JPS6042331A - 多糖体ν９ｇｉの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １、発明の背景 技術分野 オ〈発明は多：ｖＭ体Ｎ９Ｇ　ｌの製法に関するもので
ある。

さらに詳しくは、本発明は、メリア・アザノラクタ樹皮
の熱水抽出液から得られる帯色多糖体Ｎ９Ｇｌを次亜ハ
ロケ８ン酸塩で脱色することを特徴とする多糖体Ｎ９Ｃ
Ｉの製法に関するものである。

本発明の製法によって得られる多糖体Ｎ　９　Ｇ　１は
抗腫瘍剤として有用である。

先行技術 従来メリア・アザジラクタ抽出物が種々な薬理作用を有
することは知られている。即ち、メリア・アザジラクタ
の樹皮、葉部、花部、央部、枝部、根皮捷たは樹脂を水
または親水性溶媒で抽出するかあるいは微粉砕して皮膚
化粧料を得る方法（特公昭５２−２８８５３．同５２−
２８８５４および同５３−１０１２５　）、上記メリア
・アザノラクタ原料を親水性溶媒および（？１．たけ）
熱水で抽出して抗菌作用、胃腸・肝臓機能改善作用を有
する成分を祠る方法（特公昭５３−１０１２４　）およ
び上記メリア・アザノラクタ原刺を疎水性溶媒で抽出し
て皮ＩＧ疾患およびリュウマテの治療に有効な成分を得
る方法（特公昭５３−１３６８９）が報告されている。

また、本発明者等は先にメリア・アザジラクタ樹皮の熱
水抽出液にアルコールを加え、生成した沈澱を採取する
（特開昭５７−１７６９１４）があるいは上記熱水抽出
液を透析膜で処理し、透析内液から有効成分を採取する
（特開昭５７−１７６９１５）ことによシ抗腫瘍作用を
有する抽出物が得られることを報告した。

本発明者等はさらに研究を進めた結果、上記絹製抽出物
を水に溶解し、該水溶液を分画分子量約１×１０３〜１
×１０５乃至ｌＸ１０６〜２×１０５のケゝルろ過膜〔
例えばセファデックスＧ　１００　（部品名、ファルマ
ンア社製品〕、バイオグルｐ−１００（商品名、バイオ
ラット社製品）等〕を用いてケ゛ルろ過し、３つに分れ
る多糖外画分のうち、最初の両分を採取することによシ
新規な多糖体Ｎ９ＧＩが丙られることを知った。この方
法によって得られる多糖体Ｎ９ＣＩは純度の高いもので
あるが、なお樹皮に由来する着色物質によって褐色を帯
びてお９、この着色物質は活性炭処理によっても除去す
るととがてきない。

■９発明の目的 そこて本発明は、上述したような着色物質を含まない白
色の多糖体Ｎ９Ｇ（を提供することを目的とする。

かかる目的を達成するため、本発明はメリア・アザジラ
クタ樹皮の熱水抽出液から得られる帯色多糖体ＩＮ９　
Ｇ　Ｉを次亜ハロケゝン酸塩でその薬理作用を損なうこ
となく脱色精製することを特徴とする多糖体Ｎ９ＧＩの
製法からなる。

さらに本発明は、次亜ハロヶゞン酸塩が次亜塩素酸塩、
次亜臭素酸塩および／または次亜ヨウ素酸塩である上記
の多糖体Ｎ９Ｇｌの製法からなる。

３、発明の詳細な説明 多糖体Ｎ９ＧＩの原料４１σ物であるメリア・アザノラ
クタは学名をメリア・アザノラクタ・リンネ（Ｍｅｌｉ
ａ　ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ　Ｌｉｎｎ、　）　′８１
：たはアザジラクタインディカ　ソヤス（Ａｚａｄｉｒ
ａｃｈｔａ　１ｎｄｉｃａ　Ｊｕｓｓ　）といい、熱帯
地域に自生する高さｌ　Ｑ　ｒｒＬ以上に達する木本植
物である。

本発明における帯色多糖体Ｎ９Ｇｌは、メリア・アザジ
ラクタ樹皮を熱水で抽出し、抽出液を例えば次の（Ａ）
乃至（Ｃ）の方法で処理することによって得られる。

へ）上記抽出液を限外ろ過し、得られた限外ろ過内液に
低級アルコールを加え、生成する沈澱を採取する。

（１３）　上記抽出液を透析脱去またはアルコール沈澱
法により精製し、イ↓Ｉられた精製物を水に溶解し、該
水溶液を分画分子量約］、Ｘ１．０５〜１×１０５　乃
至１ｘｉｏ　〜２×１０　の分子篩剤を用いて分子篩処
理し、３つに分れる多糖外画分のうち最初の両分から多
４ノ、！ｉ体を採取する。

（Ｃ）　上記抽出／Ｉ′ｊ、を透析膜１去、アルコール
沈澱法寸グζは限外ろ過性て精製し、得られた精製抽出
液を分画汗子最ａ・α囲の上限が７００〜５，０００で
下限が１００以下である架橋されたデキストラングルと
接触さぜ、接触水溶液から多糖体を採取する。

上記の方法において、メリア・アザノラクタ樹皮を熱水
て抽出処理する１８ｈ作は常法に従って行なわれる。即
し、細断した樹皮に熱水を加えるか、あるいは、樹皮に
水を加え、その混合物を加熱沸＋ｉｅさせることによっ
て実施される。加熱は沸騰水浴中または直火で行うこと
ができる。抽出時間は原料の品質等に従って適宜決定さ
れるが通常１乃至・１８時間である。抽出終了後、抽出
混合物をろ過することにより熱水抽出液が得られる。こ
のような熱水抽出に先立って、該樹皮を有機溶媒および
（または）常温の水で抽出前処理することにより、不要
成分を′予め除去しておくことも望−ましい。

抽出前処理に使用する溶媒としてはメタノール、エタノ
ール、プロパンール、ピリノン、アセトンのような極性
有（ａ　溶媒、ベンセン、トルエン、キンノン、ｎ−へ
キザン、クロロホルム、四塩化炭素、酢酸エチルのよう
な非極性有機溶媒があげられる。

かくして得られた熱水抽出液は、」二連した（Ａ）乃至
（Ｃ）の方法によって処理される。

Ａ法においては、熱水抽出液は濃縮することなくそのま
ま限外ろ過に伺される。限外ろ過は分画分子量約１０，
０００乃至５０，０００の限外ろ過膜を用い、常法に従
って加圧下に実施される。ろ過膜は、上記の分画分子量
を有するものであればよく材質等に特に制限はないが、
合成高分子を不織布等にキャスティングしたものが行道
に使用される。このようなろ過膜の例としては東洋薄達
工業（株）製品のＴＳＫ−ＵＦ膜：　ＴＳ−１０（分画
分子量１０，０００）、ＴＳ−３０（同：３０，０００
）、ＴＳ−５０（同５０，０００）およびアミコン社製
品の限外ろ過膜：　ＹＭＩＯ（分画分子量１０．０００
）、ＰＭＩＯ（同１０，０００）、ＹＭ３０（同３０，
０００）、ＰＭ３０　（同３０，０００）　およびＸＲ
１１５０（同５０，０００）が挙げられる。特にＴＳ−
５０（束１羊曹達工業社製品）が好ましい。ろ過に際し
ての加圧は約０１〜２ｋｇ／ＣｎＬ２が適当である。

上記限外ろ過によシ熱水抽出液の濃縮と低分子夾雑物の
除去が同時に行なわれる。濃縮液の濃度番ま５〜２　Ｑ
　＋１９７Ｉｎｌ−、好適には１０〜１５　ｍｅ）／ｒ
ｎｌである。

次に、かくして得られたろ過内液（濃縮液）に、低級ア
ルコールをυ１１え、生成する沈澱を常法に従って採取
することにより目的とする多糖体Ｎ　９　Ｇ　’Ｉが得
られる。

沈、澱の生成に使用される低級アルコールしては、特に
低級アルキルアルコール タノール、エタノール、ｎ−７’ロノぐノール、ｎ−プ
クノール等が挙げられるが、エタノールが最も望ましい
。沈澱の生成は、内液の２倍量のアルコールを加えて低
温（０〜６℃）で数時間乃至−昼夜放置することによっ
て好適に実施される。生成した沈澱は常法により、例え
ば、遠心分離、凍結乾燥等によって採取される。かくし
て採取された沈澱は必要により水に溶解し低級アルコー
ル澱させて精製する。

Ｂ法においては、上記抽出液は先ず透析膜法またはアル
コール沈澱法により精製される。アルコール沈澱法で精
製する場合には、上記抽出液にメタノール、エタノール
、ゾロノぐノールのようなアルコールを加え、生成した
沈澱を常法によシ、例えば遠心分離によシ採取する。透
析膜法によシ精製する場合は、該抽出液を透析膜に入れ
、水につけて透析し、透析内液を所望によシ濃縮乾固す
るかまたは凍結乾燥して抽出物を得る。透析膜としては
分画分子量５０，０００以下のもの、例えばスペクトラ
・醪ア１〜６（商品名、スペクトラム・メディカル・イ
ンダストリーズ社製品）、ビスキング・チューブ（商品
名、ユニオンカー／＜イト社製品）が使用される。ある
いは、分画分子量が５，０００〜１０，０００　程度の
ホローファイ・ぐ−型透析器を用いてもよい。例えばテ
ルモ株式会社製品のクリランスＴＥ−１５（商品名）、
アミコン社のＨＩＰ５（商品名、分画分子量５，０００
）またはＨＩＰＩＯ（商品名、分画分子量１　０，００
　０　）を用いることができる。精製度を上げるために
、上記透析膜法とアルコール沈４・投法を組み合せるこ
ともできる。即し、上記透析内液にアルコールを加え、
生成する沈澱を採取することにより精製度の高い多糖体
が得られる。

かくして（Ｕられだ精製物を水に溶）ちイし、該水溶故
を分子篩処理する。分子篩処理は望ましくはケ８ルｐ層
剤を用いたケ８ルＥ過によって行なわれる。

ケ゛ル濾過剤は分画分子量約１×１０３〜１×１０５乃
ｆｉＩＸ１０５〜２×１０５　のものが使用され、デキ
ストラング８ル、ポリアクリルアミドゲル、ポリビニル
系のポリマーケ゛ル、多孔性ガラスピーズ等が好適に使
用される。これらは例えばセファデックスＧ−Ｚｏｏ　
、Ｇ−２００　（　７アルマシア社製品、スエーデン）
、バイオグルｐ−ｉｏｏ　（バイオラッド社製品、米国
）、トヨ・ぐールＨＷ　−　５　０　（東洋曹達工業社
製品、日本）等の製品名で市販されている。

これらのケゝル濾過剤を充填したカラムに前述した熱水
抽出液を通し、蒸留水で溶離すると多糖体が３つの画分
に分画される。最初に溶出する画分を集め、蒸留乾固ま
たは凍結乾燥すると目的とする抽出精製物が得られる。

Ｃ法においては、上記抽出液は先ず上述した透析脱法、
アルコール沈澱法または限外ろ適法によって精製される
。

前記アルコール沈澱法で得られた沈澱物または透析膜法
において透析内液を乾燥して得られた固形物は、水に溶
かして精製抽出液とする。透析膜法または限外ろ適法に
おける′内液はそのまま精製抽出液とする。

次に、上記精製抽出液を分画分子量範囲の上限が７００
〜５，０００で下限が１００以下である架橋されたデキ
ストランケ゛ルと接触さ硝て不純物を該ケゞルに吸着さ
せ、接触水溶液から多糖体を採取することにより所望の
多糖体が得られる。

本工程で吸着γ（１１として使用さ、れるケゞルｔ’ｌ
　ｚ架橋されたｊ゛キスＩランケ゛ルであシ、機械的強
度に優れており、大規模での精製に使用することができ
る。デキストランク゛ルは特に高度に架橋されたものが
機械的強度の点で好捷しい。ケ゛ルの分画分子用範囲は
臨界的ではないが、上限が７００〜５，０００で下限が
１００以下のものが適当である。このようなケ゛ルの例
としては、ファルマノア社製品のセノアデッラスＧ−１
０Ｃ分画分子量範囲７００以下）、Ｇ−１５（同１，５
００以下）、Ｇ−２５（同１００〜５，０００）が挙げ
られる。本工程は、精製抽出液を上記ケ゛ルを充填した
カラムに通し、水で溶出し、溶出液を蒸発乾固または沈
結乾固することによって実施される。本処理においては
、不純物がグ゛ルに吸着され、所望の多糖体は吸着され
ない。

従って本工程はバッチ式で実施することもできる。

即し、精製抽出′に９．を上記グルとともに攪拌し、次
いでろ過または遠心分離に上りケ゛ルを除去し、ろ液を
蒸元乾固寸たは凍結乾・燥することによって所望の多糖
体を潜ることができる。

かくして得られる多糖体は純にの高いものであるが、わ
ずかに樹皮に由来する着色物質によって褐色を帯びてい
るので、これを水に溶かし、次亜ハロゲン酸塩の水溶液
ケ０１〜２％、好適には０２〜１０饅の割合でツノ１１
え、室温で攪拌処理する。反応時間は通常２〜１５分間
である。反応終了後、反応液を透析膜で処理するかある
いはでファデックスＧ２５（商品名、ファルマシア社製
品）のような架橋されたデキストランケゞルで処理して
過剰の次亜ハロゲン酸塩を除き、処理液を減圧濃縮脣た
（ｄ凍結乾燥することにより脱色された多糖体１図９Ｇ
ｌが得られる。

上記脱色処理に使用される次亜）・ロケ゛ン酸塩として
は次亜塩酸、次亜臭素ｉ変、次亜ヨウ素酸のすトリウム
もしくはカリウム塩が好適に使用される。

かくして得られた多糖体Ｎ　９　ＣＩは下記の物理化学
的特性を有する。

（イ）　色と形状 凍結乾燥品（ｒｉ白色粉末である。

（１０）　赤外１腺吸収スペクトル ＫＢｒ−＋。

ＩＲν　ｃ７１Ｌ、３７１００，２９２０．１６３０＋
１．４．００゜１：う（う０，１１５０，１０７０，１
０３０，９２０，８４０（・う　紫外線吸収スペクトル 水（′ＩＸ’；液中の１ｌｉｌｌ定で吸収極大を示さず
末端吸収のみを示す。

に）　ｃ′＋’４１１１什Ｉｌｌ 水にｎＪ箔でメタノール、エタノール、アセトン、ニー
デル１．クロロホルム、酢酸エチル、ベノヒ゛ン、Ｊっ
・よびヘギザン等の有銭溶媒に不溶である。

（７）う　Ｎ・、′−色反）心 フェノール硫ｉ峻反応、アンスロン硫酸反応に陽］生で
ヨウ素の添加によ’）　７！ｔ’緑色を呈する。

参−８１でに、上で得られた多糖体Ｎ　９　Ｇ　Ｉを分
画分子…約］、Ｘ１０３〜２Ｘ１０５乃至ｌＸｌ０’〜
８Ｘ１０”のケ゛ルろ過膜を受填したカラムにかけ、蒸
留水て俗ｔ’：Ｉｌｌすると多：ノハ体か２つの両分に
分画される。最初に溶出する両分を多７６Δ体Ｎ９Ｇｌ
ａ、後に溶出する多糖体をＮ９Ｇｌｂとする。」−記ケ
゛ルろ過膜としてね、デキストランケゞル、ポリアクリ
ルアミドグ９ル、ホリビニル系のポリマーク８ル、多孔
性ガラスピーズ等が使用される。これらは例えはセファ
デックスＧ−２００、七ノアクリルＳ−３００（商品名
、ファルマシア社製品、スエーデン）、バーｒオケゞル
Ｐ−３００（商品名、バイオジッド肚製品、米国）、ト
ヨ・に−ル１４ｗ−６’Ｏ（藺品名、東洋四速工業社製
品、日本）等の製品名で市販されている。

多糖体Ｎ９ＧＩａおよび多糖体Ｎ９Ｇｌｂの構造および
物理化学特性は下記の通りである。

−ｆ）構造 α−（１→・１）−グルカンの主鎖にアラビノースかα
−（］→６）結合し、グルコースとアラビノースの構成
割合が約５：Ｊの中性多糖体。

口）色と形状 凍結乾燥品は白色粉末である。

・・）溶解性 水に可溶で、メタノール、エタノール、アセトン、エー
テル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンおよびヘキ
サン等の有機溶媒に不溶である。

→　呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に陽性でヨウ
素の添加によシ青緑色τ呈する。

ホ）分子量 セファデックスＧ−２００カラムケゞルクロマトグラフ
イで単一のピークを与え、分子量は約９４．０００であ
る。

へ）比旋光度 〔α）、；５　：　＋１３６．０°　（ｃ＝ｏ、ｓ　、
　Ｈ２Ｏ）ト）赤外線吸収ス４りトル ＩＲｖ■（Ｂ”ｃｒｎ−’　：　３４００，２９３０，
１６２０，１４１０゜＋１（ａ　Ｘ １３７０．１２６０，１１５０，１０８０．１０２０チ
）紫外線吸収スペクトル゛ 水溶液中の測定で吸収極太を示さず、末端吸収のみを示
す。

す）　１３　ｃ核磁気共鳴スペクトル 重水中で外部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）を
使用して測定した１　００　ＭＨｚ　１３Ｃ核磁気共鳴
スペクトルは次の通シである。

δｐｐｍ　：　６２．１．６２．７．６７．３．７２．
９　、７４．．８．７８．ｉ　。

７８．７　、８，２．４　、８５．５　、９９．２　、
１０１１．１’０８．９イ）構造 α−（１→４）−・グルカンを主鎖とし、主鎖中にβ−
（１→３）フコースを含み、分枝としてα−（１→６）
アラビノースを有し、グルコース、アラビノースおよび
フコースの構成ｔｅ１　合が約５：２：１の中性多糖体
。

口）色と形状 凍結乾燥品は白色粉末である。

ノ→　溶解性 水にＥＴ　？ｇで、メタノール、エタノール、アセ１゛
ン、エーテル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンお
よびヘキサン等の有機溶媒に不溶である。

→　呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に陽性でヨウ
素の添加により青緑色を呈する。

ホ）分子量 −１７アデツクスＧ−２００カラムクゝルクロマトグラ
フィでｊｐ−のピークを力え、分子量は約２１．０００
である。

へ）比りた尤、度 〔α）、、、　＋１４．３．７°（Ｃ＝Ｏ：５　、　ｌ
−１２０）ト）赤タト線吸収スペクトル ＫＢｒ−１゜ ＩＲｖｃ７ｎ、３４００，２９３０．１６：う０，１４
２０゜１ａＸ １２６０、ｌ０８０．１０２０．８１０チ）紫外線吸収
スペクトル 水溶液中の１１Ｂ１定て吸収極大を示さず、末Δ：、ｉ
５ｉ吸収のみを示す。

す）　１５ｃ核研気共鳴スペクトル 重水中で１Ｌ部基党にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）
を使用して１Ｉｊ１１定した１　００　ＭＨｚ　１３Ｃ
核磁気共鳴スペクトルは次の通りである。

δｐｐ＋ｎ　：　１８．２，６２．３，６２．７，６７
．４，７１．１，７２．０゜７３．２，７４．９，７８
．９，８２．９，８３．９．８５．６，９９．４゜１０
１．２，１０５．０，１０９．１ 本発明の多糖体Ｎ　９　Ｇ　ｌは上記多糖体Ｎ９Ｇｌａ
および多ｊ融体Ｎ　９　Ｇ　ｌ　ｂの混合物とみること
ができ、薬理試、険の結果、ザルコーマ１８０固形型マ
ウス移植腫瘍およびメス八固形型マウス移植腫瘍に対し
て顕著な阻止作用を有することが確認された。また上記
多糖体Ｎ９ＧｌａおよびＮ９Ｇｌｂも同様の薬理活性を
示した。

従って抗腫瘍剤として使用する場合には、木兄ｌＪｊ’
の多糖体Ｎ９Ｇ（をさらに多糖体Ｎ９ＧＩａと多、１）
月俸Ｎ９Ｇｌｂとに分離する必要はなく、両者の混合物
の状態で、即ち、本発明に多糖体Ｎ　９　Ｇ　Ｉの状態
で使用するのが実際的である。

次に参考１９すおよび実施例を示して本発明をさらに詳
しく説り１する。

参考例 帯色多、゛諧体Ｎ９Ｇ　Ｉの製造 ＩＡ）　メリア・アザノラクタ樹皮２００　ｇｒに２！
のメタノールを加えて室温で５時間から一昼夜抽出する
。抽出液をろ別し更に２！のメタノールを加える。この
操作を合計３回縁９返した後、この（）ｊ皮に２ｊの蒸
留水を加えて、２〜３時間煮沸抽出する。抽出液をろ過
または遠心して集める。同様の操作を合計３回行ない、
３回分の抽出液、約５．５７ｆ：集める。この後、必要
ならば更に遠心して不溶物を除く。

この熱水抽出ｒＬ２．３　Ａ　にれには熱水抽出物がｉ
ｌ”Ｊ　７５ｇｒ含まれている）をＴＳＫ−ＵＦ’ｌ摸
ＴＳ−５０（分画分子量５０，０００．、商品名、東洋
曹達工業は製品）を装着した限外ろ過装置５Ｃ−６０（
前品名、東洋曹達工業社製品）を用いて限外ろ過を行な
う。はじめに１００〜１．５０　ｒｕ７！程度にまで濃
縮した後、これに蒸留水を１５０〜２’ＯＯ＋ｎ６加え
て更に限外ろ過を行ない、再び１００　＋ｉ程度１でｌ
溝線する。この操作を５〜１０回繰９返）〜て得られた
内液１００ｍ１．（これには、１．９８ｇｒの固型分が
ｔδけている）に２倍量（即し２００ｍ１）のエタノー
ルを加えて、よく攪拌した後、低温（０〜６℃）で０時
間から一昼夜放置した後、遠心などの常法に従って沈澱
物を集める。

沈澱物を再び７０〃ｉの蒸留水に溶解し、２倍量（１４
０ｍｇ）のエタノールを加え、同様の操作を１〜２回繰
シ返す。得られた沈澱物を６７係、７５％、１００％の
エタノールで順次洗浄した後、アセトン、エーテルで脱
水すると、淡黄色粉末として多糖体Ｎ９ＧＩ（８０！Ｍ
＋！７）が得られる。

これをセファデックスＧ−１００でグ８ルろ過を行なう
と多糖体Ｎ９ＧＩ以外のものをほとんど含んでいないこ
とが分かる。

＜Ｂ）　（１１メリア・アザノラクタ（☆１皮乾燥品５
０ｇ−をベンゼン（５００＋＋に×３）およびメタノー
ル（５００ｍｅ×３）を用いて室温で２４時間抽出前処
理し、得られた抽出残渣を熱水２００−で３回抽出処理
した。得られた抽出液を合し、ロータリーエバポレータ
ーで濃縮乾固し、１９６０．５ｍ！７の粉末を得た。

（２）上記（１）で得られた粉末１０００１１７りを水
２００＋ｎ１．に溶解し、得られた水溶液に純エタノー
ルを攪拌しながら室温で徐々に加え、水溶液中のエタノ
ール濃度が８０係になったときに添加を−やめ、生成し
た沈澱を遠心分離により採取し、５９４、５　ｍ９のｉ
′８色粉末を得た。

（３）　、、４℃記（１）で得られた粉末５００　Ｉｎ
ノを水ｓ。

ｍｅにとかし、この水ｆ容液をスペクトラ　ポア６（分
画分子量５０，０００）に入れ、水に対して透析した。

透析内液をロータリーエバポレーターを用いて１農縮乾
固して褐色の粉末３１０　ｒｒｒｔ）を？４）／こ　。

（４）　」−記参考列（２）また（徒（３）で得らオシ
た熱水抽出′ＩＩＩＪ　１０２０　ｍ９を２０　ｍｅの
蒸留水に溶ｉｑ＋ｔ　Ｌ、セファデックスＧ−１００を
ブ１填したカラム（ｉｉＪ（そ７、　Ｏｃｍ、長さ３５
０ｃｎＬ）に注ぎ、蒸留水を用いてケ゛ル濾過を行なっ
た。フェノール硫酸法で（器用液中の糖剖（ｉ４−を定
イ１しっつケ゛ルＰａを行うと、多糖体（７１３つに分
画される。最初に浴出する両分から溶媒を留去［〜、目
的とする多読イ本２７３！１１！７がＩＪ４られた。

（Ｃ）　メリア・アザノラクタ樹皮２００　ｇｒを各２
！のメタノールで３回抽出後、各２ｅの蒸留水で３時間
煮沸抽出を３回行なう。熱水抽出液を集め、約５００ｍ
ｅに省で戎Ｆン・・ｉ陥する。次いでスペクトラポア２
透析膜を用いて、蒸留水に対して透ｉフ１する。この内
液を遠心して不溶物を除き、約４５０　ｍｌまで濃縮す
る。これに２倍指のエタノールを加え、よく攪拌した後
、低温室（４℃）に−晩装置する。遠心して沈澱物を集
め、６７係次いで１００％エタノールで洗浄し、アセト
ン、エーテルで脱水乾燥すると、淡褐色粉末３、／ｌ　
７　ｇｒが得られる。この７６．５〃＋９を５　ｍ１２
の蒸留水に溶解し、セフアゾ、ラスＧ−２５を充填した
カラム（φ２．５ｘ４５ｃ＋ａ）にかけ、蒸留水で溶出
すると、不純物はカラムに吸着され、多糖体Ｎ９Ｇｌは
そのま丑溶出されるので溶出＃、を集め、濃縮、凍結乾
燥すると多糖体Ｎ　９　Ｇ　ｌが２８、９　ｔｒｒり１
（ｊられる。

実施例 上記参考例（Ａ）乃至（Ｃ）で得られた帯色多糖体Ｎ９
Ｇ１１．０ＳＦを５０　ｍｌの蒸留水に溶解する。これ
に市販の次亜塩素酸す）　ＩＪウム溶液（商品名アンチ
ホルミン、関東化学）　０．５　ｍｌ　（即ち、約１係
Ｖ／Ｖ　）を加え室温で５分間攪拌する。

次いで反応液をビスキング・チューブを用いて蒸留水に
対して一昼夜透析する。チーープ内液を減圧４帰し、凍
結乾燥することにより脱色された多糖体Ｎ９Ｇ　１　４
６．２ｍりが得られる。

次に、本発明の多糖体Ｎ９Ｇｌの試験例を示す。

試験例１゜ （試別調製） リン酸緩衝食塩水（ギズコ社製、リン酸９．５　ｍＭを
含む：　ＰＢＳ　）に所定濃度になるように試料を溶ｊ
リイさせた。

（ザルコーマ１８０ガン細胞移植） ＩＣＲマウス腹腔中で継代培養したザルコーマ１８０ガ
ン細胞を腹水とともにと９出し、生理食塩水で適当に希
釈し７て卸ＩＪ抱数がｌ、ｏ、ｘｌｏ　個／Ｉｎ！、と
なるように調製した。この細胞懸濁液の０．１　＋ｎｌ
を４〜５週令雄ＩＣＲマウス背部皮下に注射器を用いて
細胞を移植した。従って１匹あたシの移植細胞数は１．
０Ｘ１０７　個である。

（試料投与） ザルコーマ１８０ガン細胞を移植後６日目より１日１回
連続１０日間、上に調製した試料を注射器を用いてマウ
ス腹腔内に投与した。

１試別１濃度につき８匹のマウスを使用した。対照は試
料の溶剤として用いた前記ＰＢＳを同様に投与したもの
とした。投与量の表示はマウス体重１に９あたりの１１
１９数とした。

（効果の判定法） ガン細胞移植後３５１目に成長したガン組織を摘出し、
その重量を測定した（ＩＷＩＯ匹の平均値）。この重量
と対照のものとの比（Ｔ／Ｃ）をとって効果判定を行な
った。対照のガン組織重量は１０．８３ｇ−であった。

結果を表１に示す。

表　１ 試験例２ メスＡ繊維肉＋＋Ａに対する効果 ＢａＸｂ／Ｃ−Ｉウス腹腔中で継代培養したメスＡＪイ
１［肉腫（Ｍｅｔｈ　Ａ　ｆ　ｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ
　）　ＪｔｌｌＪＩｉＭを腹水とともにとり出し、生理
食塩水で適当に希釈し、＃ｎｌ胞数が１．０ｘｌＯ６１
向／　ｒｔ＋ｅとなるように調製した。この細胞！ｊ顎
ｔｌＡ液の０．１　ｍｅを５週令雄Ｂａ１ｂ／　Ｃマウ
ス背部皮下に注射器を用いて移植した。−匹当りの移植
細胞数は１．ＯＸ　Ｉ　０５個である。試別は、試験例
１と１司様にして言周１姦し、１１１日目り１日１回、
１０日間連続してマウス腹腔内に投与した。判定は腫瘍
細胞移植２１１日目腫瘍組織を切シ出し、その型取を測
定することによって行なった。結果を表２に示す。

表　２ ＊を検定での危険率 表１お・よび２から明らかなように、本発明の脱色多１
店体Ｎ９ＣＩ（実施例のｒ＋９Ｇｌ）は、ザルコーマ１
８０固形ガンおよびメスＡ繊維肉腫に対して脱色前の多
糖体Ｎ９Ｇ　Ｉ　Ｃ参考ＨＡのＮ９Ｇｌ）と略同等の強
い抑制効果を有している。このことは、多糖体Ｎ９ＧＩ
の効力が次亜塩素酸塩による脱色処理によっても何ら損
なわれないことを示している。尚、次亜塩素酸塩のかわ
シに次亜臭素酸塩及び次亜ヨウ素酸塩を用いて脱色処理
を行なった結果、同様な結果が得られた。

試験例３ 角１牛毒性 本発明の多、糖体Ｎ９ＧＩを体重２０±ＩＦの■ＣＲ、
＞４１ｉマウスに投与して急性毒性状１験を行なった結
果、Ｌｌ）ｓｏ値は、腹腔内投謁で６００１１＋９／に
！７以」−であ　り　／こ　。

上記の条理試１験の結果からも明らかなように、本発明
の多１ノΔ体Ｎ９ＧＩは顕著な抗腫瘍性をイイし、１３
性は極めて低いので、制癌剤として優れた間質を有する
。定着面形ガンに対して強い抑１１１す効果を有するこ
とから本発明の多糖体は免疫賦活型の抗ハ］■瘍作用を
有すると考えられる。

本発明の多糖体ｘｑ　９　Ｇ　ｌは、各種の癌疾患に対
して有効てあり、投与量は、症状、年令、体重などによ
って異なるが、通當は成人に対して１日１００〜２，５
００ｍ！７であり、１〜４回に分けて膜力することがで
きる。

本発明の多糖体Ｎ９ＧＩは任意所要の製剤用担体才たは
賦形剤を用いて経口または非経１０投力用に製剤化され
る。

経口投与用の錠剤、散剤、カッ０セル剤、顆粒剤等は慣
用の賦形剤例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、
とうもろこしでんぷん、馬鈴薯でんぷん、砂糖、ラクト
−ス、タルク、ステアリン酸マグネシウム、アラビアゴ
ム等を含有していてもよい。経ロ膜力用液体製剤は水性
−または油性懸ン蜀液、溶液、ンロップ、エリキシル剤
その他であってもよい。

注射用製剤は溶液捷たは懸濁液の形態であり、懸濁化剤
、安定剤−または分散剤のような処方剤を含んでいても
よく、滅菌蒸留水、精油たとえばビーナツツ油、とうも
ろとし油あるいは非水溶媚、ポリエチレングリコール、
ポリプロピレングリコール等を含有していてもよい。

直腸内投与のためには化Ａｌｌ用組成物の形で提供され
、周知の製剤担体たとえばポリエチレングリコール、ラ
ノリン、ココナツツ油等を含有していてもよい。

■１発明の具体的効果 多糖体ＮＱＧｌｉは、メリア・アザノラクタ樹皮の熱水
抽出物から得られるが、このものは樹皮に由来する着色
物質によって褐色を帯びておシ、活性炭処理によっても
脱色することができない。

しかるに本発明の製法によれば、帯色多糖体Ｎ９Ｇｌを
次亜ハロケ゛ノ酸塩で処理することにより脱色された多
糖１１＼Ｎ９Ｇ　ｌが提供される。本発明の多糖体＋ｑ
　９ｃ　Ｉ　’ｒＪ、脱色処理によってもその薬理効果
は何ら１ｊ１なわれず、優れた抗腫ｊ易剤として使用さ
れる。

特Ｍ′ｌ出１順人　チル七株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１９メリア・アザノラクタ樹皮の熱水抽出液から得ら
   れる帯色多糖体Ｎ９ＧＩを次亜ハロゲン酸塩でその薬理
   作用を損なうことなく脱色ｊ（１−製することを特徴と
   する多糖体Ｎ　９　Ｇ　ｌの製法。 （２）　次亜ハロゲン酸塩が次亜塩素酸塩、次亜臭素酸
   塩および／または次亜ヨウ素酸塩である１１、！１′、
   ；’ｉ請求の範囲第１項に記載の多糖体Ｎ　９Ｇｌの製
   法。