JPH06315623A - 乾燥小胞体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 長期間保存可能で、しかも、水を添加して再
生するに際し、もとの構造と機能を保持・発現すること
のできる乾燥小胞体を得ることを目的とする。 【構成】 燐脂質小胞体に糖脂質を導入したのち、凍結
せずして減圧乾燥することにより乾燥小胞体を得る。 【効果】 本発明の乾燥小胞体は、長時間保存しても、
再生時に小胞体の粒径の変化や内包物漏出が殆どなく、
安定性は顕著なものがある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ドラッグデリバリーシ
ステムとしての生体内でのターゲッティングあるいは徐
放性材料としての利用やヘモグロビン（以下、Ｈｂとい
う）溶液を内包させた人工酸素運搬体への利用等、多く
の利用価値のあるリン脂質小胞体（以下、小胞体とい
う）の長期安定保存を可能とする乾燥体、即ち、乾燥リ
ン脂質小胞体（以下、乾燥小胞体という）に関するもの
である。

【０００２】

【従来の技術】小胞体は薬物のキャリアとしての応用の
検討が数多く進められているが、凝集や融合または各種
刺激による破壊があるなど不安定なものであり、長期保
存を可能にするには、添加剤や重合性リン脂質成分の高
分子化により安定化するのが一般的な手段である。

【０００３】小胞体の凍結乾燥体としての保存安定性に
ついては、小胞体に多量のトレハロース等の糖類を混合
すると、凍結乾燥後も糖と脂質極性部との水素結合がお
こり、その二分子膜構造を維持し、水を添加して再生し
た時の内包物の漏出がおさえられるとの報告（Ｌ．Ｍ．
Ｃｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｃｈｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ａｃｔａ ８６１，１３１（１９８６）、Ｋ．Ｔａ
ｎａｋａ ｅｔ ａｌ，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌ
ｌ．，４０，１（１９９２））があるが、これと同じ方
法をＨｂ内包小胞体（ヘモソーム）分散液に適用した凍
結乾燥粉末化技術の報告（Ａ．Ｓ．Ｒｕｄｏｌｆ，Ｃｒ
ｙｏｂｉｏｌｏｇｙ，２５，２７７（１９８８））で
は、凍結乾燥粉末再分散後の小胞体の粒径は、凍結前の
小胞体の粒径を維持するものの、３００ｍＭの多量のト
レハロースを添加しても２０％ものＨｂ漏出が起こり、
この場合、小胞体は十分に安定化されてはいなかった。
従って、かかる凍結乾燥法で得られた小胞体の乾燥体は
安定性が不十分なうえに、水を添加して再生したときの
糖濃度が高く、現実的には使用困難である。

【０００４】重合性リン脂質を主成分とする小胞体にＨ
ｂを内包したうえ、重合性リン脂質の高分子化により二
分子膜を安定化すると、凍結融解を繰り返しても内包物
の漏出は無いとの報告があり（Ｅ．Ｔｓｕｃｈｉｄａ，
Ｂｉｏｍａｔ．，Ａｒｔ．Ｃｅｌｌｓ ＆ Ｉｍｍｏ
ｂ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０，３３７（１９９２））、さ
らに、僅かな糖の添加で小胞体の乾燥粉末としての保存
も可能であるとの報告もある（Ｌ．Ｗａｎｇ ｅｔ ａ
ｌ，Ｐｏｌｙｍ．Ａｄｖ．Ｔｅｃｈ．３，１７．（１９
９２））。しかし、何れも、生体投与における重合リン
脂質の及ぼす影響について明らかではない。

【０００５】一方、二糖類を親水部に有するコレステロ
ール誘導体を小胞体表面に導入すると、安定な凍結乾燥
体が得られるとの報告がある（Ｒ．Ｐ．Ｇｏｏｄｒｉｃ
ｈｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．５３，１２１ａ
（１９８８））。また、菌由来の糖脂質であるα，α−
トレハローストリミコール酸エステルを小胞体に導入し
凍結乾燥すると、該小胞体は、再度純水に分散させても
再構成能を有するとする発明がある（特開平１−７５４
２１号公報）。しかし、何れも十分な安定性を得るため
には多量の糖類の導入を必要とする。

【０００６】本発明者らは、長鎖アルキルを、構造の明
確なオリゴ糖にエステル結合したオリゴ糖脂質（特開平
１ー２９４７０１号公報）やオリゴ糖鎖末端アノマー位
にエーテル結合（特開平５ー２９４９８３号公報および
特願平４ー２０６１３６号発明）、同アミド結合（特開
平５ー３１７６７７号公報および特願平４ー１９１３６
４号発明）ならびに同エステル結合した構造の明確なオ
リゴ糖脂質（特願平５−７５０１６号公報）を発明し、
小胞体の凝集や融合の抑制剤等に使用できることを開示
した。これは、小胞体表面から伸びたオリゴ糖鎖が、小
胞体間または小胞体と細胞や蛋白質との間の接近を妨げ
る効果を利用したものであり、ここで使用する糖鎖は単
糖よりもオリゴ糖のほうが優れた抑制効果があることも
開示した。しかし、該オリゴ糖脂質の使用は、小胞体の
水相系での分散安定化に関するものであり、小胞体の乾
燥化に係る事項についての開示はない。

【０００７】前記する如く、当業者間では、既に、小胞
体をその膜成分を重合することなく凍結乾燥する技術の
開発が進められてきた。しかしながら、小胞体を凍結せ
ずして乾燥する技術の開示は未だ見られない。そこで、
当業者は、凍結乾燥小胞体の作成過程において、糖類を
添加することは、その糖鎖が小胞体表面の脂質親水部と
水素結合し、さらに、糖鎖同士も水素結合を形成するた
め、乾燥脱水後も二分子膜を形成する脂質分子の立体配
置を保持することが明らかと考えている。しかし、小胞
体の分散液に多量の糖類を添加して得られる凍結乾燥体
は、糖の添加量が多いために水を添加した再生時におい
て浸透圧や粘度の上昇等の問題がある。より少ない糖量
で小胞体表面を効率よく被覆する方法の開発が待たれて
いる。さらに、凍結乾燥法は、小胞体分散液の乾燥粉末
化法として通常に用いられる方法ではあるが、糖の希薄
溶液からの凍結では水相に溶解している糖質が有効に小
胞体表面を被覆せずに乾燥するため糖の添加効果は低い
ものがあることや、凍結操作自体が小胞体を破壊するこ
となどの問題点をもつ。その結果、より少ない糖量で小
胞体表面を効率よく被覆する方法や、生体への適用に際
し、小胞体の機能を阻害しない安定な乾燥小胞体の開発
への期待は甚だ大きいものがある。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明におい
ては、長期間保存可能で、しかも，水を添加して再生す
るに際し、もとの構造と機能を保持・発現することので
きる乾燥小胞体を得ることを技術的課題とする。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明は、前記する課題
を解決するために、濃厚な糖類を介することなしに得る
ことができる乾燥小胞体に関するものである。即ち、本
発明は、リン脂質小胞体に糖脂質を導入したのち、凍結
することなく減圧乾燥したことを特徴とする乾燥小胞体
に係るものである。

【００１０】以下に、本発明を詳細に説明する。本発明
の乾燥小胞体の作成に際して、リン脂質小胞体に導入す
る糖脂質に使用する糖質（以下、糖質という）は、その
構造が糖質に長鎖アルキル基またはコレステロールが結
合しているものであれば、生体からの抽出物であって
も、化学合成物であってもよい。生体由来糖脂質として
は、例えば、グリセロ糖脂質やスフィンゴ糖脂質などが
挙げられる。好ましくは、本発明者らが前記のごとく既
に開示した、長鎖アルキルを構造の明確なオリゴ糖にエ
ステル結合したオリゴ糖脂質、長鎖アルキルをオリゴ糖
鎖末端アノマー位にエステル結合した構造の明確なオリ
ゴ糖脂質、同アルキルをオリゴ糖鎖末端アノマー位にエ
ーテル結合した構造の明確なオリゴ糖脂質、あるいは、
同アルキルをオリゴ糖鎖末端アノマー位にアミド結合し
た構造の明確なオリゴ糖脂質がそれぞれ有効である。

【００１１】次に、糖脂質、好ましくはオリゴ糖脂質、
を小胞体膜成分として導入する方法を記す。糖脂質とリ
ン脂質など小胞体成分とをクロロホルム、エーテルまた
はこれらとメタノールとの混合溶媒に溶解し、これをナ
ス型フラスコ内で減圧乾燥し、該フラスコの内壁に混合
脂質の薄膜を形成させる。或いは、前記糖脂質と小胞体
成分とをベンゼン、ジオキサンまたはこれらとメタノー
ルとの混合溶媒に溶解し、これを凍結乾燥することによ
り混合脂質の粉末を得る。糖脂質の含有量は総脂質に対
し０．１〜５０ｍｏｌ％、好ましくは１〜１０ｍｏｌ％
とする。この混合脂質薄膜または粉末に、Ｈｂ、水溶性
薬物あるいは蛍光性分子などの水溶液を添加し振盪また
は攪拌する。ここに得た分散液をさらに超音波照射する
か、あるいは、エクストルージョン法により多段階的に
孔径の異なるフィルター通過を行ない所望の粒径に制御
することができる。外水相の未内包物質をゲルろ過カラ
ムあるいは超遠心機により除去したのち、遠心濃縮する
ことにより濃厚な糖脂質導入小胞体を得ることができ
る。また、他の調製方法には、機能物質内包小胞体分散
液に糖脂質の分散液を添加して静置することにより、外
水相に面した小胞体膜表面に糖脂質を導入する方法もあ
る。

【００１２】次いで、乾燥操作を行なうが、前記糖脂質
導入小胞体分散液につき、例えばロータリーエバポレー
ターなどを使用し、室温で徐々に減圧度を上昇させなが
ら水分を蒸発させ乾燥する。この時、ロータリーエバポ
レーターの代わりにデシケーター等を用いることも可能
である。前記乾燥操作に際しては、シリカゲルブルーや
五酸化二リン等の乾燥剤を乾燥器内に共存させることに
より乾燥時間を短縮することができる。また、減圧度は
飽和蒸気圧以下にならぬようにすることが重要であっ
て、ほぼ水分が蒸発したところで真空とし、さらに１時
間以上乾燥して乾燥小胞体を得る。

【００１３】前記糖脂質導入小胞体分散液に対し、コロ
イド浸透圧を調整するため３００ｍＯｓｍ以下となるよ
うに、糖類を０〜３００ｍＭ、好ましくは１〜１５０ｍ
Ｍ添加し、凍結操作を経ることなく減圧乾燥してもよ
い。ここで糖類とは、水溶性の糖類であり、例えばグル
コース、マルトース、ガラクトース、スクロースなどの
ほかトレハロースやラフィノースなどの少糖類、デキス
トラン、デキストリン、プルランなどの多糖類を挙げる
ことができ、糖の重合度は特に制限されない。

【００１４】本発明の乾燥小胞体にあっては、オリゴ糖
脂質導入小胞体分散液あるいは天然糖脂質導入小胞体分
散液が脱水されることにより、介在する糖質または／お
よび糖と小胞体がともに濃縮されるため、小胞体表面に
糖単位が効率よく水素結合することとなり、より安定化
した小胞体構造をもつことになる。

【００１５】本発明の減圧乾燥して得た乾燥小胞体の再
生は、これに純水を添加して振盪すればよい。また、乾
燥小胞体の安定性は、再生して得られた小胞体の光散乱
測定による粒径の変化と内包物の漏出量の測定から評価
できる。内包物の漏出量は再生した小胞体分散液をゲル
ろ過し、小胞体分画と小胞体から漏出した内包物の分画
に存在する内包物量の比率、または、濃度消光した蛍光
物質を内包せしめたときは、該内包蛍光物質は漏出する
と蛍光を発するので、これを蛍光測定により検出して算
出する。本発明の乾燥小胞体はその再水和後の粒径が乾
燥操作前と変化なく、漏出率もほぼ１０％以下に低く抑
えることができる。

【００１６】

【作用】小胞体の表面に糖鎖を導入し、表面を効率良く
覆うためには、オリゴ糖脂質を用いることが有力手段で
ある。該糖質の糖鎖長に関しては、単糖のごとく極端に
短いものは十分な効果を期待し難く、高分子になると小
胞体の凝集を誘発する。本発明におけるオリゴ糖脂質は
糖鎖が２〜３０程度であり乾燥小胞体に十分な安定性を
賦与することができる。本発明の減圧乾燥による方法で
は、穏和に脱水されるため、凍結乾燥のごとき凍結によ
る小胞体の破壊がない。また、少ない糖類の添加量でも
その糖が効率良く小胞体表面に作用し、安定な乾燥小胞
体を得ることができる。これを水に再分散して得られる
小胞体には粒径の変化はなく、内包物もほぼ完全に保持
されている。従って、それぞれの目的に利用される小胞
体を、分散液ではなく、固体として安定に保存すること
が可能である。

【００１７】次いで、Ｈｂを小胞体の中に内包した人工
酸素運搬体などを多量に体内投与する際には、溶液の浸
透圧が生理条件と同一であることが要求されるが、本発
明の乾燥小胞体は、その乾燥に際して添加糖類が少量で
すむため、浸透圧上昇は起こらず水に直接再分散する
か、または、小胞体再分散液に必要量の糖を添加したの
ち直ちに生体に投与できる。また、再分散後の粒径の増
大が起こらないため、小胞体の血中滞留時間が低下する
事がなく、さらに、内包物が漏出し難いのでその運搬効
率も低下しない。

【００１８】

【実施例】以下に実施例をもってさらに詳細に説明す
る。 実施例１．ヘキサデシルマルトペンタオンアミド（以
下、ＭＰＣＡという）９６ｍｇ（総脂質に対し８．６ｍ
ｏｌ％）をメタノール２ｍｌに溶解し、これをジパルミ
トイルグリセロホスファチジルコリン（以下、ＤＰＰＣ
という）、コレステロール（以下、Ｃｈｏｌ．という）
およびパルミチン酸（以下、ＰＡという）からなる混合
脂質（モル比：ＤＰＰＣ／Ｃｈｏｌ．／ＰＡ／ＭＰＣＡ
＝７／７／２／１．５）５００ｍｇを含むクロロホルム
溶液２０ｍｌと混合する。該混合液につきロータリーエ
バポレーターを用いてナス型フラスコの内壁に薄膜を形
成せしめる。ここに、濃度４０ｇ／ｄｌの精製したスト
ローマ除去Ｈｂ水溶液１０ｍｌを添加し、エクストルー
ジョン法により粒径２００±３４ｎｍ（Ｐａｒｔｉｃｌ
ｅ Ａｎａｌｙｓｅｒ Ｎ４−ＳＤ：商品名、コールタ
ー社製）のＨｂ内包小胞体分散液を得た。

【００１９】前記Ｈｂ内包小胞体分散液０．５ｍｌをデ
シケータ内に入れ五酸化二リン５ｇと共存させ減圧後静
置（２０ｍｍＨｇ、４℃）した。３時間後、２１℃の室
温で、真空ポンプにより０．０５ｍｍＨｇにて１時間真
空乾燥し、乾燥小胞体を得た。次に、該乾燥小胞体に２
５℃にて純水を添加し、初期濃度になるように再分散し
たのち、ゲルろ過（１０ｍｍｄ×１００ｍｍｈ、セファ
ロース ＣＬ−４Ｂ：商品名、ファルマシア社製）し
た。そのＨｂ小胞体分画とＨｂ溶液分画のＨｂ濃度（シ
アノ−メトヘモグロビン法により定量）から、Ｈｂ漏出
率を算出したところ１０．３％であった。また、粒径分
布は２４０±８３ｎｍであり、乾燥前後において粒径の
変化は殆ど認められなかった。

【００２０】前記実施例１の結果を後記する比較例１、
比較例２および比較例３の結果と比較する。 比較例１．実施例１のＨｂ内包小胞体分散液において、
ＭＰＣＡ（オリゴ糖脂質）を含まない系について実施例
１と同様の減圧乾燥を行った。この乾燥物に純水を添加
して再分散させたところ、Ｈｂ漏出率は６２．４％であ
った。従って、実施例１において小胞体にオリゴ糖脂質
を導入したことにより、乾燥小胞体はより安定なものに
なったと言うことができる。

【００２１】比較例２．前記Ｈｂ内包小胞体分散液０．
５ｍｌを凍結乾燥（０．０４ｍｍＨｇ、−３０℃、９時
間）し、同様に再分散したところ、Ｈｂ漏出率は３２．
３％であった。また、該Ｈｂ内包小胞体分散液を超遠心
処理（５００００×ｇ、６０分）して上澄を除去し、そ
の外水相にトレハロースを血液の浸透圧（３００ｍＯｓ
ｍ）相当の３００ｍＭを添加したときの凍結乾燥標品の
Ｈｂ漏出率は２１．１％であった。従って、本発明よる
乾燥小胞体は、凍結乾燥した小胞体に比し極めて安定で
あることが確かめられた。

【００２２】比較例３．α−Ｄ−グルコピラノースのア
ノマー位にドデシルアルコールをエーテル結合させた糖
脂質（１−Ｏ−ドデシル−α−Ｄ−グルコース（以下、
ＤＧという））を使用してベンゼン溶液からの凍結乾燥
により得た混合脂質（モル比：ＤＰＰＣ／Ｃｈｏｌ．／
ＰＡ／ＤＧ＝７／７／２／１．５）５００ｍｇ（総脂質
に対しＤＧを８．６ｍｏｌ％使用）より、比較例２と同
様の方法に従い、外水相にスクロースを含むＨｂ内包小
胞体分散液（脂質濃度１０ｇ／ｄｌ、平均粒径２２７±
７８ｎｍ）を調製し乾燥小胞体を得た。該乾燥小胞体の
再分散後のＨｂ漏出率は４５．２％であり、平均粒径は
２６０±１１７ｎｍと多分散になり、濁度が上昇してい
た。従って、乾燥する小胞体に導入する糖脂質として
は、単糖類の誘導体は乾燥小胞体の安定性賦与に不適当
であった。

【００２３】実施例２．実施例１と同一の材料を使用
し、同一の方法で得たＨｂ内包小胞体分散液を、超遠心
処理（５００００×ｇ、６０分）して、上澄みを除去
し、スクロース水溶液を添加、再分散して総脂質濃度５
ｇ／ｄｌ、スクロース濃度を１４６ｍＭとした。前記Ｈ
ｂ内包小胞体再分散液０．５ｍｌを、これまた実施例１
と同様に五酸化二リン５ｇと共存させ減圧後静置（２０
ｍｍＨｇ、４℃）した。３時間後、１９℃の室温で、真
空ポンプにより０．０５ｍｍＨｇにて１時間真空乾燥
し、乾燥小胞体を得た。次に、該乾燥小胞体に２５℃に
て純水を添加し、初期濃度になるように再分散したの
ち、ゲルろ過したが、その方法も実施例１と同様とし
た。そこで、そのＨｂ小胞体分画とＨｂ溶液分画のＨｂ
濃度から、Ｈｂ漏出率を算出したところ３．１％であっ
た。また、粒径分布は１９７±４２ｎｍであり、乾燥前
後において粒径の変化は殆ど認められなかった。この乾
燥小胞体をアンプル瓶中に窒素下封入して室温で保存し
たが、３０日後、純水を添加して再分散したところ、そ
の粒径分布は１９９±３９ｎｍ、漏出率は３．０％であ
ったので、本発明の乾燥小胞体は長期保存が可能である
ことが明らかとなった。

【００２４】実施例３．オリゴ糖脂質として糖鎖末端ア
ノマー位に疎水性基をエーテル結合したステアリルラミ
ナリヘプタオース（以下、ＳＬＨという）（総脂質に対
し５．８ｍｏｌ％）を、ジミリストイルグリセロホスフ
ァチジルコリン（以下、ＤＭＰＣという）、Ｃｈｏ
ｌ．、ジパルミトイルグリセロホスファチジン酸（以
下、ＤＰＰＡという）とともに（モル比：ＤＭＰＣ／Ｃ
ｈｏｌ．／ＤＰＰＡ／ＳＬＨ＝７／７／２／１）ベンゼ
ン／メタノール混合溶媒に溶解し凍結乾燥した。得られ
た混合脂質凍結乾燥粉末１０ｇに５（６）−カルボキシ
フルオレセイン（以下、ＣＦという）水溶液（２０ｍ
Ｍ、ｐＨ７．４、トレハロース１００ｍＭ）１００ｍｌ
を添加し、マグネチックスターラーを用いて４℃にて２
４時間攪拌した。ここで得た小胞体分散液をマイクロフ
ルイダイザーを用い、４℃、８０００ｐｓｉ、１０分の
条件で処理し、平均粒径１００±４１ｎｍの小胞体分散
液を得た。外水相のＣＦを除去後濃縮し、脂質濃度５ｇ
／ｄｌとし、トレハロースを５０ｍＭ添加して五酸化二
リン存在下に減圧乾燥したのち、真空乾燥（０．０５ｍ
ｍＨｇ、２５℃、１時間）した。この乾燥小胞体を再分
散させたところ、ＣＦの漏出率は３．０％、その平均粒
径は１０２±４９ｎｍであった。さらに、このものを４
℃にて７日間保存後、再分散した小胞体の粒径分布は１
０３±５４ｎｍ、漏出率は３．１％であり、極めて安定
なものであった。

【００２５】実施例４．コーンスターチのプルラナーゼ
加水分解物を液体クロマトグラフィーを用い、６０℃に
保温した条件で固定相にオクタデシル修飾シリカゲルカ
ラム（ＯＤＳ−ＡＱ：商品名、ＹＭＣ社製）および移動
相に純水を使用して得られた重合度２５のオリゴ糖の還
元末端を酸化してカルボン酸とした。前記オリゴ糖のカ
ルボン酸と１，２−ジ−Ｏ−オクタデシル−３−グリセ
ロールをエステル結合させたオリゴ糖脂質、即ち、１，
２−ジ−Ｏ−オクタデシル−３−α（β）−エイコサペ
ンタオニル−ｒａｃ−グリセリド９．６ｍｇ（総脂質に
対し３．０ｍｏｌ％）とＤＰＰＣ粉末５０ｍｇとをメタ
ノール／ジオキサン混合溶媒に溶解し、凍結乾燥して乾
燥粉末を得た。カルセインを４０ｍｇ含むリン酸緩衝液
（５０ｍＭ、ｐＨ７．４）を２．５ｍｌ添加し、窒素雰
囲気下、０℃にて３０分間超音波照射することにより平
均粒径５５±５ｎｍの小胞体分散液を調製した。このと
き、孔径３μｍの滅菌フィルターを通過させた。そし
て、ゲルろ過により外水相の未内包カルセインを除去し
た。そこで、マルトースを６０ｍＭ添加して得た小胞体
分散液を五酸化二リン存在下で減圧乾燥したのち、真空
乾燥（０．０５ｍｍＨｇ、２５℃、１１時間）し、再分
散させたところ、内包物の漏出率は３．２％であり、平
均粒径５８±９ｎｍであって、本実施例で得た乾燥小胞
体は極めて安定したものであった。

【００２６】実施例５．モノシアロガングリオシド（Ｇ
Ｍ１：商品名、シグマ社製）（総脂質に対し１０．０ｍ
ｏｌ％）と混合脂質（モル比：ＤＰＰＣ／Ｃｈｏｌ．／
ジパルミトイルホスファチジルグリセロール＝５／４／
１）とを混合し、メタノール／クロロホルム混合溶媒に
溶解し、実施例１と同様にナス型フラスコ内壁に薄膜を
形成せしめた。これをボルテックスにより多重層小胞体
分散液としたあと、凍結乾燥により混合脂質粉末を得
た。この粉末を５０ｍＭのマルトースと７０ｍＭのカル
セインを含む１０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．４）５
０ｍｌを添加し、６時間室温で攪拌した。エクストルー
ジョン法にて平均粒径を２００±１０ｎｍの小胞体分散
液とし、さらに、遠心分離（３００００×ｇ、３０分）
による洗浄と濃縮により脂質濃度６ｇ／ｄｌの平均粒径
１９９±２２ｎｍの小胞体分散液を得た。これに、マル
トースを１００ｍＭになるように添加し、実施例１記載
の方法と同様にして乾燥小胞体を調製した。該乾燥小胞
体を窒素で封入し４℃にて保存した。３０日後にこの乾
燥小胞体を再分散したところ、平均粒径は２０２±２５
ｎｍ、カルセイン漏出率は２．１％と低く抑えられ、安
定したものであった。

【００２７】実施例６．マルトペンタオースの還元性末
端基を酸化してカルボン酸とし、これにコレステリルブ
ロマイドによりエステル結合させたマルトペンタオース
モノコレステリルエステル（以下、ＭＰ−Ｃｈｏｌ．と
いう）を小胞体に導入する糖脂質として総脂質に対し１
０．５ｍｏｌ％使用した。該糖脂質１０９ｍｇをメタノ
ール２ｍｌに溶解し、これをＤＰＰＣ、Ｃｈｏｌ．およ
びＰＡからなる混合脂質（モル比：ＤＰＰＣ／Ｃｈｏ
ｌ．／ＰＡ／ＭＰ−Ｃｈｏｌ．＝７／５／２／２）５０
０ｍｇを含むクロロホルム溶液２０ｍｌと混合した。以
下実施例１と同様に、該混合液につきロータリーエバポ
レーターを用いてナス型フラスコの内壁に薄膜を形成せ
しめた。ここに、濃度４０ｇ／ｄｌの精製したストロー
マ除去Ｈｂ水溶液１０ｍｌを添加し、エクストルージョ
ン法により粒径２０２±３６ｎｍのＨｂ内包小胞体分散
液を得た。この分散液を超遠心処理（５００００×ｇ、
６０分）して上澄みを除去し、スクロース水溶液を添
加、再分散し、総脂質濃度５ｇ／ｄｌ、スクロース濃度
を１４６ｍＭとした。

【００２８】前記Ｈｂ内包小胞体分散液０．５ｍｌをデ
シケータ内に入れ五酸化二リン５ｇと共存させ減圧後静
置（２０ｍｍＨｇ、４℃）した。３時間後、２３℃の室
温下で真空ポンプにより０．０５ｍｍＨｇにて１時間真
空乾燥し、乾燥小胞体を得た。次いで、該乾燥小胞体に
２５℃にて純水を添加し、初期濃度になるように再分散
したのち、ゲルろ過（１０ｍｍｄ×１００ｍｍｈ、セフ
ァロース ＣＬ−４Ｂ：商品名、ファルマシア社製）し
た。そのＨｂ小胞体分画とＨｂ溶液分画のＨｂ濃度定量
から、Ｈｂ漏出率を算出したところ３．２％であった。
また、粒径分布は１９８±３７ｎｍであり、乾燥前後に
おいて粒径の変化は殆ど認められなかった。この乾燥小
胞体をアンプル瓶中に窒素下封入して室温で保存した
が、３０日後、純水を添加して再分散したところ、粒径
分布は２０１±２９ｎｍ、漏出率は２．８％であったの
で、本実施例の乾燥小胞体もまた長期保存が可能であり
安定性に優れたものであると評価した。

【００２９】

【発明の効果】本発明の、リン脂質小胞体に糖脂質を導
入したのち、凍結せずして減圧乾燥することにより得ら
れる乾燥小胞体は、該小胞体の粒径変化や内包物漏出が
極めて少ないので、ドラッグデリバリーシステムや人工
酸素運搬体として広く期待される小胞体を、乾燥小胞体
として棚置き保存することが可能となった。従って、本
発明は、当業界に貢献するところ極めて大きいものがあ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 酒井 宏水 東京都練馬区関町南１丁目６番29号 (72)発明者 土田 英俊 東京都練馬区関町南２丁目10番10号

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 リン脂質小胞体に糖脂質を導入したの
   ち、凍結することなく減圧乾燥したことを特徴とする乾
   燥小胞体。
2. 【請求項２】 糖脂質が糖単位数２〜３０の整数で構成
   された糖質に疎水性基を結合したオリゴ糖脂質である請
   求項１記載の乾燥小胞体。
3. 【請求項３】 糖脂質が糖単位数２〜３０の整数で構成
   される糖質の末端に有するアルドースのアノマー位に疎
   水性基を結合したオリゴ糖脂質である請求項１または請
   求項２記載の乾燥小胞体。
4. 【請求項４】 疎水性基の結合がエステル結合である請
   求項２または請求項３記載の乾燥小胞体。
5. 【請求項５】 疎水性基の結合がエーテル結合である請
   求項２または請求項３記載の乾燥小胞体。
6. 【請求項６】 疎水性基の結合がアミド結合である請求
   項２または請求項３記載の乾燥小胞体。
7. 【請求項７】 疎水性基が炭素数１２〜２２のアルキル
   鎖で構成された疎水性基である請求項２、請求項３、請
   求項４、請求項５または請求項６記載の乾燥小胞体。
8. 【請求項８】 疎水性基が１から４の不飽和結合をもつ
   炭素数１２〜２２のアルキル鎖で構成された疎水性基で
   ある請求項２、請求項３、請求項４、請求項５または請
   求項６記載の乾燥小胞体。
9. 【請求項９】 疎水性基がコレステロールである請求項
   ２、請求項３、請求項４、請求項５または請求項６記載
   の乾燥小胞体。