JPH0812666A

JPH0812666A - 新規抗生物質ｆ４８３ａ

Info

Publication number: JPH0812666A
Application number: JP14155994A
Authority: JP
Inventors: Yumiko Sairenji; 弓子西連寺; Seiichi Sato; 誠一佐藤; Riyuusuke Nakagawa; 隆祐中川; Toshihiko Yoshimura; 敏彦吉村; Ryosuke Fudo; 亮介不藤; Toshiyuki Kameyama; 俊之亀山
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 1994-06-23
Filing date: 1994-06-23
Publication date: 1996-01-16

Abstract

(57)【要約】【構成】下記の式で表される抗生物質Ｆ４８３Ａ；【化１】並びにペニシリウム（Penicillinm）属に属する抗生物
質Ｆ４８３Ａ生産菌を培地に培養し、その培養物から抗
生物質Ｆ４８３Ａを採取することを特徴とする、抗生物
質Ｆ４８３Ａの製造方法；および抗生物質Ｆ４８３Ａを
有効成分として含む抗腫瘍剤。【効果】抗生物質Ｆ４８３Ａは抗腫瘍剤として有用で
ある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規抗生物質、その製
造方法およびそれを有効成分として含む抗腫瘍剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】従来、抗腫瘍抗生物質としてアントラサ
イクリン類、マイトマイシン類などの化合物などが報告
されている。キサントン骨格を有する化合物は、天然
界、特に植物界より単離され、数多く報告され、その中
で抗腫瘍効果が見いだされているものもあるが（J. Ph
arm.Sci. 62，483〜485（1973）、Phytochemistry 2
7，2795〜2800（1988）、Phytochemistry 34，1413〜1
420（1993））、さらに高い抗腫瘍性を備える化合物が
求められていた。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】高い抗腫瘍性を備える
新規抗生物質およびその製造方法を提供することを目的
とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意努力
した結果、ペニシリウム・エスピー（Penicillium s
p．）が生産する抗生物質が新規化合物であり、これが
高い抗腫瘍活性を有することを見いだし、本発明を完成
するに至った。すなわち、本発明は、下記の式で表され
る抗生物質Ｆ４８３Ａを提供するものである。

【０００５】

【化２】

【０００６】また、本発明は、ペニシリウム（Penicill
ium）属に属する抗生物質Ｆ４８３Ａ生産菌を培養し、
その培養物から抗生物質Ｆ４８３Ａを採取することを特
徴とする、抗生物質Ｆ４８３Ａの製造方法を提供するも
のである。さらに、本発明は、抗生物質Ｆ４８３Ａを有
効成分として含む抗腫瘍剤を提供するものである。

【０００７】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
抗生物質Ｆ４８３Ａを生産する微生物は、ペニシリウム
（Penicillium）属に属する抗生物質Ｆ４８３Ａの生産
能を有する菌種である。その一例として、下記に詳述す
るペニシリウム・エスピー・ＡＪ１１７２９１（Penici
llium sp．AJ117291）（以下、「ＡＪ１１７２９１
株」と称する）を挙げることができる。また、ＡＪ１１
７２９１株の自然的および人工的変異株を使用しても良
い。上記ＡＪ１１７２９１株は、愛媛県にて採取された
土壌より分離された土壌糸状菌であり、工業技術院生命
工学工業技術研究所に平成６年６月１０日付けで寄託さ
れ、その微生物受託番号は、ＦＥＲＭＰ−１４３６３
である。

【０００８】ＡＪ１７２９１株は、次の菌学的性質を有
する。（１）各種培地における生育形態麦芽エキス寒天培地上（２５℃）での生育はやや遅く、
１４日間で３３ｍｍである。コロニー表面はビロード状
で、灰緑色を呈し、裏面は黄褐色である。培地中への色
素の浸出や液滴の生成は認められない。ツアペック寒天
培地上（２５℃）での生育は良好で、１４日間で５８ｍ
ｍである。コロニー表面はビロード状で、中心部がやや
黄色味を帯びた白色。裏面は淡黄色である。培地中への
色素の浸出はみられないが、淡黄色の液滴の生成が認め
られる。バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃）での
生育は、１４日間で３９ｍｍであり、コロニー形状は麦
芽エキス寒天培地の場合と同様である。（２）形態的性状麦芽エキス寒天培地上で、分生子柄は気中菌糸から発達
し比較的短く（３０〜５０μｍｘ２．０μｍ）、無色。
通常、分生子柄の先端に２〜４本の一次分枝（メトレ）
がみられ、その上に３〜５本のフィアライドを輪生し、
その先端に多数の分生子を連鎖状に形成する。メトレは
２．０ｘ８．０〜１０μｍ。フィアライドは１．５〜
２．０ｘ６．０〜８．０μｍでペン先状で先が細い。分
生子は淡緑色で、亜球形、単胞で粗面（１．８〜２．２
μｍ）。また上記培地のいずれでも完全世代は認められ
ない。生育温度は１０〜３７℃で、至適温度は２５〜２
８℃である。また生育ｐＨは３〜１０で４〜８が至適で
ある。以上の菌学的性質から本菌は、ザジーナスペ
ニシリウム（The genus Penicillium；1979、Academi
c press，J I．Pitt 著）に従い、不完全菌亜門、不
完全糸状菌綱、ペニシリウム（Penicillium）属に属す
ることが明らかとなり、本菌株をペニシリウムエスピ
ーＡＪ１１７２９１（Penicillium sp．AJ117291）株
と命名した。

【０００９】ペニシリウム（Penicillium）属に属する
抗生物質Ｆ４８３Ａ生産菌を培養し、その培養物から抗
生物質Ｆ４８３Ａを採取することにより、本発明の抗生
物質Ｆ４８３Ａを製造することができる。Ｆ４８３Ａ生
産菌は常法に従って培養することができ、培養の形態
は、液体培養でも固体培養でもよい。工業的に有利に培
養するためには、前記抗生物質生産菌の菌懸濁液または
培養液を培地に接種し、通気攪拌培養をおこなえばよ
い。培地の栄養源としては特に限定されることはない
が、微生物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源、そ
の他を培地に含有させることができる。炭素源として
は、デンプン、デキストリン、グリセリン、グルコー
ス、スクロース、ガラクトース、イノシトール、マンニ
トールなどが、また、窒素源としては、ペプトン、大豆
紛、肉エキス、米糠、麸、尿素、コーンスティープリカ
ー、アンモニウム塩、硝酸塩、その他の有機または無機
の窒素化合物が用いられる。その他、無機塩、微量栄養
源等を適宜添加してもよい。なお、醗酵中の発泡を抑制
するため、消泡剤等を適宜添加することができる。培養
温度、培養時間等の培養条件は使用する菌の発育に適
し、しかもＦ４８３Ａの生産が最高となるような条件が
選ばれる。例えば、培地のｐＨは４〜９が適当であり、
５〜８が好ましく、培養温度は１５〜３５℃が適当であ
り、２０〜２８℃が好ましい。攪拌速度は、２００〜４
００ｒｐｍが適当であり、３００〜３５０ｒｐｍが好ま
しく、通気量は１／２０〜１／１ｖ／ｖ・ｍｉｎが適当
であり、１／４〜１／２ｖ／ｖ・ｍｉｎが好ましく、ま
た、培養時間は、２４〜１６８時間が適当であり、７２
〜１２０時間が好ましい。しかし、これらの培養組成
物、培地のｐＨ、培養温度、攪拌速度、通気量、培養時
間等の培養条件は使用する菌株の種類や、外部の条件な
どに応じて、所望の結果が得られるように適宜調節され
るべきであることはいうまでもない。

【００１０】上記のような培養物から、代謝産物を採取
するのに通常使用される手段を適宜利用してＦ４８３Ａ
を採取することができる。たとえば、Ｆ４８３Ａと培養
物中に含まれる他の物質との溶解度の差を利用する手
段、イオン結合力の差を利用する手段、吸着親和力の差
を利用する手段、分子量の差を利用する手段のいずれも
を、それぞれ単独で、または適宜組み合わせて、あるい
は反復して使用することができる。具体的には、Ｆ４８
３Ａの培養液体および菌体の抽出液を各種のイオン交換
クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、吸
着クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、セル
ロース分配クロマトグラフィー等を組み合わせて、精製
するとＦ４８３Ａおよびその他の活性成分を含む画分が
得られる。この画分を減圧濃縮して得られる固形物をさ
らに高速液体クロマトグラフィーに付して、展開して精
製することにより、Ｆ４８３Ａの淡黄白色粉末がえられ
る。

【００１１】上記のようにして得られたＦ４８３Ａの理
化学的性質は以下の通りである。分子量：２７２（Ｃ１５Ｈ１２Ｏ５）紫外線吸収スペクトル（日立 U-3210 detector、MeO
H）：図１に示す。溶解性：ジメチルスルホキシド、メタノールに易溶、
クロロホルム、酢酸エチルに可溶、ヘキサン、水に難
溶。呈色反応：塩化第二鉄反応陽性物質の色：淡黄白色１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）：主
なスペクトルδ 2.78（3H，s），3.86（3H，s），6.25
（1H，brs），6.40（1H，brs），6.62（2H，brs）１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）：
主なスペクトルδ 23.6（q），57.1（q），92.3
（d），98.9（d），102.7（d），117.6（d），105.4
（s），112.6（s），144.6（s），159.1（s），160.9
（s），164.9（s），165.0（s），166.6（s），183.4
（s）ＨＲ−ＦＡＢＭＳ：実測値 273.0756 計算値 273.0763 上記の理化学的性質から、抗生物質Ｆ４８３Ａは以下の
式で表される新規化合物であることが明らかとなった。

【００１２】

【化３】

【００１３】本発明の抗生物質Ｆ４８３Ａを有効成分と
して含む抗腫瘍剤は、経口および非経口投与のいずれの
投与経路でも使用可能であり、経口投与する場合は、軟
・硬カプセル剤または錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の
剤型で投与することができ、また、非経口投与する場合
は、水溶性懸濁液、油性製剤などの皮下あるいは静脈注
射剤、点滴剤、座薬、塗布薬、軟膏のような剤型で投与
することができる。

【００１４】本発明の有効成分である抗生物質Ｆ４８３
Ａを製剤化するために、界面活性剤、賦形剤、滑沢剤、
佐剤および医薬的に許容できる皮膜形成物質、コーティ
ング助剤等を適宜使用することができる。例えば、界面
活性剤としては、アルコール、エステル類、硫酸化脂肪
アルコール類等を挙げることができる。また、賦形剤と
しては、ショ糖、乳糖、デンプン、結晶セルロース、マ
ンニット、軽質無水珪酸、アミン酸マグネシウム、メタ
珪酸アルミン酸マグネシウム、合成珪酸アルミニウム、
炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素カル
シウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム等を挙
げることができる。滑沢剤としては、ステアリン酸マグ
ネシウム、タルク、硬化油等を挙げることができ、懸濁
剤や湿潤剤のごとき佐剤としては、ココナッツ油、オリ
ーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸カルシウム、ベニバナ
油、大豆リン脂質等を挙げることができる。皮膜形成物
質としては、セルロースや糖類等の炭水化物誘導体とし
て、酢酸フタル酸セルロース、また、アクリル酸系共重
合体、二塩基酸モルエステル類等のポリビニル誘導体と
してアクリル酸メチル・メタクリル酸共重合体、メタア
クリル酸メチル・メタクリル酸共重合体が挙げられる。
コーティング助剤としては、フタル酸エステル類等の可
塑剤を挙げることができる。上記の成分の他に、甘味
料、香料、着色料、保存料等を添加してもよい。

【００１５】

【実施例】以下に本発明を実施例により具体的に説明す
るが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではな
い。

【００１６】［製造例］ＡＪ１１７２９１株からのＦ４８３Ａの製造種菌としてペニシリウム・エスピー・ＡＪ１１７２９１
（Penicillium sp．AJ117291）を用いた。該菌株の一
白金耳を５００ｍｌ容三角フラスコ中の生産培地１００
ｍｌへ接種し、２５℃、旋回振とう（１８０ｒｐｍ）で
４日間培養した。（生産培地組成；麦芽エキス（ディフ
コ）２０ｇ／ｌ、オートミール粉末１０ｇ／ｍｌ、ペプ
トン１０ｇ／ｍｌ、グルコース１０ｇ／ｍｌ、可溶性デ
ンプン１０ｇ／ｌ（ｐＨ６．０））該培養液６０本にそれぞれ２００ｍｌのアセトンを加え
て、５℃で２日間抽出した。ついで、遠心および濾過に
よって、菌体を除去した濾液（１８Ｌ）を減圧濃縮し、
アセトンを留去した。残渣に酢酸エチル８００ｍｌを添
加し抽出した。酢酸エチル層を脱水後、減圧下濃縮し、
シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ₃−Ｍ
ｅＯＨ）に供し、ＣＨＣｌ₃溶出画分を分取した。本画
分を減圧下濃縮後、再び、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（ｎ−Ｈｅｘａｎｅ−ＥｔＯＡｃ）に供し、8
0：20の画分を分取した。本画分を減圧下濃縮後、Ｓｅ
ｐ−ｐａｋＣ₁₈（ミリポア社製）で前処理後、ＣＡＰＣ
ＥＬＬＰＡＫＮＨ₂ ８０を用いる高速液体クロマ
トグラフィーにより精製し、0.5％酢酸水：0.5％酢酸を
含むアセトニトリル＝65：35の画分を分取し、減圧下濃
縮し、１ｍｇのＦ４８３Ａを淡黄白色粉末として得た。

【００１７】［試験例］Ｆ４８３Ａの抗腫瘍活性の測定（Ａ）ＨＣＴ−１５細胞に対する抗腫瘍作用ＲＰＭＩ１６４０培地（ＳＩＧＭＡ社製）、１０％牛
胎児血清、１００ｕｎｉｔ／ｍｌペニシリンおよび１０
０μｇ／ｍｌストレプトマイシンの組成からなる培地
（培地Ａ）に５ｘ１０４細胞／ｍｌに調製したＨＣＴ−
１５細胞を５０μｌずつ９６穴マイクロタイタープレー
トの各穴に分注した。該プレートを炭酸ガス細胞培養器
内で、３７℃、２０時間培養後、これに培地Ａにより適
宜希釈した検体５０μｌずつを加え、炭酸ガス細胞培養
器内で、３７℃、７２時間培養した。これにＭＴＴ溶液
（５ｍｇ／ｍｌダルベッコＰＢＳ（−））を１０μｌず
つ加え、３７℃で４時間炭酸ガス細胞培養器内で培養し
た。ついで０．０１Ｎ塩酸／２０％ＳＤＳを５０μｌず
つ加えて生じた結晶を溶解した後、マイクロプレートリ
ーダーにより５７０ｎｍの吸光度を測定した。無処理細
胞と既知濃度の検体で処理した細胞の吸光度を比較する
ことにより、細胞の増殖を５０％阻害する検体濃度（Ｉ
Ｃ５０）を算出した。その結果を表１に示した。

【００１８】（Ｂ）Ｋ５６２細胞に対する抗腫瘍作用前記の培地Ａで８ｘ１０４細胞／ｍｌに調製したＫ５６
２細胞を５０μｌずつ９６穴マイクロタイタープレート
の各穴に分注した。これに培地Ａにより適宜希釈した検
体５０μｌずつを加え、以下前記のＨＣＴ−１５細胞の
場合と同様にしてＩＣ５０を算出した。その結果を表１
に示した。

【００１９】

【表１】

【００２０】表１より明らかなように、本願発明の新規
抗生物質Ｆ４８３Ａは高い抗腫瘍効果を有することが分
かる。

【００２１】

【発明の効果】本発明により、新規抗生物質Ｆ４８３Ａ
およびその製造方法が提供された。前記抗生物質Ｆ４８
３Ａは、高い抗腫瘍活性を有するので、抗腫瘍剤として
有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、本発明の抗生物質Ｆ４８３ＡのＭｅＯ
Ｈ溶液中での紫外線吸収スペクトルを示す図である。縦
軸は波長を、横軸は吸光度を表す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者吉村敏彦神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１味の素株式会社中央研究所内 (72)発明者不藤亮介神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１味の素株式会社中央研究所内 (72)発明者亀山俊之神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１味の素株式会社中央研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記で表される抗生物質Ｆ４８３Ａ。【化１】
【請求項２】ペニシリウム（Penicillium）属に属す
る抗生物質Ｆ４８３Ａ生産菌を培地に培養し、その培養
物から抗生物質Ｆ４８３Ａを採取することを特徴とす
る、抗生物質Ｆ４８３Ａの製造方法。
【請求項３】抗生物質Ｆ４８３Ａを有効成分として含
む抗腫瘍剤。