JPH1090264A - 免疫学的診断試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 不溶性担体に担持される融合タンパク質とし
て水溶性のより高い融合タンパク質を用い、より感度の
高い免疫学的診断試薬を提供する。 【解決手段】 診断学上有用である抗原タンパク質
（例、梅毒トレポネーマの表面抗原蛋白質）とチオレド
キシンとの融合タンパク質が、不溶性担体（例、スチレ
ン−メタクリル酸共重合体粒子）に、担持されているこ
とを特徴とする免疫学的診断試薬（例、免疫学的梅毒診
断試薬）。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、診断学上有用であ
る抗原タンパク質、特に梅毒トレポネーマ表面抗原蛋白
質が担持された不溶性担体からなる免疫学的診断試薬に
関する。

【０００２】

【従来の技術】一般に感染症では、感染しているか否か
は、血液中の細菌やウイルス等に対する抗体の存在によ
り判断される。また、ある種のガンにおいてはガン細胞
が分泌するタンパク質に対する抗体が出現することが知
られており、ガンの診断に利用されている。臨床検査分
野において、従来より、これら感染症の抗原タンパク質
やガン細胞分泌タンパク質を不溶性担体に担持させ、抗
体との抗原抗体反応により生じた不溶性担体の凝集の度
合いを検出することにより、該抗体を測定する免疫測定
方法が用いられてきた。このような測定方法としては、
赤血球凝集反応法、ラテックス凝集法が知られている。

【０００３】このような方法の一つとして、特表平２−
５００４０３号公報では、梅毒トレポネーマの分子量４
７ｋＤａの抗原を遺伝子工学的に調製し、これを用いて
抗梅毒トレポネーマ抗体を免疫学的に測定することが記
載されている。

【０００４】また、特開平７−２８７０１７号公報に
は、梅毒トレポネーマの表面抗原タンパク質とグルタチ
オン−Ｓ−トランスフェラーゼ（以下、ＧＳＴという）
との融合タンパク質を用いて、抗梅毒トレポネーマ抗体
を測定する診断試薬が開示されている。しかしながら、
この試薬においては、梅毒トレポネーマの表面抗原タン
パク質の分子量が大きい場合、その抗原の疎水性のため
にＧＳＴとの融合タンパク質の水溶性が低下してしまう
という欠点があった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題点
を解決するものであり、その目的は、不溶性担体に担持
される融合タンパク質として水溶性のより高い融合タン
パク質を用い、抗原タンパク質とグルタチオン−Ｓ−ト
ランスフェラーゼとの融合タンパク質を用いる場合より
も、より感度の高い免疫学的診断試薬を提供することで
ある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】請求項１記載の免疫学的
診断試薬は、診断学上有用である抗原タンパク質とチオ
レドキシンとの融合タンパク質が、不溶性担体に担持さ
れていることを特徴とする。

【０００７】請求項２記載の免疫学的診断試薬は、抗原
タンパク質が梅毒トレポネーマの表面抗原タンパク質で
ある請求項１記載の免疫学的診断試薬である。

【０００８】請求項３記載の免疫学的診断試薬は、不溶
性担体が、ポリスチレン、スチレン−スチレンスルホン
酸塩共重合体又はスチレン−メタクリル酸共重合体であ
る請求項１又は２項記載の免疫学的診断試薬である。

【０００９】本発明で用いられる、診断学上有用である
抗原タンパク質とは、本発明の目的にあった病原体など
の抗原タンパク質であれば特に限定されない。例えば、
細菌の抗原タンパク質として、梅毒トレポネーマ、ヘリ
コバクター・ピロリ、マイコプラズマ、淋菌などの抗原
タンパク質が挙げられる。ウイルスの抗原タンパク質と
して、ヒト免疫不全ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型
肝炎ウイルス、Ｇ型肝炎ウイルス、陰部ヘルペスウイル
ス、日本脳炎ウイルス、狂犬病ウイルス、などの抗原タ
ンパク質が挙げられる。また、ガン細胞が特異的に発現
する抗原タンパク質などであってもよい。本発明は、梅
毒トレポネーマの表面抗原タンパク質の場合に特に有効
である。

【００１０】上記梅毒トレポネーマの表面抗原タンパク
質の場合、該抗原タンパク質としては、分子量４７ｋＤ
ａの梅毒トレポネーマ表面抗原タンパク質（Infection
andImmunity 57(1),196-203(1989)）、４４ｋＤａの梅
毒トレポネーマ表面抗原タンパク質（Journal of Genet
ical Microbiology 133,1793-1803(1987))、４２ｋＤａ
の梅毒トレポネーマ表面抗原タンパク質（Infection an
d Immunity 57(9),2612-2623(1989)) 、３５ｋＤａの梅
毒トレポネーマ表面抗原タンパク質（Infection and Im
munity 59(10),3536-3546(1991))、３４ｋＤａの梅毒ト
レポネーマ表面抗原タンパク質（Infection and Immuni
ty 57(11),3314-3323(1989))、１７ｋＤａの梅毒トレポ
ネーマ表面抗原タンパク質（Infection and Immunity 6
1,1202-1210(1993) ）、１５ｋＤａの梅毒トレポネーマ
表面抗原タンパク質（MolecularMicrobiology 4,1371-1
379(1990)) などが知られており、これらはいずれも使
用可能である。これらの中でも、梅毒トレポネーマの主
要な表面抗原タンパク質と考えられている４７ｋＤａの
表面抗原タンパク質、１７ｋＤａの表面抗原タンパク
質、１５ｋＤａの表面抗原タンパク質などが好ましい。

【００１１】本発明の免疫学的診断試薬においては、単
独の抗原タンパク質のチオレドキシンとの融合タンパク
質が、不溶性担体に結合されて試薬となされていても良
いが、上記の梅毒トレポネーマの表面抗原タンパク質の
ように、一つの細菌、ウイルス又はガン細胞などに対し
て、複数の抗原タンパク質が公知となっているものの場
合、複数の抗原タンパク質の各々についてのチオレドキ
シンとの融合タンパク質が混合されて、同一の不溶性担
体に結合されて試薬となされていても良いし、また、各
々についてのチオレドキシンとの融合タンパク質が別々
に不溶性担体に結合されたものが混合されて試薬となさ
れていても良い。

【００１２】本発明で用いられる、抗原タンパク質とチ
オレドキシンとの融合タンパク質は、一般的には、遺伝
子工学的手法により得られる。この手法を詳しく説明す
ると、抗原タンパク質の遺伝子が公知のものであれば、
ＰＣＲ法により抗原タンパク質のＤＮＡを増幅、精製
し、これをチオレドキシン遺伝子を含むプラスミドベク
ターに導入する。得られたプラスミドベクターを大腸菌
に導入し、大腸菌に融合タンパク質を大量生産させる。

【００１３】上記プラスミドベクターとしては、チオレ
ドキシン遺伝子を持っているもので融合タンパク質を作
成可能なものであればどのようなものであってもよい。
従って、融合タンパク質を発現させるためのプロモータ
ー又は薬剤耐性遺伝子等はどのようなものであってもよ
い。

【００１４】本発明で用いられる不溶性担体としては、
例えば、有機高分子粒子、微生物、血球、細胞膜片等が
挙げられる。

【００１５】上記有機高分子粒子としては、例えば、不
溶性アガロース、セルロース、不溶性デキストラン等の
天然高分子粒子；ポリスチレン、スチレン−スチレンス
ルホン酸塩共重合体、スチレン−メタクリル酸共重合
体、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重合
体、塩化ビニル−アクリル酸エステル共重合体、酢酸ビ
ニル−アクリル酸エステル共重合体等の合成高分子粒子
等が挙げられ、特に合成高分子粒子を均一に懸濁させた
ラテックスが好ましく、特に、ポリスチレン、スチレン
−スチレンスルホン酸塩共重合体又はスチレン−メタク
リル酸共重合体粒子が好ましい。

【００１６】上記ラテックス粒子を用いる場合、粒径
は、０．１〜１．０μｍが好ましく、０．１〜０．５μ
ｍがより好ましい。

【００１７】本発明において、不溶性担体への融合タン
パク質の担持方法としては、物理吸着を利用する方法、
化学反応により結合させる方法などが挙げられる。

【００１８】上記化学反応を用いる方法としては、例え
ば、水溶性カルボジイミドを用いて縮合反応にて結合さ
せる方法が挙げられる。この場合は、不溶性担体を懸濁
した懸濁液と融合タンパク質溶液とを混合したものに、
水溶性カルボジイミド溶液を添加する。これを攪拌する
ことにより容易にペプチド結合を形成する架橋反応が起
こり、不溶性担体と融合タンパク質を結合することがで
きる。なお、この場合は、不溶性担体表面にカルボキシ
ル基が存在するものでなければならない。このような不
溶性担体としては、例えば、スチレン−メタクリル酸共
重合体からなるラテックス粒子が好ましい。

【００１９】上記スチレン−メタクリル酸共重合体から
なるラテックス粒子を用いる場合、そのカルボキシル基
の量は、表面荷電が０．０３〜０．７５ｍｅｑＣＯＯ^-
／ｇが好ましく、０．０５〜０．４０ｍｅｑＣＯＯ^- ／
ｇがより好ましい。

【００２０】上記縮合反応を用いる場合、ラテックス粒
子と融合タンパク質の間に、適当なスペーサーを介して
結合させることもできる。このようなスペーサーとして
は、β−アミノアラニン、γ−アミノ酪酸、ε−アミノ
カプロン酸、グルタミン酸などのアミノ酸が好ましい。

【００２１】上記水溶性カルボジイミドとしては、例え
ば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）
カルボジイミド塩酸塩（以下、ＥＤＣという）、１−シ
クロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジ
イミドメト−ｐ−トルエンスルホネート、１−エチル−
３−（３−ジエチルアミノプロピル）カルボジイミド過
塩素酸塩等が挙げられるが、水への溶解度、反応性等の
点からＥＤＣが好ましい。

【００２２】上記ＥＤＣを用いる場合、反応液中のＥＤ
Ｃ濃度は、低くなると十分に反応が進行しなくなり、高
くなるとＥＤＣが溶解せずに析出するので５〜３０％
（ｗ／ｖ）が好ましい。

【００２３】上記ＥＤＣによる反応の反応温度は、低く
なると十分に反応が進行しなくなり、高くなると抗原タ
ンパク質が変性し抗原性を失う恐れがあるので、０℃〜
４０℃が好ましい。

【００２４】不溶性担体への融合タンパク質の物理吸着
を利用する方法の場合、不溶性担体と融合タンパク質と
を溶液中で接触させることにより、抗原タンパク質と不
溶性担体の荷電により容易に吸着が起こる。

【００２５】上記吸着反応の反応温度は、低くなると十
分に反応が進行しなくなり、高くなると抗原タンパク質
又はチオレドキシンの立体構造が変化したり、分解する
恐れがあるので、０℃〜４０℃が好ましい。

【００２６】本発明の免疫学的診断試薬は、検体と混合
されて使用されることにより、測定対象である検体中の
抗体と、本発明の試薬の抗原タンパク質との抗原抗体反
応に基づいて上記抗体を測定することができる。

【００２７】上記の抗原抗体反応に際しては、検体を、
ｐＨ５．０〜９．０の緩衝液を用いて希釈してもよい。
上記の検体の希釈液としては、例えば、リン酸緩衝液、
グリシン緩衝液、ベロナール緩衝液、ホウ酸緩衝液、ク
エン酸緩衝液などが挙げられる。

【００２８】上記検体希釈液には、測定感度の向上、及
び抗原抗体反応の促進を目的として種々の増感剤を添加
することができる。上記増感剤としては、例えば、特開
平２−１７３５６７号公報に記載されたメチルセルロー
ス、エチルセルロース等のアルキル化多糖類、特開平５
−１８０８３８号公報に記載されたプルラン、ポリビニ
ルピロリドン等が挙げられる。

【００２９】また、上記検体希釈液には、検体中に存在
する他の物質により起こる非特異反応抑制を目的とし
て、牛血清アルブミン、卵性アルブミン等を添加するこ
ともできる。

【００３０】本発明の免疫学的診断試薬によって、検体
中の抗体を測定する際の測定系としては、例えば、前記
不溶性担体と検体中の抗体との反応による前記不溶性担
体の凝集の程度を測定するものが挙げられ、特に、不溶
性担体としてラテックス粒子を用いるラテックス凝集反
応系が好ましい。

【００３１】上記反応により生じた凝集を測定する方法
としては、凝集の程度を光学的に観察する方法あるいは
目視により観察する方法などが挙げられる。

【００３２】具体的には、光学的に観察する方法におい
ては、検体を検体希釈液で希釈した液に、本発明の免疫
学的診断試薬を含有する液（通常、リン酸緩衝液、グリ
シン緩衝液、ベロナール緩衝液、ホウ酸緩衝液、クエン
酸緩衝液など）を混合した後、該混合液の散乱光強度、
吸光度又は透過光強度を測定する。測定の波長は３００
〜２４００ｎｍが使用でき、測定方法は公知の方法に従
い、用いる不溶性担体の粒径、濃度、反応時間によって
散乱光強度、吸光度、又は透過光強度の増加もしくは減
少を測定する。またこれらの方法は単独で用いられても
併用されてもよい。

【００３３】目視により観察する方法においては、通
常、検体と本発明の免疫学的診断試薬を含む液を判定板
上で混合し、揺り動かした後、凝集の有無を判定する。
判定には単に肉眼で判定する以外に、ビデオカメラで撮
影し画像処理を施すことによって判定することもでき
る。

【００３４】前記抗原抗体反応は通常の条件で行われ、
反応媒体としては、例えば、上記のように、リン酸緩衝
液、クエン酸緩衝液、グリシン緩衝液等が用いられる。
反応時のｐＨは、４．５〜１０．０が好ましく、さらに
好ましくは５．８〜８．０である。反応時の温度は、０
〜５０℃が好ましく、さらに好ましくは２０〜４０℃で
ある。反応時間は適宜決められる。

【００３５】

【発明の実施の形態】本発明を実施例につき述べ、その
効果を具体的に説明する。 実施例１（化学結合法による診断試薬の作成） （１）梅毒トレポネーマ４７ｋＤａ抗原とチオレドキシ
ンとの融合タンパク質の調製 トレポネーマパリダム（Treponema Pallidum）継代ウサ
ギ睾丸の破砕物（常磐化学社製）より、トレポネーマパ
リダム菌体を抽出し、ゲノムＤＮＡを抽出してＤＮＡラ
イブラリーを作成した。すでに４７ｋＤａ抗原のＤＮＡ
配列は既知であるので、それをもとにＤＮＡ合成装置を
用いてプライマーを作成した。このプライマーを用いて
ＰＣＲ法により、先に作成したＤＮＡライブラリーを用
いて４７ｋＤａ抗原のＤＮＡ断片を得た。次に、チオレ
ドキシンとの融合タンパク質を発現するために作られた
プラスミドベクターｐＴｒｘＦｕｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ社製）に、上記のＤＮＡ断片を挿入し、ｐＴｒｘＦ
ｕｓ−４７ｋと命名した。

【００３６】次に、ｐＴｒｘＦｕｓ−４７ｋを大腸菌に
導入し、培養した。培養液にトリプトファンを加えるこ
とにより、４７ｋＤａ抗原とチオレドキシンとの融合タ
ンパク質の発現を誘導した。十分に融合タンパク質が発
現した大腸菌を超音波処理により菌体を破砕し、遠心分
離により細胞膜、核などを除いた上清を、ＴｈｉｏＢｏ
ｎｄ（商標）レジンカラム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社
製）に通し、融合タンパク質を吸着させた。十分にカラ
ムを洗浄した後、融合タンパク質を５重量％β−メルカ
プトエタノール水溶液により溶出させた。次に、溶出液
をリン酸緩衝食塩水（以下、ＰＢＳという。食塩の濃度
０．９重量％、ｐＨ７．４）で透析することにより、過
剰のβ−メルカプトエタノールを除去し、トレポネーマ
パリダム４７ｋＤａ抗原とチオレドキシンとの融合タン
パク質を得た。

【００３７】（２）免疫学的梅毒診断試薬の調製 スチレン−メタクリル酸共重合体ラテックス〔カルボキ
シル基０．２５ｍｅｑＣＯＯ^- ／ｇ、粒径０．４μｍ、
積水化学工業社製、１０％（ｗ／ｖ）〕０．２ｍｌに、
ｐＨ６．８の５０ｍＭリン酸緩衝液（以下、ＰＢ緩衝液
という）にＥＤＣを３０％（ｗ／ｖ）の割合で溶解した
溶液を１ｍｌ加え、室温で５時間攪拌した。遠心分離に
より未反応のＥＤＣを除去し、ＰＢ緩衝液で２回洗浄
後、２ｍｌのｐＨ９．０の１００ｍＭホウ酸緩衝液（以
下、ＢＢ緩衝液という）に懸濁した。この懸濁液に、上
記（１）で得られた融合タンパク質溶液１００μｌ（融
合タンパク質濃度１００μｇ／ｍｌ）を添加し、室温で
１２時間攪拌した。遠心分離により未反応の融合タンパ
ク質を除去し、ＢＢ緩衝液で２回洗浄後、牛血清アルブ
ミンを１％（ｗ／ｖ）含むＰＢＳ４ｍｌに懸濁し、本発
明の免疫学的梅毒診断試薬を得た。

【００３８】実施例２ 実施例１における梅毒トレポネーマ４７ｋＤａ抗原の代
わりに、梅毒トレポネーマ１５ｋＤａ抗原としたことの
他は、実施例１と同様に操作して、本発明の免疫学的梅
毒診断試薬を得た。

【００３９】比較例１ （１）梅毒トレポネーマ４７ｋＤａ抗原とＧＳＴとの融
合タンパク質の調製 実施例１の（１）と同様にして、４７ｋＤａ抗原のＤＮ
Ａ断片を得た。次に、ＧＳＴとの融合タンパク質を発現
するために作られたプラスミドベクターｐＧＥＸ−４Ｔ
−３（ファルマシア社製）に、上記のＤＮＡ断片を挿入
し、ｐＧＥＸ−４Ｔ−３−４７ｋと命名した。

【００４０】次に、ｐＧＥＸ−４Ｔ−３−４７ｋを大腸
菌に導入し、培養した。培養液にイソプロピル−β−
（−）−チオガラクトピラノシドを加えることにより、
４７ｋＤａ抗原とＧＳＴとの融合タンパク質の発現を誘
導した。十分に融合タンパク質が発現した大腸菌を超音
波処理により菌体を破砕し、遠心分離により細胞膜、核
などを除いた上清に、グルタチオンセファロース４Ｂ
（ファルマシア社製）を加え、４℃で一晩ゆるやかに振
とうし、融合タンパク質をグルタチオンセファロース４
Ｂに吸着させた。遠心分離により融合タンパク質が吸着
したグルタチオンセファロース４Ｂを回収し、これをカ
ラムに充填した。数回洗浄の後、グルタチオン溶液を流
すことにより融合タンパク質がグルタチオンセファロー
ス４Ｂから遊離し溶出した。溶出液をリン酸緩衝食塩水
（以下、ＰＢＳという。食塩の濃度０．９重量％、ｐＨ
７．４）で透析することにより、過剰のグルタチオンを
除去し、融合タンパク質を得た。

【００４１】（２）免疫学的梅毒診断試薬の調製 実施例１の（２）における、４７ｋＤａ抗原とチオレド
キシンとの融合タンパク質の代わりに、上記（１）で得
られた４７ｋＤａ抗原とＧＳＴとの融合タンパク質を用
いたことの他は、実施例１の（２）と同様に操作して、
免疫学的梅毒診断試薬を得た。

【００４２】比較例２ 比較例１における梅毒トレポネーマ４７ｋＤａ抗原の代
わりに、梅毒トレポネーマ１５ｋＤａ抗原としたことの
他は、比較例１と同様に操作して、免疫学的梅毒診断試
薬を得た。

【００４３】比較例３ （１）４７ｋＤａ抗原の精製 実施例１の（１）で作成したトレポネーマパリダム４７
ｋＤａ抗原とチオレドキシンとの融合タンパク質溶液５
ｍｌ（融合タンパク質濃度１００μｇ／ｍｌ）に、１０
ＵＮＩＴＳのウシ由来エンテロキナーゼを添加し、３７
℃で１２時間反応させ４７ｋＤａ抗原とチオレドキシン
を切断した。次に、ＴｈｉｏＢｏｎｄ（商標）レジンカ
ラム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）に通し、チオレドキ
シンを除去した。このようにして４７ｋＤａ抗原を精製
した。

【００４４】（２）免疫学的梅毒診断試薬の調製 実施例１の（２）における、４７ｋＤａ抗原とチオレド
キシンとの融合タンパク質の代わりに、上記（１）で得
られた４７ｋＤａ抗原を用いたことの他は、実施例１の
（２）と同様に操作して、免疫学的梅毒診断試薬を得
た。

【００４５】比較例４ 比較例３の（１）における、実施例１の（１）で作成し
た４７ｋＤａ抗原とチオレドキシンとの融合タンパク質
の代わりに、実施例２で作成した１５ｋＤａ抗原とチオ
レドキシンとの融合タンパク質を用いたことの他は、比
較例３と同様に操作して、免疫学的梅毒診断試薬を得
た。

【００４６】実施例３（物理吸着法による診断試薬の作
成） 実施例１の（１）で作成した４７ｋＤａ抗原とチオレド
キシンとの融合タンパク質の溶液（融合タンパク質濃度
１００μｇ／ｍｌ）１００μｌを、ポリスチレンラテッ
クス（平均粒径０．４μｍ、固形分１０％（ｗ／ｖ）、
積水化学工業社製）１００μｌに添加し、４℃で１時間
攪拌した。次いで、牛血清アルブミン（以下、ＢＳＡと
いう）を１％（ｗ／ｖ）含有するｐＨ７．４の１００ｍ
Ｍリン酸緩衝液（以下、１００ｍＭＰＢ緩衝液という）
を２ｍｌ添加し、１．５時間攪拌した。この液を１０℃
で３０分間、１８０００ｒｐｍで遠心分離した。得られ
た沈殿物に、ＢＳＡを０．２５％（ｗ／ｖ）含有する１
００ｍＭＰＢ緩衝液５ｍｌを添加し、ラテックス粒子を
懸濁させ、融合タンパク質担持ラテックスを調製し、本
発明の免疫学的梅毒診断試薬を得た。

【００４７】実施例４ 実施例３における、実施例１の（１）で作成した４７ｋ
Ｄａ抗原とチオレドキシンとの融合タンパク質の代わり
に、実施例２で作成した１５ｋＤａ抗原とチオレドキシ
ンとの融合タンパク質を用いたことの他は、実施例３と
同様に操作して、本発明の免疫学的梅毒診断試薬を得
た。

【００４８】比較例５ 実施例３における、実施例１の（１）で作成した４７ｋ
Ｄａ抗原とチオレドキシンとの融合タンパク質の代わり
に、比較例１の（１）で作成した４７ｋＤａ抗原とＧＳ
Ｔとの融合タンパク質を用いたことの他は、実施例３と
同様に操作して、免疫学的梅毒診断試薬を得た。

【００４９】比較例６ 実施例３における、実施例１の（１）で作成した４７ｋ
Ｄａ抗原とチオレドキシンとの融合タンパク質の代わり
に、比較例２で作成した１５ｋＤａ抗原とＧＳＴとの融
合タンパク質を用いたことの他は、実施例３と同様に操
作して、免疫学的梅毒診断試薬を得た。

【００５０】比較例７ 実施例３における、実施例１の（１）で作成した４７ｋ
Ｄａ抗原とチオレドキシンとの融合タンパク質の代わり
に、比較例３の（１）で作成した４７ｋＤａ抗原を用い
たことの他は、実施例３と同様に操作して、免疫学的梅
毒診断試薬を得た。

【００５１】比較例８ 実施例３における、実施例１の（１）で作成した４７ｋ
Ｄａ抗原とチオレドキシンとの融合タンパク質の代わり
に、比較例４で作成した１５ｋＤａ抗原を用いたことの
他は、実施例３と同様に操作して、免疫学的梅毒診断試
薬を得た。

【００５２】感度の測定 実施例１〜４で得られた本発明の免疫学的梅毒診断試
薬、及び比較例１〜８で得られた免疫学的梅毒診断試薬
について、以下のようにして感度を測定した。生化学自
動分析装置（日立７０５０形、日立製作所社製）によ
り、０、５０、１００、２５０、５００各タイターユニ
ット（以下、Ｔ．Ｕ．と略す）の標準梅毒トレポネーマ
陽性血清からなる標準液を測定した。測定条件は、温度
３７℃、波長５７０ｎｍとした。測定方法は、上記標準
液２０μｌを分注後、直ちに検体希釈液（梅毒診断用試
薬「メディエースＴＰＬＡ」（積水化学工業社製）に含
まれているものを用いた。）３５０μｌを添加・混合
し、次いで上記免疫学的梅毒診断試薬の５０μｌを添加
・混合した。反応量は、上記免疫学的梅毒診断試薬添加
後８０秒から３２０秒の間の吸光度変化量とした。この
吸光度変化量を１００００倍した値と標準血清のＴ．
Ｕ．との関係を図１（実施例１、比較例１と比較例
３）、図２（実施例２、比較例２と比較例４）、図３
（実施例３、比較例５と比較例７）及び図４（実施例
４、比較例６と比較例８）に示した。

【００５３】

【発明の効果】請求項１記載の免疫学的診断試薬の構成
は上記の通りであり、抗原タンパク質とチオレドキシン
との融合タンパク質が不溶性担体に担持されているの
で、抗原タンパク質とグルタチオン−Ｓ−トランスフェ
ラーゼとの融合タンパク質が不溶性担体に担持されてい
る免疫学的診断試薬に比べて、融合タンパク質の水溶性
が高く、より感度の高い免疫学的診断試薬を提供する。
請求項２記載の免疫学的診断試薬の構成は上記の通りで
あり、梅毒トレポネーマの表面抗原タンパク質とチオレ
ドキシンとの融合タンパク質が不溶性担体に担持されて
いるので、梅毒トレポネーマの表面抗原タンパク質とグ
ルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼとの融合タンパク
質が不溶性担体に担持されている免疫学的診断試薬に比
べて、融合タンパク質の水溶性が高く、より感度の高い
免疫学的診断試薬を提供する。請求項３記載の免疫学的
診断試薬の構成は上記の通りであり、不溶性担体が、ポ
リスチレン、スチレン−スチレンスルホン酸塩共重合体
又はスチレン−メタクリル酸共重合体であるので、より
感度の高い免疫学的診断試薬を提供する。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１、比較例１及び比較例３の感度測定の
結果を示すグラフである。

【図２】実施例２、比較例２及び比較例４の感度測定の
結果を示すグラフである。

【図３】実施例３、比較例５及び比較例７の感度測定の
結果を示すグラフである。

【図４】実施例４、比較例６及び比較例８の感度測定の
結果を示すグラフである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 診断学上有用である抗原タンパク質とチ
   オレドキシンとの融合タンパク質が、不溶性担体に担持
   されていることを特徴とする免疫学的診断試薬。
2. 【請求項２】 抗原タンパク質が梅毒トレポネーマの表
   面抗原タンパク質である請求項１記載の免疫学的診断試
   薬。
3. 【請求項３】 不溶性担体が、ポリスチレン、スチレン
   −スチレンスルホン酸塩共重合体又はスチレン−メタク
   リル酸共重合体である請求項１又は２項記載の免疫学的
   診断試薬。