JPH052684B2

JPH052684B2 -

Info

Publication number: JPH052684B2
Application number: JP58190824A
Authority: JP
Inventors: Takuo Kosuge; Masami Yokota; Michio Nagasawa
Original assignee: TSUMURA KK
Current assignee: TSUMURA KK
Priority date: 1983-10-14
Filing date: 1983-10-14
Publication date: 1993-01-13
Also published as: JPS6084301A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は抗腫瘍性を有する新規な多糖体および
その製造方法、さらには、それを有効成分として
含有する抗腫瘍剤に関する。マメ科ビスタリア属に属する植物の地上部に発
生する塊状瘤は、フジコブ、フジノコブあるいは
藤瘤と呼ばれ、古来から民間薬として健胃薬に用
いられてきた生薬である。本発明者等は、種々の生薬の抗腫瘍作用につい
てのスクリーニングテストを行つた結果、マメ科
ビスタリア属に属する植物の地上部に発生する塊
状瘤が動物の実験腫瘍に対して、すぐれた抗腫瘍
作用を示すことを明らかにした。この事実に着目
し、マメ科ビスタリア属に属する植物の地上部に
発生する塊状瘤から有効成分の分離を行つたとこ
ろ、新規な多糖体を分離精製することに成功し、
該多糖体が抗腫瘍作用の本体であることを発見し
て本発明を完成した。本発明のマメ科ビスタリア属に属する植物の地
上部に発生する塊状瘤から分離された抗腫瘍性を
有する新規な多糖体の代表的な物理的および化学
的性質は下記の通りである。性状：白色或いは微黄色の粉末溶解性：水に溶けやすく、メタノール、エタ
ノール、アセトン、エーテル、シクロヘキサ
ン、石油エーテルおよび酢酸エチルにほとんど
溶けない。安定性：本物質は熱水中で５時間安定であ
る。元素分析値：Ｃ：39±３％、Ｈ：６±３％、
Ｎ：１±３％を示す。単一性：ゲル過カラムを使用した高速液体
クロマトグラフイー〔高速液体クロマトグラフ
イー：Jasco tri rotar、使用ゲル：トーヨー
ソーダG5000PW、検出器：Shodex RISE−
31、溶媒：水〕により、本物質は第１図に示す
ように単一性を示す。融点：融点測定器〔ヤナコ(株)製マイクロメル
テイングポイントアパラタス〕を使用した測定
により、本物質は明確な融点あるいは分解点を
示さない。分子量：種々の分子量のデキストランおよび
ポリエチレンオキサイドを基準物質とし、ゲル
過カラムを使用した高速液体クロマトグラフ
イー〔高速液体クロマトグラフイー：Jasco
tri rotar、使用ゲル：トーヨーソーダ
G5000PW、検出器：Shodex RISE−31、溶
媒：水〕の結果より得た上記基準物質の溶出点
と、同じ高速液体クロマトグラフイーによる本
物質の分析パターンより、本物質の分子量範囲
は700000〜800000であると推定される（第２図
参照）。呈色反応：本物質の水溶液を種々の呈色反応
について試験した結果を第１表に示す。

【表】

【表】構成糖類：本物質を1Nトリフルオロ酢酸に
溶解後、100℃で２時間加水分解し、トリメチ
ルシリル化後、ガスクロマトグラフイーで分析
することにより、グルコースのみが検出され
る。本発明の物質である抗腫瘍性多糖体を得るに
は、マメ科ビスタリア属に属する植物の地上部に
発生する瘤状塊を水性溶媒〔水、希薄な無機塩水
溶液（たとえば塩化ナトリウム、塩化カリウムな
どの水溶液）、弱酸性水溶液（たとえば0.05モル
までの酢酸、0.05モルまでのシユウ酸など）〕で
抽出し、この抽出液を濃縮した後、限外過また
は透析して低分子物質を除き、限外過内液また
は透析内液を濃縮後、フエノール−水系にて分配
する。更に遠心分離等の方法により水層を分取
し、親水性有機溶媒を加えて撹拌し、遠心分離し
て得られる沈殿を乾燥（例えば凍結乾燥）して粉
末（粗多糖体）を得る。上記製造過程において、
親水性有機溶媒としてはメタノール、エタノール
およびプロパノールを用いることが望ましいが、
ブタノール、アセトンあるいはこれらの親水性有
機溶媒の二種以上の混液を使用することもでき
る。上記のようにして得た粉末（粗多糖体）は更に
精製される。精製には種々の方法が考えられる
が、その一つとしてゲル過クロマトグラフイー
を用いることができる。すなわち上記粉末を水に
溶解し、ゲル粒子としてトーヨーパールHW−65
を使用したゲル過クロマトグラフイーにかけ、
水性溶媒で展開してKd＝０〜0.5に相当する分画
を分取する。この分画を直接乾燥するか、減圧下
（30mmHg以下）で濃縮後、乾燥することにより、
白色〜微黄色の本発明の物質を得ることができ
る。ゲル過クロマトグラフイーにおいてゲル粒子
としては、セフアデツクスＧ−75、Ｇ−100、Ｇ
−150、Ｇ−200、セフアロース2B、4B、6B、
CL−2B、CL−4B、CL−6B、バイオゲルＰ−
150、Ｐ−200、Ｐ−300およびトーヨーパール
HW−65、75などを使用することができ、展開に
用いる水性溶媒としては、水、希薄な無機塩水溶
液（たとえば塩化ナトリウム、塩化カリウムなど
の水溶液）、弱酸性水溶液（たとえば0.05モルま
での酢酸、0.05モルまでのシユウ酸など）を用い
て展開することができる。ゲル過クロマトグラフイー以外の方法として
は、透析、限外過などの方法も使用できる。次に本物質の抗腫瘍活性および安全性について
実験例をあげて説明する。実験例１本物質の抗腫瘍活性 ICR系アルビノマウスにエーリツヒ腹水癌を移
植し、１週間後、腹水を採取し、別のマウスに一
匹当りエーリツヒ腹水癌細胞１×10⁷個を腹腔中
に移植した。１群５匹とし、被験薬をそれぞれ癌
移植の翌日より１日１回５日間腹腔内投与した。
移植７日後に開腹して腹水を取り出し、これを
2000Gで５分間遠心分離して癌細胞を分離した。
この癌細胞の容積（Packed Cell Volume）を測
定し、対照群の癌細胞の容積に対する対照群と投
与群の癌細胞の容積の差のパーセンテージをもつ
て、癌細胞成長抑制率とした。なお、被験薬は生理食塩水に溶解したものを使
用し、対照群には生理食塩水のみを投与した。本
発明である多糖体の癌細胞成長抑制率を第２表に
示す。

【表】実験例２本物質の急性毒性試験 ICR系アルビノマウスを１群10匹として用い、
これに本物質を経口投与、腹腔内投与、静脈注射
した場合のLD₅₀は、いずれも1000mg／Kg以上で
あつた。このことより、本物質の安全性は、極め
て高いものと推定される。本物質の抗腫瘍剤としての有効投与量は、患者
の年令、体重および疾患の程度により異なるが、
通常成人で１回50〜100mg、１日２〜３回までの
内服あるいは、１回10〜20mg、１日２〜３回まで
の静脈注射、筋肉内注射が適当と思われる。また、本物質を抗腫瘍剤として用いるにあた
り、本物質に通常の製剤に用いられる賦形剤、補
助剤などを加えて製剤製法の常法に従つて、注射
剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤お
よびシロツプ剤などの製剤にして用いることもで
きる。経口投与のために少くとも一種の賦形剤、例え
ばデンプン、乳糖、白糖、マンニツト、カルボキ
シメチルセルロース等を用いて錠剤、丸剤、カプ
セル剤、散剤、顆粒剤等に処方できる。この種の製剤には、適宜前記賦形剤の他に、例
えばステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナ
トリウム、タルク等の滑沢剤、デキストリン、結
晶セルロース、ポリビニルピロリドン、アラビア
ゴム、トウモロコシデンプン、ゼラチン等の結合
剤、バレイシヨデンプン、カルボキシメチルセル
ロール等の崩壊剤を使用することができる。また懸濁液、エマルジヨン剤、シロツプ剤、エ
リキシル剤として投与することができ、これら剤
型には、矯味矯臭剤、着色在を含有してもよい。非経口用製剤として、適当な基剤として混和し
てクリーム、軟膏剤、パツプ剤、注射剤または坐
剤とすることができる。希釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩
水、デキストロース水溶液、注射用植物油、プロ
ピレングリコール、ポリエチレングリコール等を
用いることができる。さらに必要に応じて、適宜
等張化剤、溶解補助剤、安定剤、防腐剤、無痛化
剤等を加えてもよい。また、この種の剤型の場
合、滅菌された注射用媒体に溶解することが望ま
しい。次に実施例を示して本発明を具体的に説明する
が、本発明はこれによりなんら制限されるもので
はない。実施例１粗多糖体の分離マメ科ビスタリア属に由来する植物であるノダ
フジ（Wistaria floribundaDC.）の地上部に発
生した塊状瘤を採集し、粉砕して４日間風乾し
た。このもの100ｇに水１を加え沸騰水浴上で
１時間熱水抽出し、熱時遠心分離して抽出液を得
た。残渣に水１を加え、再び沸騰水浴上で１時
間熱水抽出し、熱時遠心分離して抽出液を得、さ
らにもう１度この操作を行い、計３回の抽出液を
合せて減圧下で濃縮し、約300mlとした。この濃
縮液を限外過〔アルバツクサービス(株)製限外
過装置MC−6A、およびアミコン(株)製ダイヤフロ
ーメンブレン×M300限外過膜使用、分画分子
量30万〕し、限外過内液を減圧下で濃縮し、凍
結乾燥した。この乾燥物を２％の濃度になるよう
に精製水に溶解し、50％のフエノール−水系にて
分配し、一夜放置後、2000G、10分間遠心分離し
て水層を分取し、減圧下で濃縮して200mlとした
ものにアセトン800mlを加えて撹拌した後、遠心
分離した沈殿物を凍結乾燥して粉末（粗多糖体）
100mgを得た。実施例２多糖体のゲル過クロマトグラフイーによる精
製実施例１で得られた粉末100mgを精製水10mlに
溶解し、トーヨーパールHW−65をつめたカラム
（3.0×50cm）にかけ、流速20ml／hr.にて0.01Mの
酢酸で展開した。流出液をフラクシヨンコレクタ
ーにて捕集し、各フラクシヨンとした。本発明の
物質は、Kd＝０〜0.5に含有されているので、そ
れに該当するフラクシヨン約450mlをまとめて、
減圧下で20mlまで濃縮して凍結乾燥し、目的とす
る抗腫瘍性多糖体である白色粉末27mgを得た。このようにして得られた白色粉末は上記の理化
学的性質にすべてに適合するものであつた。実施例３マメ科ビスタリア属に由来する植物であるシラ
フジ（Wistaria venusta Rehd.et Wils）の地上
部に発生した塊状瘤を捕集し、粉砕して４日間風
乾した。このもの５Kgに水50を加えて抽出器で
１時間熱水抽出し、熱時遠心分離して抽出液を得
た。残渣に水50を加え、再び抽出器で１時間熱
水抽出し、熱時遠心分離して抽出液を得た。この
抽出液を前の抽出液と合せて減圧下で濃縮し、約
20とした。この濃縮液を限外過〔アルバツク
サービス(株)製限外過装置MC−6A、およびアミ
コン(株)製ダイヤフローメンブレン×M300限外
過膜使用、分画分子量30万〕し、限外過内液を
液膜流下式濃縮器で濃縮し、凍結乾燥した。この
乾燥物を２％の濃度になるように精製水に溶解
し、50％のフエノール−水系にて分配し、一夜放
置後、2000G、10分間遠心分離して水層を分取
し、液膜流下式濃縮器で濃縮して８としたもの
にメタノール32を加えて撹拌した後、遠心分離
した沈殿物を凍結乾燥して粉末（粗多糖体）６ｇ
を得た。この粉末６ｇを精製水250mlに溶解し、
セフアデツクス2Bをつめたカラム（10×100cm）
にかけて、流速800ml／hr.にて蒸溜水で展開し
た。Kd＝０〜0.5に相当する流出液１を取り、
減圧下で100mlまで濃縮して凍結乾燥し、目的と
する抗腫瘍性多糖体である白色粉末3.7ｇを得た。このようにして得られた白色粉末は上記の理化
学的性質にすべて適合するものであつた。実施例４実施例２で得られた白色粉末30ｇを微結晶セル
ロース155ｇおよびステアリン酸マグネシウム５
ｇと混合し、この混合物を単発式打錠機にて打錠
して直径７mm、重量190mgの錠剤を製造した。本錠剤１錠中には実施例２において得られた白
色粉末を30mg含有する。本錠剤は症状にあわせて
１回２〜３錠を１日３回服用する。実施例５実施例２で得られた白色粉末10ｇをトウモロコ
シデンプン490ｇと混合し水を加えて練合し、１
mm×１mmの網目を有するスクリーンにて造粒して
乾燥し顆粒剤とした。本顆粒剤１ｇ中には実施例２において得られた
白色粉末を20mg含有する。本顆粒剤は症状にあわ
せて１回３〜５ｇを１日３回服用する。実施例６実施例３で得られた白色粉末20ｇを乳糖70ｇお
よびステアリン酸マグネシウム10ｇと混合し、
500mgづつ硬カプセルに充填した。本カプセル剤１カプセル中には実施例３で得ら
れた白色粉末100mg含有する。本カプセル剤は症
状にあわせて１回１カプセルを１日２〜３回服用
する。実施例７実施例３で得られた白色粉末10ｇを水80mlに溶
解し、オレンジエツセンス２mlおよび単シロツプ
を加えて全量1000mlのシロツプ剤とした。本シロツプ剤１ml中には実施例３で得られた白
色粉末を10mg含有する。本シロツプ剤は症状にあ
わせて１回５〜10mlを１日３回服用する。実施例８実施例３で得られた白色粉末５ｇを注射製造の
常法に従つて、注射用蒸留水１に溶解し、塩化
ナトリウムを加えることにより等張化し、10mlづ
つバイアルに分注して注射剤とした。本注射剤１ml中には実施例３で得られた白色粉
末を５mg含有する。本注射剤は症状にあわせて１
回２〜４mlを１日３回静脈注射あるいは筋肉内注
射する。

【図面の簡単な説明】

第１図はゲル過カラムを使用した高速液体ク
ロマトグラフイーによる本発明多糖体の分析パタ
ーンを示す図であり、第２図は同じ高速液体クロ
マトグラフイーによる種々の分子量の基準物質の
溶出点と本発明多糖体の分析パターンを示す図で
ある。

Claims

【特許請求の範囲】１マメ科ビスタリア属に属する植物の地上部に
発生する塊状瘤より得られ、構成糖が主としてグ
ルコースであり、水に溶けやすくメタノール、エ
タノール、アセトン、エーテル、シクロヘキサ
ン、石油エーテルおよび酢酸エチルにほとんど溶
けず、元素分析においてＣ：39±３％、Ｈ：６±
３％、Ｎ：１±３％であり、分子量範囲が700000
〜800000である多糖体。２マメ科ビスタリア属に属する植物の地上部に
発生する塊状瘤の水性溶媒抽出液を限外過また
は透析して低分子物質を除き、限外過内液また
は透析内液を濃縮後、フエノール−水の系にて分
配し、水層を分取し親水性有機溶媒を加えて得ら
れる沈殿を精製することを特徴とする、構成糖が
主としてグルコースであり、水に溶けやすくメタ
ノール、エタノール、アセトン、エーテル、シク
ロヘキサン、石油エーテルおよび酢酸メチルにほ
とんど溶けず、元素分析においてＣ：39±３％、
Ｈ：６±３％、Ｎ：１±３％であり、分子量範囲
が700000〜800000である多糖体の製造方法。３マメ科ビスタリア属に属する植物の地上部に
発生する塊状瘤より得られ、構成糖が主としてグ
ルコースであり、水に溶けやすくメタノール、エ
タノール、アセトン、エーテル、シクロヘキサ
ン、石油エーテルおよび酢酸エチルにほとんど溶
けず、元素分析において、Ｃ：39±３％、Ｈ：６
±３％、Ｎ：１±３％であり、分子量範囲が
700000〜800000である多糖体を有効成分とする抗
腫瘍剤。