JPS58144321A - 抗腫瘍性多糖体およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １、発明の背景 技術分野 本発明は新規な抗腫瘍性多糖体およびその製造方法に関
する。

さらに詳しくは、本発明はニーム樹皮の熱水抽出液を精
製して得られる抗腫瘍性中性多糖体およびその製造方法
に関するものである。本発明の多糖体は癌の治療薬とし
て有用である。

先行技術 従来ニーム抽出物が種々な薬理作用を有することは知ら
れている。即ち、ニームの樹皮、葉部、花部、果実、枝
部、根皮または樹脂を水または親水性溶媒で抽出するか
あるいは微粉砕して皮膚化粧料を得る方法（特公昭５２
−２８８５３、同５２−２８８５４および５３−１０１
２５）、上記ニーム原料を親水性溶媒および（または）
熱水で抽出して抗菌作用、胃腸・肝臓機能改善作用を有
する成分を得る方法（特公昭５３−１０１２４）および
上記ニーム原料を疎水性溶媒で抽出して皮膚疾患および
リュウマチの治療に有効な成分を得る方法（特公昭５３
−１３６８９）が報告されている。

本発明者等は先にニーム樹皮の熱水抽出物が９（１１胞
分裂阻止活性を有することを見い出したが、さらに研究
を進めた結果、ニーム樹皮熱水抽出物の薬理活性成分と
してα−（１→４）−グルカン−１−１鎖とし、主鎖中
にβ−（１→３）−フコースを介与、分枝としてα−（
１→６）−アラビノースを有し、グルコース、アラビノ
ースおよびフコースの構成割合が約５：２：１である中
性多糖体を単離した。

この多糖体は文献未載の新規化合物であって優れた抗腫
瘍作用を有する。

ｎ１発明の目的 従って本発明の目的は、制癌剤として有用な上記多糖体
を提供することにある。本発明の多糖体（は後述する如
く、ザルコーマ１８０腹水型および固形型マウス移植腫
瘍に対して強い抑制活性を示し、特に定着固形腫瘍に対
して著効を示す。

本発明の目的はさらに上記多糖体を製造する方法を提供
することにある。本発明の方法によれば、上記多糖体は
、ニーム樹皮の熱水抽出液を分子篩処理、特にケ゛ル濾
過し分子量約２１，０００の化合物を採取することによ
って製造される。

ＩＩｌ、　　発明の詳細な説明 本発明は第１に、ニーム樹皮より得られる下記構造およ
び特性を有する抗腫瘍性多糖体からなる。

イ）構造 α−（１→４）−グルカンを主鎖とし、主鎖中にβ−（
１→３）−フコースを含み、分枝としてα−（１→６　
）　−７ラヒノースを有し、グルコース、アラビノ−ス
およびフコースの構成割合が約５：２：１の中性多糖体
。

口）色と形状 凍結乾燥品は白色粉末である。

・・）溶解性 水に可溶で、メタノール、エタノール、アセトン、エー
テル、クロロホルム、酢酸エチル、ベノセンオヨびヘキ
サン等の有機溶媒に不溶である。

二）呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に陽性で、ヨ
ウ素の添加により青緑色を呈する。

ホ）分子量 セファデックスＧ−２００カラムケ８ルクロマトクラフ
イ単一のピークを与え、分子量は約２１，０００である
。

へ）比旋光度　　　□ 〔α〕；２ニー４６℃（ｃ＝０．２８．Ｈ２Ｏ）ト）赤
外線吸収ス〈クトル 第１図に示す通シである。

ＩＲνＫＢｒｃｒｆＬ−’：　３４００，２９３０．１
６３０ａＸ チ）紫外線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず末端吸収のみを示す
。

す）　　Ｃ核磁気共鳴スＲクトル 重水中で外部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）を
使用して測定した１　００　ＭＨｚ　１３Ｃ核磁気共鳴
スペクトルは第２図の通りである。

本発明は第２に、ニーム樹皮の熱水抽出液を分子篩処理
し、分子量約２１．０００を有する化合物を採取してな
る上記抗腫瘍性多糖体の製造方法からなる。

本発明は第３に、上記分子篩処理として先ず分画分子量
約Ｉ×１０〜１×１０　乃至ｌＸ１０〜２Ｘ１０”の分
子篩剤を用いて行ない、次いで最初の多糖体画分をさら
に分画分子量約１×１０〜２Ｘ１０　乃至ｌＸ１．０’
〜８×１０５の分子篩剤を用いて行ない、二番目の多糖
体画分を採取してなる上記抗腫瘍性多糖体の製造方法か
らなる。

本発明は第４に、上記分子篩処理がケゝルｐ過であり、
上記分子篩剤がダル涙過剤である上記抗腫瘍性多糖体の
製造方法からなる。

本発明は第５に、上記ｒル濾過剤がデキストランダル、
ポリアクリルアミドヶ゛ル、親水性ポリヒニル系りル又
は多孔性ガラスピーズである上記抗腫瘍性多糖体の製造
方法からなる。

本発明の方法を実施するに際しては、ニーム樹皮の熱水
抽出液を分子篩処理、特にケ゛ルｐ過し、分子量約２１
，０００を有する化合物を採取する。

本発明方法の原料植物であるニームは学名をメリア・ア
ザノラクタ（玉虫ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ　）といい、
熱帯地域に自生する高さ１０７＋Ｚ以上に達する木本植
物である。本発明の方法においては、ニームの樹皮の熱
水抽出液を原料として使用する。ニーム樹皮を熱水で抽
出処理する操作は常法に従って行なわれる。即ち、細断
したニーム樹皮に熱水を加えるか、あるいは、ニーム樹
皮に水を加え、その混合物を加熱沸騰させることによっ
て実施さり、る。

加熱は沸騰水浴中または直火で行うことができる。

抽出時間は原料の品質等に従って適宜決定さｈるが通常
１乃至４８時間である。抽出終了後、抽出混合物を濾過
することにより抽出液が得られる。

かくして得られたニーム樹皮熱水抽出液には多量の不純
物が含まれているので本発明のグル濾過工程に供する前
に、アルコール沈澱法または透析膜法により、該抽出液
を精製するのが望ましい。例えば、アルコール沈澱法で
精製する場合には、上記抽出液にメタノール、エタノー
ルのようなアルコールを加え、生成した沈澱を常法によ
り、例えば遠心分離によシ採取する。透析膜法により精
製する場合は、該抽出液を透析膜に入れ、水につけて透
析し、透析内液を所望により濃縮乾固するかまたは凍結
乾燥して抽出物を得る。透析膜としては分画分子量５０
，０００以下のもの、例えばスペクトラ・ボア１〜６（
スにクトラム・メディカル・イノダストリーズ社裳品）
、ビスキング・チューブ（ユニオンカーバイト社梨品）
が使用される。

アルコール沈澱法または透析膜法で精↓して得られた抽
出物を水に溶解して本発明方法の原料であるニーム樹皮
熱水抽出液とする。さらに、ニーム樹皮の熱水抽出処理
に先立って、ニーム樹皮を有機溶媒および（または）常
温の水で抽出前処理することによシ、不要成分を予め除
去しておくことも望ましい。抽出前処理に使用する溶媒
としてはメタノール、エタノール、グロパノール、ビリ
ノン、アセトンのような極性有機溶媒、ベンゼ／、トル
エン、キシレン、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、四塩化
炭素、酢酸エチルのような非極性有機溶媒があげられる
。

本発明の方法におけるグル濾過工程は、前記ニーム樹皮
熱水抽出液をグル濾過剤を充填したカラムにかけ、溶離
する多糖体画分から分子量約２１．０００の多糖体を常
法によシ採取することによって実施される。グル濾過は
、分画分子量が約８×１０５以下のグル濾過剤を用いて
行なわれ、所望の多糖体は、最初の両分から採取される
。

上記工程で使用されるケ゛ル濾過剤として（ｉ、’ｊ”
キストラングル、ポリアクリルアミドゲル、ポリビニル
系のポリマーグル、多孔性ガラスピーズ等があげられる
。これらは、例えばセフアゾ、クスＧ−１００、Ｇ−２
００、セファクリルＳ−３００（以上ファルマシア社製
品、スエーデン）、バイオグルＰ−１００〜Ｐ−３００
（バイオランド社製品、米国）、トヨパールＨＷ−５０
，ＨＷ−５５（東洋曹達工業、日本）、ＣＰＧ−１０（
エレクトロ・ヌクレオニックス社、米国）等の製品名で
市販されている。

本発明の方法においては、分画分子量の異なるケ９ルヂ
過剤を組合せて使用することにより所望の多糖体を高純
度で単離することができる。即ち、ニーム樹皮熱水抽出
液を分画分子量約１×１０〜１×１０５乃至１×１０〜
２×１０　のグル濾過剤（例えばセファデックスＧ−１
００、Ｇ−２００、バイオグルＰ−１００、トヨパール
ＨＷ−５０等）を充填したカラムにかけ蒸留水で溶離す
ると多糖体が３つの両分に分画される。最初に溶出する
画分を採取し、これを分画分子量約１×１０〜２×１０
　乃至１×１０３〜８Ｘ１０５のケ゛ルテ過剤（例えば
セファデックスＧ−２００、セファクリルＳ−３００、
バイオケ８ルＰ−；３００、トヨノぞ−ルＨＷ−６０等
）を充填したカラムにかけ蒸留水で溶離すると多糖体が
さらに２つの画分に分画される。二番目に溶出する両分
を採取し、蒸留乾固または凍結乾燥すると目的とする抗
腫瘍性多糖体が得られる。かくして得られた多糖体は次
の構造および特性を有する。

イ）構造 α−（１→４）−グルカンを主鎖とし、主鎖中にβ−（
１→３）フコースを含み、分校としてα−（１→６）ア
ラビノースを有し、グルコース、アラビノースおよびフ
コースの構成割合が約５：２：１の中性多糖体。

口）色と形状 凍結乾燥品は白色粉末である。

・・）溶解性 水に可溶で、メタノール、エタノール、アセトン、エー
テル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンおよびヘキ
サン等の有機溶媒に不溶であるウニ）呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に１）ｉう性
でヨウ素の添加によシ青緑色を呈する。

ホ）分子量 セファデックスＧ−２００カラムダルクロマトグラフイ
で単一のピークを与え、分子量は約２１，０００である
。

へ）比旋光度 〔α冗２ニー４６°（ｃ＝０．２８．Ｈ２Ｏ）ト）赤外
線吸収スペクトル 第１図に示す通りである。

ＫＢｒ　　　−１。

ＩＲｖ　ｃｍ　　、３４００．２９３０．１６３０ａｘ チ）紫外線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず、末端吸収のみを示
す。

ＩＪ）　　　Ｃ核磁気共鳴スペクトル 重水中で外部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）を
使用して測定した１００ＭＨｚＣ核磁気共鳴ス橡クトル
は第２りの通シである。

本発明の多糖体はく薬理試験の結果、ザルコーマ１８０
腹水型および固形型マ虻ス移植腫瘍に対して顕著な阻止
作用を有することが確認された。

次にその試験例を示す。

試験例１゜ （試料調製） リン酸緩衝食塩水（ギブコ社製、リン酸９．５　ｍＭヲ
含ｂ　：　ＰＢＳ　）に０．５％カルボキシメチルセル
ロース（ＣＭＣ）を懸濁させた溶液に所定ａ／ｆになる
ように試料を溶解させた。

（ザルコーマ１８０ガン細胞移植） ＩＣＲマウス腹腔中で継代培養したザルコーマ１８０ガ
ン細胞を腹水とともにとり出し、生理食塩水で適当に希
釈して細胞数が１．ｏｘ１′０”個／　ｍｅとなるよう
に調製した。この細胞懸濁液の０．１　ｍｅを４退会雄
ＩＣＲマウス腹腔へ注射器を用いて移植した。従って１
匹あたシの移植細胞数は１．ＯＸ　１０′個である。

（試料投与） サルコーマ１８０〃ン細胞を移植した次の日よシ１日１
回連続４日間、上に調製した試料を注射器を用いて腹腔
に０．エコ投与した。ｌ試料ｌ濃度につき６匹のマウス
を使用した。対照は試料の溶剤として用いた上記ＣＭＣ
入りＰＢＳを同様に投与したものとした。投与量の表示
はマウス体重１　ｋｇあたシのｎ９数とした。

（効果の判定法） ガン細胞移植後７臼目にそれぞれのマウスの体重を測定
した。次に腹腔に貯まりた腹水を全量とり出した後のマ
ウスの体重を測定した。腹水採取前後の体重の差を腹水
量とする。採取した腹水をヘマトクリット管に吸い込ま
せ、ヘマトクリット測定用ローターを用いて、低温で遠
心分離し゛、血液のへマドクリット値に相当するアサイ
ドクリット値を得た（腹水中に占めるガン細胞の割合）
。

腹水量にこの値を乗ずれば全腹水中の細胞の容量が得ら
れる。これを全細胞容量（トータル・）’？ツクト・セ
ル・ゲリュウム：　ＴＰＣＶ　）とする。対照では、全
腹水量は６〜１Ｏ−１ＴＰＣＶは、１６〜２５−となっ
た。

試料投与マウスのＴＰＣＶと対照投与マウスのＴＰＣＶ
の比（Ｔ／Ｃ）をとって１００〜６６係のものをガンに
対する効果なしく−）、６５〜４１％のものをやや有効
（＋）、４０〜１１ｔＩＩのものを有効（甘）、１０〜
０チのものを著効（１）とする。結果を表１に示す。

試験例２ ザルコーマ１８０固型ガンに対する効果（ザルコーマ１
８０ガン細胞移植） 試験例１と同様にして１．ＯＸ　１０８個／−の細胞懸
濁液を調製した。この懸濁液の０．１　ｍｌを４週令、
雄ＩＣＲマウス背部皮下に注射器を用いて細胞を移植し
た。

（効果判定法） ガン細胞移植後２１白目に成長したガン組織を摘出し、
その重量を測定した（１群６匹の平均値）。

この重量と対照のものとの比（Ｔ／Ｃ）をとって効果判
定を行った。対照のガン組織１険は３０〜４．５１であ
った。比の値が１００〜７１％のものを無効（−）、７
０〜５１％のものをやや有効（＋）、５０〜２１係のも
のを有効（＋）、２０〜０％のものを著効（＋Ｈ）とし
た。結果を表１に示す。

表１から明らかなように、本発明の多糖体は、ザルコー
マ１８０移植ガンのうち、特に腹水ガンに対して強い抑
制効果を有している。

表　　１ ザルコーマ１８ｏ＃植ガンに対する効果（マウス） 試験例３ ザルコーマ１８０細胞１×１０７個を雄性ＩＣＲマウス
（５匹）背部皮下に移植し、飼育した。固形腫瘍が完全
に定着し、１〜２１程の大きさとなった１０日自効ら１
日１回、５日間マウス腹腔内に所定、取の試料を投与し
た。移植後２１日１に腫瘍部を切りとりその重量部を対
照群と比較し、試験例２の方法に従って効果を判定した
。結果を表２に示ノ゛。

表　　２ 定着固形ガンに対する効果 （マウス） 試験例４゜ 急性毒性 本発明の多糖体を体重２０±１１のＩＣＲ雄性マウスに
投与して急性毒性試験を行なった結果、ＬＤ５゜値は、
腹腔内投与で６００■／に９以上、経口投与では１００
０　ｒｎｙ／ｋｇ　以上であった。

上記の薬理試験の結果からも明らかなように、本発明の
多糖体は顕著な抗腫瘍性を有し、毒性は極めて低いので
、制癌剤として優れた性質を有する。また、定着固形ガ
ンに対して特に強い抑制効果を有することから本発明の
多糖体は免疫賦活Ｑすの抗腫瘍作用を有すると考えられ
る。

本発明の多糖体は、各種の癌疾患に対して有効であり、
投与量は、症状、年令、体重などによって異なるが、通
常は成人に対して１日１００〜２５００ｍｐであり、１
〜４回に分けて投与することができる。

本発明の多糖体は任意所要の製剤用担体または賦形剤を
用いて経口または非経口投与用に製剤化される。

経口投与用の錠剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤等は慣用
の賦形剤例えば炭酸カルシウム、リン酸力ルンウム、と
うもろこしでんぷん、馬鈴薯でんぷン、砂糖、ラクトー
ス、タルク、ステアリン酸マグネシウム、アラビアゴム
等を含有していてもよい。経口投与用液体製剤は水性ま
たは油性懸濁液、溶液、シロ、ゾ、エリキシル剤その他
であってもよい。

注射用製剤は溶ｒｊ、または懸濁液の形態であり、懸濁
化剤、安定剤または分散剤のような処方剤を含んでいて
もよく、滅菌蒸留水、精油たとえばピーナツ油、とうも
ろこし油あるいは非水溶媒、ポリエチレングリコール、
ポリゾロピレングリコール等を含有していてもよい。

直腸内投与のためには坐剤用組成物の形で提供され、周
知の製剤担体たとえばポリエチレングリコール、ラノリ
ン、ココナツト油等を含有していてもよい。

次に参考例および実施例を示して本発明をさらに具体的
に説明する。

参考例 ニーム樹皮熱水抽出液の製造 （１）　　ニーム樹皮乾燥品５０ｇ−をベンゼン（５０
０４×３）およびメタノール（５０７Ｘ３）を用いて室
温で２４時間抽出前処理し、得られた抽出残渣を熱水２
００　ｍｅで３回抽出処理した。得られた抽出液を合し
、ロータリーエバポレーターで濃縮乾固し、１９６０．
５ｍｇの粉末を得た。

（２）上記（１ンで得られた粉末１００（ＩＩりを水２
００ｄに溶解し、得られた水溶液に純エタノールを１が
拌しながら室温で徐々に加え、水溶液中のエタン−ル濃
度が８０係になったときに添加をやめ、生成した沈澱を
遠心分離によシ採取し、５９４．５ｍ＆の褐色粉末を得
た。

（３）　　上記（すで得られた粉末５００〜を水５〇−
にとかし、この水溶液をスペクトラポア６（分画分子量
５０，０００）に入れ、水に対して透析した。

透析内液をロータリーエバポレーターを用いて濃縮乾固
して褐色の粉末３１０　ｍ１７を得た。

実施例 上記参考例（２）または（３）で得られたニーム樹皮熱
水抽出物１１０２０ｒｎを２０−の蒸留水に溶解し、セ
ファデックスＧ−１００を充填したカラム（＠径７、０
　ｃｍ、３ｓ、ｏｃｍ）に注ぎ、蒸留水を用いてケ゛ル
濾過を行った。フェノール硫酸法で溶出液中の糖含量を
定量しつつケ゛ル濾過を行うと、多糖体は３つに分画さ
れる。最初に溶出される画分から多糖体２７３　ｍ９が
得られる。次にこの５０Ｉｖを５−の蒸留水に溶解し、
セファデックスＧ−２００を充填したカラム（＠径４．
０　ｃｍ　％長さ５０．０　ｃｍ　）に注ぎ、？−貿水
を用いてグル濾過を行った。フェノール硫酸法で溶出液
中の糖含量を定量しっつケ゛ル濾過を行うと多糖体は２
つに分画される。二番目に溶出する多糖体画分よシ所望
の抗腫瘍性多糖体１６Ｆ＋９が得られた。このものは、
高速液体クロマトおよび電気泳動で単一の化合物である
ことを確認しり、−、。

また上記ケ゛ル濾過において、セファデックスＧ−２０
０の代シに七フアクリルＳ−３００を使用しても同様の
結果が得られた。

■１発明の具体的効果 上に詳述した如く、本廃明によれば、第１に、抗腫瘍性
多糖体が提供される。本多糖体は文献＋−載の新規化合
物であって、試験例で示したように、。

ザルコーマ１８０腹水型および固形型マウス１多伊腫瘍
等に対して強い抑制活性を示し、毒性は非常に低いので
、制癌剤として有用である。

本発明によれば、第２に、上記多糖体の製造ノブ法が提
供される。即ち、該多糖体は、ニーム１４１皮の熱水抽
出液を分子篩処理し、分子量約２　ｉ、ｏ　００を有す
る化合物を採取することによって得られる。

本発明によれば１、第３に、上記多、塘体の有’ｆｌＪ
な製造方法が提供される。即ち、該多糖体は、上記分子
篩処理を分画分子量約１×１０〜ｌＸ１０　乃至１×１
０３〜２Ｘ１０５の分子篩剤と分画分子量約１×１０’
〜２×１０５〜８Ｘ１０”の分子篩剤と組合せて行なう
ことによって高純度で得られる。

本発明によれば、第４に、上記多糖体のさらに有利な製
造方法が提供される。即ち、該多糖体は、上記分子篩処
理としてケ゛ル濾過剤を用いたケ８ルヂ過を行うことに
よってよシ容易に得られる。

本発明によれば、第５に、上記多糖体のさらに有利な製
造方法が提供される。即ち、該多糖体は、ケ゛ル濾過剤
としてデキストランヶ゛ル、ポリアクリルアミドケ゛ル
、親水性ポリビニル系ケ８ルまたは多孔性ガラスピーズ
を使用することによって容易に高純度で得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の抗腫瘍性多糖体の赤外線吸収スペクト
ルを示し、第２図は、同物質の１３０核磁気共鳴ス被ク
トルを示す。 １０−

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　二〜ム樹皮よシ得られる下記構造および特性
   を有する抗腫瘍性多糖体。 イ）構造 α−（１→４）−グルカンを主鎖とし、主鎖中にβ−（
   １→３）−フコースを含み、分校としてα−（１→６）
   アラビノースを有し、グルコース、アラビノースおよび
   フコースの構成割合が約５：２：１の中性多糖体。 口）色と形状 凍結乾燥品は白色粉末である。 ハ）溶解性 水に可溶で、メタノール、エタノール、アセトン、エー
   テル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンおよびヘキ
   サン等の有機溶媒に不溶である。 二）呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に陽性でヨウ
   素の添加により青緑色を呈する。 ホ）分子量 セファデックスＧ−２００カラムケ９ルクロマトグラフ
   イで単一のピークを与え、分子量は約２１，０００であ
   る。 へ）比旋光度 ［α］、、−４６℃（ｃ　＝０．２８　、　Ｈ２Ｏ）ト
   ）赤外線吸収スペクトル 第１図に示す通りである。 ＩＲｖ　ＫＢｒｃｍ−’　　＝　３４００　．２９３０
   　．１６３０ａｘ チ）紫外線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず、末端吸収のみを示
   す。 ワ）１５Ｃ核磁気共鳴スペクトル 重水中で外部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）を
   使用して測定した１　００　ＭＨｚ　　Ｃｆ％磁気共鳴
   スペクトルは第２図の通りである。
2. （２）　　ニーム樹皮の熱水抽出液を分子篩処理し、分
   子量約２１，０００を有する化合物を採取することを特
   徴とする下記構造および特性を有する抗腫瘍性多糖体の
   製造方法。 り構造 α−（１→４）−グルカンを主鎖とし、主鎖中にβ−（
   １→３）−７コースを含み、分枝としてα−（１→６）
   −アラビノースを有シ、グルコース、アラビノースおよ
   びフコースの構成割合が約５：２：１の中性多糖体。 口）色と形状 凍結乾燥品は白色粉末である。 ハ）溶解性 水に可溶で、メタノール、エタノール、アセトン、エー
   テル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンおよびヘキ
   サン等の有機溶媒に不溶である。 二）呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に陽性でヨウ
   素の添加により青緑色を呈する。 ホ）分子量 セファデックスＧ−２００カラムダルクロマトグラフイ
   で単一のピークを与え、分子量は約２１，０００である
   。 へ）比旋光度 〔α］、、−４６℃（ｃ＝０２８．Ｈ２Ｏ）ト）赤外線
   吸収スペクトル 第１図に示す通シである。 ＩＲ、ＫＢｒｃＩｒＬ−１：　３４００．２９３０　、
   １６３０ａｘ チ）紫外線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず、末端吸収のみを示
   す。 ＩＪ）　　　Ｃ核磁気共鳴スペクトル 重水中で外部基準にＴＭＳ　（テトラメチル７ラン）を
   使用して測定した１　００　ＭＨｚ　１３Ｃ核磁気共鳴
   スペクトルは第２図の通りである。
3. （３）上記分子篩処理は、先ず分画分子量約１×１０〜
   １×１０５乃至ｌＸ１０〜２×１０　の分子篩剤を用い
   て行ない、次いで最初の多糖体１画分をさらに分画分子
   量約１×１０３〜２×１０５乃至１×１０〜８Ｘ１０　
   の分子篩剤を用いて行ない、二番目の多糖体画分を採取
   することを特徴とする特許請求の範囲第２項記載の抗腫
   瘍性多糖体の製造方法。
4. （４）上記分子篩処理がグルｐ過であり、上記分子篩剤
   がｒル濾過剤である特許請求の範囲第２項または第３項
   記載の抗腫瘍性多糖体の製造方法。
5. （５）上記グル許過剤がデキストラングル、ポリアクリ
   ルアミドゲル、親水性ポリビニル系グルまたは多孔性ガ
   ラスピーズである特許請求の範囲第４項記載の抗腫瘍性
   多糖体の製造方法。