JPH1192783A - ドコサヘキサエン酸およびドコサヘキサエン酸を含む化合物 - Google Patents

ドコサヘキサエン酸およびドコサヘキサエン酸を含む化合物

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JPH1192783A
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＤＨＡ含有食用単細胞オイルを提供する。 【解決手段】 渦鞭毛虫、好ましくはクリプテコディニ
ウムコニーを供給源とすることにより、トリグリセリド
を含む食用単細胞オイルであって、ＤＨＡがオイルの少
なくとも２０％を占める食用単細胞オイル、より好まし
くは、少なくとも７０％のトリグリセリドを含み、ＤＨ
Ａがトリグリセリドの少なくとも３０％を占める、食用
単細胞オイルが提供される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はドコサへキサエン酸
（ＤＨＡ）を含有する食用単細胞オイルに関する。本発
明は、また、本オイルを含有する製品に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＤＨＡはオメガ−３−脂肪酸で脳灰白質
中の最も多量の長鎖多不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）であ
る。オメガ−３−脂肪酸は一般に冠状動脈心疾患の発現
低下に有益であることが知られている〔Ｌａｎｄｓ，Ｆ
ｉｓｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｈｅａｌｔｈ（１９８６）
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ〕。しかし、オメガ−３
−脂肪酸の代謝はよく知られていない。従って、正確な
臨床用量と有効性は未知である。
【０００３】冷水海魚はＤＨＡを含むオメガ−３−脂肪
酸の供給源であることが知られている。合衆国特許第
４，６７０，２８５号はＣ22オメガ−３−脂肪酸供給源
として大型ニシン（ｍｅｎｈａｄｅｎ）やニシン（ｈｅ
ｒｒｉｎｎｇ）等から採れる魚油の利用を開示してい
る。実際、魚油はオメガ−３−脂肪酸の主な商品化用供
給源である。しかし、魚油はＰＣＢ等の環境汚染物質の
混入により人間の消費には使用できないことが多い。
【０００４】食品用にＤＨＡ含有魚油を回収することに
関しては問題もある。このようなオイルには脂肪酸の酸
化生成物に関連する魚臭といやな味があることが多い。
この過酸化物の味と毒性が本オイルのベビーフードや乳
幼児用調合乳等の食用組成物への使用を満足できないも
のにしている。
【０００５】海中微生物もＤＨＡを含有することが知ら
れている。特に、種々の渦（双）鞭毛虫類がＤＨＡを含
有することが知られている。Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎら
は、８つの光合成、および１つの有機栄養海中渦鞭毛虫
の脂肪酸含有量を特性づけ、渦鞭毛虫がドコサヘキサエ
ン酸の一次生産者群であり、この化合物の海中食物運鎖
にかなりの量で寄与していると結論づけている（Ｔｈｅ
Ｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉ
ｄｓ ｏｆ Ｍａｒｉｎｅ Ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔ
ｅｓ（海中渦鞭毛虫類の多不飽和脂肪酸）、Ｊ．Ｐｒｏ
ｔｏｚｏａｌ，１７：２１３−２１９（１９７０））。
【０００６】ＤＨＡ含有の食用オイルを産生する渦鞭毛
虫類の培養は成功していない。
【０００７】渦鞭毛虫類は概して非常に成長が遅く剪断
力感受性が高い。Ｇｕｉｌｌａｒｄら、Ｄｉｎｏｆｌａ
ｇｅｌｌａｔｅｓ，（１９８４），Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ．従来技術は培養槽のごくわずかな振動でさ
え培養物の成長を減じると開示している。しかし、商品
化用産生では増殖を最大化するための適当な酸素添加反
応を達成するためにはこのような振動が必要である。
【０００８】ＤＨＡは上述したように脳と網膜中の最も
多量の長鎖ＰＵＦＡであるので、乳幼児の脳と視覚の適
正な発達に不可欠であると考えられている。哺乳類では
食物中のリノール酸からＤＨＡを生合成する代謝経路が
あるが、この経路は生物エネルギー学的に不利であり
〔Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｐ．Ａ０ＣＳ．Ｓｈｏｒｔ Ｃｏ
ｕｒｓｅ ｉｎ Ｐｏｌｙ−ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ
Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓａｎｄ Ｅｉｃｏｓａｎｏｉｄ
ｓ，ｐｐ．２７０−２９５（１９８７）〕、哺乳類は魚
類同様ＤＨＡのほとんどを食物から得ていると考えられ
ている。乳幼児の場合、最も適当な供給源は母乳であ
る。実際、ＤＨＡは母乳中最も多量のＣ20オメガ−３−
ＰＵＦＡである。しかし、一般にＤＨＡは乳幼児用調合
乳には含まれていない。合衆国特許第 ４，６７０，２
８５号はオメガ−３−脂肪酸含有の乳幼児用調合乳を開
示している。しかし、そこで利用されている脂肪酸は卵
あるいは魚（Ｔａｌａｐｉａ）油から得たもので、前述
した好ましくない特性がある。さらに、魚油は一般に他
のオメガ−３−脂肪酸であるエイコサペンタエン酸（Ｅ
ＰＡ）を含み、これは持続性抗凝血作用と乳幼児のアラ
キドン酸濃度抑制のため乳幼児用調合乳に望ましくない
成分である。これは乳幼児の体重増加率の減少と関連が
ある（Ｃａｒｌｅｓｏｎら、ＩＮＦＯＲＭ １：３０
６）。実際、母乳中ＥＰＡ濃度は非常に低い（ＤＨＡの
４分の１以下）。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の１つ
の目的はＤＨＡ含有単細胞食用オイルを提供することで
ある。本オイルは他の多不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）を有
意量、すなわち全脂肪酸量の約２％以上含まないことが
好ましい。概して、本発明の目的は単細胞オイルを商品
化可能な収率で産生することである。本オイルはここで
「デザイナー」オイルとして特徴づけるが、抽出後に、
乳幼児用調合乳、ベビーフード、栄養補助食品および医
薬品に使用できる。
【００１０】加えて、オメガ−３−脂肪酸の代謝経路を
さらによく理解することが望ましい。これについては同
位体標識ＤＨＡが非常に有用と考えられる。しかし、今
日まで十分量の同位体標識ＤＨＡを産生する方法は知ら
れていない。従って、このような研究を行うに十分な量
の同位体標識ＤＨＡを提供することも、本発明の目的で
ある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明は微生物、特に渦
鞭毛虫類の発酵槽での培養と、この微生物がＤＨＡを高
率で含有する単細胞オイルを有意量産生するよう誘導す
ることを含む、前記オイルの回収に関する。ここで用い
る「単細胞オイル」は単細胞有機体の脂質産生物をさ
す。本発明は、少なくとも約２０重量％のＤＨＡを含有
する単細胞オイルを多量に産生できる変異有機体も含
み、またＤＨＡ含有単細胞オイルも含む。
【００１２】本発明はＤＨＡ含有食用オイルを高水準で
得る経済的な方法を提供する。加えて、本法は高細胞濃
度の渦鞭毛虫の商品化用培養も可能にする。
【００１３】本発明による方法で産生した食用オイルに
はいやな味や魚臭がなく従来の供給源から得たＤＨＡ含
有オイルによくみられる環境汚染物質も含まない。従っ
て、本発明はさらに本発明のオイルを含有する食品も含
む。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明に従い、ＤＨＡ含有単細胞
オイル産生能のある微生物をこのような微生物の増殖を
支持できる栄養液に入れ発酵槽で培養する。単細胞オイ
ルはＤＨＡを少なくとも約２０重量パーセント含むこと
が望ましい。
【００１５】ＤＨＡ含有食用単細胞オイル産生能のある
微生物はすべて本発明に用いることができる。たとえ
ば、光合成珪藻類を用いることができる。好ましい微生
物はＣｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｓｐ．を含む海
中渦鞭毛虫類である。特に好ましいしものは Ｃｒｙｐ
ｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｃｏｈｎｉｉであり、これは
増殖に還元炭素源を要する偏性有機栄養生物である。
Ｃ．ｃｏｈｎｉｉが好ましい理由は、十分量（全ＰＵＦ
Ａ量の約１％以上）存在するＰＵＦＡがＤＨＡのみであ
るという脂肪酸プロフィールを有するからである。この
有機体の標本は、ＭＫ８８４０と称し、Ｒｏｃｋｖｉｌ
ｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ の ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ に寄託されて
おり、受け入れ番号４０７５０号である。ここで用いら
れる微生物、あるいは微生物の特異型には、野生株、変
異株あるいは組換え型を含む。ＤＨＡ含有オイルを高水
準で産生する微生物はすべて本発明の範囲内と考えられ
る。本発明の特徴の１つは渦鞭毛虫類等の微生物の食用
オイル産生能力の認識と、それに伴うこのようなオイル
の信頼できる経済的な供給源の維持の問題の解決であ
る。従って、野性型微生物とＤＨＡ含有単細胞オイルを
産生するよう設計された組換え微生物は本発明の一面で
ある。このような組換え微生物には、同じ基質で、同じ
野性型微生物が産生する量と比べて、単細胞オイル中の
ＤＨＡ量が多くなるように、あるいは総オイル量が多く
なるように、あるいはその両方を意図して設計されたも
のが含まれる。また、さらに費用効果のすぐれた基質を
効率よく用いて匹適する野性型と同量のＤＨＡ含有単細
胞オイルを産生するよう設計された微生物も含まれる。
【００１６】一般に、当該技術分野の専門家は Ｃ．ｃ
ｏｈｎｉｉ が発酵槽内培養に適する有機体であると考
えようとしなかった。従前の研究者は Ｃ．ｃｏｈｎｉ
ｉ を首尾よく培養するには極めて複雑な栄養混合物が
必要であると説明してきた。Ｇｏｌｄら、Ｐｒｏｔｏｚ
ｏａｌ，１３：２５５‐２５７（１９６６）；Ｇｕｉｌ
ｌａｒｄ ら、ｉｎ“Ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅ
ｓ”，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８４）；Ｈ
ｅｎｄｅｒｓｏｎら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２
７：１６７９‐１６８３（１９８８）。これに対して、
本発明はグルコースと酵母エキスを含む簡単な培地でＤ
ＨＡ産生微生物の培養をなしとげる。これらの成分を海
水等の溶液に用いて経済的に有意な増殖速度と細胞濃度
が得られる。たとえば、３〜５日の発酵期間で、Ｃ．ｃ
ｏｈｎｉｉ細胞濃度は少なくとも溶液１ｌあたりバイオ
マス１０ｇで、一般には２０から約４０ｇ／ｌに達しう
る。
【００１７】このような濃度はこれまで到達されえなか
った。
【００１８】培養はすべての適当な発酵槽で行えるが、
撹拌槽発酵槽（Ｓｔｉｒｒｅｄ ｔａｎｋ ｆｅｒｍｅ
ｎｔｏｒ；ＳＴＦ）かエアリフト発酵槽（ＡＬＦ）で有
機体と増殖することが好ましく、いずれのタイプも当該
技術分野専門家既知である。ＳＴＦを選んだ場合は、Ｒ
ｕｓｈｔｏｎ型高効率タービンかピッチドブレードある
いはマリンインペラーを用いて撹拌する。撹拌と散布が
微生物への酸素供給をくり返す。バイオマスの増加につ
れて、酸素要求量が増えるので、通常撹拌速度を上げ
る。翅端速度は約５００ｃｍ／秒以下に、好ましくは約
３００ｃｍ／秒以下に保つことが望ましい。大きな翅端
速度にも剪断をうけることなく耐えうる微生物株の選択
は当該技術分野の範囲内である。このような株の使用は
本発明に明らかに含まれる。
【００１９】上述したように、海水は栄養溶液として認
容できる培養基である。海水は自然のものでも、濾過し
たものでも、人工的に混合したものでもよく、いずれも
水道水で希釈して塩度を通常の１／２から１／４に減じ
たり、２倍に濃縮してもよい。好ましい例は、ｌｎｓｔ
ａｎｔ Ｏｃｅａｎ（登録商標）（ＩＯ）ブランドの人
工海水である。Ｃ．Ｃｏｈｎｉｉは海水微生物である
が、塩度０でもいくらかの増殖が観察されている。低塩
度でもよく増殖する変異体の使用は本発明に特に包含さ
れている。微量元素を添加してもよく、これは低塩度で
必要となることがある。しかし、このような微量元素は
当該技術専門家既知であり概して海水や水道水中に存在
する。選択した微生物が、Ｃ．ｃｏｈｎｉｉ等の有機栄
養生物である場合は炭素源を添加する。海水培養基を発
酵槽に入れた後、栄養分と微生物の種を加える前に培養
基入り発酵槽を滅菌し冷却する。（栄養分を海水と一緒
に滅菌してもよいが、この滅菌方法では有効グルコース
の減損をきたすことがある。）栄養分と微生物は同時に
加えても順々に加えてもよい。
【００２０】有効種濃度は当該技術専門家により決定さ
れる。ＳＴＦを用いる場合、発酵開始時に１ｌあたり約
０．０５〜１．０ｇ乾燥重量当量の添加が好ましい。こ
れは約１０6細胞／ｍｌである。従って３０ｌの発酵槽
では、生存能力のある細胞を１ｌあたり２０ｇ乾燥重量
の濃度で含む種付け培養基１〜３ｌを添加する。
【００２１】酸素濃度は少なくとも空気飽和濃度の約１
０％のＤ.０.に維持することが好ましい。ＤＨＡ生合成
には酸素が必要であるので、ＤＨＡの収率を上げるには
空気飽和濃度の約１０〜５０％のＤ.０.濃度が必要であ
る。翅端撹拌速度１５０〜２００ｃｍ／秒と給気速度１
ＶＶＭ（１分あたりの空気体積／発酵槽体積）の組み合
わせによりバイオマス濃度約２５ｇ乾燥重量／培養物１
ｌで約２０〜３０％のＤ.０.濃度が提供できる。細胞濃
度が高ければより高いＤ.０.濃度が必要となるが、これ
は０2散布による給気速度の増加が発酵槽の空気圧の上
昇で達成できる。
【００２２】認容できる炭素源は当該技術分野専門家既
知である。たとえば、炭素はグルコースの形で Ｃ．ｃ
ｏｈｎｉｉに供給できる。他の有機栄養生物は他の還元
炭素源を用いることができるが、これは当該技術専門家
により容易に決定され、独立栄養生物は二酸化炭素を利
用する。Ｃ．ｃｏｈｎｉｉは他のもっと複雑な還元炭素
源でも増殖する。一般には、グルコース約１０〜５０ｇ
／ｌで発酵を開始する。発酵中必要に応じてグルコース
を追加する。あるいは、グルコース約５０〜１５０ｇ／
ｌ、好ましくは５０〜１００ｇを最初に加えて、以降の
追加回数を少なくすることもできる。他の有機体に供給
する炭素源の量は当該技術分野専門家により容易に決定
される。
【００２３】還元炭素源に加えて、酵母エキス（ＹＥ）
等の窒素源を培養基に供給する。市販の酵母エキスが認
容される。たとえば、ＤＩＦＣＯやＭＡＲＣＯＲブラン
ドの酵母エキスを使用できる。酵母エキスは微量元素も
含む有機窒素源である。他の有機窒素源は当該技術専門
家により容易に決定できる。しかし、このような化合物
は概して酵母エキスより高価である。尿素や硝酸塩で増
殖可能な変異体の使用は本発明の範囲内である。一般に
ＹＥ約６〜１２ｇ／ｌで発酵を開始する。必要に応じて
さらにＹＥを追加してもよい。一般的な発酵は全工程で
ＹＥ約８〜１５ｇ／ｌを要する。従って、その量のＹＥ
を最初に加えて以降の追加の必要を減らすことができ
る。正確な量は当該技術専門家により決定できる。一般
に、グルコースとＹＥの比は約２：１から約１５：１で
ある。
【００２４】培養はどのような生命維持温度でも行え
る。一般にＣ．ｃｏｈｎｉｉは約１５℃から３４℃の範
囲で増殖する。温度を約２０〜３０℃に保つことが好ま
しい。高温で増殖する株は倍増時間が短く発酵時間を減
じられるので好ましい。他の微生物の適正温度範囲は当
該技術専門家によって容易に決定される。
【００２５】培養は広いｐＨ範囲、一般にはｐＨ約５．
０ から９．０で遂行される。増殖期には約６．０から
約７．０のｐＨ範囲を用いることが好ましい。接種前に
はＫＯＨやＮａＯＨ等の塩基を用いて培養基ｐＨを調整
する。発酵の後期には、培養基はアルカリ性になる傾向
がある。必要であれば、増殖期中のアルカリ性を修正す
るために無機酸のｐＨ調節剤を用いてもよい。渦鞭毛虫
での単細胞オイルの産生は定常期の賦課（たとえば窒素
枯渇やｐＨ上昇）によって誘発される。ＹＥ欠乏は、利
用できるグルコースが残存しているのに培養基がＹＥを
使い果すようにＹＥ供給量を制限することに起因する。
本発明は、単細胞オイルの効率のよい産生を促進するも
のが、炭素源の窒素源に対する比であることを認めてい
る。
【００２６】例としてグルコースとＹＥを用いると、好
ましい炭素源と窒素源の比は、ＹＥ１に対してグルコー
ス約１０〜１５である。他の炭素源と窒素源における同
様の比は当該技術専門家により算出できる。
【００２７】オイル産生誘発後、培養物をさらに２４時
間増殖させる。この油合成期間中、ＤＨＡ含有単細胞オ
イルが合成され可視のオイル滴が現れる。当該技術専門
家は、加えたＹＥ量に基づく細胞バイオマスの期待値に
達するに要する発酵時間を容易に算出できる。その時間
が経過したら、培養物をさらに２４時間増殖させてから
採収する。一般に、Ｃ．ｃｏｈｎｉｉを単細胞オイルを
産生するに足る時間、通常約６０分から約９０分、培養
するが、この時間は変動する。
【００２８】野生型 Ｃ．ｃｏｈｎｉｉを用いて、結果
として生じるバイオマスの約１５〜３０％が抽出可能な
オイルから成る。株の選択によりこの比率を上げること
ができ、このような選択は本発明の範囲内である。本オ
イルは、一般に次の脂肪酸組成を有するトリグリセリド
を約７０％以上含むことが好ましい。
【００２９】 １５〜２０％ミリスチン酸（Ｃ14：0） ２０〜２５％パルミチン酸（Ｃ16：0） １０〜１５％オレイン酸（Ｃ18：0） ３０〜４０％ＤＨＡ（Ｃ22：6） ０〜１０％その他 （ホスファチジルコリン等の極性脂質を含む他のオイル
成分もＤＨＡに含まれることがある） 粗オイルの特性は黄澄色で室温で液体である。本オイル
はＤＨＡを少なくとも約２０重量％含むことが望まし
く、約３５重量％以上含むことが最も望ましい。
【００３０】有機体は当該技術分野専門家既知の従来法
である遠心分離，凝集，濾過等で採収し、すぐに加工処
理するが、後の加工処理用に乾燥させる。いずれの場合
も、オイルは有効量の溶媒で容易に抽出できる。適当な
溶媒は当該技術専門家により決定される。しかし、好ま
しい溶媒には精製へキサンと臨界超過Ｃ０2等の臨界超
過液体が含まれる。
【００３１】臨界超過液体を用いた抽出法は当該技術分
野専門家既知で、ＭｃＨｕｇｌらのＳｕｐｅｒｃｒｉｔ
ｉｃａｌ Ｆ１ｕｉｄ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，Ｂｕｔｔ
ｅｒｗｏｒｔｈ，１９８６．に記載されている。抽出溶
媒がへキサンである場合は、乾燥バイオマスに対するへ
キサンの適当な割合は、乾燥バイオマス１ｋｇあたりへ
キサン約４ｌである。へキサンとバイオマスを撹拌反応
槽に入れ約２０〜５０℃の温度で約２時間混合すること
が好ましい。混合後、バイオマスを濾過しオイルを含む
へキサンから分離する。あるいは、湿性バイオマスペー
スト（固形分３０〜３５％）をエタノール、イソプロパ
ノールあるいはへキサン／イソプロパノール混合物等の
より極性の高い溶媒で直接抽出できる。残澄バイオマ
ス、すなわち Ｃ．ｃｏｈｎｉｉ等の微生物の単細胞食
用オイル抽出後のバイオマスは動物の飼料として使用で
きるがこれは約３５〜４０％のタンパク質、８〜１０％
の灰分、４５〜５０％の炭水化物を含む。タンパク質含
有率が高くＤＨＡ濃度も高いことから、バイオマスペー
スト全体を水産養殖（例、エビ，カキ，魚）飼料として
使用できる。
【００３２】その後、当該技術分野専門家既知の蒸留方
法でオイルから溶媒を除去する。従来の油料種子加工装
置が濾過、分離および蒸留の遂行に適している。個々の
適用において、当該技術分野専門家既知の追加加工行程
が必要であれば行ってよい。この行程も従来の植物性オ
イル加工に含まれるものと類似しており、ＤＨＡに富む
極性脂質分画の分離を可能にする。
【００３３】本発明の方法により、ＤＨＡの代謝経路の
研究を可能にする量の標識ＤＨＡを含む同位体標識単細
胞オイルを簡単に得ることができる。還元炭素基質とし
て13Ｃ−グルコースか14Ｃ−グルコースを供給すると標
識ＤＨＡが得られる。
【００３４】本発明は、本発明のＤＨＡ含有単細胞オイ
ルを含む乳幼児用調合乳、ベビーフード、栄養補助食品
等の食品も含む。当該技術専門家はＤＨＡ含有乳幼児用
調合乳が望ましいと認めてはきたが、従来技術の乳幼児
用調合乳は魚油からとったＤＨＡを含んでおり、それに
付随するいやな味と特殊感覚器に印象を与える特性があ
った。さらに、乳幼児用調合乳に魚油を添加すると、抗
凝血作用がありアラキドン酸生合成の減少におそらく関
与しているオメガ−３−脂肪酸であるエイコサペンタエ
ン酸（ＥＰＡ）も添加される。このような作用は乳幼児
用調合乳やベビーフードに望ましくなく、ここで記述し
た単細胞オイルには有意な量のＥＰＡは含まれていな
い。本発明の単細胞オイルを含有する乳幼児用調合乳等
の食品には魚油の持つ不快な特殊感覚器に印象を与える
特性がない。従って食品は乳幼児にも成人にもより容易
に認容される。本発明の乳幼児用調合乳は０．０５重量
％のＤＨＡ含有単細胞オイルを含むことが好ましい。さ
らに固形分の多い本発明のベビーフードは、約０．５重
量％のＤＨＡ含有単細胞オイルを含むことが好ましい。
いずれの場合でも、オイルが少なくとも約３５％のＤＨ
Ａを含むことが最も好ましい。
【００３５】本発明はＤＨＡ含有単細胞オイルを含む医
薬品を含む。本製品は少なくとも約３５％のＤＨＡを含
むことが好ましい。このような医薬品の例としては乳幼
児や成人への完全非経口栄養（ＴＰＮ）の供給に適した
ものがある。さらに、単細胞オイルを含有する栄養補助
食品も含まれる。このような栄養補助食品は前記オイル
をカプセルに入れたゼラチンカプセル形態で妊婦や授乳
中の婦人に適することが好ましい。これは特に菜食主義
者で食事から十分量のＤＨＡを摂れないような女性に適
する。
【００３６】本発明はＤＨＡ含有単細胞オイルも含む。
本単細胞オイルは少なくとも約２０重量％のＤＨＡを含
むことが好ましい。本オイルは少なくとも約３５重量％
のＤＨＡを含むことが最も好ましい。
【００３７】本発明を全般的に記述してきたが、次に特
定実施例を引用するがこれに限られるものではない。
【００３８】
【実施例】
実施例１ 作業容量３０ｌのＳＴＦに濃度２分の１の人工海水を入
れた。ＩＯ６ｌを水道水１８ｌと化合した。培養基の入
った発酵槽を滅菌し２８℃まで冷却した。
【００３９】濃縮ＹＥ（４５５ｇ／ｌ）４００ｍｌ、グ
ルコースシロップ（４００ｇ／ｌ）９００ｍｌおよび約
２×１０7細胞／ｍｌあるいはバイオマス２０ｇ／ｌ
（最終濃度は約７×１０6細胞／ｍｌあるいはバイオマ
ス約７００ｍｇ／ｌになる）含有する種発酵槽からの接
種物１ｌを培養基に加えた。撹拌は翅端速度１２０ｃｍ
／秒に設定し給気は１ＶＶＭ（３０ｌ／分）に設定し
た。３０時間後にグルコースシロップ（９００ｍｌ）を
追加し、さらに次の４２時間の間に４．２ｌを追加し
た。従って計６ｌのグルコースシロップを加えた。６時
間後に濃縮ＹＥ溶液（４００ｍｌ）を加え次の４８時間
の間にさらに１．２ｌ追加し、計２．０ｌ加えた。Ｄ.
０.２０％以上に維持するため２４時間後に翅端速度を
１５０ｃｍ／秒に、４８時間後には１６０ｃｍ／秒に上
げた。７２時間後には翅端速度を２００ｃｍ／秒に上
げ、最後投入グルコースが細胞オイルに転化するに十分
な時間をおいて培養物を増殖させた。培養条件を図１に
グラフで示す。その後細胞球粒を保持して遠心分離によ
り培養物を採収した。採収した細胞球粒を凍結乾燥して
水分含有量約４％とした。へキサン（２．８ｌ）を乾燥
バイオマスに加えガラスケトルに入れ５０℃で１．５時
間撹拌した。回転蒸発装置を用いてへキサンを除去し、
粗ＤＨＡ含有オイル約１７５ｇを産生した。
【００４０】実施例２ 作業容量３５０ｌのＳＴＦにＩ.Ｏ.（登録商標）４．３
ｋｇと水道水２３０ｌを化合して作った濃度２分の１の
人工海水培養基を入れた。培養基を入れた発酵槽を滅菌
し２８℃まで冷却した。濃縮ＹＥ（４００ｇ／ｌ）６．
８ｌ、グルコースシロップ（４００ｇ／ｌ）１２．５ｌ
および種発酵槽（１０6 細胞／ｍｌあるいはバイオマス
濃度約１．３ｇ／ｌ）からの Ｃ．ｃｏｈｎｉｉ接種物
３０ｌを培養基に加えた。撹拌は翅端速度７３ｃｍ／秒
に設定し給気は１ＶＶＭ（２８０ｌ／分）に設定した。
約４４時間後にグルコースシロップ（１２ｌ）を追加し
次の３２時間の間にさらに４３ｌを加えた。従って、計
６７．５ｌのグルコースシロップを加えた。グルコース
添加と細胞増殖を図２にグラフで表す。
【００４１】Ｄ.０.を２０％以上に維持するため、４４
時間後に指枠麹端速度を１７５ｃｍ／秒に上げ、５５時
間後には２２５ｃｍ／秒に上げた。７６時間後には翅端
速度を１５０ｃｍ／秒に下げて、最終投入グルコースが
細胞オイルに転化するに十分な時間をおいて培養物を増
殖させた。その後培養物を採収した。採収した細胞を乾
燥し水分含有量約４％とした。へキサンを乾燥バイオマ
スに加えてガラスケトルに入れ２５℃で２時間撹拌し
た。回転蒸発装置を用いてへキサンを除去し、粗ＤＨＡ
含有オイル約７００ｇを産生した。
【００４２】実施例３ 作業容量３０ｌのＳＴＦにＩ.Ｏ.（登録商標）５６５ｇ
と水道水１５ｌを化合して作った正規濃度の人工海水を
入れた。培養基を入れた発酵槽を滅菌し２８℃に冷却し
た。濃縮ＹＥ（４００ｇ／ｌ）４００ｍｌ、グルコース
シロップ（４００ ｇ／ｌ）１．９ｌ、および種発酵槽
（１０6細胞／ｌあるいはバイオマス約２０ｇ／ｌ）か
らの Ｃ．ｃｏｈｎｉｉ接種物１ｌを培養基に加えた。
撹拌は翅端速度８０ｃｍ／秒に設定し給気は１ＶＶＭ
（２０ｌ／分）に設定した。９４時間後にグルコースシ
ロップ（１．５ｌ）を追加し１１６時間後にさらに１．
１ｌ追加した。従って、計４．５ｌのグルコースシロッ
プを加えた。
【００４３】Ｄ.０.を ２０％以上に維持するため、５
２時間後に撹拌翅端速度を１６０ｃｍ／秒に上げた。６
６時間後に、定常期を導入したがこれを成しとげるため
に４Ｎ ＫＯＨでＰＨを７．０にスパイクし撹拌翅端速
度は行程中さらには上げなかった。図３に示すように、
最終投入グルコースが細胞オイルに転化するに十分な時
間をおいて培養物を増殖させた。その後培養物を採収し
た。
【００４４】採収した細胞を乾燥し水分含有量約４％と
した。乾燥バイオマスにへキサンを加えガラスケトルに
入れ５ ０℃で１．５時間撹拌した。回転蒸発装置を用
いてへキサンを除去し、粗ＤＨＡ含有オイル約６５ｇ産
生した。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、種々の栄養物を添加したＣ．ｃｏｈｎ
ｉｉの経時的バイオマス累積のグラフである。
【図２】図２は、種々の栄養物を添加したＣ．ｃｏｈｎ
ｉｉの経時的バイオマス累積のグラフである。
【図３】図３は、種々の栄養物を添加したＣ．ｃｏｈｎ
ｉｉの経時的バイオマス累積のグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 35/60 Ａ６１Ｋ 35/60 Ｃ１２Ｎ 1/12 Ｃ１２Ｎ 1/12 Ｃ Ｃ１２Ｐ 7/64 Ｃ１２Ｐ 7/64 // Ａ２３Ｄ 9/007 Ａ２３Ｄ 9/00 ５１４ (Ｃ１２Ｎ 1/12 ５１６ Ｃ１２Ｒ 1:89） (Ｃ１２Ｐ 7/64 Ｃ１２Ｒ 1:89） (71)出願人 598083706 6480 Ｄｏｂｂｉｎ Ｒｏａｄ，Ｃｏｌｕ ｍｂｉａ，Ｍａｒｙｌａｎｄ 21045，Ｕ ｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅ ｒｉｃａ (72)発明者 リーブ，スー・エレン アメリカ合衆国、21214 メリーランド州、 バルティモア、ハミルトン・アベニュー 3033 (72)発明者 シコット，バレリー・ジャクリーヌ アメリカ合衆国、21229 メリーランド州、 バルティモア、アラン・ドライブ 4302 ビー

Claims (14)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 トリグリセリドを含む食用単細胞オイル
    であって、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）がオイルの少
    なくとも２０％を占める、食用単細胞オイル。
  2. 【請求項２】 少なくとも７０％のトリグリセリドを含
    み、ＤＨＡがトリグリセリドの少なくとも３０％を占め
    る、請求項１記載の食用単細胞オイル。
  3. 【請求項３】 単細胞オイルが約２％を越える他の多不
    飽和脂肪酸を含まない、請求項１または２記載のオイ
    ル。
  4. 【請求項４】 単細胞オイルが渦鞭毛虫から得られたも
    のである、請求項１ないし３のいずれか１項記載のオイ
    ル。
  5. 【請求項５】 単細胞オイルがクリプテコディニウム
    （Crypthecodinium）属から得られたものである、請求
    項１ないし３のいずれか１項記載のオイル。
  6. 【請求項６】 クリプテコディニウム属がクリプテコデ
    ィニウムコニー（Crypthecodinium cohnii）である、請
    求項１ないし３のいずれか１項記載のオイル。
  7. 【請求項７】 請求項１ないし６のいずれか１項記載の
    食用単細胞オイルを含む食品。
  8. 【請求項８】 乳幼児用調合乳、ベビーフード、または
    栄養補助食品である、請求項７項記載の食品。
  9. 【請求項９】 請求項１ないし６のいずれか１項記載の
    食用単細胞オイルを含む医薬品。
  10. 【請求項１０】 完全非経口栄養剤として有用であるこ
    とを特徴とする、請求項９記載の医薬品。
  11. 【請求項１１】 請求項１ないし６のいずれか１項記載
    の食用単細胞オイルを含む動物用飼料。
  12. 【請求項１２】 少なくとも１０ｇ／ｌの密度のクリプ
    テコディニウムコニー細胞を含む細胞培養物。
  13. 【請求項１３】 水産養殖用飼料として有用である、請
    求項１２記載の細胞培養物。
  14. 【請求項１４】 小エビ、カキまたは魚の水中培養に用
    いるための、請求項１３記載の細胞培養物。
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