JPH0710774B2

JPH0710774B2 - アンジオテンシンｉ転換酵素阻害剤

Info

Publication number: JPH0710774B2
Application number: JP353686A
Authority: JP
Inventors: 隆諸田; 博佐々木; 政雄陳; 俊次佐藤; 直子片山; 潔福山; 博三橋
Original assignee: Tsumura and Co
Current assignee: Tsumura and Co
Priority date: 1986-01-13
Filing date: 1986-01-13
Publication date: 1995-02-08
Anticipated expiration: 2010-02-08
Also published as: JPS62164620A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、アンジオテンシンＩ転換酵素阻害剤に関する
ものである。

アンジオテンシンＩ（angiotensin I）は、アミノ酸10
個からなるデカペプチドであり、血清中に存在する分子
量約10万のアンジオテンシノゲン（angiotensinogen）
から腎臓に存在する酵素レニンによって生成される。さ
らに、このアンジオテンシンＩは、アンジオテンシンＩ
転換酵素の作用によって活性型のアンジオテンシンII
（angiotensin II）に変換される。このアンジオテンシ
ンIIは、オクタペプチドで強力な血管収縮作用を有し、
腎性昇圧物質の本体であるといわれている。また、アン
ジオテンシンＩ転換酵素は降圧作用を有するキニン（Ki
nin）を分解し、不活性化させることも知られている。
従つて、アンジオテンシンＩ転換酵素阻害剤は、昇圧物
質の生成を阻害するという点と、降圧物質の分解を阻害
するという点で、高血圧症の治療に有効である。

そこで本発明者等は、高血圧症の治療に有効な薬剤を開
発すべく、鋭意研究を重ねた結果、一般式で表される化
合物がすぐれたアンジオテンシンＩ転換酵素阻害作用を
有することを見出し、これに基づいて本発明を完成する
に至つた。

すなわち、本発明は一般式（ただし、式中Ｒは水素、低級アルキルカルボニル基、
または芳香族カルボニル基を示す。）で表される不飽和脂肪酸誘導体およびその薬理学的に許
容し得る塩を有効成分とするアンジオテンシンＩ転換酵
素阻害剤（以下、本発明の薬剤という）である。

［実施例］ 9-ハイドロキシ‐10,12-オクタデカジエン酸上記一般式で表される化合物のうち、Ｒが水素である化
合物は、9-ハイドロキシ‐10,12-オクタデカジエン酸で
あり、たとえば漢方薬である滋陰至宝湯、清心蓮子飲、
清肺湯などに配剤されている漢薬の地骨皮（Lycii Radi
cis Cortex）または、貝母（Fritillariae Bulbus）か
ら得られる。地骨皮はナス科の植物クコ（Lycium chine
nse MILLER）、あるいはその近縁植物の根皮を乾燥した
ものであり、貝母はユリ科の植物アサガミユリ（Fritil
laria thunbergii MIQ.）、あるいはその近縁植物の鱗
茎を石灰にまぶした後乾燥したものである。

9-ハイドロキシ‐10,12-オクタデカジエン酸は、例えば
地骨皮をクロロホルム、クロロホルム‐メタノール混合
溶媒またはアセトン等の有機溶媒で抽出し、抽出液より
溶媒を除去し、その残留物を含水メタノールに溶解し、
これをn-ヘキサンまたは石油エーテル等で抽出した後、
含水メタノール層から溶媒を除去し、その残留物をシリ
カゲル等を用いた一般的なクロマトグラフイーおよび／
または高速液体クロマトグラフイーに付すことにより得
ることができる。

また、貝母をメタノール、エタノール等の低級アルコー
ル類、または低級アルコール類と水との混合溶媒で抽出
し、抽出液より溶媒を除去した後、その残留物を水に溶
解し、これを酢酸エチル、n-ブタノール、エーテル、ク
ロロホルム等の有機溶媒で抽出し、抽出液の溶媒を除去
した後、必要に応じ過等の操作を施し、シリカゲル等
を用いた一般的なクロマトグラフイーおよび／または高
速液体クロマトグラフイーに付すことによっても得るこ
とができる。

他の方法としては、リノール酸またはリノール酸ナトリ
ウムを原料として、これを水に懸濁または溶解し、新鮮
なジャガイモより調製したリポキシダーゼを加え酸素ガ
スを吹き込んで反応させた後、水素化ホウ素ナトリウム
（NaBH₄）で還元することによっても得ることができ
る。

この9-ハイドロキシ‐10,12-オクタデカジエン酸の製造
の具体例を以下に示す。

具体例１粉末とした地骨皮10kgをクロロホルム100に添加混合
し、室温で抽出した後、この抽出液から溶媒を除去して
クロロホルムエキス76gを得た。このクロロホルムエキ
スを90％（v/v）メタノール‐水混合溶媒１に溶解し
た後、分液ロートに移し、n-ヘキサン１を加えて振り
混ぜた後静置して下層を取り、溶媒を除去して90％（v/
v）メタノール‐水エキス18gを得た。この90％（v/v）
メタノール‐水エキスを、シリカゲルを吸着剤としたカ
ラムクロマトグラフイーに付し、順次n-ヘキサン、n-ヘ
キサン‐ベンゼン、n-ヘキサン‐エーテル、エーテル‐
酢酸エチル、酢酸エチル‐メタノールで溶出し、エーテ
ル‐酢酸エチル（1:1）で溶出した分画（約2g）を高速
液体クロマトグラフイー［カラム，μ‐Bondapak C
₁₈（径8mm,長さ30cm）；移動相，アセトニトリル:1％酢
酸（3:2）；流速,3ml/min］で分取して無色油状物質0.3
gを得た。

この無色油状物質は下記の理化学的性質を有し、文献記
載［H.W.S.Chan and G.Levett Lipids 1299（1977）］
の9-ハイドロキシ‐10,12-オクタデカジエン酸の理化学
的性質と一致した。

赤外線吸収スペクトル 3600,1708,1462,1412 プロトン核磁気共鳴スペクトル（δppm in CDCl₃） 0.89（3H,t,J＝6Hz）， 2.16（2H,m）， 2.34（2H,t,J＝7Hz）， 4.16（1H,m）， 5.45（1H,dt,J＝11,7Hz）， 5.66（1H,dd,J＝15,7Hz）， 5.97（1H,dt,J＝11,11Hz）， 6.49（1H,dd,J＝15,11Hz）具体例２粉末とした貝母10kgに、50％（v/v）エタノール‐水混
合溶媒100を添加混合し、２時間加熱還流抽出した。
この抽出残渣に、更に50％（v/v）エタノール‐水混合
溶媒100を添加混合し、２時間加熱還流抽出し、以上
２回の抽出液を合併し、減圧下に濃縮した後凍結乾燥し
て50％エタノールエキス1.04kgを得た。この50％エタノ
ールエキスを８の水に懸濁させ、４の6-ブタノール
により４回抽出し、抽出液を合併した後溶媒を除去し、
n-ブタノールエキス140gを得た。

このn-ブタノールエキスを約150mlのメタノールに溶解
し、2.5の酢酸エチル中に滴下し放置した後、過
（東洋紙No.2）し、可溶部と不溶部に分画した。この
うち酢酸エチル可溶部より減圧下に溶媒を除去して酢酸
エチルエキス50gを得た。

この酢酸エチルエキスをシリカゲル（Kieselgel 60,70
−230メツシユ，メルク社製）を吸着剤とするカラムク
ロマトグラフイーに付し、n-ヘキサン‐アセトン混合溶
媒を用いて順次アセトンの濃度を増加させて溶出した。
n-ヘキサン‐アセトン（5:1）で溶出した分画を更に分
取中圧液体クロマトグラフイー［カラム，草野科学器械
製作所製CIGプレパツクカラム（径22mm,長さ30cm）；充
填剤，シリカゲル（50μｍ破砕状）；移動相,n-ヘキサ
ン：アセトン（5:1）；流速,3ml/min］に付し、9-ハイ
ドロキシ‐10,12-オクタデカジエン酸を無色油状物質と
して約30mg得た。

具体例３ジヤガイモ約200gを1cm角に切り、水150mlを加え、ミキ
サーでホモジナイズした後、200メツシユのフイルター
で過し、液を10,000Gで20分間遠心分離した。その
上清に0.5M酢酸緩衝液（pH5.5）150mlを加えて粗リポキ
シダーゼを得た。これを約30mlの水に溶解したリノール
酸ナトリウム（1.5g,東京化成製）に加え、25℃で５分
毎に酸素ガスを１分間反応液に通じて反応させた。45分
後に2N塩酸5mlを加えて反応を止め、エーテル20mlで３
回抽出した。さらに、抽出液から溶媒を除去し、残留物
にメタノール30mlを加えて溶解し、水素化ホウ素ナトリ
ウム（NaBH₄）400mgを加えて０℃で30分間反応させた。
反応液をエーテル20mlで３回抽出し、抽出液から溶媒を
除去して残留物約1.2gを得た。これをシリカゲルを用い
たカラムクロマトグラフイーに付し、n-ヘキサン：酢酸
エチル（1:1）で溶出して、9-ハイドロキシ‐10,12-オ
クタデカジエン酸約60mgを得た。

9-アセトキシ‐10,12-オクタデカジエン酸上記一般式で表される化合物のうち、Ｒがアセチル基で
ある化合物は9-アセトキシ‐10,12-オクタデカジエン酸
であり、この化合物を得るには、上記具体例１で得た化
合物を、通常行なわれるアセチル化反応、例えば無水酢
酸‐ピリジンとの反応によってアセチル化することによ
り得ることができる。

この9-アセトキシ‐10,12-オクタデカジエン酸の製造の
具体例を以下に示す。

具体例４具体例１で得た9-ハイドロキシ‐10,12-オクタデカジエ
ン酸30mgを、ピリジン1mlに溶解し、無水酢酸0.5mlを加
えて一夜室温で放置した。この反応液に氷水30mlを加
え、エーテル20mlで抽出し、減圧下で溶媒を除去し、反
応生成物40mgを得た。この反応生成物を分取中圧液体ク
ロマトグラフイー［カラム，草野科学器械製作所製CIG
プレパツクカラム（径15mm,長さ30cm）；充填剤，シリ
カゲル（10μｍ破砕状）；移動相,n-ヘキサン：酢酸エ
チル（5:1）；流速,2ml/min］に付し、9-アセトキシ‐1
0,12-オクタデカジエン酸を無色油状物質として21mg得
た。

9-ベンゾイルオキシ‐10,12-オクタデカジエン酸上記一般式で表される化合物のうち、Ｒがベンゾイル基
である化合物は9-ベンゾイルオキシ‐10,12-オクタデカ
ジエン酸であり、この化合物を得るには、上記具体例１
で得た化合物を、通常行なわれるベンゾイル化反応、例
えばベンゾイルクロライド‐トリエチルアミンとの反応
によつてベンゾイル化することにより得ることができ
る。

この9-ベンゾイルオキシ‐10,12-オクタデカジエン酸の
製法の具体例を以下に示す。

具体例５具体例１で得た9-ハイドロキシ‐10,12-オクタデカジエ
ン酸18mgを4mlのトリエチルアミンに溶解し、少量のジ
メチルアミノピリジンと0.5mlのベンゾイルクロライド
を加え、窒素気流下室温で15時間攪拌した。この反応液
に氷水20mlを加え、エーテル20mlで抽出し、減圧下で溶
媒を除去し反応生成物30mgを得た。この反応生成物の分
取中圧液体クロマトグラフイー［カラム，草野科学器械
製作所製CIGプレパツクカラム（径15mm,長さ30cm）；充
填剤，シリカゲル（10μｍ破砕状）；移動層,n-ヘキサ
ン：酢酸エチル（5:1）；流速,2ml/min］に付し、9-ベ
ンゾイルオキシ‐10,12-オクタデカジエン酸を無色油状
物質として15mg得た。

次に本発明の薬剤の有効成分である一般式で表される化
合物がアンジオテンシンＩ転換酵素阻害作用を有するこ
とを実験例を挙げて説明する。

実験例ラビツトラングアセトンパウダー（シグマ社製）2gを50
mMのリン酸緩衝液（pH8.3）30mlに溶解し、34,000Gで40
分間遠心分離して、その上澄液を透析チユーブに封入
し、10mMリン酸緩衝液３に対して透析した後、更に50
mMリン酸緩衝液で２倍に希釈してアンジオテンシンＩ転
換酵素液を得た。

具体例１で得た化合物を含む試料を試験管に25μｌ入
れ、これに基質としてヒプリルヒスチジルロイシン（最
終濃度5mM）50μｌを加え、更に3Mの塩化ナトリウム溶
液25μｌ、500mMリン酸緩衝液（pH8.3）50μｌを添加
し、37℃で10分間保温後、上記のようにして得た酵素液
100μｌを添加し37℃で60分間反応させた。その後1N塩
酸100μｌを加えて反応を停止させた後、内部標準とし
てベンゾイルアラニン（1mg/ml）25μｌを添加し、1ml
の酢酸エチルを加え、酢酸エチルエステル中に抽出され
たヒプリン酸の量を高速液体クロマトグラフイー［カラ
ム，μ‐Bondapak C₁₈（径4mm,長さ30cm）；移動相，ア
セトニトリル：メタノール:1％酢酸（1:1:8）；流速,1m
l/min;検出，紫外線（254nm）］により測定し、これを
酵素活性とした。

この結果について、阻害率を次式により算出した。

C:具体例で得た化合物を含まない場合のヒプリン酸のピ
ーク面積（内部標準により補正） S:具体例で得た化合物添加の場合のヒプリン酸のピーク
面積（内部標準により補正）これよりIC₅₀を求めたところ0.9mMであり、明らかなア
ンジオテンシンＩ転換酵素阻害作用が認められた。

次に、本発明の薬剤の有効成分である具体例１、４およ
び５で得た化合物の急性毒性試験をddY系マウスを用い
て行つたところ、いずれも2g/kgの経口および腹腔内投
与で死亡例はなかった。

このように、一般式で表される化合物は極めて特性が低
く、安全性の高いものである。

また、一般式で表される化合物は、その所期の効果を達
成するために、ナトリウム、カリウム、カルシウム、ア
ルミニウム、アンモニウム、ジエチルアミン、トリエタ
ノールアミン等の医薬として慣用される塩として用いる
こともできる。

次に、本発明の薬剤の投与量および製剤化について説明
する。

一般式で表される化合物はそのまま、あるいは慣用の製
剤担体と共に動物および人に投与することができる。投
与形態としては、特に限定がなく、必要に応じ適宜選択
して使用され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の経口剤、
注射剤、坐剤等の非経口剤が挙げられる。

経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の年
令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で一般
式で表される化合物の重量として１日0.5〜1.0gを、３
回までに分けて服用するのが適当と思われる。

本発明において錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の経口剤は
常法に従って製造される。錠剤は一般式で表される化合
物をゼラチン、でん粉、乳糖、ステアリン酸マグネシウ
ム、滑石、アラビアゴム等の製剤学的賦形剤と混合し賦
形することにより製造され、カプセル剤は、上記化合物
を不活性の製剤充填剤、もしくは希釈剤と混合し、硬質
ゼラチンカプセル、軟質ゼラチンカプセル等に充填する
ことにより製造される。シロツプ剤、エリキシル剤は、
一般式で表される化合物をシヨ糖等の甘味剤、メチルお
よびプロピルパラベン類等の防腐剤、着色剤、調味剤、
芳香剤、補助剤と混合して製造される。

非経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の
年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で一
般式で表される化合物の重量として１日50〜300mgまで
の静注、皮下注射、筋肉注射が適当と思われる。

この非経口剤は常法に従って製造され、希釈剤として一
般に注射用蒸留水、生理食塩水、デキストロース水溶
液、プロピレングリコール等を用いることができる。さ
らに必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤を加えても
よい。また、この非経口剤は安定性の点から、カプセル
等に充填後冷凍し、通常の凍結乾燥技術より水分を除去
し、使用直前に連結乾燥物から液剤を再調製することも
できる。

その他の非経口剤としては、外用液剤、軟膏等の塗布
剤、直腸内投与のための坐剤等が挙げられ、常法に従っ
て製造される。

次に、用例を示して本発明を具体的に説明するが、本発
明はこれによりなんら制限されるものではない。

用例１具体例１で得た薬剤200gを150mlのポリソルベート80に
溶解させ、これに60℃に加温した滅菌生理食塩水4.85
を加えてよく振盪し、これを無菌的にバイアルに具体例
１で得た薬剤が300mg含有するように分配し、密封して
注射剤を製造した。

本注射剤は用時振盪し、１日当たり症状に応じて1.5〜
7.5ml静脈内投与する。

用例２具体例２で得た薬剤100gを無水ケイ酸20gと混合し、こ
れにトウモロコシデンプン75gを加え、さらに混合し
た。この混合物に10％ハイドロキシプロピルセルロース
・エタノール溶液を100ml加え、常法通りねつ和し、押
し出し、乾燥し、篩別することにより20〜50メツシユの
粒子の顆粒剤を得た。

この顆粒剤は、症状に合わせて１回量0.4〜0.6g（具体
例２で得た薬剤の重量として0.2〜0.3gに相当）として
１日３回服用する。

用例３具体例４で得た薬剤20gを無水ケイ酸20gと混合し、これ
に微結晶セルロース10g、ステアリン酸マグネシウム0.5
g、乳糖49.5gを加え混合し、この混合物を単発式打錠機
にて打錠して径7mm重量100mgの錠剤を製造した。

本錠剤１錠は、具体例４の薬剤100mgを含有する。本錠
剤は、１回２〜３錠、１日３回服用する。

用例４具体例５で得た薬剤170mgを乳糖100mgと混合し、No.0の
ゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を得た。

本カプセル剤は、症状に合わせて１回１〜２カプセルを
１日３回服用する。

フロントページの続き (72)発明者三橋博千葉県柏市南柏１−３−５コンドミニアム南柏606 審査官星野紹英

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式（ただし、式中Ｒは水素、低級アルキルカルボニル基、
または芳香族カルボニル基を示す。）で表される不飽和
脂肪酸誘導体およびその薬理学的に許容し得る塩を有効
成分とするアンジオテンシンＩ転換酵素阻害剤。