JPH10506607A - 血漿から得られるフィブリノーゲン濃縮物、その製法及び製造設備 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、フィブリノーゲン濃縮物に関し、この濃縮物は、ウイルス汚染物を含まず、純度が95％以上であることを特徴にしている。本発明はまた、かかるフィブリノーゲン濃縮物を得るための方法にも関係している。

Description

【発明の詳細な説明】 血漿から得られるフィブリノーゲン濃縮物、 その製法及び製造設備発明の主題 本発明は、ヒトまたは動物の血漿から得られるフィブリノーゲン濃縮物とその 製法、及び前記フィブリノーゲン濃縮物の製造設備に関する。 本発明は、前記フィブリノーゲン濃縮物を含む薬剤及び／または化粧剤にも関 する。発明の技術的背景 フィブリノーゲンは、凝集過程において基本的に重要な血漿タンパク質であり 、その医薬としてや化粧剤としての用途は多様な領域にわたる（創傷治癒、凝集 剤、生物学的接着剤の成分、高フィブリノーゲン血症、手術に伴なう続発症及び 手術後の後遺症の抑制など）。 治療または非治療用として使用されるフィブリノーゲンのような血液タンパク 質を製造するには、高純度でウイルス汚染（ＨＩＶ、肝炎ウイルス、パルボウイ ルスなど）がなく、また、例えば抗体やプロテアーゼのような生物学的分子が全 く無い製品の入手を可能にする精製技術が必要である（６５／６５ ＥＥＣ，７ ５／３１９／ＥＥＣ 及び ８９／３８１ ＥＥＣ Ｃｏｕｎｃｉｌ Ｄｉｒｅ ｃｔｉｖｅｓ）。 そこで、血漿汚染物質及び／または血漿から誘導される化合物（第VIII因子、 フォンビルブラント（ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ）因子、フィブロネクチン など）を排除又は不活性化する種々の処理方法（濾過、沈殿、アフィニティーク ロマトグラフィーな ど）が提案されている。 ウイルスの不活性化処理としては、熱処理または化学処理がある。 化学処理としては、例えば特許出願ＥＰ−０ １３１ ７４０に記載されてい るような溶剤／清浄剤を使用することによって行うウイルス不活性化がある。 しかし、ウイルスを不活性化するためのこのような熱または化学処理は、特に パルボウイルスＢ１９のようなエンベロープを持たないウイルスの場合、ある種 のウイルス汚染物を完全には排除できない。従来技術 特許出願ＰＣＴ／ＦＲ８９／０００５０（ＷＯ８９／１２０６５）は、血漿の 低温沈殿物の溶解フラクションから血漿タンパク質を分離する方法において、溶 剤／清浄剤を利用するウイルス不活性化を開示している。 この方法によれば、血漿低温沈殿物の溶解フラクションを水に再溶解させ、溶 剤／清浄剤ウイルス不活性化処理を施し、多孔性及び疎水性ゆえに第VIII因子／ フォンビルブラント因子複合体を保持できるゲルからなるマトリックスを有する 陰イオン交換樹脂を吸着剤として１回のクロマトグラフィー分離を行う。次いで 、溶離バッファのイオン強度を順次増大させることによって個々のタンパク質を 選択的に回収する。 クロマトグラフィーの結果得られる最初の濾液は、主成分としてフィブリノー ゲンを含有するが、アルブミン、免疫グロブリン及びウイルス不活性化剤（トゥ イーン（Ｔｗｅｅｎ）及びＴＮＢＰ）をも含有している。 次いで、この溶液を利用し、ヘパリン／セファロース樹脂の カラムであらためてクロマトグラフィー分離することによってフィブリノーゲン を精製する（ウイルス不活性化剤の排除）。 次いで、この回収されたフィブリノーゲンフラクションを濃縮し、カセット・ システムを利用して透析する。濃縮された生成物をボトルに配分し、凍結乾燥す る。 しかし、このフィブリノーゲン精製技術には、煩わしくかつ経費のかかるクロ マトグラフィー精製を必要とするという欠点がある。 しかも、この精製技術では、高純度フィブリノーゲンを豊富に含有する大量の フラクションを工業的規模で迅速に処理することができない。あらためてクロマ トグラフィー分離を行うことによって精製されたフィブリノーゲン濃縮物は、第 XIII因子を含んでいないから、生物学的接着剤としての有用性は低くなる。 特許及び特許出願ＤＥ−３ ００１ ４３５，ＥＰ−０ ３１１ ９５０及び ＰＣＴ／ＧＢ８６／００１２１（ＷＯ８６／０５１９０）は、酸性ｐＨ及びアミ ノ酸の存在における沈殿によって、血漿から得られた血液化合物を精製する方法 について教示している。 これらの方法は、化学的ウイルス不活性化方法と組み合わせることができる。 ただし、上述した種々の技術によって得られる生成物は、その純度が不充分で ある。 即ち、プロテアーゼのような汚染物質は、上記の技術では排除されない。 さらにまた、得られるフィブリノーゲン濃縮物は、脂質を含んだままであり、 溶解させるのに多大の時間を要する。発明の目的 本発明の目的は、純度が高く、（エンベロープを持つ及び／またはエンベロー プを持たない）ウイルス汚染物質も、プロテアーゼのような生物学的分子も含ま ないフィブリノーゲン濃縮物を得ることにある。 本発明の他の目的は、容易に、好ましくは１０分間以内に溶解させることので きるフィブリノーゲン濃縮物を得ることにある。 生物学的接着剤として使用できるように第XIII因子を含有するフィブリノーゲ ン濃縮物を得ることも本発明の目的である。 本発明は、血漿からこのフィブリノーゲン濃縮物を得るための、上記従来技術 の欠点を伴なわない方法、特に簡単、迅速かつ低コストで大量の高純度フィブリ ノーゲンを工業的規模で製造することを可能にする方法の提供をも目的とする。発明の特徴的要素 本願出願人は、現在知られているウイルス汚染物質のすべて、即ち、周知のエ ンベロープを持つウイルス及びエンベロープを持たないウイルス、特にＡ型肝炎 、Ｂ型肝炎及びＣ型肝炎ウイルス、ＨＩＶウイルス及びパルボウイルス（特にパ ルボウイルスＢ１９）を含まないフィブリノーゲン濃縮物の分離に成功した。 また、前記フィブリノーゲン濃縮物は、９８％よりも高くないにしても９５％ よりも高い純度を特徴とする。このフィブリノーゲン濃縮物中の残りのフラクシ ョンは、第XIIIフラクション（残りフラクション中における第XIII因子の比率が ３０％を超える場合もある）及び免疫グロブリンから成る。 さらにまた、このフィブリノーゲン濃縮物を化学的に不活性化する工程で使用 される極めて低い濃度の化学添加物（溶剤／ 清浄剤）もこのフィブリノーゲン濃縮物中に残留する可能性がある。 ただし、最終製品中に検出される溶剤／清浄剤は、毒性のない微量に過ぎない 。 有益な特徴として、前記フィブリノーゲン濃縮物は、プロテアーゼをも含有し ない。 有益な特徴として、本発明の前記フィブリノーゲン濃縮物は、脂質を含有しな いから、迅速かつ容易に、１０分間以内でないとしても、好ましくは１５分間以 内に溶解させることができる。 また、本発明のフィブリノーゲン濃縮物は、４℃で１２ヵ月以上放置しても凝 集しない。 好ましくは、前記フィブリノーゲン濃縮物は、０．００１％よりも多く、好ま しくは０．１％以上の第XIII因子を含有する。 本発明は、このフィブリノーゲン濃縮物の製法にも関係し、この製法ではフィ ブリノーゲンを含有する血漿の溶解フラクションを化学的にウイルス不活性化処 理し、ｐＨが酸性で、かつアミノ酸を含有する溶液中で１回または２回以上沈殿 処理する（場合によっては、１回または２回以上の物理的なウイルス不活性化処 理（紫外線、特にＵＶＣ放射線による処理）または加熱によるウイルス不活性化 処理をする）。 これらのステップを組み合わせると、予想外の成果として、相乗効果により純 度が９５％を超え、ウイルス汚染物を含まない本発明のフィブリノーゲン濃縮物 を得ることが可能になる。 酸性ｐＨにおいて行われる沈殿ステップは、４．０ないし７．０、好ましくは ５．５ないし６．５のｐＨで行うことで有益な成果が得られる。 溶液中のアミノ酸（好ましくはグリシン）の濃度は、０．１ ないし３．３モル、好ましくは０．５ないし１．５モルである。 また、精製方法は、好ましくは各沈殿ステップのあとに精製ずみフィブリノー ゲンを濾過する１回または２回以上のステップを含む。好ましくは、この濾過ス テップは、活性炭素のフィルタを介して行う。 本発明の製法には、ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）社から市販されている製品のよう なＡＫＳ−４またはＡＫＳ−７カーボンフィルタが特に好適である。 本発明では、化学的ウイルス不活性化処理として特許出願ＥＰ−０ １３１ ７４０に記載されているような溶剤／清浄剤を採用する。 加熱ウイルス不活性化ステップは、例えば１０時間またはそれ以上の、好まし くは２４ないし７２時間に相当する時間にわたって８０℃よりも高い温度で加熱 することによって行われる。 物理的ウイルス不活性化ステップは、血漿の溶解フラクションをその波長が２ ５０ないし２７０ｎｍ、好ましくは２５４ｎｍのＵＶＣ線で２５０ジュール／ｍ² 程度の照射線量を使用して処理することによって行われる。 本発明では、血漿低温沈殿物の溶解フラクション、コーン（Ｃｏｈｎ）ＦＩフ ラクション及び／またはこれらのフラクションの混合物を溶解血漿フラクション として選択する。 本発明の第１の好ましい実施例では、血漿の低温沈殿物の溶解フラクションに 対して先ずイオン交換樹脂を吸着剤とする１回のクロマトグラフィー処理を行う 。 イオン交換樹脂は、その多孔性と疎水性とによって血漿中に存在する第VIII因 子／フォンビルブラント因子複合体を保持できるようなゲルから成るマトリック スを含むことが好ましい。 本発明のこの好ましい実施例では、血漿の低温沈殿物の溶解フラクションに対 して先ず１０ないし２０℃の温度において水酸化アルミニウムによる処理及び／ または沈殿処理から成る精製処理を行うステップをも含む。 本発明は、本発明のフィブリノーゲン濃縮物から成る、及び／または本発明の 製法によって得られる薬剤及び／または化粧剤にも関係する。 具体的には、この薬剤及び／または化粧剤は、特許出願ＥＰ−０ ３０５ ２ ４３に記載され、かつ本発明のフィブリノーゲン濃縮物を含む生物学的接着剤で ある。 本発明はまた、本発明の血液誘導体、具体的には血液フィブリノーゲン濃縮物 、薬剤または化粧剤及び／または生物学的接着剤の製造設備にも関係する。前記 設備は、本発明の製法における溶解血漿フラクション中の物理的ウイルス不活性 化を確実にする装置を含む。 具体的には、本発明の設備の前記装置は、波長が２５０ないし２７０ｎｍ、好 ましくは２５４ｎｍ程度、照射線量が２５０ジュール／ｍ²程度のＵＶＣ線放射 源を含む。図面の簡単な説明 図１は、ポリアクリルアミド（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）ゲル上における種々の方法 を利用した精製ずみフィブリノーゲンのデンシトメーター分析の結果を示すグラ フである。 図２ないし図５は、種々の方法を利用した精製ずみフィブリノーゲンのザイモ グラフ分析の結果を示すグラフである。 図６は、本発明のフィブリノーゲン濃縮物製造設備を示す簡略図である。 添付の図面に沿って本発明の詳細を以下に説明するが、下記 の例はあくまでも本発明を説明するための例であり、本発明を制限するものでは ない。例１ フィブリノーゲンを含有する再懸濁血漿低温沈殿物を出発材料として使用する 。 この低温沈殿物懸濁液を水酸化アルミニウムによる処理と低温における沈殿処 理とで予備精製する。 次いで、この予備精製ずみ溶液を、ヨーロッパ特許出願ＥＰ−０ １３１ ７ ４０に記述されているように、溶剤／清浄剤ウイルス不活性化処理する。 次いで、この溶解フラクションに対してイオン交換樹脂を吸着剤とする１回の クロマトグラフィー処理をして、得られる第１フラクション（溶出液＋洗液）を 選択的に回収し、このフラクションを下記条件下に行われる第１沈殿ステップに よって精製する： −温度＝２５℃ −０．１５Ｍクエン酸ナトリウム、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１Ｍグリシン −ｐＨ６．１（１Ｎ ＨＣｌ） −１Ｍグリシン。 次いで、温度を＋４℃に設定し、遠心分離を行う。 下記条件下で沈殿物を再溶解させる： −ｐＨ７．０ −温度＝３０℃ −０．１５Ｍクエン酸ナトリウム、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１Ｍグリシン −ＡＫＳ−４／ＡＫＳ−７濾過 −ｐＨ６．１（１Ｎ ＨＣｌ） 次いで、温度を＋４℃にし、遠心分離を行う。 下記条件下で沈殿物を再溶解させる： −温度＝３０℃ −０．０５Ｍクエン酸ナトリウム、５０ｇ／ｌグルコース −０．０５Ｍ ＮａＣｌ −ｐＨ７。 次いで、沈殿物をＡＫＳ４−ＥＫＳＰ（商標）タイプのカーボンフィルタ（ザ イツ（ＳＥＩＴＺ））で濾過し、濃縮し、ダイアフィルトレーション処理する。 この濃縮生成物を、安定剤（スクロース）を添加したのち、濾過によって殺菌し 、ボトルに移し、凍結乾燥する。 本発明の製法で得られる収率は８０％程度であり、生成物の純度は９８％±２ ％程度の値に達する。例２ 例１の場合と同様に、溶剤／清浄剤による化学的ウイルス不活性化処理した血 漿低温沈殿物を出発材料として使用する；ただし、例１のような低温沈殿物のク ロマトグラフィー予備精製ステップは採用しない。 １回の沈殿ステップによってフィブリノーゲンを精製する。得られる収率は、 ７０ないし８０％程度であり、精製物の純度は７５ないし８５％程度の値に達す る。 下に掲げる表１は、種々のフィブリノーゲン精製方法から得られた比較データ を要約したものである。 図１は、ポリアクリルアミドゲル（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）のデンシトメーター分 析の結果を、本発明及び従来技術による種々の方法を利用して得られたフィブリ ノーゲンのそれぞれのバッチに関して示す。 トラックごとに沈着している物質量：タンパク質５μｇ −トラック１及び８：バイオ−ラド（ＢＩＯ−ＲＡＤ 商標）“ハイ・レンジ ”分子量標準品 −トラック２：低温沈殿物の溶液 −トラック３：コーディア（Ｋｏｒｄｉａ 商標）からのフィブリノーゲン標 準品 −トラック４：低温沈殿物（２回のグリシン沈殿処理）から調製されたフィブ リノーゲン −トラック５：イオン交換カラムのピークＡから調製されたフィブリノーゲン （１回のグリシン沈殿処理） −トラック６：イオン交換カラムのピークＡから調製されたフィブリノーゲン （２回のグリシン沈殿処理） −トラック７：ヘパリン−セファロース（ファーマチア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ））カラムから調製されたフィブリノーゲン トラック２，３，４及び７は、ほかにフィブロネクチン帯（３００，０００Ｍ Ｗ）を含む。 図２〜５に示すザイモグラフ分析は、本発明及び従来技術の種々の方法（ゼラ チン（図２）、ゼラチン＋ＥＤＴＡ（図３）、カゼイン（図４）及びカゼイン＋ ＥＤＴＡ（図５））を利用して得られたそれぞれ異なるフィブリノーゲンバッチ の分析結果を示す。 トラックごとに沈着している物質の量：タンパク質５００μｇ −トラック１及び８：ＢＩＯ−ＲＡＤ（商標）“ハイ・レンジ”分子量標準品 −トラック２：低温沈殿物の溶液 −トラック３：コーディア（商標）からのフィブリノーゲン標準品 −トラック４：低温沈殿物から調製されたフィブリノーゲン（２回のグリシン 沈殿処理） −トラック５：イオン交換カラムのピークＡから調製されたフィブリノーゲン （１回のグリシン沈殿処理） −トラック６：イオン交換カラムのピークＡから調製されたフィブリノーゲン （２回のグリシン沈殿処理） −トラック７：ヘパリン−セファロース（ファーマチア）カラムから調製され たフィブリノーゲン トラック２及び７は、明らかにプロテアーゼの存在を示唆する。例３ ：ＦＩフラクション（コーンフラクション（表２及び３参照））からのフィ ブリノーゲン濃縮物調製 ＦＩフラクションの取得 ５０ｌの血漿を０±２℃で溶融させ、遠心分離処理することによって低温沈殿 物を得る。低温沈殿物においては、低い血漿 のｐＨをＨＣｌによってｐＨ７．２にし、エタノールを添加する（９±１％）。 温度を−２．５℃に維持する。２時間の保温後、懸濁液を遠心分離してペレット （コーンフラクションＩまたはＦＩ）を得る（±８００ｇ）。 ＦＩフラクションを１５℃でクエン酸塩バッファ（０．１５Ｍクエン酸ナトリ ウム−０．１５Ｍ ＮａＣｌ−ｐＨ７．０±０．１）中に再懸濁させる。アルハ イドロゲル（最終濃度２％）を添加し、２０分間にわたって２２℃で保温する。 プロテアーゼを豊富に含むペレットを除去したのち、１ｌ／ｍの流量で上澄を清 澄化フィルタ（Ｐａｌｌ １μｍ）で濾過する。溶剤／清浄剤を添加することに よって、最初のウイルス不活性化を行う（１％トゥィーン８０及び０．３％ＴＮ ＢＰの存在において２５℃で８時間）。最初のグリシン沈殿処理 不活性化ののち、ｐＨを６．１±０．１に調整し、グリシン濃度を１Ｍにする 。４℃において少なくとも２時間の沈殿後、懸濁液を遠心分離するか、またはデ カンテーションによって分離する。ペレットをその１０倍に相当する量の３０℃ のクエン酸塩バッファに溶解させ、ｐＨを７．０±０．１にする。清澄化吸収性フィルタによる溶剤／清浄剤の除去 ＡＫＳ−４またはＡＫＳ−７タイプ（３ディスク）の木炭及びＥＫＳＰキーゼ ルグールタイプ（３ディスク）のフィルタで懸濁液を濾過する（流量：７００ｍ ｌ／ｍｉｎ）。 ツァイス社製のフィルタのようなＡＫＳ−４またはＡＫＳ−７木炭フィルタを 使用すれば、クノ（Ｃｕｎｏ）社製のフィルタのような“脱脂”フィルタを使用 するよりももっと効率的に溶剤／清浄剤を除することができる。２回目のグリシン沈殿処理 濾液のｐＨを６．１±０．１に調整し、グリシンを添加する（最終濃度：１Ｍ ）。４℃における沈殿処理を少なくとも２．５時間持続させる。遠心分離または デカンテーション後、沈殿物を得る。２回目の清澄化濾過 ３倍に希釈したクエン酸塩バッファにペレットを溶解させ、この溶液を上述の ように濾過する。濃度及びダイアフィルトレーション ２回目の濾過から得た濾液を限外濾過（フィルトロン（Ｆｉｌｔｒｏｎ商標） 、ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ））によって濃縮し、３倍に希釈されたクエン 酸塩バッファからダイアフィルトレーション処理する。安定剤の添加と紫外線による２回目のウイルス不活性化 精製ずみのフィブリノーゲンに安定剤を添加し、ｐＨを７．０±０．１に調整 し、フィブリノーゲンの溶液をＵＶＣ線で処理することにより、特にエンベロー プを持たないウイルス（パルボウイルスＢ１９，肝炎Ａ及びＣウイルスなど）を 不活性化する。殺菌のための濾過 ０．４５μｍ及び０．２２μｍ ミリディスク（Ｍｉｌｌｉｄｉｓｋ商標）フ ィルタ（ミリポア）で濾過することによって溶液を殺菌する。凍結乾燥及び強力な熱処理 凍結乾燥後、１０時間以上、好ましくは２４ないし７２時間にわたってフィブ リノーゲンを８０℃に加熱すればよい。結果 得られる生成物は、下記の性質を特徴とする： −収率：原料血漿（ＦＩフラクション）に対して０．４〜１ｇ／ｌ −溶出液：血漿の０．２ｍｇ／ｌ −純度：９８％よりも高い −（乾熱後でも）第VIII因子の高い濃度 −測定可能なプロテアーゼ（特にビタミンＫ依存プロテアーゼ）の不在 −１０分間以内に溶解可能な生成物 −溶液中での極めて高い安定性（１２カ月以上４℃で放置しても凝集しない） を特徴とする生成物 −極めて低い製造コスト −３回のウイルス不活性化処理されたフィブリノーゲンの活性低下が小さい 本発明のフィブリノーゲン濃縮物製造設備 添付図面の図６は、本発明のフィブリノーゲン濃縮物の製造設備を示す簡略図 である。 この設備は、本発明のフィブリノーゲン濃縮物の沈殿、遠心分離／デカンテー ション、濾過、濃縮及び透析を行う装置（１及び２）を含み、これらの装置を処 理すべき血液誘導体に応じて構成することは当業者にとって容易である。 この設備は、物理的処理によって血液誘導体中のウイルスを不活性化する装置 （図６中の３）をも含む。 従って、本発明の設備は血液誘導体、特に凝集因子（第VIII因子、第IX因子な ど）、免疫グロブリン、アルブミン、フィブリノーゲンなどを物理的にウイルス 不活性化するのに利用できる。 この装置は、放射の９０％以上が２５０ないし２７０ｎｍ、好ましくは２５４ ｎｍの波長を有するＵＶ殺菌管を含み、石英またはポリマー材で形成されていて 、前記波長を吸収しない管にむかって放射線を反射させる反射囲いの中に取り付 けられている。管４内を循環する生成物とＵＶランプ５が互いに接触することは ない。 バッフルや窒素注入などのような乱流システムによって、管内の流れを均質に 維持することができる。管を照射するＵＶ量をモニターするシステムを管のラン プとは反対の側に配置する。照射線量を一定にするためには、生成物の滞留時間 を調節すればよい。管径は、殺菌ランプの出力または長さと同様に、処理すべき 容量に応じて設定すればよい。囲いの内部及び液体の温度をモニターし、記録す る。 システム全体は、イノックス３０４ステンレススチールやテフロンのような薬 剤製造慣行（ＧＭＰ）に合致する材料で形成し、使用現場で衛生処理を施せばよ い。 ＵＶ線、特にＵＶＣ線を使用することにより、ウイルス、特にエンベロープを 持たないウイルス、例えばマウスパルボウイルスのような１本鎖ウイルスを不活 性化することができる（ウイルス不活性化の５〜６ ｌｏｇ）。 システムは、血液誘導体製造工程の下流側、例えば殺菌用濾過の手前または限 外濾過の後方に配置される。 ＵＶランプの出力は、１８ないし１３２ワットである。製剤（第VIII因子、フ ィブリノーゲン及びＩｇＧ）の活性は、僅かしか影響されない（平均して活性低 下は５％）。 装置は、単一体として、または並置される一連のモジュールとして構成すれば よい。照射線量は１００ないし２０００ジュール／ｍ²、好ましくは２５０ジュ ール／ｍ²程度である。 本発明の設備に使用されるＵＶ殺菌装置はｓ．ｐ．ｌタイプのものである（ア クアファイン（ＡＱＵＡＦＩＮＥ 商標）、Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ（ＵＳＡ） ）。例５ ：本発明のフィブリノーゲン濃縮物の分析 表４は、血漿の低温沈殿物の溶解フラクションに対してイオ ン交換樹脂を吸着材として１回のクロマトグラフィー処理（クロマト溶出液）を 行い、場合によっては乾熱処理（ＤＨクロマト溶出液）によって調製するか、ま たはコーン第Ｉフラクション（ＦＩ）の処理を行い、場合によっては、このフラ クションを乾熱処理（ＤＨ ＦＩ）することにより得られたフィブリノーゲン濃 縮物の特性を分析した結果を示す。 この分析結果から明らかなように、得られた生成物は極めて高い、即ち、９８ ％を超える純度を有し、溶剤／清浄剤の比率は極めて低い；ただし、この生成物 は充分な量の第XIII因子フラクションを保有しているから、本発明のフィブリノ ーゲン濃縮物を生物学的接着剤として利用することを可能にする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 1/34 Ａ６１Ｋ 37/04 ＡＤＴ 1/36 ＡＣＡ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ウイルス汚染物を含まず、その純度が９５％よりも高いことを特徴とする フィブリノーゲン濃縮物。 ２．純度が９８％よりも高いことを特徴とする請求の範囲第１項に記載のフィ ブリノーゲン濃縮物。 ３．プロテアーゼを含まないことを特徴とする請求の範囲第１項または第２項 に記載のフィブリノーゲン濃縮物。 ４．脱脂処理されていることを特徴とする請求の範囲第１項から第３項までの いずれか１項に記載のフィブリノーゲン濃縮物。 ５．４℃の温度で１２カ月以上放置しても凝集しないことを特徴とする請求の 範囲第１項から第４項までのいずれか１項に記載のフィブリノーゲン濃縮物。 ６．請求の範囲第１項から第５項までのいずれか１項に記載のフィブリノーゲ ン濃縮物の製法において、フィブリノーゲンを含有する溶解血漿フラクションを 化学的にウイルス不活性化処理し、次いでアミノ酸を含有し、かつｐＨが酸性の 溶液中で１回または２回以上沈殿処理することを特徴とする前記製法。 ７．溶液のｐＨが４．０ないし７．０、好ましくは５．５ないし６．５である ことを特徴とする請求の範囲第６項に記載の製法。 ８．溶液中のアミノ酸濃度が０．１ないし３．３モル、好ましくは０．５ない し１．５モルであることを特徴とする請求の範囲第６項または第７項に記載の製 法。 ９．アミノ酸がグリシンであることを特徴とする請求の範囲第６項から第８項 までのいずれか１項に記載の製法。 １０．好ましくは各沈殿ステップのあと、１回または２回以 上の精製ずみフィブリノーゲンを濾過するステップを含むことを特徴とする請求 の範囲第６項から第９項までのいずれか１項に記載の製法。 １１．濾過ステップを活性炭素のフィルタを介して行うことを特徴とする請求 の範囲第１０項に記載の製法。 １２．化学的ウイルス不活性化処理が溶剤／清浄剤の添加を伴なう処理である ことを特徴とする請求の範囲第６項から第１１項までのいずれか１項に記載の製 法。 １３．好ましくは溶解血漿フラクションを８０℃以上の温度で１０時間以上加 熱する熱処理ウイルス不活性化ステップをも含むことを特徴とする請求の範囲第 ６項から第１２項までのいずれか１項に記載の製法。 １４．溶解血漿フラクションをＵＶＣ線で処理する物理的ウイルス不活性化ス テップをも含むことを特徴とする請求の範囲第６項から第１３項までのいずれか １項に記載の製法。 １５．ＵＶＣ線の大部分が２５０ないし２７０ｎｍの波長を有し、照射線量が ２５０ジュール／ｍ²程度であることを特徴とする請求の範囲第１４項に記載の 製法。 １６．溶解血漿フラクションを血漿低温沈殿物、コーンＦＩフラクション及び ／またはこれらのフラクションの混合物から選択することを特徴とする請求の範 囲第６項から第１５項までのいずれか１項に記載の製法。 １７．血漿低温沈殿物の溶解フラクションに対して先ずイオン交換樹脂を吸着 剤とする１回のクロマトグラフィー処理を行うことを特徴とする請求の範囲第１ ６項に記載の製法。 １８．イオン交換樹脂が多孔性及び疎水性ゆえに第VIII因子／フォンビルブラ ント因子複合体を保持できるゲルから成るマ トリックスを含むことを特徴とする請求の範囲第１７項に記載の製法。 １９．血漿低温沈殿物の溶解フラクションに対して、先ず水酸化アルミニウム による処理及び／または１０ないし２０℃の温度における沈殿処理から成る精製 処理を行うことを特徴とする請求の範囲第１７項または第１８項に記載の製法。 ２０．請求の範囲第１項から第５項までのいずれか１項に記載のフィブリノー ゲン濃縮物を含む、または請求の範囲第６項から第１９項までのいずれか１項に 記載の製法によって得られる薬剤及び／または化粧剤。 ２１．請求の範囲第１項から第５項までのいずれか１項に記載のフィブリノー ゲン濃縮物を含む、または請求の範囲第６項から第１９項までのいずれか１項に 記載の製法によって得られる生物学的接着剤。 ２２．請求の範囲第１項から第５項までのいずれか１項に記載のフィブリノー ゲン濃縮物または請求の範囲第２０項及び第２１項に記載の薬剤または化粧剤及 び／または生物学的接着剤の製造設備において、請求の範囲第１４項または第１ ５項に記載の製法によって得られるフィブリノーゲンを含有する溶解血漿フラク ション中のウイルスを不活性化する装置（３）を含むことを特徴とする前記製造 設備。 ２３．装置がＵＶＣ放射線源を含み、その線源の波長が２５０ないし２７０ｎ ｍ、好ましくは２５４ｎｍ程度、照射線量が２５０ジュール／ｍ²程度であるこ とを特徴とする請求の範囲第２２項に記載の製造設備。