JPS6042330A - 多糖体ν９ｇｉの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ｌ　発明の背景 技術分野 本発明は多糖体Ｎ　９　Ｇ　Ｉの製法に（Ｊ４するもの
である。

さらに詳しくは、本発明は、メ１ノア・ア世ゝノラフタ
樹皮の熱水抽出物を特定の方法で精製することを特徴と
する多糖体Ｎ９Ｇｌの製法に関するものである。

本発明の製法によって得られる多糖体は抗腫瘍剤として
有用である。

先行技術 従来メリア・ブザジラクタ抽出物が種々な薬理作用を有
することは知られている。即ち、メリア・アザノラクタ
の樹皮、葉部、花部、果部、枝部、根皮まグヒは樹脂を
水または親水性溶媒で抽出するかあるいは微粉砕して皮
膚化粧料を得る方法（特公昭５２　２８８５３．同５２
−２８８５４および同５３−１０１２５）、上記メリア
・アザジラクタ原料を親水性溶媒および（捷たけ）熱水
で抽出して抗菌作用、胃腸・肝臓機能改善作用を有する
成分を得る方法（特公昭５３−１０１２４　）および上
記メリア・アヂノラクタ原料を疎水性溶媒で抽出して皮
膚疾患およびリュウマテの治療に有効な成分を得る方法
（特公昭５３−１３６８９）が報告されている。

また、本発明者等は先にメリア・アザノラクタ樹皮の熱
水抽出液にアルコールを加え、生成した沈澱を採取する
（特開昭５７−１７６９１４）かあるいは上記熱水抽出
液を透析膜で処理し、透析内液から有機成分を採取する
（特開昭５７−１７５９１５）ことによシ抗腫瘍作用を
有する抽出物が得られることを報告した。

本発明者等はさらに研究を進めた結果上記精製抽出物を
水に溶解し、該水溶液を分画分子量約１×１０〜１×１
０　乃至１×１０〜２×１０　のグルろ層剤〔例えばセ
ファデックスＧｌ　００　（商品名、ファルマンア社製
品〕、バイオグルＰ−１００（商品名、バイオラット社
製品）等〕を１．用いてケゞルろ過し’１１３つに分れ
る多糖体画分のうち、最初の両分を採取することによシ
新規な多糖体Ｎ９Ｇｌが得られることを知った。この方
法は純度の高い多糖体Ｎ　９　Ｇ　ｌを得る点で優れて
いるが、操作が煩雑なため大規模での実施が非常に困難
であシ、まん上記グルろ層剤が機械的強度に欠けている
ため工業的実施にはあまシ向いていない。

■１発明の目的 そこで本発明は、工業的な実施に適した多糖体Ｎ９Ｇｌ
の製造法を提供することを目的とする。

即し本発明はｆｆ１ｌ　朗な操作と大規模な実施が可能
な装置を用寝て多糖体Ｎ　９　Ｇ　ｌを製造する方法を
提供することを目的とする。

本発明の目的は以下に記載する方法によって達成される
。

メリア・アザノラクタ樹皮を熱水で抽出し、該抽出液を
透析膜法、アルコール沈澱法または限外ろ過去で鞘製し
、得られた精製抽出液をレクチンを固定化した４’＋４
体と接触させて多糖体を吸着させ、メチル−α−Ｄ−ゲ
ルコンドまたはメチル−α−Ｄ−マンノ／トで溶出し、
溶出液を万両分子量５０．０００以下の透析膜を用いて
水に対して透析し透析内液から多糖体を採取することを
特徴とする下記の物理化学的特性を有する多糖体Ｎ９　
Ｇ　ｌの製法。

（イ）　色と形状 凍結乾燥品は白色または淡黄褐色粉末である。

（０）赤外線吸収スペクトル ＩＲｖＫＢｒｏｎ−１：　３４００　、２９２０　、１
６３０　、１４００　。

１３６０　、１１５０　、１０７０　、１０３０．９２
０　、８４０（ハ）紫外線吸収ス被りｌ・ル 水溶液中の１ｎｌｉ定で吸収極大を示さず末端吸収のみ
を示す。

に）　溶解性 水に可溶でメタノール、エタノール、アセトン、エーテ
ル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンおＪ：びヘキ
サン等の有機溶媒に不溶である。

（ｉｌう　景色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に陽性でヨウ
素の添加により青緑色を呈する。

３、発明の詳細な説明 本発明方法の原料植物であるメリア・アザノラクタは学
名をメリア・アザノラクタ・リンネといい、熱帯地域に
自生する高さ１０７？＋、以上に達する木本植物である
。本発明の方法においては、メリア・アザジラクタの樹
皮を原料として使用する。該樹皮を熱水で抽出処理する
操作は常法に従って行なわれる。即ち、細断した樹皮に
熱水を加えるか、あるいは、樹皮に水を加え、その混合
物を加熱沸騰させることによって実施される。加熱は沸
騰水浴中または直火で行うことができる。抽出時間は原
料の品質等に従って適宜決定されるが通常１乃至４８時
間である。抽出終了後、抽出混合物をろ過することによ
シ熱水抽出液が得られる。

このような熱水抽出に先立って、該樹皮を有機溶媒およ
び（または）常温の水で抽出前処理することにより、不
要成分を予め除去しておくことも望ましい。抽出前処理
に使用する溶媒としてはメタノール、エタノール、フロ
ノぐノール、ピリジン、アセトンのような極性有機溶媒
、ベンゼン、トルエン、キシレン、ｎ−ヘキサン、クロ
ロホルム、四塩化炭素、酢酸エチルのような非極性有機
溶媒があげられる。

かくして得られた熱水抽出液にはなお多量の不純物が含
まれているのでアルコール沈澱法、透析膜法または限外
ろ過法によシ、該抽出液を精製する。アルコール沈澱法
で精製する場合には、上記抽出液にメタノール、エタノ
ール、プロパノールのようなアルコールを加え、生成し
た沈澱を常法によシ、例えば遠心分離によシ採取する。

透析膜法により精製する場合は、該抽出液を透析膜に入
れ、水につけて透析し、透析内液を所望によシ濃縮乾固
するかまたは凍結乾燥して抽出物を得る。

透析膜としては分画分子量５０．０００以下のもの、例
えばスペクトラ・ボア１〜６（商品名、スペクトラム・
メディカル・インダストリーズ社製品）、ビスキング・
チューブ（商品名、ユニオンカーバイト社製品）が使用
される。あるいは、分画分子量が５，０００〜１０，０
００程度のホローファイバー型透析器を用いてもよい。

例えばテルモ株式会社製品のクリランス’ｒＥ−１５（
商品名）、アミコン社のＨＩＰ５（商品名、分画分子量
５，０００）またはＨＩＰＩＯ（商品名、分画分子量１
０，０００）を用いることができる。精製度を上げるた
めに、上記透析膜法とアルコール沈澱法を組み合せるこ
ともできる。即ち、上記透析内液にアルコールを加え、
生成する沈澱を採取する°ことにより精製度の高い多糖
体が得られる。限外ろ過法で精製する場合は分画分子量
約１０，０００乃至５０，０００の限外ろ過膜を用い、
常法に従って抽圧下に実施される。ろ過膜は、上記の分
画分子量を有するものであればよく祠質等に特に制限は
ないが、合成高分子を不織布等にキャスティングしたも
のが好適に使用される。このようなろ過膜の例としては
東洋曹達工業（沫）製品のＴＳＫ−ＵＦ膜：　ＴＳ−１
０Ｃ分画分子量１ｏ、０ｏｏ）、ＴＳ−３０（同３’０
．０００）、ＴＳ−５０（同５０，０００）およびアミ
コン社製品の限外ろ過１摸：ＹＭ１０（分画分子量１０
，０００）、ｐＭｌ。

（同１０，０００）、ＹＭ３０（同３０，０００）、Ｐ
Ｍ３０（同３０，０００）およびＸＭ５０（同５０，０
００）が挙げられる。特にＴＳ−５０（東洋曹達工業社
製品）が好ましい。ろ過に際しての加圧は約０．１〜２
　’に９／ｃｒｎ２が適当である。限外ろ過にょシ熱水
抽出液の濃縮と低分子夾雑物の除去が同時に達成される
。濃縮液の濃度は５〜２０　Ｔｌｆ／／ｒｎｌ、好適に
は１０〜１５　ｍｆ）／＋ｎｌである。

前記アルコール沈澱法で得られた沈澱物−よたは透析膜
法において透析内液を乾燥して得られた固形物は、水に
溶かして本発明の精製抽出液とする。

透析膜法または限外ろ過法における内液はそのまま本発
明の精製抽出液とする。

かくして得られた精製抽出液をレクチンを固定化した担
体と接触させて多糖体を吸着させる。多糖体Ｎ９ＧＩは
後述するようｉＣＮ　９　Ｇ　ｌ　ａとＮ９Ｇｌｂの２
成分よりなるが両者ともα−（１，４）−グルカン全主
鎖とする多糖体であり、レクチンと特異的に結合するた
め不純物と分離される。本発明の上記アフィニティーク
ロマトグラフィに用いる吸着ｉすとしては、レクチンを
固定化した市販のＣｏｎ　Ａ−８ｅｐｈａｒｏｓｅ　＋
　Ｌｅｎｔｉｌ　１ｅｃｔｉｎ−８ｅｐｈａｒｏｓｅ　
（商品名、ファルマシア社製品）、アノｆロース固定化
Ｃｏｎ　Ａ　（フナコシ薬品社製品）＠が挙げられる。

また、レクチンを常法に従ってアガロース、多孔性〃ラ
スビーズ等に固定したものを用いることもできる。例エ
バ、ＣＮＢ　ｒ　活性化セファロース（ファルマンア社
製品）とＣｏｎ　Ａを反応させることによりＣｏｎ　Ａ
　−セファロースが得られる。またアミノプロピル−Ｃ
ＰＧ　（フナコ／’ｄｌ；品製品）をグルタルアルデヒ
ドで活性化したのち、１ｅｎｔｉｌ　１ｅｃｔｉｎと反
応させることにより１ｅｎｔｉｌ　Ｉｅｃｔｉｎ　−Ｃ
ＰＧが得られる。

次に吸着された多糖体はメチル−α−Ｄ−ゲルコント寸
たはメチル−α−Ｄ−アンノンドの０１〜０、５　Ｍ水
溶液で溶離される。溶離液を水に対して透析し、透析内
４゛グから常法により、例えば凍結乾燥法によシ所望の
多糖体Ｎ９Ｇｌが得られる。透析には前述した分画分子
量が５０，０００以下の透析膜または分両分子計が５，
０００〜１．０．０００程此のホローフ、アイバー型透
析器が使用される。

本発明の方法により得られた多’１７ｉ！を休Ｎ　９　
Ｇ　ｌは下記の物理化学的特性を有する。

（イ）　色と形状 凍結乾・燥品は白色粉末又は淡黄褐色粉末である。

（ロ）　赤外線吸収スペクトル ＩＲｖＫＢｒｃｒｎ−１：　３４００，２９２０，１６
３０．１４００゜１３６０．１１５０，１０７０，１０
３０，９２０，８４０（−ウ　紫外線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極太を示さず末端吸収のみを示す
。

に）　（容角イ性 水に可溶でメタノール、エタノ−７・し、アセトン、エ
ーテル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンおよびヘ
キサン等の有機溶媒に不溶である。

０）　呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反１．＋Ｓに陽性
でヨウ素の添加により青緑色を呈する。

参考寸でに、上で得られた多糖体Ｎ　９　Ｇ　Ｉを分画
分子量約１×１０３〜２×１０５乃至１×１０３〜８Ｘ
１０５のケ゛ルろ層剤を充填したカラムにかけ、蒸留水
で溶離すると多糖体が２つの両分に分画される。

最？力に溶出する両分を多糖体Ｎ９Ｇｌａ、、後に溶出
する多糖体’１Ｎ９Ｇｌｂとする。上記ケゞルろ層剤と
してはガキストランケゝル、ポリアクリルアミドケゝル
、ポリビニル系のポリマーケ゛ル、多孔性がラスビーズ
等が使用される。これらは例えば′セファデックスＧ−
２００、セフアクリルＳ−３００（商品名、ノアルマ／
ア社製品、スエーデン）、バイオケ゛ルＰ３００　（ｉ
和品名、バイオラッド社製品、米国）、トヨパールＩ−
ＩＷ　−６０（商品名、東洋四速工業社製品、［」本）
等の製品名で市販されている。

多糖体Ｎ　９　Ｇ　ｌ　ａおよび多糖体Ｎ　９　Ｇ　ｌ
　ｂの構造および物理化学苛性は下記の通りである。

多４唐体Ｎ９Ｇｌａ イ）　構　」貨 α−（１→・１）−グルカンの主鎖にアラビノースがα
−（１→６）結合し、グルコースとアラビノースの構成
割合が約５：１の中性多糖体。

口）色と形状 凍結乾燥品は白色粉末である。

７つ　溶　ｊクイ　：’１ 水に川（容で、メタノール、エタノール、アセトン、エ
ーテル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンおよびヘ
キサン等の有機７容媒に不溶である。

二）呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に陽性でヨウ
素の添加により青緑色を呈する。

月９　分子量 セフアゾ、ラスＧ−２００カラムケゞルクロマトグラノ
イで単一のピークを与え、分子量は約９４．０００であ
る。

へ）比旋光度 〔α〕’ｊ５：　＋１３６．ｏｏ（Ｃ＝０．５　、　Ｈ
，、Ｏ）ｌ・）赤外線吸収スペクトル ＩＲ壮暦の−”　：　３／１００．２９３０，１（３２
０，１４１０゜１．３７０．１２Ｇ０，１１５０，１．
０８０ブつ　紫外線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず、末端吸収のみを示
す。

す）１５Ｃ核磁気共鳴スにクトル 重水中で外部基準にＴＭＳ　（テトラメチルンラン）を
使用して測定した１　００　ＭＴ−（ｚ　Ｃ核ｌ邊気共
鳴スペタトルは次の通りである。

δ　ｐｐｍ　：　６２．１，６２．７，６７．３，７２
．９，７４．８，７８．１゜７８．７．８２．４．８５
．５　、９９．２　、１０１．１．１０８．９多糖体Ｎ
９Ｇｌｂ イ）構造 α−（１→４）−グルカンを主鎖とし、主鎖中にβ−（
１→３）フコースを含み、分枝としてα−（１→６）ア
ラビノースを有し、グルコース、アラビノースおよびフ
コースの構成割合が約５：２：１の中性多糖体。

口）色と形状 凍結乾燥品は白色粉末である。

ノ９　溶解性 水に可溶で、メタノール、エタノール、アセトン、エー
テル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンおよびヘキ
サン等の有機溶媒に不溶である。

二）呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロン硫酸反応に陽性でヨウ
素の添加により青緑色を呈する。

ホ）分子量 セファデックスＧ−２００カラムダルクロマトグラフイ
で単一のピークを与え、分子量は約２１．０００である
。

へ）比旋光度 〔α孫５：　＋１４３．７°　（Ｃ＝Ｑ、５　、　Ｈ２
Ｏ）ト）赤外線吸収スペクトル ＩＲｖＫＢｒｃｒｒＬ−１：　３４００，２９３０，１
６３０，１４２０゜ａｘ １２６０．１０８’０，１０２０．８１０ブう　紫外線
吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず、末端吸収のみを示
す。

ＩＪ）　１３Ｃ核磁気共鳴ス被クトル 重水中で外部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシシン）を
使用して測定した１　００　ＭＩ−１ｚ　１５Ｃ核磁気
共鳴スペクトルは次の通シである。

δｐｐｍ　：　１８．２，６２．３，６２．７，６７．
４，７１．１，７２．０゜７３．２，７４．９，７８．
３，７８．９，８２．９，８３．９゜８５．６　、９９
．４　、１０１．２　、１０５．０　、１０９．１本発
明の多糖体Ｎ９Ｇ　Ｉは上記多糖体Ｎ　９　Ｇ　１ａお
よび多糖体Ｎ９Ｇｌｂの混合物とみることができ、薬理
試験の結果、ザルコーマ１８０マウス移植腫瘍およびメ
スＡ固形型マウス移植腫瘍に対して顕著な阻止作用を有
することが確認された。

また上記多糖体Ｎ９ＧＩａおよびＮ９Ｇｌｂも同様の薬
理活性を示した。

従って抗力・Ｆ瘍剤として使用する場合には、本発明の
多糖体Ｎ９Ｇｌをさらに多糖体Ｎ９ＧＩａと多糖体Ｎ　
９　Ｇ　ｌ　ｂとに分離する必要はなく、両者の混合物
の状態で、即ち、本発明に多糖体Ｎ９Ｇ　ｌの状態で萌
用するのが実際的である。

次に、本発明の多糖体Ｎ９ＧＩの試４験例を示す。

試１１５Ｑ例１ ザルコーマ１８０固形ガンに対する効果（試別調製） リン酸緩衝食塩水（ギブコ社製、リン酸９．５　ｍＭを
含む；　ＰＢＳ　）に０．５　％カルがキシメチルセル
ロース（ＣＭＣ）を慧７蜀させた溶ｆ夜に所定ｍ１度に
なるように各両分試料を溶）質させた。

（ザルコーマ１８０ガン則胞移植） ＩＣＲマウス腹腔中で継代培養したザルコーマ１８０ガ
ン細胞を腹水とともにとり出し、生理食塩水で適当に希
釈して細胞数がｉ、０Ｘ１０個／＋ｆＩ７！となるよう
に調整した。この懸濁液の０．１　ｍｌを４週令、雄Ｉ
ＣＲマウス背部皮下に注射器を用いて細胞を移植した。

（試料投与） ザルコーマ１８０ガン細胞を移植した６１目よシ１日１
回連続１０日間、上に調製した試別を注射器を用いて腹
腔に０１−膜力した。■試料１儂度につき６匹のマウス
を使用した。対照は試料の溶１＋ｌＩとして用いた上記
ＣＭＣ入りＰＢＳを同様に投与したものとした。投−／
ｉ量の表示はマウス体重１　ｋｆｊあたりの１πσ数と
した。

（効果判定法） ガン細胞移植後２１１目に成長したガン組織を摘出し、
その重量を測定した（１群６匹の平均値）。

この重数と対照のものとの比（Ｔ／Ｃ）をとって効果判
定を行なった。対照のガン組織重量は１５〜３．５１で
あった。比の値が１００〜７１％のものを無効（−）、
７０〜５１％のものをやや有効（＋）、５０〜２１係の
ものを有効（甘）、２０〜０％のものを著効（＋１＋）
とした。結果を表１に示す。

表　１ ザルコーマ１８０移植ガンに対する効果（マウス） （庄） 比較例Ａ、特開昭５７−１７６９１４に記載の方法によ
り、メリア・アザノラクタ樹皮の熱水抽出液にアルコー
ルを加え、生成した沈澱を採取して得られた熱水抽出物
。

比較例Ｂ、特開昭５７−１７６９１５に記載の方法によ
り、メリア・アザジラクタ樹皮の熱水抽出液を透析膜で
処理し、透析内液から有効成分を採取して得られた熱水
抽出物。

試験例２ Ｂａｌｂ／Ｃマウス腹腔中で継代培養したメスＡ繊維肉
腫（Ｍｅｔｈ　Ａ　ｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ　）　９
１Ｂ胞を腹水とともにと９出し、生理食塩水で適当に希
釈し、細胞数がｉ、ｏｘｌｏ６個／ｍｅとなるように調
製した。この細胞懸濁液の０．１　ｙｄを５週令雄Ｂａ
１ｂ／Ｃマウス背部皮下に注射器を用いて移植した。−
匹当りの移植細胞数は１．０Ｘ１０５個である。試料は
、試験例１と同様にして調製し、１１日目上り１日１回
、１０日間連続してマウス腹腔内に投与した。判定は腫
瘍細胞移ｔｉｌｔ　２１白目に腫瘍組織を切り出し、そ
の重量を１ｆｌｌｌ定することによって行なった。結果
を表２に示す。

表　２ （庄） 比較例Ａ、比較しｌ　Ｂは表１に同じ。

表１および表２から明らかなように、本発明の多＋ｒ、
ｉｒ　Ｉ本Ｎ９Ｃ；　ｌは、ザルコーマ１８０１川形ガ
ンならびにメスＡ　俄ｉｆ肉腫に対して強い抑ｆｉｉｌ
ｌ効果を有している。−１：たその効力は比較例Ａおよ
びＢに比べて約５〜６倍強くなっており、有効成分の純
波が高くなっているととを示している。

試験例３ 急１′１ｇ毒性 本発明の多糖体Ｎ９ＣＩを体重２０±１ｇ−のＩＣＲ雄
マウマウス与して急性毒性試１験を行なった結果、ＬＤ
５ｏ値は、腹腔内膜力で６００　ｍｇ／ｋｇ以上であっ
た。

上記の薬（！ｉ！試験の結果からも明らかなように、本
発明の多糖体Ｎ９Ｇｌは顕著な抗腫瘍性を有し、毒性は
極めて低いので、制Ｊｌ’ｌｌｊ剤として（１ｉｚだ性
質を有する。定着固形ガンに対して強い抑制効果をイア
することから本発明の多糖体（は免疫賦活型の抗ｊ匝瘍
作用を有すると考えられる。

本発明の多糖体は、各種のＪりＪ疾Ｍに刻して有効であ
り、投Ｉｊ量は、症状、年令、体重などによって異なる
が、通常は成人に対して１日１００〜２，５００ｎ１！
７であり、１〜４回に分けて膜力することができる。

本発明の多゛：店体Ｎ９Ｃ１は任、き、所要の製剤用坦
体ま／ζは賦形剤を用いて経口または非経口投与用に製
剤化される。

経口投与用の錠剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤等は慣用
の賦形剤例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、と
うもろこしでんぷん、馬鈴薯でんぷん、砂楯、ラクトー
ス、タルク、ステアリン酸マグネシウム、アラビアコ８
ム等を含有していてもよい。経口投与用液体製剤は水性
または油性愁濁液１溶７１１−　Ｎ　ンロッフ０、エリ
キシル剤その他であってもよい。

注射用製ｊ″ｉｌｌは溶成または懸／）ｉｉ液の形態で
あシ、懸濁化剤、安定剤または分散剤のような処方剤を
含んでいてもよく、滅菌蒸留水、精油たとえばビーナツ
ツ油、と）もろこし油あるいは非水溶媒、ポリエチレン
グリコール、ポリプロピレングリコール等を含有してい
てもよい。

直腸内投与のためには坐剤用組成物の形で提供され、周
知の製剤相体たとえばポリエチレングリコール、ラノリ
ン、ココナツツ油等を含有していてもよい。

次に実施例イｃ示して本発明をさらに具体的に説明する
。

実施例１゜ テ１）　メリア・アザノラクタ樹皮乾燥品５０ｇ−をベ
ンゼン（５００ｍ１Ｘ３　）およびメタノール（５００
＋＋ＪＸ３）ｆ：用いて室温で２４時間抽出前処理し、
得られた抽出残渣を熱水２００−で３回抽出処理した。

得られた抽出液を合し、ロータリーエバポレーターで濃
縮乾固し、１９６０．５ｍｇの粉末を得た。

（２）上記（１）で得られた粉末ｔ　ｏ　ｏ　ｏ　ｍｇ
を水２００ｍ１！に溶解し、得られた水溶液に純エタノ
ールを攪拌しながら室温で徐々に加え、水溶液中のエタ
ノール濃度が８０％になったときに添加をやめ、生成し
た沈澱を遠心分離によシ採取し、５９４．５Ｖ１９の褐
色粉末を得た。

（３）上記（１）で得られた粉末５００　ｍ９を水５０
　＋ｎｌにとかし、この水溶液をスペクトラ　Ｉアロ（
分画分子Ｆｔ５０，０００）に入れ、水に対して透析し
た。

透析内液をロータリーエバポレーターを用いて濃縮乾固
して褐色の粉末３１０．πりを得た。

（４）上記（２）または（３）で得られた粉末１００　
ｈｒりを２０ｄの蒸留水に溶解し、ＣｏｎＡ−セファロ
ース（ファルマシア社製品）を充填したカラム（φ１．
ＯＸ１０ｃｍ）に通し、蒸留水で洗浄する。次いで０．
３Ｍのメチル−α−Ｄ−グルコシド水溶液で溶出した。

溶出液を集め水に対して、透析したのち減圧濃縮し、凍
結乾燥すると所望の多糖体Ｎ９Ｇｌが３５．８　ｍｇ得
られた。

（５）上記（４）でＣｏｎ　Ａ−セファロースの代シに
Ｌｅｎｔｉｌ　１ｅｃｔｉｎ−セファロース（ファルマ
シア社製品）を用いても同様の結果が得られた。

上記（４）および（５）における多糖体を七ファデ、ラ
スＧ−１００でケ゛ルろ過を行うとＮ９Ｇ１両分しか含
んでおらず、不純物が除去されていることが分る。

■０発明の具体的効果 上（（詳述したように、本発明によれば多糖体Ｎ９Ｇｌ
の工業的製造法が提供される。

多ン：店体Ｎ９Ｇｌは試験例で示したように、ザルコー
マ１１８０移ｔ＋ｉガンおよびメスＡ繊維肉腫に対して
強い抑制活性を示し、毒性は非常に低いので抗腫瘍剤と
して有用である。本発明によればかがる多糖体Ｎ　９　
Ｇ　ｌを工業的に有利に製造する方法が提供される。

−１゛

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　メリア・アデノラクタ樹皮を熱水で抽出し、該
   抽出液を透析膜法、アルコール沈澱法寸たは限外ろ過去
   により謂製し、得られた精製抽出液をレクチ／を固定化
   した担体と接触させて多１唐体を吸着さぜ、メチル−α
   −Ｄ−グルコ７トマｌｃ　Ｉｒ、１メチル−α−Ｄ−マ
   ンノシドで溶出し、溶出液を分両分７−量５０，０００
   以下の透析膜を用いて水に刻して透析し、透析内直から
   多：ｉＶ！ｉ　（４；、を採取することを特徴とする下
   記の物理化学的！ｊＮ性を有する多糖１＜　Ｎ　９　Ｇ
   　ｌの製法。 づ）　色と形状 凍結乾・燥品（・よ白色または淡Ｊソ（褐色粉末である
   。 （ロ）赤外線吸収スペクトル ＩＲｖ””ｃｗｉ”　：　３４００．２９２０，１６３
   ０，１４００゜１ａＸ １３６０．１１５０，１０７０，１０３０，９２０゜４
   ０ Ｃ）　紫外線吸収ス横りトル 水ｉ＠液液中１ｉｉｌｌ定で吸収極大を示さず末ＳＩＲ
   吸収のみを示す。 に）　溶解性 水に可溶でメタノール、エフノール、アセトン、エーテ
   ル、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンおよびヘキサ
   ン等の有限溶媒に不溶である。 ０う　呈色反応 フェノール硫酸反応、アンスロンｆ流酸反応に陽性てヨ
   ウ素の添加により青緑色を呈する。