JPH0714878B2

JPH0714878B2 - ピロリジンアミドを有効成分とするプロリルエンドペプチダーゼ阻害剤

Info

Publication number: JPH0714878B2
Application number: JP60255711A
Authority: JP
Inventors: 直樹樋口; 雅之齊藤; 昌樹橋本; 治一深見; 隆治田中
Original assignee: Suntory Ltd
Current assignee: Suntory Ltd
Priority date: 1985-11-14
Filing date: 1985-11-14
Publication date: 1995-02-22
Anticipated expiration: 2010-02-22
Also published as: JPS62114978A

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は一般式（１）（式中、ｎは1,2,3または４を表わし、Ｒは炭素数１〜
８のアルキル基、炭素数７〜12のアリールアルキル基ま
たは炭素数３〜10のメチルチオアルキル基を表わす）を有するピロリジンアミドを有効成分として含有するプ
ロリルエンドペプチダーゼ活性阻害剤に関する。

さらに詳しく述べれば、本発明は前記一般式（１）を有
する、プロリルエンドペプチダーゼ（EC,3.4.21.26,Pro
lyl−endopeptidase）に対して、酵素阻害活性性を示す
化合物を有効成分として含有するプロリルエンドペプチ
ダーゼ活性阻害剤及び薬剤、特に抗健忘症剤としての利
用に関するものである。

（従来技術）プロリルエンドペプチダーゼは、神経伝達物質とされて
いる、サブスタンスＰ、TRH（早状線刺激ホルモン）及
びノイロテンシンや記憶と関係があると考えられてい
る、バソプレシンに作用し、これらを不活性化すること
が知られている。一方長崎大学薬学部の鶴、芳本両氏
は、プロリルエンドペプチダーゼ活性を阻害する化合物
がラツトのスコポラミンによる実験的健忘症を予防する
ことを見出し、記憶の固定にプロリルエンドペプチダー
ゼインヒビターが関与すると推論した。またこの結果
プロリルエンドペプチダーゼインヒビターが健忘症の
予防および治療に利用できる可能性を示唆している（日
本農芸化学会誌,58、1147−1154（1984））。

（発明が解決しようとする技術課題）本発明者は、上記の知見に基づき、プロリルエンドペプ
チダーゼ阻害活性が強く、さらに、毒性の充分低い新規
な化合物を見出すべく、天然化合物として安全性の高い
アミノ酸、ペプチド系化合物の組合せにより天然物に近
似した化合物を合成することを考えた。

上記の考えに添つて、前記一般式（１）で表わされる新
規ピロリジンアミド誘導体は抗プロリルエンドペプチダ
ーゼ活性を有していることを見出し本発明を完成した。
一般式（１）の化合物の多くは新規である。

（問題点を解決するための手段）本発明の前記一般式（１）を有するピロリジンアミド
は、アミノ酸とそのピロリジンアミドを含む点で、従来
よく知られているピラセタム誘導体系の抗健忘症剤とは
大きく異なつており、さらにアミノ酸又はペプチド誘導
体のため、生体に対する毒性も極めて低いものである。

一般式（１）の化合物のうち、抗プロリルエンドペプチ
ダーゼ活性が大きい点で好ましい化合物は次のものであ
る。なお、以下これらの化合物をかつこ内の番号で呼ぶ
ことがある。

一般式（１）の化合物は、一般的ペプチド合成法により
合成することができるが、以下に説明する合成法によれ
ば都合よく合成される。なお略記号は次の意味を表わ
す。

Ｌ−Pro:L−プロリン残基Ｌ−Val:L−バリン残基Ｌ−Phe:L−フエニルアラニン残基Ｌ−Met:L−メチオニン残基Ｌ−nLeu:L−ノルロイシン残基 WSCD:N−エチル−N,N′−ジメチルアミノプロピルカル
ボジイミド Z:ベンジルオキシカルボニル基前記一般式（１）の化合物は、以下のようにして合成す
ることができる。

まず一般式（２）（式中、ｎおよびＲは前記と同一意義を表わす）で表わされるカルボン酸未端がアミド化されていない化
合物類は一般式（３）（式中、ｎは前記と同一意義を表わし、Ｘはハロゲン原
子を表わす）を有するハロギ酸エステル誘導体と一般式（４）（式中、Ｒは前記と同一意義を表わす）を有するアミノ酸を塩基存在下に反応させることにより
得られる。この反応で用いる塩基はアルカリ金属の水酸
化物、アルカリ金属の炭素塩、トリアルキルアミンまた
は芳香族アミンなどがあげられる。

反応温度は室温以下が好ましく、溶媒は上記の塩基をと
かすものであればよい。

この化合物（２）とピロリジンを縮合剤を用い縮合させ
ることにより一般式（１）の化合物は得られる。

縮合剤としてはペプチド合成において一般に用いられて
いる試薬、例えばN,N′−ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド、WSCD等があげられるが、他の方法、例えば酸クロ
リド法、混合酸無水物法、活性エステル法などの一般に
常用されている方法でもよい。

別法として、一般式（５）（式中、Ｒは前記と同一意義を表わす）を有するカルボン酸アミド化合物と前述の一般式（３）
で表わされるハロギ酸エステル誘導体を前述と同じよう
にして塩基存在下で反応させることによつても一般式
（１）の化合物は得られる。

本発明のプロリルエンドペプチダーゼ活性阻害剤を健忘
症の改善・治療に用いる場合、一般式（１）の活性化合
物を製薬上許容される補助剤と混合して医薬組成物とす
る。

すなわち、有効成分は、カプセル、錠剤、および粉末の
ような固形投与形態で、またはエリキシール、シロップ
および懸濁液のような液体投与形態で経口投与される。
また、非経口的に、例えば注射剤および座薬としても用
いられる。

医薬組成物に含ませる固形投薬用の補助剤としては、例
えば固形粉末状の担体、ラクトース、サッカロース、デ
キストロース、マンニット、ソルビット、セルロース、
グリシンなどが挙げられる。さらに、医薬組成物は潤沢
剤として二酸化珪素、タルク、ステアリン酸マグネシウ
ム、ポリエチレングリコール；結合剤として澱粉、ゼラ
チン、トラガント、メチルセルロース、ナトリウムカル
ボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどを
含んでよい。また、崩壊剤としては澱粉や寒天などが挙
げられる。

本発明の医薬組成物の投与量は成人に対して１日あた
り、有効成分として100〜1000mgの服用量で経口投与を
行うか、あるいは、50〜500mgの用量で非経口投与す
る。投与量は、投与される疾患の種類、患者の年齢、体
重、症状の程度、投与形態によって変化し、また、上記
範囲の異なる場合もありうることは明らかである。

本発明の有効成分は、後記実施例で製造した化合物につ
いての急性毒性試験の結果から、500mg/kg/マウスでも
毒性がないことが示されたので、安全性も十分広いもの
である。

以下の実施例により、本発明をさらに詳述する。

実施例１Ｚ−_LVal−ピロリジンアミド（SUAM1240）Ｌ−バリン（10mモル）を１規定水酸化ナトリウム溶液2
0mlに溶解し、これを水で30mlに希釈した。この水溶液
を氷冷下攪拌しながらＺ−クロリド（10mモル）を、あ
らかじめ10mlのベンゼンに溶かした溶液をゆつくりと滴
下した。その直後にさらに１規定水酸化ナトリウム溶液
を10ml加えた。室温にもどした後、混合物を一昼夜攪拌
した。

反応終了後、混合物を２回エチルエーテルで抽出し、未
反応の酸クロリドを除去した。水槽を塩酸酸性にして沈
澱する化合物を酢酸エチルで３回抽出し、溶媒を減圧留
去することにより、Ｚ−Ｌ−バリンを得た。次にこのＺ
−Ｌ−バリン（１当量）とピロリジン（１当量）を乾燥
塩化メチレンに溶解し（約100ml）、１当量のWSCDを加
え、一昼夜攪拌した。反応終了後、１規定塩酸、飽和食
塩水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、飽和食塩水の順に
洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧濃縮し
たのち残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフイーに
付し標記化合物を得た。

性状：無色油上物質 IRスペクトル（フイルム、cm^-1）： 3270,2970,2870,1710,1630,1520,1445,1230,1020,750,7
00 NMRスペクトル（CDCl₃,δ）： 0.94（3H,d,J＝11）,0.98（3H.d,J＝11）,1.80〜2.10
（5H,m）,3.50〜3.80（4H,m）,4.30（1H,dd.J＝6,J＝
７）,5.08（2H,dd,J＝12,J＝12）5.52（1H,d,J＝９）,
7.34（5H,s）実施例２Ｚ−Ｌ−フエニルアラニルピロリジンアミド（SUAM 124
1）実施例１のＬ−バリンの代りにＬ−フエニルアラニンを
用いることにより、標記化合物が得られた。

性状：無色油状物質 IRスペクトル（フイルム,cm^-1）： 3250,3030,2975,2880,1710,1630,1520,1495,1450,1340,
1280,1245,1060,1030,750,700 NMRスペクトル（CDCl₃,δ）： 1.50〜1.80（4H,m）,2.58（1H,m）3.00（2H,m）,3.20〜
3.50（3H,m）4.44（1H,m）,5.08（2H,dd,J＝12,J＝1
2）,5.69（1H,d,J＝９）,7.23（5H,s）,7.36（5H,s）実施例３Ｚ−Ｌ−メチオニンピロリジンアミド（SUAM1242）実施例１のＬ−バリンの代りにＬ−メチオニンを用いる
ことにより、標記化合物が得られた。

性状：無定形結晶 IRスペクトル（KBr,cm^-1）： 3250,3050,2975,2950,2920,2875,1720,1635,1535,1440,
1340,1260,1140,1060,740,700 NMRスペクトル（CDCl₃,δ）： 1.70〜2.20（6H,m）,2.80（3H,s）,2.50（2H,t,J＝
７）,3.30〜3.70（4H,m）4.62（1H,m）,5.80（2H,s）,
5.68（1H,d,J＝９）,7.32（5H,s）実施例４Ｚ−Ｌ−ノルロイシンピロリジンアミド（SUAM1257）実施例１のＬ−バリンの代りにＬ−ノルロイシンを用い
ることにより標記化合物を得た。

性状：無色油状物質 IRスペクトル（フイルム,cm^-1）： 3280,2950,2870,1710,1630,1520,1450,1250,1020,750,7
00 NMRスペクトル（CDCl₃,δ）： 0.88（3H,m）,1.36（4H,m）,1.65（2H,m）,1.90（4H,
m）,4.44（4H,m）5.48（1H,m）,6.08（2H,s）,6.58（1
H,d,J＝９）,7.35（5H,s）抗プロリルエンドペプチダーゼ活性の測定抗プロリルエンドペプチダーゼ活性の測定は、芳本（T.
YoshimotoおよびD.Tsuru,Agr.Biol.Chem.42、2417、197
8）等の方法で行つた。即ち、0.0025M Ｚ−グリシル−
プロリン−β−ナフチルアミド0.25ml、0.1Mリン酸緩衝
液（pH7.0）0.99mlおよび抗プロリルエンドペプチダー
ゼ化合物の溶液0.01mlを含む混合液を試験管中で37℃、
３分間加温した後、プロリルエンドペプチダーゼ溶液
（0.2単位/ml）を0.1ml加え、35℃で10分間反応させ
た。その後、1M酢酸緩衝液（pH4.0）中のトリトンＸ−1
00（TritonX−100）溶液2.0mlを界面活性剤の最終濃度
が10％となるように加え、室温に15分間放置したのち
に、410nmにおける吸光度（ａ）を測定した。

同時に抗プロリルエンドペプチダーゼ化合物の溶液の代
りに緩衝液のみを用いた盲検の吸光度（ｂ）を測定し、
プロリルエンドペプチダーゼ阻害率を、次式：〔（ｂ−ａ）/b〕×100 により計算し、50％阻害に必要な量〔IC₅₀〕を求めた。
試験結果を表１に示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者深見治一大阪府三島郡島本町若山台１丁目１番１号サントリー株式会社応用微生物研究所内 (72)発明者田中隆治大阪府三島郡島本町若山台１丁目１番１号サントリー株式会社応用微生物研究所内 (56)参考文献Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，ＰｅｒｋｉｎＴｒａｎｓ．１（９），（1975），Ｐ. 830−841

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式：（式中、ｎは1,2,3または４を表し、Ｒは炭素数１〜８
のアルキル基、炭素数７〜12のアリールアルキル基また
は炭素数３〜10のメチルチオアルキル基を表す）を有するピロリジンアミドを有効成分として含有するプ
ロリルエンドペプチダーゼ活性阻害剤。
【請求項２】Ｒがメチル基、エチル基、プロピル基、イ
ソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec−ブチル
基、イソペンチル基、ペンチル基、ヘキシル基、イソヘ
キシル基、ネオヘキシル基、ヘプチル基またはオクチル
基である、特許請求の範囲第１項記載のプロリルエンド
ペプチダーゼ活性阻害剤。
【請求項３】Ｒがベンジル基、フェネチル基、フェニル
プロピル基、フェニルブチル基、フェニルペンチル基、
トルイルメチル基またはトルイルエチル基である、特許
請求の範囲第１項記載のプロリルエンドペプチダーゼ活
性阻害剤。
【請求項４】Ｒがメチルチオエチル基、メチルチオプロ
ピル基、メチルチオブチル基、メチルチオペンチル基、
メチルチオヘキシル基、メチルチオヘプチル基、メチル
チオオクチル基またはメチルチオノニル基である、特許
請求の範囲第１項記載のプロリルエンドペプチダーゼ活
性阻害剤。
【請求項５】健忘症の治療に使用するための、特許請求
の範囲第１項ないし第４項のいずれか１項記載の、プロ
リルエンドペプチダーゼ活性阻害剤。