JPH0566114B2 - - Google Patents
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- JPH0566114B2 JPH0566114B2 JP61219430A JP21943086A JPH0566114B2 JP H0566114 B2 JPH0566114 B2 JP H0566114B2 JP 61219430 A JP61219430 A JP 61219430A JP 21943086 A JP21943086 A JP 21943086A JP H0566114 B2 JPH0566114 B2 JP H0566114B2
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Description
［産業上の利用分野］
本発明はマルトオリゴ糖の製造方法に関し、詳
しくは特定の担体に固定化した固定化マルトオリ
ゴ糖生成アミラーゼと固定化枝切り酵素を充填し
た反応器に澱粉液化液を供給し、作用させること
を特徴とするマルトオリゴ糖の製造方法に関す
る。 ［従来の技術及び発明が解決しようとする問題
点］ 従来よりマウトースは麦芽、大豆等の植物由来
のβ−アミラーゼを用いて回分法により工業的に
製造されているが、マルトトリオース以上のグル
コース重合度を有するマルトオリゴ糖は、澱粉ま
たはアミロースを酸または液化型α−アミラーゼ
で部分加水分解して調製していた。 近年になり、澱粉またはアミロースに作用して
マルトトリオース、マルトテトラオース、マルト
ペンタオース、マルトヘキサオース等のマルトオ
リゴ糖を特異的に生成する各種マルトオリゴ糖生
成アミラーゼが相ついで発見され、各種オリゴ糖
の工業的生産が期待されている。 マルトオリゴ糖生成アミラーゼとしては次のも
のが知られている。 マルトース生成アミラーゼとしては、大豆、麦
芽等の植物起源のβ−アミラーゼ以外に、バチル
ス・ポリミキサ［Bacillus polymyxa、J.Robyt
and D.French、Arch.Biochem Biophys 104、
338（1964）］、バチルス・セレウス［Bacillus
cereus、Y.Takasaki、Agric.Biol.Chem.、40、
1515−1523（1976）］、シユードモナス属菌
［Pseudomonas sp.S.Shinke et al.、J.Ferment.
Technol.53、693−698（1975）］、ストレプトミセ
ス・ヒグロスコピカス［Streptomyces
hygroscopicus、Y.Hidaka et al.、Starke、26、
413（1974）］、ストレプトミセス・プレコツクス
［Streptomyces praecox、若生勝雄ら、澱粉化
学、25、155（1978）］等の微生物起源のマルトー
ス生成アミラーゼがある。 また、マルトトリオース以上のグルコース重合
度を有するオリゴ糖を生成するアミラーゼとして
は次のものが知られている。 マルトトリオース生成アミラーゼ［若生勝雄
ら：澱粉化学、26、175（1979）、ストレプトミセ
ス・グリセウス（Streptomyces griseus）起源
のもの；高崎義幸：昭和58年日本農芸化学大会要
旨集、P169（1983）、バチルス（Bacillus）属起源
のもの］ マルトテトラオース生成アミラーゼ［J.F.
Robyt and R.J.Ackerman：Arch.Biochem.
Biophys.、145、105（1971）、シユードモナス・
ストツツエリ（Pseudomonas stutzeri）起源の
もの］ マルトペンタオース生成アミラーゼ［N.
Saito：Arch.Biochem.Biophys.、155、290
（1973）、バチルス・リケニホルミス（Bacillus
licheniformis）起源のもの；小林等；昭和58年
度日本澱粉学会大会要旨集、P301（1983）；吉儀
ら：昭和59年度日本農芸化学大会要旨集、P584
（1984）］ マルトヘキサオース生成アミラーゼ［K.
Kainumaら：FEBS Lett.、26、281（1972）、エ
アロバクター・エアロゲネス（Aerobacter
aerogenes）起源のもの；J.F.Kennedy and C.
A.White：Sta¨rke、3193（1979）；谷口ら：澱粉化
学、29、107（1982）；Y.Takasaki：Agric.Biol.
Chem.、47、2193（1983）］ しかしながら、β−アミラーゼを除きこれらの
マルトオリゴ糖生成アミラーゼは一般のアミラー
ゼに比べて非常に高価であり、scらアミラーゼを
用いて製造されたマルトオリゴ糖の試薬グレード
品が少量生産されているにすぎない。したがつ
て、これらマルトオリゴ糖生成アミラーゼを用い
て各種オリゴ糖を工業的に生産するためには、こ
れらアミラーゼを効率的に使用することが不可欠
である。その具体的手法としてこれらアミラーゼ
を固定化して使用することが考えられる。 そこで、本発明者らはオリゴ糖の効率的な製造
法について検討を重ね、各種マルトオリゴ糖生成
アミラーゼを担体に固定化する技術（特願昭60−
81340号）を開発すると共に、該固定化酵素を用
いたマルトオリゴ糖の製造方法（特願昭60−
125093号）を提案した。 さらに効率よく高純度のマルトオリゴ糖を得る
べく研究を重ねた結果、固定化マルトオリゴ糖生
成アミラーゼと固定化枝切り酵素を併用すること
によつて目的が達成でき、しかも固定化マルトオ
リゴ糖生成アミラーゼ単一系よりも、より広範囲
かつ高流速でカラム通液することが可能であるこ
とを見出し、かかる知見に基いて本発明を完成す
るに至つた。なお、枝切り酵素が作用する基質は
一般に巨大分子であるので、従来は該酵素を固定
化することなく使用されていた。 ［問題点を解決するための手段］ すなわち本発明は、酵素との親和性が80％以上
であり、かつ100Å以上の細孔径を有する細孔の
比表面積が20〜200m2／ｇである多孔性担体に固
定したマルトオリゴ糖生成アミラーゼを固定化枝
切り酵素と共に澱粉液化液に作用させることを特
徴とするマルトオリゴ糖の製造方法を提供するも
のである。 本発明で使用する原料澱粉としては種々のもの
が使用できるが、通常馬鈴薯澱粉、甘薯澱粉、コ
ーンスターチ、ワキシーコーンスターチ、キヤツ
サバ澱粉等を用いる。また、反応器に通液する澱
粉液化液のグルコース当量（DE）は通常、１〜
35、好ましくは５〜20の範囲にあるものを用いる
のが良い。ここで澱粉液化液のDEがワシーコー
ンスターチの場合１以下、それ以外の澱粉では
DEが５以下のものは老化が激しく、また老化を
防止するために70〜80℃以上に加熱保持する必要
があり、工程上不利である。一方、DEが５以上
になると、グルコース、マルトース等の低分子糖
のの生成が増大し、かつ目的とするマルトオリゴ
糖の収量が低下するので適当でない。なお、各種
澱粉を液化する方法は特に制限はないが、通常は
液化型α−アミラーゼまたは塩酸等の酸で処理す
る。 次に、マルトオリゴ糖とはマルトース、マルト
トリオース、マルトテトラオース、マルトペンタ
オース、マルトヘキサオース等であり、マルトオ
リゴ糖生成アミラーゼとは前述の各種マルトオリ
ゴ糖を生成するアミラーゼである。 また、枝切り酵素としては、バチルス・アシド
プルリテイカス（Bacillus acidopullulyticus）
およびクレブシエーラ・ニユーモニア
（Klebsiella pneumoniae）起源のプルラナーゼ
やシユードモナス・アミロデラモサ
（Pseudomonas amyloderamosa）、サイトフア
ーガ属菌（Cytophaga sp.）等が生産するイソア
ミラーゼを用いることができるが、オリゴ糖生成
アミラーゼはほとんどがPH5.0〜8.5の範囲に至適
PHを有するため、同様の安定かつ至適PH範囲を有
する枝切り酵素を用いるのが望ましい。 酵素の固定化方法としては各種の方法が知られ
ており、その１つに物理的吸着法、イオン結合
法、共有結合法等を含む担体結合法がある。この
中、分理的吸着法、イオン結合法は操作が簡単で
あり、酵素タンパク質の活性中心の破壊あるいは
高次構造の変化が小さく、また担体の再生利用も
容易であることから適当な担体を発見できれば工
業化に対して有望な方法と云える。 また、本発明者らが先に提案したマルトオリゴ
糖生成アミラーゼの固定化手段（特開昭61−
239892号）も有利な方法の１つである。この方法
ではマルトオリゴ糖生成アミラーゼの担体とし
て、酵素との親和性が80％以上であり、かつ100
Å以上の細孔径を有する細孔の比表面積が20〜
200m2／ｇである多孔性担体を使用する。ここで、
酵素と担体の親和性は次の方法により求めた値を
意味する。 担体0.5ｇと25IUの酵素（PH7.0の50ｍＭリン酸
緩衝液2.0mlに溶解したもの）を50ml三角フラス
に入れ、室温下で１時間、120ストローク、４cm
幅で振とうしながら酵素を担体に固定化したのち
過を行ない、得られた液中の活性を測定して
次式により酵素と担体との親和性を求める。 添加した酵素活性−液中の酵素活性／添加した酵素
活性×100 親和性を求める際に用いる酵素の純度は必ずし
も限定されるものではないが、好ましくは比活性
が30IU／mg・タンパク質以上あるものを使用す
る。なお、上記酵素と担体の親和性は工業的に利
用する場合の酵素活性／担体重量比よりも低いレ
ベルで求めたものであるが、酵素と担体の親和性
を知る尺度として重要である。すなわち、実際に
高い酵素活性／担体重量比において固定化した酵
素が基質に対し高い発現活性を示すものは上記親
和性についても高い値を示すことを本発明者らは
見出している。この親和性については、上記の如
く80％以上であることが必要であるが、マルトテ
トラオース生成アミラーゼ用担体の場合は95％以
上であることが好ましく、その他のオリゴ糖生成
アミラーゼ用担体の場合は80％以上であることが
好ましい。これらの値は使用酵素の起源および比
活性によつて決まる。ここで発現活性とは以下の
如く定義されるものである。 固定化酵素の発現する活性はその使用条件によ
つて絶対値が大きく変わるので、次のような測定
条件を設定して求めた。すなわち、固定化酵素10
mg（wet）を0.5mlの10ｍＭリン酸バツフアー（PH
6.0〜7.0）（50ml三角フラスコ中）に加え、十分
に馴染ませた後、10w／ｖ％可溶性澱粉（Merck
社製）5.0mlを加えて40℃で10分間往復振とう機
により120ストローク／min、４cm幅で振とうし
ながら酵素反応を行ない、生成還元糖をSmogyi
−Nelson法で測定し、発現する活性を求めた。 また、枝切り酵素であるプルラナーゼを固定化
した固定化酵素の場合は、固定化酵素10mg
（wet）を0.5mlの10ｍＭリン酸バツフアー（PH
6.0）（50ml三角フラスコ中）に加え、上記と同様
に処理した後、同バツフアーに溶解した10％
（ｗ／ｖ）プルラン溶液5.0mlを加え上記と同様の
方法で発現活性を求めた。 なお、１単位とは１分間に1μmolのグルコシド
結合を切断する酵素量を意味する。 この担体は、さらに以下の条件を満足するもの
であることを要する。すなわち、担体の100Å以
上の細孔径を有する細孔の比表面積が20〜200
m2／ｇであることが必要である。この比表面積が
200m2／ｇを越えると、担体は強度が弱いものと
なり、好ましくない。なお、マルトテトラオース
生成アミラーゼ用担体にあつては、さらに400Å
以上の細孔径を有する細孔の比表面積が３〜100
m2／ｇ、好ましくは５〜50m2／ｇであることが望
ましい。 ここで、比表面積は水銀圧入法により測定した
値である。 上記の条件は、いずれか一方を満足するだけで
は不十分であり、すべての条件を同時に満たすも
のだけが基質に対して高い反応性を示す。 多孔性担体としては上記特性を満足するもので
はれば、素材、製法等を問わないが、通常はフエ
ノール系吸着樹脂、スチレン−ジビニルベンゼン
系吸着樹脂、トリアジン系吸着樹脂、アクリルエ
ステル系吸着樹脂、弱塩基性アニオン交換樹脂な
どの多孔性合成樹脂が用いられる。より具体的に
は、デユオライト系樹脂（ダイヤモンド・シヤム
ロツク社製）の商品名「Ｓ−761」、「Ｓ−762」、
「ES−771」、「ES−8610」、「Ａ−７」など；ダイ
ヤイオン系樹脂（三菱化成工業(株)製）の商品名
「WK−10」、「HP−10」、「HP−20」、「HP−50」、
「SP−206」など；アンバーライト系樹脂（ロー
ム・アンド・ハース社製）の商品名「XAD−
７」、「XAD−８」などを挙げることができる。 また、多孔性担体の粒径については、発現活性
が高ければ特に制限はないが、通常は0.05〜1.5
mm、より好ましくは0.2〜1.0mmのものを用いるの
が適当である。粒径が小さいことは酵素の固定化
や発現活性に対しては好ましい要因であるが、あ
まり小さいと、固定化酵素を反応器に充填し、こ
れち澱粉液化液を供給したときに、圧力損失が大
きいため、運転上不都合である。一方、粒径があ
まり大きいと、酵素の固定化や発現活性に対して
効率的でない。 上記担体への酵素の固定化は各種の方法を適用
しうるが、最も一般的な方法は、前述したよう
に、適当な緩衝液に酵素を溶解し、この酵素液を
担体を混ぜて撹拌する方法である。次いで、過
等の操作により固・液分離を行ない、得られた固
定化酵素を適当な緩衝液で洗浄する。緩衝液とし
てはリン酸緩衝液（PH６〜７）、トリス塩酸緩衝
液（PH７〜９）または蒸留水などが好適に用いら
れる。 酵素の固定化量は、用いる酵素およびその比活
性や担体の種類等によつても異なるが、通常は担
体１ｇ当りタンパク質として0.2〜1000mg、好ま
しくは１〜200mgが適当である。 酵素の固定化量が担体１ｇ当りタンパク質とし
て0.2mgより少ない場合、固定化率が高く、効率
的に固定化することができるが、発現活性の絶対
値が小さく、目的成分の収量が少ない。一方、固
定化量が担体１ｇ当りタンパク質として1000mgよ
りも多い場合、酵素固定化時の固定化率が低下す
るため、酵素の使用効率が悪いばかりでなく、発
現活性として利用される割合も減少し、好ましく
ない。そのほか上記方法で得られる固定化酵素に
対して適当な多官能性架橋剤、たとえばグルタル
アルデヒドで処理することにより酵素の固定化活
性の維持性能を改良したものを用いても良い。 一方、枝切り酵素を固定化する担体については
固定化操作により高い発現活性を示すものであれ
ば、どのような担体でも使用できるが、特に以下
に示す担体を用いることが好ましい。 すなわち、本発明者らの検討によると、枝切り
酵素の固定化用担体としては微弱酸性の多孔質吸
着樹脂、弱酸性カチオン樹脂、フエノール系吸着
樹脂、粒状多孔質キトサンなどが好適であること
を見出した。より具体的には、デユオライト系樹
脂（ダイヤモンド・シヤムロツク社製）、商品名
「Ｓ−761」、「Ｓ−762」、「ES−771」、「Ｃ−464」
、
「Ａ−７」、「Ｓ−587」、「Ａ−562」や「キトパー
ル）（富士紡績(株)製）等を挙げることができる。
また、固定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼに対
する固定化枝切り酵素の使用比率については、後
者の量を増すほど目的のマルトオリゴ糖の濃度を
高めることができるが、通常は発現活性ベースで
前者１に対して後者0.1〜５、好ましくは0.2〜２
である。固定化枝切り酵素を上限以上に用いて
も、マルトオリゴ糖の濃度向上効果が少なく、反
応器の大きさが比例的に大きくなり好ましくな
い。 本発明者らは、種々の固定化酵素を用いてマル
トオリゴ糖を効率よく生成するため条件について
種々検討を重ねた結果、次のような因子等が大き
く影響していることが判つた。すなわち、使用す
る基質の種類、濃度およびその供給量、固定化担
体の種類（物性）、固定化した酵素量、その充填
塔への充填量、反応系の温度、PH等の条件などで
ある。 これらを系統的に検討した結果、これら因子等
の影響は以下に示す表現および条件の範囲内にお
いて効率よくマルトオリゴ糖を生成することがで
きることを見出した。すなわち、本発明の方法
は、固定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼと固定
化枝切り酵素を併用して反応器に充填し、前述の
澱粉液化液を固定化マルトオリゴ糖生成アミラー
ゼの単位活性あたりの重量基準空塔速度が１×
10-4〜２×10-1hr-1（IU／ｇ）-1、好ましくは２×
10-4〜７×10-2hr-1（IU／ｇ）-1の条件で供給する
ことによつて効率良くマルトオリゴ糖を製造する
ものである。ここで、固定化酵素の単位活性あた
りの重量基準空塔速度は次のようにして求めた値
である。まず、反応器に充填するものと同じ固定
化マルトオリゴ糖生成アミラーゼ10mg（wet）を
0.5mlの10ｍＭリン酸バツフアー（PH7.0）（50ml
三角フラスコ中）に加え、十分に馴染ませた後、
反応器に供給するとものと同じ基質（澱粉の種
類、濃度等も同じ）5.0mlを加えて、反応器と同
じ温度で往復振とう機により120ストロークス／
min.、４cm幅で振とうしながら酵素反応を行い、
生成環元糖をSomogi−Nelson法で測定するか、
高速液体クロマトグラフイーのような分析機器で
直接生成するマルトオリゴ糖を測定して発現する
活性を測定する（この発現活性をＡ IU／ｇ−
担体とする。）。また、反応器に充填する固定化マ
ルトオリゴ糖生成アミラーゼをBg（wet）、反応
器に供給する澱粉液化液量を固形分としてCg−
固形分／hrとするとき、単位活性あたりの重量基
準空塔速度をＣ／（Ａ×Ｂ）hr-1（IU／ｇ）-1とし
て求める。なお、DEが大き場合には原料中に目
的とするマルトオリゴ糖やそれよりも小さい糖を
含むので、上記Ｃの値としてはそれらを除いた固
形分量を用いるのがより実際的である。単位活性
あたりの重量基準空塔速度が２×10-1hr-1（IU／
ｇ）-1よりも大きいと、すなわち反応器中での反
応時間が短いと加水分解反応が十分におこなわれ
ないため、マルトオリゴ糖の収率が悪くなり好ま
しくない。また、単位活性あたりの重量基準空塔
速度が１×10-4hr-1（IU／ｇ）-1よりも小さくなる
と、すなわち反応器中での反応時間が長くなる
と、下記の刊行物に明らかにされているように、
生成したマルトオリゴ糖がさらに過分解されるた
め、グルコース、マルトース等の低分子の糖が生
成され、製品の純度が著しく低下するばかりでな
く、後に精製分離を行なう場合の効率を悪くする
ので好ましくない。 上記したマルトオリゴ糖の過分解については、
β−アミラーゼを除くマルトオリゴ糖生成アミラ
ーゼは、反応初期にはそれぞれのオリゴ糖（マル
トトリオース、マルトテトラオース、マルトペン
タオース、マルトヘキサオース等）を特異的に生
産するが、反応後期になるにつれて生成物そのも
のを分解することが明らかにされている［T.
Nakakuki et al；Carbohydro.Res.、128、297
（1984）］。 複合固定化酵素系の場合、反応器の形態および
充填方法は種々考えられる。たとえば２種類の固
定化酵素を別々の容器に充填する方法、２種類の
固定化酵素を混合してから充填する方法、２種類
のネイテイブ酵素を一定の比率にて混合した後、
両酵素を同時に固定化して充填する方法等があ
る。 これらのいずれの方法を用いても目的とする各
種オリゴ糖の生成量に大差はないが、固定化酵素
を混合して充填する方法が好ましい。 なお、２種類のネイテイブ酵素を同時に固定化
する場合、マルトオリゴ糖生成アミラーゼと枝切
り酵素の両者を同時に効果的に固定化することが
出来る担体を使用することが必要である。このよ
うな担体としては、各種のものを使用しうるが、
特に微弱酸性の多孔質吸着樹脂がすぐれているこ
とが判明した。具体的に例示すると、デユオライ
ト系樹脂の商品名「Ｓ−761」、「Ｓ−762」、「ES
−771」などがある。 本発明の方法によりマルトオリゴ糖を製造する
場合、マルトオリゴ糖の目的とする純度に応じて
様々な製造方式をとり得る。たとえば純度20〜60
％程度のマルトオリゴ糖は、0.5〜40％（ｗ／ｗ）
の澱粉液化液を前述の固定化マルトオリゴ糖生成
アミラーゼと固定化枝切り酵素を充填した反応器
に前述の条件で供給することによつて得られる。
また、さらに高純度（60〜100％）のマルトオリ
ゴ糖は、上記反応器から得られら生成物をさらに
精製分離することにより得られる。この場合の精
製分離手段は特に制限はなく種々の方法をとりう
るが、たとえば限外過、ゲル過、カチオン交
換樹脂カラムクロマトグラフイー、カーボンカラ
ムクロマトグラフイー等の手段が有効である。ま
た、上記精製分離を行なつた際に得られる未分解
物の一部または全部を固定化酵素を充填した反応
器へ再循環させて供給原料の一部とすることによ
つて原料澱粉液化液あたりのマルトオリゴ糖収量
を増大させることができる。 固定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼを単独
で、もしくは固定化枝切り酵素と共に充填した反
応器に澱粉液化液を供給するにあたり、澱粉液化
液中のカルシウムイオン濃度を適切な範囲に制御
することによつて、酵素の活性維持性能を向上さ
せうることを見出した。すなわち、たとえば固定
化マルトテトラオース生成アミラーゼの場合、澱
粉を溶解させるために用いる水が水道水であると
き、澱粉液化液中のカルシウムイオンが0.1〜5.0
ｍＭ、好ましくは0.2〜2.0ｍＭとなるように調製
することによつて、このような調製を行わなかつ
た場合よりも活性維持性能を1.2〜1.5倍程度に改
善することができる。また、澱粉を溶解させるた
めに用いる水が蒸留水であるときは、澱粉液化液
中のカルシウムイオンが0.5〜10ｍＭ、好ましく
は１〜５ｍＭとなるように調整することにより、
無調整の場合よりも活性維持性能を２〜３倍程度
に改善することができる。なお、この特性は高温
における連続運転下での安定性の向上に顕著に認
められる。マルトテトラオース生成アミラーゼ以
外の酵素の場合についても同様の効果がみられ
る。 ［実施例］ 次に、本発明を実施例により詳しく説明する。 実施例 １ 担体としてデユオライト系吸着樹脂「Ｓ−761」
を用い、マルトテトラオース生成アミラーゼ（シ
ユードモナス・ストツツエリ起源、比活性
80.8IU／mg・タンパク）を固定化して固定化酵素
を得た。すなわち、担体20ｇを50ｍＭ Tris−
HClバツフアー（PH7.0）で十分に平衡化した後、
100mlの同一バツフアーに溶解した20000IUの酵
素を添加し、室温で１時間往復振とう（200ml三
角フラスコ中120ストローク／分、４cm幅）しな
がら酵素を担体に固定化した。 次いで、紙により過した後、10ｍＭ
Tris−HClバツフアー（PH7.0）でタンパクが溶
出しなくなるまで十分に洗浄し、発現活性が
252IU／ｇ−担体の固定化マルトテトラオース生
成酵素を得た。 また、枝切り酵素であるプルラナーゼ（クレブ
シエーラ・ニユーモニア起源、比活性50IU／
mg・タンパク）を用いてPH6.0のリン酸バツフア
ーを使用したこと以外は上記と同様の方法で同一
の担体に固定化し、発現活性74.9IU／ｇ−担体の
固定化酵素を得た。 次に、直径27mm、長さ130mmのガラスカラム２
本を用いて、一方にマルトテトラオース生成固定
化酵素10mlを、他方にマルトテトラオース生成固
定化酵素10mlと固定化枝切り酵素８mlを混合（発
現活性比で前者：後者＝約４：１）して充填し
た。これに基質として26.2％（ｗ／ｗ）の澱粉液
化液（DE＝７、PH7.2）を用い、温度45℃、流速
24ml／hrの条件で連続通液した。結果を第１図に
示す。 第１図から明らかなように、両カラム共に850
時間の連続運転を行なつても活性の低下は観察さ
れなかつた。マルトテトラオース生成固定化酵素
のみを充填したカラム（カラム）ではマルトテ
トラオースの生成量が約45％（ｗ／ｗ）であるの
に対し、マルトテトラオース生成固定化酵素と枝
切り固定化酵素を混合して充填した複合酵素系
（カラム）の場合、約50％（ｗ／ｗ）のマルト
テトラオースが生成した。 比較例 20.0％（ｗ／ｗ）の澱粉液化液（DE＝７）100
ｇに対し、マルトテトラオース生成アミラーゼ
40IU（基質固形分１ｇあたり2IU）およびプルラ
ナーゼ20IU（基質固形分１ｇあたり1IU）を添加
し、温度45℃、PH6.5の条件で糖化反応を行つた。
そのときのモルトテトラオース生成の経時変化を
下表に示す。
しくは特定の担体に固定化した固定化マルトオリ
ゴ糖生成アミラーゼと固定化枝切り酵素を充填し
た反応器に澱粉液化液を供給し、作用させること
を特徴とするマルトオリゴ糖の製造方法に関す
る。 ［従来の技術及び発明が解決しようとする問題
点］ 従来よりマウトースは麦芽、大豆等の植物由来
のβ−アミラーゼを用いて回分法により工業的に
製造されているが、マルトトリオース以上のグル
コース重合度を有するマルトオリゴ糖は、澱粉ま
たはアミロースを酸または液化型α−アミラーゼ
で部分加水分解して調製していた。 近年になり、澱粉またはアミロースに作用して
マルトトリオース、マルトテトラオース、マルト
ペンタオース、マルトヘキサオース等のマルトオ
リゴ糖を特異的に生成する各種マルトオリゴ糖生
成アミラーゼが相ついで発見され、各種オリゴ糖
の工業的生産が期待されている。 マルトオリゴ糖生成アミラーゼとしては次のも
のが知られている。 マルトース生成アミラーゼとしては、大豆、麦
芽等の植物起源のβ−アミラーゼ以外に、バチル
ス・ポリミキサ［Bacillus polymyxa、J.Robyt
and D.French、Arch.Biochem Biophys 104、
338（1964）］、バチルス・セレウス［Bacillus
cereus、Y.Takasaki、Agric.Biol.Chem.、40、
1515−1523（1976）］、シユードモナス属菌
［Pseudomonas sp.S.Shinke et al.、J.Ferment.
Technol.53、693−698（1975）］、ストレプトミセ
ス・ヒグロスコピカス［Streptomyces
hygroscopicus、Y.Hidaka et al.、Starke、26、
413（1974）］、ストレプトミセス・プレコツクス
［Streptomyces praecox、若生勝雄ら、澱粉化
学、25、155（1978）］等の微生物起源のマルトー
ス生成アミラーゼがある。 また、マルトトリオース以上のグルコース重合
度を有するオリゴ糖を生成するアミラーゼとして
は次のものが知られている。 マルトトリオース生成アミラーゼ［若生勝雄
ら：澱粉化学、26、175（1979）、ストレプトミセ
ス・グリセウス（Streptomyces griseus）起源
のもの；高崎義幸：昭和58年日本農芸化学大会要
旨集、P169（1983）、バチルス（Bacillus）属起源
のもの］ マルトテトラオース生成アミラーゼ［J.F.
Robyt and R.J.Ackerman：Arch.Biochem.
Biophys.、145、105（1971）、シユードモナス・
ストツツエリ（Pseudomonas stutzeri）起源の
もの］ マルトペンタオース生成アミラーゼ［N.
Saito：Arch.Biochem.Biophys.、155、290
（1973）、バチルス・リケニホルミス（Bacillus
licheniformis）起源のもの；小林等；昭和58年
度日本澱粉学会大会要旨集、P301（1983）；吉儀
ら：昭和59年度日本農芸化学大会要旨集、P584
（1984）］ マルトヘキサオース生成アミラーゼ［K.
Kainumaら：FEBS Lett.、26、281（1972）、エ
アロバクター・エアロゲネス（Aerobacter
aerogenes）起源のもの；J.F.Kennedy and C.
A.White：Sta¨rke、3193（1979）；谷口ら：澱粉化
学、29、107（1982）；Y.Takasaki：Agric.Biol.
Chem.、47、2193（1983）］ しかしながら、β−アミラーゼを除きこれらの
マルトオリゴ糖生成アミラーゼは一般のアミラー
ゼに比べて非常に高価であり、scらアミラーゼを
用いて製造されたマルトオリゴ糖の試薬グレード
品が少量生産されているにすぎない。したがつ
て、これらマルトオリゴ糖生成アミラーゼを用い
て各種オリゴ糖を工業的に生産するためには、こ
れらアミラーゼを効率的に使用することが不可欠
である。その具体的手法としてこれらアミラーゼ
を固定化して使用することが考えられる。 そこで、本発明者らはオリゴ糖の効率的な製造
法について検討を重ね、各種マルトオリゴ糖生成
アミラーゼを担体に固定化する技術（特願昭60−
81340号）を開発すると共に、該固定化酵素を用
いたマルトオリゴ糖の製造方法（特願昭60−
125093号）を提案した。 さらに効率よく高純度のマルトオリゴ糖を得る
べく研究を重ねた結果、固定化マルトオリゴ糖生
成アミラーゼと固定化枝切り酵素を併用すること
によつて目的が達成でき、しかも固定化マルトオ
リゴ糖生成アミラーゼ単一系よりも、より広範囲
かつ高流速でカラム通液することが可能であるこ
とを見出し、かかる知見に基いて本発明を完成す
るに至つた。なお、枝切り酵素が作用する基質は
一般に巨大分子であるので、従来は該酵素を固定
化することなく使用されていた。 ［問題点を解決するための手段］ すなわち本発明は、酵素との親和性が80％以上
であり、かつ100Å以上の細孔径を有する細孔の
比表面積が20〜200m2／ｇである多孔性担体に固
定したマルトオリゴ糖生成アミラーゼを固定化枝
切り酵素と共に澱粉液化液に作用させることを特
徴とするマルトオリゴ糖の製造方法を提供するも
のである。 本発明で使用する原料澱粉としては種々のもの
が使用できるが、通常馬鈴薯澱粉、甘薯澱粉、コ
ーンスターチ、ワキシーコーンスターチ、キヤツ
サバ澱粉等を用いる。また、反応器に通液する澱
粉液化液のグルコース当量（DE）は通常、１〜
35、好ましくは５〜20の範囲にあるものを用いる
のが良い。ここで澱粉液化液のDEがワシーコー
ンスターチの場合１以下、それ以外の澱粉では
DEが５以下のものは老化が激しく、また老化を
防止するために70〜80℃以上に加熱保持する必要
があり、工程上不利である。一方、DEが５以上
になると、グルコース、マルトース等の低分子糖
のの生成が増大し、かつ目的とするマルトオリゴ
糖の収量が低下するので適当でない。なお、各種
澱粉を液化する方法は特に制限はないが、通常は
液化型α−アミラーゼまたは塩酸等の酸で処理す
る。 次に、マルトオリゴ糖とはマルトース、マルト
トリオース、マルトテトラオース、マルトペンタ
オース、マルトヘキサオース等であり、マルトオ
リゴ糖生成アミラーゼとは前述の各種マルトオリ
ゴ糖を生成するアミラーゼである。 また、枝切り酵素としては、バチルス・アシド
プルリテイカス（Bacillus acidopullulyticus）
およびクレブシエーラ・ニユーモニア
（Klebsiella pneumoniae）起源のプルラナーゼ
やシユードモナス・アミロデラモサ
（Pseudomonas amyloderamosa）、サイトフア
ーガ属菌（Cytophaga sp.）等が生産するイソア
ミラーゼを用いることができるが、オリゴ糖生成
アミラーゼはほとんどがPH5.0〜8.5の範囲に至適
PHを有するため、同様の安定かつ至適PH範囲を有
する枝切り酵素を用いるのが望ましい。 酵素の固定化方法としては各種の方法が知られ
ており、その１つに物理的吸着法、イオン結合
法、共有結合法等を含む担体結合法がある。この
中、分理的吸着法、イオン結合法は操作が簡単で
あり、酵素タンパク質の活性中心の破壊あるいは
高次構造の変化が小さく、また担体の再生利用も
容易であることから適当な担体を発見できれば工
業化に対して有望な方法と云える。 また、本発明者らが先に提案したマルトオリゴ
糖生成アミラーゼの固定化手段（特開昭61−
239892号）も有利な方法の１つである。この方法
ではマルトオリゴ糖生成アミラーゼの担体とし
て、酵素との親和性が80％以上であり、かつ100
Å以上の細孔径を有する細孔の比表面積が20〜
200m2／ｇである多孔性担体を使用する。ここで、
酵素と担体の親和性は次の方法により求めた値を
意味する。 担体0.5ｇと25IUの酵素（PH7.0の50ｍＭリン酸
緩衝液2.0mlに溶解したもの）を50ml三角フラス
に入れ、室温下で１時間、120ストローク、４cm
幅で振とうしながら酵素を担体に固定化したのち
過を行ない、得られた液中の活性を測定して
次式により酵素と担体との親和性を求める。 添加した酵素活性−液中の酵素活性／添加した酵素
活性×100 親和性を求める際に用いる酵素の純度は必ずし
も限定されるものではないが、好ましくは比活性
が30IU／mg・タンパク質以上あるものを使用す
る。なお、上記酵素と担体の親和性は工業的に利
用する場合の酵素活性／担体重量比よりも低いレ
ベルで求めたものであるが、酵素と担体の親和性
を知る尺度として重要である。すなわち、実際に
高い酵素活性／担体重量比において固定化した酵
素が基質に対し高い発現活性を示すものは上記親
和性についても高い値を示すことを本発明者らは
見出している。この親和性については、上記の如
く80％以上であることが必要であるが、マルトテ
トラオース生成アミラーゼ用担体の場合は95％以
上であることが好ましく、その他のオリゴ糖生成
アミラーゼ用担体の場合は80％以上であることが
好ましい。これらの値は使用酵素の起源および比
活性によつて決まる。ここで発現活性とは以下の
如く定義されるものである。 固定化酵素の発現する活性はその使用条件によ
つて絶対値が大きく変わるので、次のような測定
条件を設定して求めた。すなわち、固定化酵素10
mg（wet）を0.5mlの10ｍＭリン酸バツフアー（PH
6.0〜7.0）（50ml三角フラスコ中）に加え、十分
に馴染ませた後、10w／ｖ％可溶性澱粉（Merck
社製）5.0mlを加えて40℃で10分間往復振とう機
により120ストローク／min、４cm幅で振とうし
ながら酵素反応を行ない、生成還元糖をSmogyi
−Nelson法で測定し、発現する活性を求めた。 また、枝切り酵素であるプルラナーゼを固定化
した固定化酵素の場合は、固定化酵素10mg
（wet）を0.5mlの10ｍＭリン酸バツフアー（PH
6.0）（50ml三角フラスコ中）に加え、上記と同様
に処理した後、同バツフアーに溶解した10％
（ｗ／ｖ）プルラン溶液5.0mlを加え上記と同様の
方法で発現活性を求めた。 なお、１単位とは１分間に1μmolのグルコシド
結合を切断する酵素量を意味する。 この担体は、さらに以下の条件を満足するもの
であることを要する。すなわち、担体の100Å以
上の細孔径を有する細孔の比表面積が20〜200
m2／ｇであることが必要である。この比表面積が
200m2／ｇを越えると、担体は強度が弱いものと
なり、好ましくない。なお、マルトテトラオース
生成アミラーゼ用担体にあつては、さらに400Å
以上の細孔径を有する細孔の比表面積が３〜100
m2／ｇ、好ましくは５〜50m2／ｇであることが望
ましい。 ここで、比表面積は水銀圧入法により測定した
値である。 上記の条件は、いずれか一方を満足するだけで
は不十分であり、すべての条件を同時に満たすも
のだけが基質に対して高い反応性を示す。 多孔性担体としては上記特性を満足するもので
はれば、素材、製法等を問わないが、通常はフエ
ノール系吸着樹脂、スチレン−ジビニルベンゼン
系吸着樹脂、トリアジン系吸着樹脂、アクリルエ
ステル系吸着樹脂、弱塩基性アニオン交換樹脂な
どの多孔性合成樹脂が用いられる。より具体的に
は、デユオライト系樹脂（ダイヤモンド・シヤム
ロツク社製）の商品名「Ｓ−761」、「Ｓ−762」、
「ES−771」、「ES−8610」、「Ａ−７」など；ダイ
ヤイオン系樹脂（三菱化成工業(株)製）の商品名
「WK−10」、「HP−10」、「HP−20」、「HP−50」、
「SP−206」など；アンバーライト系樹脂（ロー
ム・アンド・ハース社製）の商品名「XAD−
７」、「XAD−８」などを挙げることができる。 また、多孔性担体の粒径については、発現活性
が高ければ特に制限はないが、通常は0.05〜1.5
mm、より好ましくは0.2〜1.0mmのものを用いるの
が適当である。粒径が小さいことは酵素の固定化
や発現活性に対しては好ましい要因であるが、あ
まり小さいと、固定化酵素を反応器に充填し、こ
れち澱粉液化液を供給したときに、圧力損失が大
きいため、運転上不都合である。一方、粒径があ
まり大きいと、酵素の固定化や発現活性に対して
効率的でない。 上記担体への酵素の固定化は各種の方法を適用
しうるが、最も一般的な方法は、前述したよう
に、適当な緩衝液に酵素を溶解し、この酵素液を
担体を混ぜて撹拌する方法である。次いで、過
等の操作により固・液分離を行ない、得られた固
定化酵素を適当な緩衝液で洗浄する。緩衝液とし
てはリン酸緩衝液（PH６〜７）、トリス塩酸緩衝
液（PH７〜９）または蒸留水などが好適に用いら
れる。 酵素の固定化量は、用いる酵素およびその比活
性や担体の種類等によつても異なるが、通常は担
体１ｇ当りタンパク質として0.2〜1000mg、好ま
しくは１〜200mgが適当である。 酵素の固定化量が担体１ｇ当りタンパク質とし
て0.2mgより少ない場合、固定化率が高く、効率
的に固定化することができるが、発現活性の絶対
値が小さく、目的成分の収量が少ない。一方、固
定化量が担体１ｇ当りタンパク質として1000mgよ
りも多い場合、酵素固定化時の固定化率が低下す
るため、酵素の使用効率が悪いばかりでなく、発
現活性として利用される割合も減少し、好ましく
ない。そのほか上記方法で得られる固定化酵素に
対して適当な多官能性架橋剤、たとえばグルタル
アルデヒドで処理することにより酵素の固定化活
性の維持性能を改良したものを用いても良い。 一方、枝切り酵素を固定化する担体については
固定化操作により高い発現活性を示すものであれ
ば、どのような担体でも使用できるが、特に以下
に示す担体を用いることが好ましい。 すなわち、本発明者らの検討によると、枝切り
酵素の固定化用担体としては微弱酸性の多孔質吸
着樹脂、弱酸性カチオン樹脂、フエノール系吸着
樹脂、粒状多孔質キトサンなどが好適であること
を見出した。より具体的には、デユオライト系樹
脂（ダイヤモンド・シヤムロツク社製）、商品名
「Ｓ−761」、「Ｓ−762」、「ES−771」、「Ｃ−464」
、
「Ａ−７」、「Ｓ−587」、「Ａ−562」や「キトパー
ル）（富士紡績(株)製）等を挙げることができる。
また、固定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼに対
する固定化枝切り酵素の使用比率については、後
者の量を増すほど目的のマルトオリゴ糖の濃度を
高めることができるが、通常は発現活性ベースで
前者１に対して後者0.1〜５、好ましくは0.2〜２
である。固定化枝切り酵素を上限以上に用いて
も、マルトオリゴ糖の濃度向上効果が少なく、反
応器の大きさが比例的に大きくなり好ましくな
い。 本発明者らは、種々の固定化酵素を用いてマル
トオリゴ糖を効率よく生成するため条件について
種々検討を重ねた結果、次のような因子等が大き
く影響していることが判つた。すなわち、使用す
る基質の種類、濃度およびその供給量、固定化担
体の種類（物性）、固定化した酵素量、その充填
塔への充填量、反応系の温度、PH等の条件などで
ある。 これらを系統的に検討した結果、これら因子等
の影響は以下に示す表現および条件の範囲内にお
いて効率よくマルトオリゴ糖を生成することがで
きることを見出した。すなわち、本発明の方法
は、固定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼと固定
化枝切り酵素を併用して反応器に充填し、前述の
澱粉液化液を固定化マルトオリゴ糖生成アミラー
ゼの単位活性あたりの重量基準空塔速度が１×
10-4〜２×10-1hr-1（IU／ｇ）-1、好ましくは２×
10-4〜７×10-2hr-1（IU／ｇ）-1の条件で供給する
ことによつて効率良くマルトオリゴ糖を製造する
ものである。ここで、固定化酵素の単位活性あた
りの重量基準空塔速度は次のようにして求めた値
である。まず、反応器に充填するものと同じ固定
化マルトオリゴ糖生成アミラーゼ10mg（wet）を
0.5mlの10ｍＭリン酸バツフアー（PH7.0）（50ml
三角フラスコ中）に加え、十分に馴染ませた後、
反応器に供給するとものと同じ基質（澱粉の種
類、濃度等も同じ）5.0mlを加えて、反応器と同
じ温度で往復振とう機により120ストロークス／
min.、４cm幅で振とうしながら酵素反応を行い、
生成環元糖をSomogi−Nelson法で測定するか、
高速液体クロマトグラフイーのような分析機器で
直接生成するマルトオリゴ糖を測定して発現する
活性を測定する（この発現活性をＡ IU／ｇ−
担体とする。）。また、反応器に充填する固定化マ
ルトオリゴ糖生成アミラーゼをBg（wet）、反応
器に供給する澱粉液化液量を固形分としてCg−
固形分／hrとするとき、単位活性あたりの重量基
準空塔速度をＣ／（Ａ×Ｂ）hr-1（IU／ｇ）-1とし
て求める。なお、DEが大き場合には原料中に目
的とするマルトオリゴ糖やそれよりも小さい糖を
含むので、上記Ｃの値としてはそれらを除いた固
形分量を用いるのがより実際的である。単位活性
あたりの重量基準空塔速度が２×10-1hr-1（IU／
ｇ）-1よりも大きいと、すなわち反応器中での反
応時間が短いと加水分解反応が十分におこなわれ
ないため、マルトオリゴ糖の収率が悪くなり好ま
しくない。また、単位活性あたりの重量基準空塔
速度が１×10-4hr-1（IU／ｇ）-1よりも小さくなる
と、すなわち反応器中での反応時間が長くなる
と、下記の刊行物に明らかにされているように、
生成したマルトオリゴ糖がさらに過分解されるた
め、グルコース、マルトース等の低分子の糖が生
成され、製品の純度が著しく低下するばかりでな
く、後に精製分離を行なう場合の効率を悪くする
ので好ましくない。 上記したマルトオリゴ糖の過分解については、
β−アミラーゼを除くマルトオリゴ糖生成アミラ
ーゼは、反応初期にはそれぞれのオリゴ糖（マル
トトリオース、マルトテトラオース、マルトペン
タオース、マルトヘキサオース等）を特異的に生
産するが、反応後期になるにつれて生成物そのも
のを分解することが明らかにされている［T.
Nakakuki et al；Carbohydro.Res.、128、297
（1984）］。 複合固定化酵素系の場合、反応器の形態および
充填方法は種々考えられる。たとえば２種類の固
定化酵素を別々の容器に充填する方法、２種類の
固定化酵素を混合してから充填する方法、２種類
のネイテイブ酵素を一定の比率にて混合した後、
両酵素を同時に固定化して充填する方法等があ
る。 これらのいずれの方法を用いても目的とする各
種オリゴ糖の生成量に大差はないが、固定化酵素
を混合して充填する方法が好ましい。 なお、２種類のネイテイブ酵素を同時に固定化
する場合、マルトオリゴ糖生成アミラーゼと枝切
り酵素の両者を同時に効果的に固定化することが
出来る担体を使用することが必要である。このよ
うな担体としては、各種のものを使用しうるが、
特に微弱酸性の多孔質吸着樹脂がすぐれているこ
とが判明した。具体的に例示すると、デユオライ
ト系樹脂の商品名「Ｓ−761」、「Ｓ−762」、「ES
−771」などがある。 本発明の方法によりマルトオリゴ糖を製造する
場合、マルトオリゴ糖の目的とする純度に応じて
様々な製造方式をとり得る。たとえば純度20〜60
％程度のマルトオリゴ糖は、0.5〜40％（ｗ／ｗ）
の澱粉液化液を前述の固定化マルトオリゴ糖生成
アミラーゼと固定化枝切り酵素を充填した反応器
に前述の条件で供給することによつて得られる。
また、さらに高純度（60〜100％）のマルトオリ
ゴ糖は、上記反応器から得られら生成物をさらに
精製分離することにより得られる。この場合の精
製分離手段は特に制限はなく種々の方法をとりう
るが、たとえば限外過、ゲル過、カチオン交
換樹脂カラムクロマトグラフイー、カーボンカラ
ムクロマトグラフイー等の手段が有効である。ま
た、上記精製分離を行なつた際に得られる未分解
物の一部または全部を固定化酵素を充填した反応
器へ再循環させて供給原料の一部とすることによ
つて原料澱粉液化液あたりのマルトオリゴ糖収量
を増大させることができる。 固定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼを単独
で、もしくは固定化枝切り酵素と共に充填した反
応器に澱粉液化液を供給するにあたり、澱粉液化
液中のカルシウムイオン濃度を適切な範囲に制御
することによつて、酵素の活性維持性能を向上さ
せうることを見出した。すなわち、たとえば固定
化マルトテトラオース生成アミラーゼの場合、澱
粉を溶解させるために用いる水が水道水であると
き、澱粉液化液中のカルシウムイオンが0.1〜5.0
ｍＭ、好ましくは0.2〜2.0ｍＭとなるように調製
することによつて、このような調製を行わなかつ
た場合よりも活性維持性能を1.2〜1.5倍程度に改
善することができる。また、澱粉を溶解させるた
めに用いる水が蒸留水であるときは、澱粉液化液
中のカルシウムイオンが0.5〜10ｍＭ、好ましく
は１〜５ｍＭとなるように調整することにより、
無調整の場合よりも活性維持性能を２〜３倍程度
に改善することができる。なお、この特性は高温
における連続運転下での安定性の向上に顕著に認
められる。マルトテトラオース生成アミラーゼ以
外の酵素の場合についても同様の効果がみられ
る。 ［実施例］ 次に、本発明を実施例により詳しく説明する。 実施例 １ 担体としてデユオライト系吸着樹脂「Ｓ−761」
を用い、マルトテトラオース生成アミラーゼ（シ
ユードモナス・ストツツエリ起源、比活性
80.8IU／mg・タンパク）を固定化して固定化酵素
を得た。すなわち、担体20ｇを50ｍＭ Tris−
HClバツフアー（PH7.0）で十分に平衡化した後、
100mlの同一バツフアーに溶解した20000IUの酵
素を添加し、室温で１時間往復振とう（200ml三
角フラスコ中120ストローク／分、４cm幅）しな
がら酵素を担体に固定化した。 次いで、紙により過した後、10ｍＭ
Tris−HClバツフアー（PH7.0）でタンパクが溶
出しなくなるまで十分に洗浄し、発現活性が
252IU／ｇ−担体の固定化マルトテトラオース生
成酵素を得た。 また、枝切り酵素であるプルラナーゼ（クレブ
シエーラ・ニユーモニア起源、比活性50IU／
mg・タンパク）を用いてPH6.0のリン酸バツフア
ーを使用したこと以外は上記と同様の方法で同一
の担体に固定化し、発現活性74.9IU／ｇ−担体の
固定化酵素を得た。 次に、直径27mm、長さ130mmのガラスカラム２
本を用いて、一方にマルトテトラオース生成固定
化酵素10mlを、他方にマルトテトラオース生成固
定化酵素10mlと固定化枝切り酵素８mlを混合（発
現活性比で前者：後者＝約４：１）して充填し
た。これに基質として26.2％（ｗ／ｗ）の澱粉液
化液（DE＝７、PH7.2）を用い、温度45℃、流速
24ml／hrの条件で連続通液した。結果を第１図に
示す。 第１図から明らかなように、両カラム共に850
時間の連続運転を行なつても活性の低下は観察さ
れなかつた。マルトテトラオース生成固定化酵素
のみを充填したカラム（カラム）ではマルトテ
トラオースの生成量が約45％（ｗ／ｗ）であるの
に対し、マルトテトラオース生成固定化酵素と枝
切り固定化酵素を混合して充填した複合酵素系
（カラム）の場合、約50％（ｗ／ｗ）のマルト
テトラオースが生成した。 比較例 20.0％（ｗ／ｗ）の澱粉液化液（DE＝７）100
ｇに対し、マルトテトラオース生成アミラーゼ
40IU（基質固形分１ｇあたり2IU）およびプルラ
ナーゼ20IU（基質固形分１ｇあたり1IU）を添加
し、温度45℃、PH6.5の条件で糖化反応を行つた。
そのときのモルトテトラオース生成の経時変化を
下表に示す。
【表】
＊ 固形分あたりの含有量
［発明の効果］ 実施例に示した結果は、他のマルトオリゴ糖生
成アミラーゼを用いた場合も同様であり、本発明
により固定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼと固
定化枝切り酵素を併用することによつて、目的と
する各種マルトオリゴ糖の純度の向上や単位活性
あたりの重量基準空塔速度の拡大が可能である。
さらに、本発明よれば、酵素を固定化しないで用
いた場合に比し、反応時間を大幅に短縮すること
ができ、装置の小型化を図ることができる。ま
た、固定化することにより、酵素を繰り返し使用
できるので、酵素の使用効率も向上する。したが
つて、本発明の方法は各種マルトオリゴ糖の工業
的な製造法として有用である。
［発明の効果］ 実施例に示した結果は、他のマルトオリゴ糖生
成アミラーゼを用いた場合も同様であり、本発明
により固定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼと固
定化枝切り酵素を併用することによつて、目的と
する各種マルトオリゴ糖の純度の向上や単位活性
あたりの重量基準空塔速度の拡大が可能である。
さらに、本発明よれば、酵素を固定化しないで用
いた場合に比し、反応時間を大幅に短縮すること
ができ、装置の小型化を図ることができる。ま
た、固定化することにより、酵素を繰り返し使用
できるので、酵素の使用効率も向上する。したが
つて、本発明の方法は各種マルトオリゴ糖の工業
的な製造法として有用である。
第１図は単一酵素系（カラム）の複合酵素系
（カラム）で連続通液した場合のアルトテトラ
オース生成量を比較したグラフである。
（カラム）で連続通液した場合のアルトテトラ
オース生成量を比較したグラフである。
Claims (1)
- １ 酵素との親和性が80％以上であり、かつ100
Å以上の細孔径を有する細孔の比表面積が20〜
200m2／ｇである多孔性担体に固定したマルトオ
リゴ糖生成アミラーゼを固定化枝切り酵素と共に
澱粉液化液に作用させることを特徴とするマルト
オリゴ糖の製造方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21943086A JPS6374489A (ja) | 1986-09-19 | 1986-09-19 | マルトオリゴ糖の製造方法 |
| EP87112006A EP0257535B1 (en) | 1986-08-28 | 1987-08-19 | Process for production of starch sugar |
| DE3788908T DE3788908T2 (de) | 1986-08-28 | 1987-08-19 | Verfahren zur Herstellung von Zuckern aus Stärke. |
| US07/494,851 US5130243A (en) | 1986-08-28 | 1990-03-15 | Process for production of starch sugar |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21943086A JPS6374489A (ja) | 1986-09-19 | 1986-09-19 | マルトオリゴ糖の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6374489A JPS6374489A (ja) | 1988-04-04 |
| JPH0566114B2 true JPH0566114B2 (ja) | 1993-09-21 |
Family
ID=16735274
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21943086A Granted JPS6374489A (ja) | 1986-08-28 | 1986-09-19 | マルトオリゴ糖の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6374489A (ja) |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6040839B2 (ja) * | 1977-12-28 | 1985-09-12 | 天野製薬株式会社 | 非結晶性マルト−スシロップの製造方法 |
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| JPS594118A (ja) * | 1982-06-30 | 1984-01-10 | Fujitsu Ltd | 半導体装置の製造方法 |
| JPS5933359A (ja) * | 1982-08-17 | 1984-02-23 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | シアン酸エステル系樹脂成形材料の製法 |
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-
1986
- 1986-09-19 JP JP21943086A patent/JPS6374489A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6374489A (ja) | 1988-04-04 |
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