより経時的
に採決し、血漿レニン活性を測定する。血漿レニ
ン活性は0.2mlの血漿を37℃、60分間インキユベ
ートして生ずるアンジオテンシンＩの量をダイナ
ボツト社のレニンリアビーズキツトを用いて測
定する。本発明の化合物は希塩酸に溶かし、胃ゾ
ンデを用いて経口的に投与する。

化合物名：（2RS，3S）−３−｛Ｎ−〔２−（１−ナ
フチルメチル）−３−（モルホリノカルボニ
ル）プロピオニル〕−Ｌ−ヒスチジル｝アミ
ノ−４−シクロヘキシル−２−ヒドロキシ酪
酸イソプロピル 30mg／Kg経口投与（例数２〜３） PRA（阻害％）コントロール 23.2n＝３投与後 20分 8.66（68.2）ｎ＝３ 40分 2.41（88.1）ｎ＝３ 60分 3.39（87.1）ｎ＝３ 120分 2.34（88.8）ｎ＝３ 180分 5.17（79.6）ｎ＝３ 300分 6.38（53.4）ｎ＝２

Claims

【特許請求の範囲】１一般式（式中のHisはＬ−ヒスチジル基であり、Ｘは
−Ｏ−または−NH−であり、Ｒは炭素数１〜７
の直鎖状または枝分かれ状のアルキル基である）
で表されアミノ酸誘導体およびそれらの薬理学的
に許容される酸付加塩。２一般式（式中のＣ＊はＳ配置を示し、His，ＸおよびＲ
は前記と同じ意味をもつ）で表される特許請求の
範囲第１項記載のアミノ酸誘導体およびそれらの
薬理学的に許容される酸付加塩。３式で表される特許請求の範囲の第２項記載のアミノ
酸誘導体およびその薬理学的に許容される酸付加
塩。４式で表される特許請求の範囲第２項記載のアミノ酸
誘導体およびその薬理学的に許容される酸付加
塩。