JPH0770101A - 不飽和ラクトン化合物 - Google Patents
不飽和ラクトン化合物Info
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- JPH0770101A JPH0770101A JP6121619A JP12161994A JPH0770101A JP H0770101 A JPH0770101 A JP H0770101A JP 6121619 A JP6121619 A JP 6121619A JP 12161994 A JP12161994 A JP 12161994A JP H0770101 A JPH0770101 A JP H0770101A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 神経成長因子（ＮＧＦ）様作用あるいはＮＧ
Ｆ作用増強効果を有する新規な生理活性物質を提供する
こと 【構成】 式 【化３】 で表される不飽和ラクトン化合物 【効果】 ＮＧＦ様作用あるいは作用増強効果を示し、
生体内で神経細胞に働き、神経変性に伴う神経障害の改
善・治療効果を示す。
Ｆ作用増強効果を有する新規な生理活性物質を提供する
こと 【構成】 式 【化３】 で表される不飽和ラクトン化合物 【効果】 ＮＧＦ様作用あるいは作用増強効果を示し、
生体内で神経細胞に働き、神経変性に伴う神経障害の改
善・治療効果を示す。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は神経成長因子（以下、Ｎ
ＧＦと称する。）様作用とその作用増強効果を有する新
規な生理活性物質に関する。
ＧＦと称する。）様作用とその作用増強効果を有する新
規な生理活性物質に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年増えつつあるアルツハイマー型痴呆
においては、大脳基底核神経細胞であるアセチルコリン
作動性神経の変性、脱落が、記憶障害、知的活動低下に
深く係わっていることが示唆されている。
においては、大脳基底核神経細胞であるアセチルコリン
作動性神経の変性、脱落が、記憶障害、知的活動低下に
深く係わっていることが示唆されている。
【０００３】ＮＧＦは繊維切断による中枢性アセチルコ
リン作動性神経の変性・脱落を抑制すること、及び老齢
ラットの迷路学習障害を改善すると共にアセチルコリン
作動性神経細胞の萎縮を抑制することが報告されてい
る。これらのことは、ＮＧＦがアルツハイマー型痴呆の
治療薬となりうることを示している。さらには、ＮＧＦ
は、脳虚血スナネズミの海馬神経細胞死を防ぐことも確
かめられており、脳卒中後遺症治療薬としても有用であ
ると考えられる。
リン作動性神経の変性・脱落を抑制すること、及び老齢
ラットの迷路学習障害を改善すると共にアセチルコリン
作動性神経細胞の萎縮を抑制することが報告されてい
る。これらのことは、ＮＧＦがアルツハイマー型痴呆の
治療薬となりうることを示している。さらには、ＮＧＦ
は、脳虚血スナネズミの海馬神経細胞死を防ぐことも確
かめられており、脳卒中後遺症治療薬としても有用であ
ると考えられる。
【０００４】一方、ＮＧＦは、末梢神経損傷の回復を早
める作用も持っており、末梢神経障害治療薬としても有
用であることが明らかにされている。
める作用も持っており、末梢神経障害治療薬としても有
用であることが明らかにされている。
【０００５】ＮＧＦの他にも、神経細胞の生存・機能維
持作用あるいは変性修復活性を示す生体成分が数多く見
つかっており、神経栄養因子と呼ばれている。従って、
これら神経栄養因子は、神経細胞変性に伴う中枢性神経
障害及び末梢性神経障害の治療薬として有用であると考
えられる。
持作用あるいは変性修復活性を示す生体成分が数多く見
つかっており、神経栄養因子と呼ばれている。従って、
これら神経栄養因子は、神経細胞変性に伴う中枢性神経
障害及び末梢性神経障害の治療薬として有用であると考
えられる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】神経栄養因子と呼ばれ
る生体成分は、ＮＧＦを含めその何れもがタンパク質で
ある。タンパク質は、中枢性神経障害治療薬として用い
る際、その物状から判断して、直接脳室内投与が必要と
なることが予想され、実用上問題が多い。従って、より
簡単な投与方法が可能な、神経栄養因子作用自身あるい
は神経栄養因子の作用増強効果を持つ低分子化合物が望
まれている。
る生体成分は、ＮＧＦを含めその何れもがタンパク質で
ある。タンパク質は、中枢性神経障害治療薬として用い
る際、その物状から判断して、直接脳室内投与が必要と
なることが予想され、実用上問題が多い。従って、より
簡単な投与方法が可能な、神経栄養因子作用自身あるい
は神経栄養因子の作用増強効果を持つ低分子化合物が望
まれている。
【０００７】本発明の目的は、ＮＧＦ様作用あるいはＮ
ＧＦ作用増強効果を有する新規な生理活性物質を提供す
ることにある。
ＧＦ作用増強効果を有する新規な生理活性物質を提供す
ることにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
の達成のために多数の菌株を土壌または植物より分離
し、その菌株の代謝産物について種々検討した結果、あ
る種の菌株が、ＮＧＦ様作用あるいは作用増強効果を有
する新規な生理活性物質を生産することを見いだし、本
発明を完成するに至った。
の達成のために多数の菌株を土壌または植物より分離
し、その菌株の代謝産物について種々検討した結果、あ
る種の菌株が、ＮＧＦ様作用あるいは作用増強効果を有
する新規な生理活性物質を生産することを見いだし、本
発明を完成するに至った。
【０００９】すなわち、本発明は、式
【００１０】
【化２】
【００１１】で表される不飽和ラクトン化合物（以下、
ＮＧ−２６１と称する。）である。
ＮＧ−２６１と称する。）である。
【００１２】本発明のＮＧ−２６１を生産する微生物
は、本発明者らが新たに分離した菌株であり、微生物の
名称「Cladosporium cladosporioides TF-0380」および
微生物寄託番号 ＦＥＲＭ Ｐ−１３６４１として、工
業技術院生命工学工業技術研所に寄託されている。
は、本発明者らが新たに分離した菌株であり、微生物の
名称「Cladosporium cladosporioides TF-0380」および
微生物寄託番号 ＦＥＲＭ Ｐ−１３６４１として、工
業技術院生命工学工業技術研所に寄託されている。
【００１３】この菌株の菌学的性状を以下に示す。 １）形態 本菌株は、バレイショ・ブドウ糖寒天培地、オートミー
ル寒天培地、ＹｐＳｓ寒天培地等の平板培地上で良好に
生育し、また胞子の形成はバレイショ・ブドウ糖寒天培
地、LCＡ（三浦）寒天培地で良好、オ−トミ−ル寒天培
地、麦芽エキス寒天培地で中程度である。本菌株がLCＡ
（三浦）寒天培地上、２５℃、１４日間の培養で形成し
たコロニーを光学顕微鏡で観察すると、菌糸は隔壁を有
し高度に分岐しており、分生子柄先端部分の１〜数個の
出芽点から分生子が生じ、さらにその分生子の先端にも
新しい分生子の出芽点が生じており、この繰り返しによ
って最終的に樹枝状の分生子頭を形成する。なお、分生
子は分生子柄の先端部分のみで形成され、その後再度分
生子柄が伸長することはない。分生子柄は暗灰緑色、長
さは５００μｍに達するものもあるが通常はそれよりも
短く、２００〜４００μｍ程度、幅は２．８〜４．６μ
ｍである。分生子は樹枝状分生子鎖の基部に相当する分
生子（Ramo-conidia）とそれ以外の通常の分生子の２種
に分けられるが、いずれも暗灰緑色、乾性で、脱落し易
く、両端または基部に暗色の分離痕を有する。Ramo-con
idiaは多くが０隔壁、まれに１隔壁のものがあり、表面
は平滑、大きさは０隔壁の場合に５．０〜２５．０×
２．８〜４．２μｍ、１隔壁の場合に８．０〜３２．０
×３．０〜４．８μｍである。一方、樹枝状分生子鎖の
先端付近に相当する分生子は亜球形から楕円形、まれに
レモン形で０隔壁、表面は平滑、大きさは３．０〜８．
０×２．０〜３．２μｍである。なお、培養を３週間に
延長したが有性生殖器官の形成は認められなかった。
ル寒天培地、ＹｐＳｓ寒天培地等の平板培地上で良好に
生育し、また胞子の形成はバレイショ・ブドウ糖寒天培
地、LCＡ（三浦）寒天培地で良好、オ−トミ−ル寒天培
地、麦芽エキス寒天培地で中程度である。本菌株がLCＡ
（三浦）寒天培地上、２５℃、１４日間の培養で形成し
たコロニーを光学顕微鏡で観察すると、菌糸は隔壁を有
し高度に分岐しており、分生子柄先端部分の１〜数個の
出芽点から分生子が生じ、さらにその分生子の先端にも
新しい分生子の出芽点が生じており、この繰り返しによ
って最終的に樹枝状の分生子頭を形成する。なお、分生
子は分生子柄の先端部分のみで形成され、その後再度分
生子柄が伸長することはない。分生子柄は暗灰緑色、長
さは５００μｍに達するものもあるが通常はそれよりも
短く、２００〜４００μｍ程度、幅は２．８〜４．６μ
ｍである。分生子は樹枝状分生子鎖の基部に相当する分
生子（Ramo-conidia）とそれ以外の通常の分生子の２種
に分けられるが、いずれも暗灰緑色、乾性で、脱落し易
く、両端または基部に暗色の分離痕を有する。Ramo-con
idiaは多くが０隔壁、まれに１隔壁のものがあり、表面
は平滑、大きさは０隔壁の場合に５．０〜２５．０×
２．８〜４．２μｍ、１隔壁の場合に８．０〜３２．０
×３．０〜４．８μｍである。一方、樹枝状分生子鎖の
先端付近に相当する分生子は亜球形から楕円形、まれに
レモン形で０隔壁、表面は平滑、大きさは３．０〜８．
０×２．０〜３．２μｍである。なお、培養を３週間に
延長したが有性生殖器官の形成は認められなかった。
【００１４】２）培地上での生育状態 各種培地上で、２５℃、１４日間培養した場合の肉眼的
観察結果を次の表１に示した。なお色の表示は日本規格
協会、ＪＩＳ色名帳（１９８５年）の系統色名を引用し
た。
観察結果を次の表１に示した。なお色の表示は日本規格
協会、ＪＩＳ色名帳（１９８５年）の系統色名を引用し
た。
【００１５】
【表１】
【００１６】３）生理的性質 生育温度範囲及び最適温度 本菌株はｐＨ６．０のサブロー液体培地において、８〜
３１℃の範囲で生育し、最適温度は２３〜２６℃であ
る。 生育ｐＨ範囲及び最適ｐＨ 本菌株はＹｐＳｓ液体培地中２６℃においてｐＨ３〜１
０の範囲で生育し、最適ｐＨは６〜７である。 ４）好気性，嫌気性の区別；好気性である。
３１℃の範囲で生育し、最適温度は２３〜２６℃であ
る。 生育ｐＨ範囲及び最適ｐＨ 本菌株はＹｐＳｓ液体培地中２６℃においてｐＨ３〜１
０の範囲で生育し、最適ｐＨは６〜７である。 ４）好気性，嫌気性の区別；好気性である。
【００１７】以上の形態的特徴および培養上の性状か
ら、本菌株が不完全菌亜門中の、Cladosporium属の１菌
種であることが明らかであり、宇田川俊一，椿啓介 編
『菌類図鑑』（1978年）、M.B.Ellis著『DEMATIACEOUS
HYPHOMYCETES』（1971年）および『MORE DEMATIACEOUS
HYPHOMYCETES』（1976年）に報告されている多くの既知
菌株と比較検討した。その結果、本菌株はC.cladospori
oides(Fresen.)に最も近い性状を示すことが明かとな
り、本菌株を「Cladosporium cladosporioides TF-038
0」と命名した。ＮＧ−２６１の生産は、大略一般の発
酵生成物を生産する場合に準じ、各種の栄養物質を含む
培地でCladosporium cladosporioides TF-0380を好気的
条件下で培養することにより行う。
ら、本菌株が不完全菌亜門中の、Cladosporium属の１菌
種であることが明らかであり、宇田川俊一，椿啓介 編
『菌類図鑑』（1978年）、M.B.Ellis著『DEMATIACEOUS
HYPHOMYCETES』（1971年）および『MORE DEMATIACEOUS
HYPHOMYCETES』（1976年）に報告されている多くの既知
菌株と比較検討した。その結果、本菌株はC.cladospori
oides(Fresen.)に最も近い性状を示すことが明かとな
り、本菌株を「Cladosporium cladosporioides TF-038
0」と命名した。ＮＧ−２６１の生産は、大略一般の発
酵生成物を生産する場合に準じ、各種の栄養物質を含む
培地でCladosporium cladosporioides TF-0380を好気的
条件下で培養することにより行う。
【００１８】培地は主として液体培地を用い、炭素源、
窒素源、無機塩よりなり、必要に応じてビタミン類、先
駆物質、消泡剤を加えることができ、ｐＨは６前後に調
整する。炭素源としては、例えばグルコース、マルトー
ス、デキストリン、グリセリン、澱粉などを単独かまた
は混合して用いる。窒素源としては、例えば酵母エキ
ス、ペプトン、肉エキス、大豆粉、コーン・スティー・
リカー、尿素、アンモニウム塩などを単独かまたは混合
して用いる。無機塩としては、例えば燐酸一カリウム、
硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、炭酸カルシウムな
どを単独かまたは混合して用いる。消泡剤としてはアデ
カノール、シリコン化合物などを用いることができる。
窒素源、無機塩よりなり、必要に応じてビタミン類、先
駆物質、消泡剤を加えることができ、ｐＨは６前後に調
整する。炭素源としては、例えばグルコース、マルトー
ス、デキストリン、グリセリン、澱粉などを単独かまた
は混合して用いる。窒素源としては、例えば酵母エキ
ス、ペプトン、肉エキス、大豆粉、コーン・スティー・
リカー、尿素、アンモニウム塩などを単独かまたは混合
して用いる。無機塩としては、例えば燐酸一カリウム、
硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、炭酸カルシウムな
どを単独かまたは混合して用いる。消泡剤としてはアデ
カノール、シリコン化合物などを用いることができる。
【００１９】培養方法としては振盪培養、通気撹拌培養
などの好気的培養が適しており、ｐＨ５〜７、２５〜３
０℃で３〜５日間、望ましくはｐＨ５〜７、２５〜２７
℃で４日間培養する。この培養により生産されたＮＧ−
２６１を単離するには、発酵生産物を採取する一般的な
方法に準じて行えばよい。
などの好気的培養が適しており、ｐＨ５〜７、２５〜３
０℃で３〜５日間、望ましくはｐＨ５〜７、２５〜２７
℃で４日間培養する。この培養により生産されたＮＧ−
２６１を単離するには、発酵生産物を採取する一般的な
方法に準じて行えばよい。
【００２０】すなわち、培養終了後、遠心分離または濾
過により分離した菌体からＮＧ−２６１を低級アルコー
ル、アセトンなどの有機溶媒で抽出し、この抽出液を減
圧濃縮し有機溶媒を除去した後、酢酸エチル、ベンゼ
ン、クロロホルムなどの非水溶性有機溶媒に転溶し、こ
れを減圧濃縮してシロップ状とする。このシロップを再
度酢酸エチル、ベンゼン、クロロホルム、アセトン、メ
タノールなどの有機溶媒に溶解し、シリカゲルを用いた
カラムクロマトグラフィー、逆相分配用シリカゲルＯＤ
Ｓを充填した高速液体クロマトグラフィー及びゲル濾過
カラムクロマトグラフィーに付すことによりＮＧ−２６
１を精製、単離することができる。
過により分離した菌体からＮＧ−２６１を低級アルコー
ル、アセトンなどの有機溶媒で抽出し、この抽出液を減
圧濃縮し有機溶媒を除去した後、酢酸エチル、ベンゼ
ン、クロロホルムなどの非水溶性有機溶媒に転溶し、こ
れを減圧濃縮してシロップ状とする。このシロップを再
度酢酸エチル、ベンゼン、クロロホルム、アセトン、メ
タノールなどの有機溶媒に溶解し、シリカゲルを用いた
カラムクロマトグラフィー、逆相分配用シリカゲルＯＤ
Ｓを充填した高速液体クロマトグラフィー及びゲル濾過
カラムクロマトグラフィーに付すことによりＮＧ−２６
１を精製、単離することができる。
【００２１】以上の精製によって得られた本発明の目的
物質であるＮＧ−２６１は、その分子量、紫外線吸収ス
ペクトル、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル、13Ｃ−ＮＭＲスペ
クトル等の解析結果より構造式が決定された。
物質であるＮＧ−２６１は、その分子量、紫外線吸収ス
ペクトル、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル、13Ｃ−ＮＭＲスペ
クトル等の解析結果より構造式が決定された。
【００２２】ＮＧ−２６１の理化学的性質は以下の通り
である。
である。
【００２３】（ａ）ＳＩマススペクトル：ＳＩ ｍ／ｚ
２２９（Ｍ＋Ｈ）+ （ｂ）分子量：２２８ （ｃ）分子式：Ｃ12Ｈ20Ｏ4 （ｄ）紫外線吸収スペクトル：λmax ２０９ｎｍ（ε
＝８６００） （メタノール溶液中で測定） （ｅ）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＣＤ3ＯＤ中、４００Ｍ
Ｈｚで測定した結果を図１に示す。
２２９（Ｍ＋Ｈ）+ （ｂ）分子量：２２８ （ｃ）分子式：Ｃ12Ｈ20Ｏ4 （ｄ）紫外線吸収スペクトル：λmax ２０９ｎｍ（ε
＝８６００） （メタノール溶液中で測定） （ｅ）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＣＤ3ＯＤ中、４００Ｍ
Ｈｚで測定した結果を図１に示す。
【００２４】（ｆ）13Ｃ−ＮＭＲスペクトル：ＣＤ3Ｏ
Ｄ中、１００ＭＨｚで測定した結果を図２に示す。
Ｄ中、１００ＭＨｚで測定した結果を図２に示す。
【００２５】（ｇ）ＩＲ吸収スペクトル：臭化カリウム
錠中で測定した結果を図３に示す。
錠中で測定した結果を図３に示す。
【００２６】（ｈ）溶剤に対する溶解性：メタノール、
エタノール、アセトンに可溶 ｎ−ヘキサン、ベンゼンに難溶 水に不溶 （ｉ）呈色反応； 陽性：Ｈ2ＳＯ4、Ｉ2 陰性：ニンヒドリン （ｊ）塩基性、酸性、中性の区別：中性 （ｋ）物質の色：白色油状
エタノール、アセトンに可溶 ｎ−ヘキサン、ベンゼンに難溶 水に不溶 （ｉ）呈色反応； 陽性：Ｈ2ＳＯ4、Ｉ2 陰性：ニンヒドリン （ｊ）塩基性、酸性、中性の区別：中性 （ｋ）物質の色：白色油状
【００２７】
【発明の効果】ＮＧＦは、ある種の神経細胞の生存、機
能維持を担っており、変性修復・保護作用を有してい
る。本発明の化合物ＮＧ−２６１は、ＮＧＦ様作用ある
いは作用増強効果を示している。従って、ＮＧ−２６１
は、生体内で神経細胞に働き、神経変性に伴う神経障害
の改善・治療効果を示すことが期待される。例えば、外
傷性、アルコールや抗癌剤などの薬剤性、炎症性、糖尿
病などに見られる代謝性、さらには特発性の末梢性神経
変性に伴う症状・疾患の改善・治療薬として用いること
ができる。また、中枢性神経変性に伴う症状・疾患、例
えば、アルツハイマー型及び脳血管性痴呆、ダウン症候
群、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、脳虚血・脳
梗塞・脳出血・頭部外傷などの後遺症、健忘症、脊髄性
神経麻ひ症などの改善・治療薬としても用いることがで
きる。
能維持を担っており、変性修復・保護作用を有してい
る。本発明の化合物ＮＧ−２６１は、ＮＧＦ様作用ある
いは作用増強効果を示している。従って、ＮＧ−２６１
は、生体内で神経細胞に働き、神経変性に伴う神経障害
の改善・治療効果を示すことが期待される。例えば、外
傷性、アルコールや抗癌剤などの薬剤性、炎症性、糖尿
病などに見られる代謝性、さらには特発性の末梢性神経
変性に伴う症状・疾患の改善・治療薬として用いること
ができる。また、中枢性神経変性に伴う症状・疾患、例
えば、アルツハイマー型及び脳血管性痴呆、ダウン症候
群、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、脳虚血・脳
梗塞・脳出血・頭部外傷などの後遺症、健忘症、脊髄性
神経麻ひ症などの改善・治療薬としても用いることがで
きる。
【００２８】
【実施例】以下、実施例及び試験例を示し、本発明を更
に詳細に説明する。
に詳細に説明する。
【００２９】実施例 １００ｍｌ当りグルコース２ｇ、ポリペプトン０．５
ｇ、酵母エキス０．２ｇ、リン酸一カリウム０．１ｇ、
硫酸マグネシウム０．０５ｇからなるｐＨ６の無菌液体
培地にCladosporium cladosporioides TF-0380株を接種
し、２６℃、９６時間振盪培養した。次に５０Ｌ容培養
ジャー１基を用いて、種培養と同じ組成の無菌培地３０
Ｌに前記種培養液３００ｍｌを接種し２６℃、９６時間
撹拌通気培養した。
ｇ、酵母エキス０．２ｇ、リン酸一カリウム０．１ｇ、
硫酸マグネシウム０．０５ｇからなるｐＨ６の無菌液体
培地にCladosporium cladosporioides TF-0380株を接種
し、２６℃、９６時間振盪培養した。次に５０Ｌ容培養
ジャー１基を用いて、種培養と同じ組成の無菌培地３０
Ｌに前記種培養液３００ｍｌを接種し２６℃、９６時間
撹拌通気培養した。
【００３０】培養終了後吸引濾過により上澄液と菌体に
分けた。得られた上澄液を３ＬのＨＰ−２０（商品名、
三菱化成社製）に吸着させた。メタノールで溶出し、こ
れを濃縮後その濃縮液を１．５Ｌの酢酸エチルで４回抽
出した。また得られた菌体をアセトンで抽出し、濃縮後
その濃縮液を１Ｌの酢酸エチルで４回抽出した。この抽
出液を合わせ無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧濃縮乾
固し褐色のシロップ状物質１０．７９ｇを得た。
分けた。得られた上澄液を３ＬのＨＰ−２０（商品名、
三菱化成社製）に吸着させた。メタノールで溶出し、こ
れを濃縮後その濃縮液を１．５Ｌの酢酸エチルで４回抽
出した。また得られた菌体をアセトンで抽出し、濃縮後
その濃縮液を１Ｌの酢酸エチルで４回抽出した。この抽
出液を合わせ無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧濃縮乾
固し褐色のシロップ状物質１０．７９ｇを得た。
【００３１】この褐色シロップをクロロホルムに溶解
し、クロロホルムで調製したシリカゲル［ワコーゲルＣ
−２００（商品名、和光純薬社製）］の６００ｍｌカラ
ムに吸着させた。クロロホルムで洗浄後、クロロホルム
−メタノール（９８：２、９６：４）の混合溶媒で順次
溶出し、この区分を除去した。次にクロロホルム−メタ
ノール（９０：１０）の混合溶媒で溶出を行い、それを
減圧濃縮乾固し褐色物質を得た。
し、クロロホルムで調製したシリカゲル［ワコーゲルＣ
−２００（商品名、和光純薬社製）］の６００ｍｌカラ
ムに吸着させた。クロロホルムで洗浄後、クロロホルム
−メタノール（９８：２、９６：４）の混合溶媒で順次
溶出し、この区分を除去した。次にクロロホルム−メタ
ノール（９０：１０）の混合溶媒で溶出を行い、それを
減圧濃縮乾固し褐色物質を得た。
【００３２】シリカゲルカラム精製で得られた褐色物質
を少量のクロロホルム−メタノール（１：１）の混合溶
媒に溶解し、セファデックスＬＨ−２０（商品名、ファ
ルマシア社製）を用いクロロホルム−メタノール（１：
１）の混合溶媒でゲル濾過し、得られた活性区分を集め
減圧濃縮乾固して褐色物質５４０ｍｇを得た。
を少量のクロロホルム−メタノール（１：１）の混合溶
媒に溶解し、セファデックスＬＨ−２０（商品名、ファ
ルマシア社製）を用いクロロホルム−メタノール（１：
１）の混合溶媒でゲル濾過し、得られた活性区分を集め
減圧濃縮乾固して褐色物質５４０ｍｇを得た。
【００３３】ゲル濾過で得られた褐色物質を少量のクロ
ロホルム−メタノール−ヘキサン（５：１：５）の混合
溶媒に溶解し、セファデックスＬＨ−２０を用いクロロ
ホルム−メタノール−ヘキサン（５：１：５）の混合溶
媒でゲル濾過し、得られた活性区分を集め減圧濃縮乾固
してＮＧ−２６１の粗精製物質２５３．５ｍｇを得た。
ロホルム−メタノール−ヘキサン（５：１：５）の混合
溶媒に溶解し、セファデックスＬＨ−２０を用いクロロ
ホルム−メタノール−ヘキサン（５：１：５）の混合溶
媒でゲル濾過し、得られた活性区分を集め減圧濃縮乾固
してＮＧ−２６１の粗精製物質２５３．５ｍｇを得た。
【００３４】ＮＧ−２６１の粗精製物質を少量のメタノ
ールに溶解し、セファデックスＬＨ−２０を用いメタノ
ールで溶出し、この区分を減圧濃縮乾固してＮＧ−２６
１の白色油状物質３０．０ｍｇを得た。
ールに溶解し、セファデックスＬＨ−２０を用いメタノ
ールで溶出し、この区分を減圧濃縮乾固してＮＧ−２６
１の白色油状物質３０．０ｍｇを得た。
【００３５】試験例［ＮＧＦ作用増強効果試験］ ＮＧＦ作用増強効果は、ＰＣ−１２細胞の突起伸張で評
価した。ＰＣ−１２細胞は、ＮＧＦに反応して神経突起
の伸張、神経伝達物質の生合成に関する酵素活性の上昇
などを示し、神経様細胞へと分化する。この性質を利用
し、本培養細胞へＮＧＦ存在下で本発明化合物を作用さ
せ、本発明化合物のＮＧＦ作用増強効果を調べた。
価した。ＰＣ−１２細胞は、ＮＧＦに反応して神経突起
の伸張、神経伝達物質の生合成に関する酵素活性の上昇
などを示し、神経様細胞へと分化する。この性質を利用
し、本培養細胞へＮＧＦ存在下で本発明化合物を作用さ
せ、本発明化合物のＮＧＦ作用増強効果を調べた。
【００３６】（検体）実施例で得られたＮＧ−２６１を
メタノールに溶解し、１ｍｇ／ｍｌ〜３ｍｇ／ｍｌとし
た。
メタノールに溶解し、１ｍｇ／ｍｌ〜３ｍｇ／ｍｌとし
た。
【００３７】（試験細胞） ＰＣ−１２細胞 ラット褐色細胞腫（ＮＧＦ応答細胞） （試験方法）ＰＣ−１２細胞を１０％牛胎児血清、５％
馬血清、５０ユニット／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ｍ
ｌストレプトマイシンを含有するダルベッコ改変イーグ
ル培地（ギブコ社製，高グルコース含有）にて、２×１
０4細胞／ｍｌに調製し、コラーゲンコート２４孔プレ
ート（培養孔あたりの面積２cm2,コーニング社製）へ、
０．５ｍｌ／孔ずつまき、３７℃、５％ＣＯ2で培養し
た。２４時間後、培地を除き、新たにＮＧＦ（シグマ社
製、２．５Ｓ）と各種濃度の検体を含む上記培地０．３
ｍｌ／孔を加えた。ここで、ＮＧＦは最終濃度が０．５
ｎｇ／ｍｌとなるように添加した。また、本発明化合物
はメタノールに溶解し、最終濃度が下記表２に示す各種
濃度となるように添加した。なお、比較として、ＮＧ
Ｆ，本発明化合物共に加えない培地、本発明化合物のみ
加えない対照培地も調製した。
馬血清、５０ユニット／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ｍ
ｌストレプトマイシンを含有するダルベッコ改変イーグ
ル培地（ギブコ社製，高グルコース含有）にて、２×１
０4細胞／ｍｌに調製し、コラーゲンコート２４孔プレ
ート（培養孔あたりの面積２cm2,コーニング社製）へ、
０．５ｍｌ／孔ずつまき、３７℃、５％ＣＯ2で培養し
た。２４時間後、培地を除き、新たにＮＧＦ（シグマ社
製、２．５Ｓ）と各種濃度の検体を含む上記培地０．３
ｍｌ／孔を加えた。ここで、ＮＧＦは最終濃度が０．５
ｎｇ／ｍｌとなるように添加した。また、本発明化合物
はメタノールに溶解し、最終濃度が下記表２に示す各種
濃度となるように添加した。なお、比較として、ＮＧ
Ｆ，本発明化合物共に加えない培地、本発明化合物のみ
加えない対照培地も調製した。
【００３８】このような各種培地下で４８時間培養した
後、ＰＣ−１２細胞の神経突起の伸張を、顕微鏡下に観
察した。
後、ＰＣ−１２細胞の神経突起の伸張を、顕微鏡下に観
察した。
【００３９】観察結果を細胞の突起長で４段階に分類
し、形態変化のない細胞を０点、突起の伸張を伴わず形
態変化を起こした細胞を１点、細胞体の直径以内の突起
を持つ細胞を２点、細胞体の直径以上の突起を持つ細胞
を３点とし、１００細胞の合計点を突起伸張活性とし
た。
し、形態変化のない細胞を０点、突起の伸張を伴わず形
態変化を起こした細胞を１点、細胞体の直径以内の突起
を持つ細胞を２点、細胞体の直径以上の突起を持つ細胞
を３点とし、１００細胞の合計点を突起伸張活性とし
た。
【００４０】（結果）結果を表２に示す。
【００４１】
【表２】
【図１】ＣＤ3ＯＤ中、４００ＭＨｚで測定したＮＧ−
２６１の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
２６１の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図２】ＣＤ3ＯＤ中、１００ＭＨｚで測定したＮＧ−
２６１の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
２６１の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】臭化カリウム錠中で測定したＮＧ−２６１の赤
外線吸収スペクトルを示す。
外線吸収スペクトルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 17/04 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 折居 由利子 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内 (72)発明者 溝部 文夫 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内 (72)発明者 酒井 則義 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内 (72)発明者 花田 和紀 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内
Claims (1)
- 【請求項１】式 【化１】 で表される不飽和ラクトン化合物
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6121619A JPH0770101A (ja) | 1993-06-22 | 1994-06-03 | 不飽和ラクトン化合物 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5-150014 | 1993-06-22 | ||
| JP15001493 | 1993-06-22 | ||
| JP6121619A JPH0770101A (ja) | 1993-06-22 | 1994-06-03 | 不飽和ラクトン化合物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0770101A true JPH0770101A (ja) | 1995-03-14 |
Family
ID=26458927
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6121619A Pending JPH0770101A (ja) | 1993-06-22 | 1994-06-03 | 不飽和ラクトン化合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0770101A (ja) |
-
1994
- 1994-06-03 JP JP6121619A patent/JPH0770101A/ja active Pending
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