JPH06157520A

JPH06157520A - 新規物質ｈｑ２４

Info

Publication number: JPH06157520A
Application number: JP30381792A
Authority: JP
Inventors: Kazutoshi Shindo; 藤一敏新; Shinichiro Kato; 藤慎一郎加
Original assignee: Kirin Brewery Co Ltd
Current assignee: Kirin Brewery Co Ltd
Priority date: 1992-11-13
Filing date: 1992-11-13
Publication date: 1994-06-03

Abstract

(57)【要約】【目的】活性酸素種を消去し過酸化脂質生成を強力に
抑制する作用を有する新規な化合物を提供する。【構成】次式（Ｉ）で示される化合物ＨＱ２４または
その付加塩。【化１】式中、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、それぞれ塩素原子また
は臭素原子を表し、互いに同一でも異なっていてもよ
い。上記の化合物は活性酸素種に起因する各種疾患の予
防および治療剤として使用できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】〔発明の背景〕

【産業上の利用分野】本発明はピロール骨格を有する新
規物質に関し、さらに詳しくは、本発明は活性酸素消去
作用および過酸化脂質生成抑制作用を有する新規物質Ｈ
Ｑ２４に関する。

【０００２】

【従来の技術】高齢化社会の到来と食生活の変化に伴
い、脳虚血障害や虚血性心疾患などの虚血性各種疾患な
らびにリウマチ・動脈硬化症・腎炎といった疾患が近年
急増している。これら疾患の発症や進展に活性酸素種
（active oxygen radicals）が関与していることが示唆
されている。すなわち、生体の病的状態にあっては、活
性酸素種が疾患組織中に多量に発生し、場合によっては
内因性の鉄と錯体を形成することによってさらに強力な
反応性を有するハイドロキシラジカル（ＯＨ・）とな
り、組織に大量の過酸化脂質生成をもたらす。活性酸素
種の一種でもあるこの過酸化脂質は、血管をはじめ正常
な臓器・組織に障害をもたらし、血管障害・炎症・浮腫
などの二次的病変の原因となる〔日本臨床、４６（１
０）、６４（１９８８）〕。これらの知見をもとに、上
記記載の疾患以外の各種病態における活性酸素種の関与
についても幅広く研究された結果、小腸や肝臓などの虚
血性障害、肺酸素毒症、アルツハイマー型痴呆症、敗血
症、喘息、エンドトキシンショック、潰瘍、白内障、あ
るいは気管支炎・肝炎・膵炎・皮膚炎・関節炎などの各
種臓器などの炎症、さらには発癌や放射線障害などに
も、活性酸素種の関与が示唆されるようになった〔大柳
善彦著、ＳＯＤと活性酸素調節剤、日本医学館（１９８
９）〕。さらに、虚血性障害に加え、虚血後に血流を再
開通した際に組織の再酸素化状態により活性酸素種の生
成が著増することが近年示唆され、各種臓器の虚血再灌
流性障害や臓器移植障害などにあっても、活性酸素種や
過酸化脂質が障害原因物質として注目されつつある〔活
性酸素・フリーラジカル１（３）、２５８（１９９
０）〕。従って、活性酸素種を消去し過酸化脂質生成抑
制ができれば、細胞機能の低下や壊死が防止され、組織
障害を抑止して活性酸素種に基づく上記した各種疾患の
予防・治療が可能になるものと期待される。このような
観点からこれまでにも活性酸素消去剤、あるいは抗酸化
剤が種々検討され、上記疾患の予防・治療剤として提案
されてきた〔近藤元治監修フリーラジカルの臨床、第
３巻、４１（１９８８）〕。これらの典型的なものとし
て、ビタミンＣおよびＥ、イデベノン〔Biochem. Bioph
ys. Res. Commun.１２５、１０４６（１９８４）〕、
ＣＶ−３６１１〔武田研究所報４７、２７（１９８
８）〕、ニゾフェノン〔J. Neurochem. ３７、９３４
（１９８１）〕、フルナリジン〔Arch. Int. Pharmacod
yn.Ther. ２７２、２８３（１９８４）〕などがある。
これら各物質については、活性酸素消去作用ないし過酸
化脂質生成抑制作用があるとする報告がなされている
が、その作用は強力であるとはいえず、病態の予防治療
目的に十分なものではない。

【０００３】〔発明の概要〕

【発明が解決しようとする課題】上記したように、活性
酸素種を消去し過酸化脂質生成を強力に抑制する作用を
有する物質は、上記各種疾患に対し予防および治療剤と
して使用できる。本発明は、活性酸素種を消去し過酸化
脂質生成を強力に抑制する作用を有する新規な物質を提
供することを目的とするものである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは前記課題に
つき鋭意検討し、化合物ＨＱ２４が活性酸素種を消去し
過酸化脂質生成を抑制する作用を有することを見出し
た。すなわち、本発明による新規化合物は次式（Ｉ）で
示されるＨＱ２４またはその付加塩である。

【化２】式中、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、それぞれ塩素原子また
は臭素原子を表し、互いに同一でも異なっていてもよ
い。

【０００５】〔発明の具体的説明〕新規化合物ＨＱ２４１）化学構造本発明による新規化合物ＨＱ２４は、前記の一般式
（Ｉ）で示される化学構造を有している。この化学構造
は後記実施例に記載された物理化学的性状（特にプロト
ン核磁気共鳴スペクトル、¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル、
紫外部吸収スペクトル、赤外部スペクトルおよび物質分
析スペクトル）をもとにして決定されたものである。式
（Ｉ）で示される本発明化合物は、具体的には上記Ｒ_１
〜Ｒ_３の前記した定義のように、Ｒ_１〜Ｒ_３がすべて塩
素原子である化合物（以後、ＨＱ２４−Ａということも
ある）、Ｒ_１〜Ｒ_３がすべて臭素原子である化合物（以
後、ＨＱ２４−Ｂということもある）およびＲ_１、
Ｒ_２、Ｒ_３のいずれか１種または２種が塩素原子であ
り、残りが臭素原子である化合物である。式（Ｉ）で示
される化合物は、ピロール環の窒素原子の位置において
酸付加塩および塩基付加塩が有り得る。また、カルボン
酸の位置において塩基付加塩が有り得る。本発明化合物
は、これらの付加塩をも包含するものである。酸付加塩
としては、例えば無機酸、例えば塩酸、硫酸、硝酸、リ
ン酸など、あるいは有機酸、例えば酢酸、プロピオン
酸、マレイン酸、オレイン酸、パルミチン酸、クエン
酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、グルタミン酸、パン
トテン酸、ラウリルスルホン酸、との塩などをあげるこ
とができる。また、塩基付加塩としては、例えばアルカ
リ金属化合物（例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウ
ムなど）との塩、アルカリ土類金属化合物（例えば水酸
化カルシウム、水酸化マグネシウムなど）との塩、アン
モニウム塩、有機塩基（例えばトリエチルアミン、エタ
ノールアミンなど）との塩などをあげることができる。
なお、これらの付加塩を医薬として使用する場合には、
酸および塩基は薬学上許容されるものでなければならな
いことは言うまでもない。本発明による化合物には、不
斉炭素原子などに起因する各種立体異性体、例えば個々
のエナンチオマー、光学対掌体、ラセミ混合物などが存
在する。本発明は、これらのいずれの形態の化合物をも
包含するものである。

【０００６】化合物ＨＱ２４の製造１．概要本発明化合物ＨＱ２４は、ＨＱ２４の生産能を有する微
生物の培養により取得することができるが、類緑化合物
から出発して、この化合物の合成化学的ないし微生物学
的修飾により製造したり、あるいは全合成により製造す
ることも可能であろう。さらに、微生物培養による場合
も遺伝子工学的手法、すなわち、化合物ＨＱ２４の生産
に関与する遺伝子を適当な宿主微生物に組み込み、得ら
れた形質転換体を培養し、この培養物から化合物ＨＱ２
４を取得することも可能であろう。化合物ＨＱ２４を微
生物培養により取得する場合の菌株としては、放射菌に
属し、ＨＱ２４生産能を有するものが好ましい。具体的
には、本発明者らが分離したアクチノマジュラ（Actino
madura SP.）ＨＱ２４株がＨＱ２４の生産能を有する。
また、抗生物質生産菌探索に慣用されている手法により
自然界から他の適当な菌株を得ることも可能である。さ
らに、このＨＱ２４株を含めたＨＱ２４の生産菌を放射
線照射その他の変異処理に付して、ＨＱ２４の生産能を
高める余地もある。前述のように、遺伝子工学的手法を
利用することも可能である。化合物ＨＱ２４は、常法に
よって前記したような酸付加塩または塩基付加塩の形に
することができる。

【０００７】２．ＨＱ２４株ＨＱ２４株はＨＱ２４生産能を有する放射菌に属する一
菌株で、本発明者らが分離したＨＱ２４株は、下記のよ
うな内容のものである。１）由来および寄託番号本株は、紀伊半島で採取した土壌から分離されたもの
で、平成４年１０月１６日、工業技術院微生物工業技術
研究所に微工研条寄第４０３７号（ＦＥＲＭＢＰ−４
０３７）として寄託されている。２）菌学的性状（１）形態ＨＱ２４株は、シュクロース、硝酸塩寒天培地、グリコ
ース・アスパラギン寒天培地、グリセロール・アスパラ
ギン寒天培地、スターチ無機塩寒天培地、チロシン寒天
培地、栄養寒天培地、イースト・麦芽寒天培地、および
オートミール寒天培地のいずれでも良く生育する。気菌
糸の着生は、オートミール寒天培地では良好、スターチ
無機塩寒天培地で中程度であるが、他の培地では生育が
弱い。直線状またはループ状を呈する菌糸上に６〜７個
の胞子が連鎖して着生し、ループ状または螺旋状を呈す
る。胞子は卵型〜楕円型で、サイズは約１．８μｍ〜
０．９×約０．７μｍであり、その表面は、わずかに瘤
状を呈する。基生菌糸は細く長く伸長し、単純分枝す
る。胞子嚢、鞭毛胞子、菌核などの特殊形態を認められ
ない。（２）各種培地上の生育ＨＱ２４株を各種培地に２７℃、３週間培養した結果
は、第１表に示す通りである。（３）生理的性質ＨＱ２４株の生理的性質は、第２表に示す通りである。（４）炭素源の利用性ＨＱ２４株の炭素源の利用性（プリドハム、ゴトリーブ
寒天培地上）は、第３表に示す通りである。（５）細胞壁の組成全菌体中にメソ−ジアミノピメリン酸、微量の３−ＯＨ
−ジアミノピメリン酸を有するが、グリシンは認められ
ない。また、糖成分としてはマジュロースが検出され、
アラピノースおよびキシロースの存在は認められなかっ
た。以上の菌学的性状を要約すると、次の通りである。 i) 菌糸は直線状またはループ状を呈する。 ii) 胞子は６〜７個連鎖して菌糸に着生し、ループま
たは螺旋状を形成する。また、その表面はわずかに瘤状
を呈する。 iii) 基生菌糸は、細く長く伸長し、単純分枝してい
る。 iv) 菌体の色調は、白〜うす黄〜黄茶〜明るいオリー
ブ灰などを呈する。 v) チロシン寒天培地、ペプトン、イースト・鉄寒天培
地、およびトリプトン・イースト液体培地のいずれで
も、メラニン様色素は認められない。 vi) イノシトール・ラフィノースおよびソルビトール
の利用性は弱く、また、Ｄ−マンニトールは資化されな
い。 vii) ジアミノピメリン酸は、メソ型が主で、微量の３
−ハイドロキシ型を含む。また、糖としてはマジュロー
スが検出された。上記性状を、バージーズ・マニュアル・オブ・システマ
ティック・バクテリオロジー（Bergey's Manual of Sys
tematic Bactcriology）第４巻の記載と対比し、細胞壁
の成分、および形態などよりアクチノマジュラ属に属す
る菌株であると推定した。さらに、ＨＱ２４菌株の各種
試験の結果について、アクチノマジュラ属の既知菌株に
ついて検索したが、種を特定するにはいたらなかった。
従って本菌株をActinomadura sp. ＨＱ２４株とし、工
業技術院微生物工業技術研究所に寄託して、微工研条寄
第４０３７号（ＦＥＲＭＢＰ−４０３７）の寄託番号
を得ている。

【０００８】第１表培地生育気菌糸集落色可溶性色素シュクロース・良好中程度黄茶なし硝酸塩寒天培地明るいオリーブ灰グルコース・アス良好貧弱明るいパラギン寒天培地オリーブなし灰グリセロール・良好貧弱黄茶なしアスパラギン白寒天培地スターチ無機塩良好良好黄茶なし寒天培地白チロシン寒天培地良好中程度黄茶なし白栄養寒天培地良好なしうす黄なしうす黄イースト・麦芽良好貧弱黄茶なし寒天培地白オートミール良好良好黄茶なし寒天培地白第２表生育温度範囲１５〜４５℃ メラニン様色素チロシン寒天倍地陰性ペプトン・イースト・鉄寒天倍地陰性トリプトン・イースト液体培地陰性スターチの加水分解陰性ゼラチンの液化陽性脱脂乳の凝固陰性脱脂乳のペプトン化陽性硝酸塩の還元能陽性

【０００９】３．ＨＱ２４の生産培養法による化合物ＨＱ２４の生産は、以下のように放
線菌に属するＨＱ２４生産菌を適当な培地で好ましくは
好気的に培養した産物から採取することにより行なうこ
とができる。培地は、ＨＱ２４生産菌が利用しうる任意
の栄養源を含有するものでよい。具体的な例としては、
炭素源としてグルコース、シュクロース、ガラクトー
ス、グリセロール、および油脂類などが使用でき、窒素
源としては大豆粉、魚粉、綿実粕、乾燥酵母、酵母エキ
ス、およびコーンスティープリカーなどの有機物、並び
にアンモニウム塩または硝酸塩、例えば硫酸アンモニウ
ム、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどの無機
物が利用できる。また、必要に応じて、塩化ナトリウ
ム、塩化カリウム、炭酸カルシウム、燐酸塩、重金属塩
などの無機塩類を添加することもできる。発酵中の発泡
を抑制するために、慣用の適当な消泡剤、例えばシリコ
ーン油を添加することもできる。通常の培地を使用した
場合には、化合物ＨＱ２４は式（Ｉ）中の置換基Ｒ_１〜
Ｒ_３が全て塩素原子である構造を有するが、無機塩とし
て臭化カリウム、あるいは臭化ナトリウムなどの臭素塩
を添加した培地を用いることにより、Ｒ_１〜Ｒ_３が段階
的に塩素から臭素に置換された構造にすることができ
る。すなわち、少量の臭素塩を用いた場合には、Ｒ_１、
Ｒ_２、Ｒ_３の一部が臭素原子によって置換され、大過剰
の臭素塩を添加することにより、Ｒ_１〜Ｒ_３の全てが臭
素によって置換されるようになる。培養方法としては、
一般に抗生物質採取目的で常用されている生産方法の場
合と同様に好気的液体培養法が適している。培養温度は
１５〜４５℃が適当で、特に２５〜３０℃が好ましい。
この条件で振盪培養すると、通常培養５日間でＨＱ２４
の生産量は最高に達する。ＨＱ２４が蓄積された培養物
中において、ＨＱ２４の一部は培養濾液中にあるが、大
部分は菌体中に存在する。このような培養物からＨＱ２
４を採取するには、合目的的な任意の方法を用いること
ができるが、その一つの方法は抽出操作によるものであ
る。具体的には、培養濾液中のＨＱ２４については水不
混和性溶媒、例えば酢酸エチル（後記実施例のＨＱ２４
の物理化学的性状の項参照）で抽出する方法、また菌体
中のＨＱ２４については、濾過、遠心分離などで菌体集
体を得て、これをメタノール、エタノール、アセトンな
どで処理して回収する方法などがある。菌体の分離を省
略し、培養物をそのまま抽出操作に付すこともできる。
適当な溶媒による向流分配法も抽出の範疇に含めること
ができる。ＨＱ２４採取のための他の一つの手法は、吸
着法に基づくものである。具体的にはＨＱ２４含有の液
状物、例えば培養濾液や上記の抽出液を対象とし、適当
な吸着剤、例えばシリカゲル、活性炭、「ダイヤイオン
ＨＰ２０」（三菱化成社製）などを用いてＨＱ２４を吸
着させた後、適当な溶媒で溶離させることによってＨＱ
２４を得ることができる。これを減圧濃縮乾固すること
により、ＨＱ２４の粗標品が得られる。このようにして
得られたＨＱ２４の粗標品をさらに精製するには、上記
の抽出および吸着操作に必要に応じてゲル濾過法、高速
液体クロマトグラフィーなどを必要回数組み合わせて行
なえばよい。例えば、シリカゲルなどの吸着剤、「セフ
ァデックスＬＨ−２０」（ファルマシア社製）などのゲ
ル濾過剤によるカラムクロマトグラフィー、「ＹＭＣパ
ック」（山村科学社製）などによる高速液体クロマトグ
ラフィー、さらにこれらと向流分配法の適当な組み合わ
せが可能である。好ましくは、ＨＱ２４粗標品を少量の
メタノールに溶解し、「セファデックスＬＨ−２０」カ
ラムに付し、メタノールで活性画分を溶出させ、これを
濃縮乾固するとＨＱ２４の純品が得られる。得られる粗
精製あるいは精製ＨＱ２４は、必要に応じ、常法によっ
て前記したような酸付加塩あるいは塩基付加塩の形にす
ることができる。

【００１０】ＨＱ２４の用途本発明による化合物ＨＱ２４およびその付加塩は、活性
酸素種を消去し過酸化脂質生成を抑制する作用を有する
という点で有用である。従って、本発明化合物は、活性
酸素や過酸化脂質の関与する諸疾患に対する有用な予防
および治療剤として使用できる。上記薬剤としての本発
明化合物は合目的的な任意の投与経路、具体的には、動
物の場合には腹腔内投与、皮下投与、静脈または動脈へ
の血管内投与および注射による局所投与などの方法が、
またヒトの場合は静脈内投与、動脈内投与、注射による
局所投与、腹腔・胸腔への投与、経口投与、皮下投与、
筋肉内投与、舌下投与、経皮吸収または直腸投与により
投与することができる。本発明化合物を薬剤として投与
する場合は、投与方法、投与目的により、注射剤、顆粒
剤、錠剤、粉末剤、座剤、懸濁剤、カプセル剤、軟膏
剤、クリーム剤などの形状で投与することができる。ま
た、経口投与あるいは直腸投与の場合には徐放化製剤の
形態としてもよい。これらの製剤を製造するには、通常
使用されている製薬上許容される各種補助剤、すなわち
担体（もしくは希釈剤）あるいは必要に応じてその他の
助剤を添加するのが普通である。これらの補助剤として
は、溶剤、賦形剤、可溶化剤、等張化剤、結合剤、崩壊
剤、安定剤、保存剤、抗酸化剤、防腐剤、無痛化剤、乳
化剤、滑沢剤などがあげられる。溶剤としては、例えば
水、生理食塩水等が、可溶化剤としては、例えばエタノ
ール、ポリソルベート類、クレモフォア等が、賦形剤と
しては、例えば乳糖、デンプン、結晶セルロース、マン
ニトール、マルトース、リン酸水素カルシウム、軽質無
水ケイ酸、炭素カルシウム等が、結合剤としては、例え
ばデンプン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピ
ルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセ
ルロース、アラビアゴム等が、崩壊剤としては、例えば
デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム等
が、滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウ
ム、タルク、硬化油等が、安定剤としては、例えば乳
糖、マンニトール、マルトース、ポリソルベート類、マ
クロゴール類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等を用
いることができる。又、必要に応じて、グリセリン、ジ
メチルアセトアミド、７０％乳酸ナトリウム、界面活性
剤、塩基性物質（例えば、水酸化ナトリウム、エチレン
ジアミン、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、アルギ
ニン、メグルミン、トリスアミノメタン）などを添加す
ることができる。単位製剤形態における本発明化合物の
含量は、上記の種々の製剤形態により広範囲に変更可能
である。本発明化合物の投与量は、動物実験の結果およ
び種々の状況を勘案して、連続的または間欠的に投与し
たときに総投与量が一定量を越えないように定められ
る。具体的な投与量は、投与方法、患者または被処理動
物の状況、例えば年齢、体重、性別、感受性、食事（食
餌）、投与時間、併用する薬剤、患者またはその病気の
程度に応じて変化することは言うまでもなく、また一定
の条件のもとにおける適量と投与回数は、上記指針をも
ととして専門医の適量決定試験によって決定されなけれ
ばならない。具体的には、成人１日あたり０．１〜１０
０ｍｇ程度、好ましくは１ｍｇ〜１００ｍｇ程度であ
る。

【００１１】

【実施例】以下は、本発明の実施例を示すものであり、
これによって本発明は限定されるものではない。実施例１：ＨＱ２４−Ａ（式（Ｉ）のＲ_１〜Ｒ_３＝塩素
原子）の製造（１）種母の調製使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの水に
溶解して調製したものである。可溶性デンプン８．０ｇグリセロール８．０ｇソイビーンミール３．０ｇ魚粉８．０ｇ炭酸カルシウム２．０ｇｐＨ無調整上記培地１００ｍｌを５００ｍｌ容のイボ付き三角フラ
スコへ分注したもの２本調製し、殺菌後、Actinomadura
sp.ＨＱ２４株（ＦＥＲＭＢＰ−４０３７）をスラン
トより各々のフラスコへ１白金耳ずつ接種し、２７℃に
て３日間、２００ｒｐｍで振盪培養したものを前培養液
とした。（２）培養次に、種母を調製する際に使用したものと同じ組成を有
する生産培地を２５リットルずつ５０リットル容ジャー
ファーメンターに分注殺菌したものへ、上記種母を１０
０ｍｌ添加し、２７℃にて５日間、１５０ｒｐｍ、０．
５ＶＶＭの通気攪拌培養を行なった。（３）ＨＱ２４−Ａの採取上記の条件で培養後、培養液（５０リットル）をブフナ
ー濾過し、菌体を得る。この菌体を１５リットルのアセ
トンで２回抽出し、抽出液を５リットルに濃縮後、３Ｎ
ＨＣｌでｐＨを４に調整し２倍量の酢酸エチルで２回抽
出する。抽出液に無水硫酸ナトリウムを添加して脱水
し、濾過した後、濾液を濃縮し、１７．５ｇの濃縮物を
得る。この濃縮物をクロロホルムで平衡化したシリカゲ
ル（和光純薬製「ワコーゲルＣ−２００」）のカラム
（１０ｃｍφ×５０ｃｍ）に吸着させ、クロロホルム、
クロロホルム−メタノール（１００：１）、クロロホル
ム−メタノール（１５：１）の組成の溶液各３リットル
で順次展開した。ＨＱ２４−Ａを含む画分はクロロホル
ム−メタノール（１５：１）で溶出され、この画分を集
めて粗ＨＱ２４−Ａを３．４ｇ得た。この粗ＨＱ２４−
Ａをメタノールに溶解し、分取ＨＰＬＣ（（ＹＭＣ社製
ＯＤＳカラム（２５０ｍｍ×２０ｍｍ）、メタノール
にて展開）を行なうことにより、純粋なＨＱ２４−Ａを
１．９ｇ得る。ＨＱ２４−Ａの物理化学的性状：（１）外観白色粉末（２）融点６７〜６９℃（分解）（３）溶解性メタノール、エタノール、クロロホ
ルム、アセトン、酢酸エチルに可溶、水、ｎ‐ヘキサン
に不溶（４）Ｒｆ値（メルク社製「シリカゲル６０Ｆ₂₅₄」
使用）クロロホルム−メタノール（１０：１）０．３５（５）高分解能ＦＡＢ−ＭＳスペクトル（ｍ／ｚ）実測値：４９５．０７１３（（Ｍ＋Ｈ）^＋）［計算
値：４９５．０７４７］（６）旋光度［α］_D＝−１２２°（ｃ１、メタノ
ール中、２２℃）（７）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）：図１
に示されている。 λmax nm（ε）２５２（７６５０）、２７５（５１１
０）、２８７（４６９０）、３４５（３３４７０）、３
６０（２８９２０）（８）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒディスク法）：
図２に示されている。主な吸収ピーク（ｃｍ^-1）を下に示す。３４２１、２９６０、２９２９、１５８７、１５４０、
１５００、１４７７、１４５４、１４３９、１４１７、
１０１２（９）プロトン核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨ
ｚ、重メタノール中）：図３に示されている。観測されたピークを下に示す。３．４９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．５）、３．４１（１
Ｈ、ｍ）、３．１５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．５）、２．
５４（１Ｈ、ｍ）、２．１７（１Ｈ、ｍ）、１．８８
（１Ｈ、ｍ）、１．５５（１Ｈ、ｍ）、１．２２〜１．
２５（１Ｈ、ｍ）、１．２２（３Ｈ、ｓ）、１．１０
（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．０）、１．０９〜１．１４（１
Ｈ、ｍ）、１．０８（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．７）、１．０
４（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．９）（１０） ¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ、
重メタノール中）：図４に示されている。観測されたピークを下に示す。２０１．３（ｓ）、１８５．５（ｓ）、１８２．５
（ｓ）、１７３．５（ｓ）、１２８．２（ｓ）、１１
５．９（ｓ）、１１２．０（ｓ）、１１０．６（ｓ）、
９７．２（ｄ）、８６．１（ｓ）、４３．５（ｔ）、４
１．５（ｔ）、４０．９（ｄ）、３６．７（ｄ）、３
６．１（ｔ）、３０．３（ｄ）、２２．６（ｑ）、２
１．８（ｑ）、２０．３（ｑ）、１７．０（ｑ）（１１）元素分析ＣＨＮＯＳＣ１分析値（％） 48.95 5.22 5.38 13.17 6.32 20.91 計算値（％） 48.58 5.09 5.67 12.95 6.47 21.23 （１２）分子式Ｃ₂₀Ｈ₂₅Ｎ₂Ｏ₄ＳＣｌ₃ 実施例２：ＨＱ２４−Ｂ（式（Ｉ）中のＲ_１〜Ｒ_３＝臭
素原子）の製造（１）培養使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの水に
溶解して調製したものである。可溶性デンプン８．０ｇグリセロール８．０ｇソイビーンミール３．０ｇ魚粉８．０ｇ炭酸カルシウム２．０ｇ臭化カリウム２０．０ｇｐＨ無調整上記培地１００ｍｌを５００ｍｌのイボ付き三角フラス
コへ分注し、殺菌後、ActinomaduraＨＱ２４株（ＦＥＲ
ＭＢＰ−４０３７）をスラントより１白金耳ずつ接種
し、２７℃にて５日間振盪培養した。（２）ＨＱ２４−Ｂの採取上記の条件で培養後、培養液（１リットル）を濾過し、
菌体を５００ｍｌのアセトンで抽出する。抽出物を減圧
下２００ｍｌまで濃縮し、等量の酢酸エチルで２回抽出
する。抽出物に無水硫酸ナトリウムを添加し、脱水し、
濾過した後、濾液を濃縮し、１８０ｍｇの濃縮物を得
る。この濃縮物をクロロホルム−メタノール（１５：
１）で平衡化したシリカゲル（和光純薬製「ワコーゲル
Ｃ−２００」）のカラム（２ｃｍφ×２０ｃｍ）に吸
着させ、同溶媒で展開する。ＨＱ２４−Ｂを含む画分を
濃縮し、粗ＨＱ２４−Ｂを１６．８ｍｇ得る。この粗Ｈ
Ｑ２４−Ｂをメタノールに溶解し、分取ＨＰＬＣ（（Ｙ
ＭＣ社製ＯＤＳカラム（２５０ｍｍ×２０ｍｍ）、メ
タノールにて展開）を行なうことにより、純粋なＨＱ２
４−Ｂを６．１ｇ得る。ＨＱ２４−Ｂの物理化学的性状：（１）外観白色粉末（２）融点１６６〜１６８℃（分解）（３）溶解性メタノール、エタノール、クロロホ
ルム、アセトン、酢酸エチルに可溶、水、ｎ‐ヘキサン
に不溶（４）Ｒｆ値（メルク社製「シリカゲル６０Ｆ₂₅₄」
使用）クロロホルム−メタノール（１０：１）０．３５（５）ＦＡＢ−ＭＳスペクトル（ｍ／ｚ）６４９
（（Ｍ＋Ｎａ）^＋）（６）旋光度［α］_D＝−９２．６°（ｃ０．１、
メタノール中、２２℃）（７）紫外部吸収スペクトル（メタノール中） λmax nm（ε）２５５（９３６０）、２７８（７１９
０）、２８５（５７８０）、３４６（３１７３０）、３
６１（２８１２０）（８）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒディスク法）：
主な吸収ピークを下に示す。３３５０、２９５０、
２９２０、１５８５、１５７０、１４９０、１４００（９）プロトン核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨ
ｚ、重メタノール中）：図５に示されている。観測されたピークを下に示す。３．４９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．５）、３．４１（１
Ｈ、ｍ）、３．１４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．５）、２．
５３（１Ｈ、ｍ）、２．１７（１Ｈ、ｍ）、１．８８
（１Ｈ、ｍ）、１．５６（１Ｈ、ｍ）、１．２２〜１．
２５（１Ｈ、ｍ）、１．２２（３Ｈ、ｓ）、１．１０
（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．０）、１．０９〜１．１４（１
Ｈ、ｍ）、１．０８（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．７）、１．０
５（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．９）（１０） ¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ、
重メタノール中）：図６に示されている。観測されたピークを下に示す。２０１．３（ｓ）、１８５．５（ｓ）、１８２．６
（ｓ）、１７３．６（ｓ）、１３２．８（ｓ）、１０
５．８（ｓ）、１０４．３（ｓ）、１００．５（ｓ）、
９７．２（ｄ）、８６．１（ｓ）、４３．５（ｔ）、４
１．５（ｔ）、４０．９（ｄ）、３６．７（ｄ）、３
６．２（ｔ）、３０．３（ｄ）、２２．６（ｑ）、２
１．８（ｑ）、２０．３（ｑ）、１７．０（ｑ）（１１）分子式Ｃ₂₀Ｈ₂₅Ｎ₂Ｏ₄ＳＢｒ₃

【００１２】実験例：本発明化合物の生理活性（過酸化
脂質生成抑制作用）ウィスター系雄ラットの前脳を摘出し、６７ｍＭの燐酸
緩衝液（ｐＨ７．４）でホモジナイズして、脳ホモジネ
ートを作成した。このラット脳ホモジネートに直ちにア
スコルビン酸を１００μＭ、硫酸第１鉄を１０μＭ加
え、振盪しながら３７℃で１時間インキュベートした。
脳ホモジネート中にはこれにより活性酸素種が発生し、
それによる過酸化脂質生成がみられる。被験薬物をアス
コルビン酸添加と同時に反応液に加え、同様にインキュ
ベートした。第一のインキュベイト混合物中に生成した
マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）を、八木ら〔Anal. Bioc
hem.95. 351(1979) 〕のチオバルビツール酸法によって
定量した。被験薬物を加えたときのＭＤＡ量（ａ）とコ
ントロール値（ｂ）とから、次式により過酸化脂質生成
抑制率を算出した。過酸化脂質生成抑制率（％）＝〔（ｂ−ａ）／ｂ〕×１
００被験薬物の濃度を数段階に変えてそれぞれの場合におけ
る過酸化脂質生成抑制率を求め、これから回帰直線式を
決定して、被験薬物の過酸化脂質生成５０％抑制濃度
（ＩＣ₅₀）を算出した。被験薬物は水に難溶のため、メ
タノールに溶かし希釈してから試験に供した。対照薬物
としてビタミンＥ（和光純薬社製）と塩酸フルナリジン
（Sigma 社製）を選び、上記試験を実施した。その結果
ビタミンＥのＩＣ₅₀（μＭ）は１００以上、塩酸フルナ
リジンのそれは５５．０であったのに対し、ＨＱ２４−
Ａのそれは６．６、ＨＱ２４−Ｂのそれは９．８と強力
な過酸化脂質生成抑制作用が認められた。

【００１３】

【発明の効果】本発明による化合物ＨＱ２４は、活性酸
素種を消去し過酸化脂質生成を抑制する作用を有してお
り、活性酸素種や過酸化脂質の関与する諸疾患、すなわ
ち脳・心臓・小腸・肝臓などの各種臓器の虚血性疾患や
虚血再灌流障害、リウマチ、動脈硬化症、肺酸素毒症、
アルツハイマー型痴呆症、敗血症、喘息、エンドトキシ
ンショック、潰瘍、白内障、気管支炎・肝炎・膵炎・皮
膚炎・関節炎・腎炎など各種臓器などの炎症、さらには
浮腫、癌、放射線障害、臓器移植時の障害などに対して
も、予防ないし治療剤として有用となろう。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＨＱ２４−Ａのメタノール中での紫外吸収スペ
クトルを模写したもの。

【図２】ＨＱ２４−ＡのＫＢｒディスク法による赤外吸
収スペクトルを模写したもの。

【図３】ＨＱ２４−Ａの重メタノール中における５００
メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写したも
の。

【図４】ＨＱ２４−Ａの重メタノール中における１２５
メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写したも
の。

【図５】ＨＱ２４−Ｂの重メタノール中における５００
メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写したも
の。

【図６】ＨＱ２４−Ｂの重メタノール中における１２５
メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写したも
の。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:03） 7804−4Ｂ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次式（Ｉ）で示される、化合物ＨＱ２４ま
たはその付加塩。【化１】式中、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、それぞれ塩素原子また
は臭素原子を表し、互いに同一でも異なっていてもよ
い。