JPS5911194A

JPS5911194A - 低分子ペプチド組成物の製造方法

Info

Publication number: JPS5911194A
Application number: JP11073983A
Authority: JP
Inventors: Kenichi Yamazaki; 研一山崎; Soji Takao; 荘二高尾; Hiroshi Hara; 博原
Original assignee: Terumo Corp
Current assignee: Terumo Corp
Priority date: 1983-06-20
Filing date: 1983-06-20
Publication date: 1984-01-20

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明はディペプチドおよびトリペプチドを主構成分と
するタンパク（低分子ペプチド）組成物の製造方法に関
するものである。

従来、タンパク質を酵素で加水分解し、ペプチドおよび
アミノ酸を製造することは食品分野を中心として行われ
てきた。しかしながら、そこでの目的はタンパク質を酵
素で分解することによって可溶化するとか２食品素材と
して適したものにするために低分子化（分子量が数千以
上）するとかのものばかりであり１分解生成物の分子量
そのものを問題としたものは全くなかった。

本発明者等はタンパク質の酵素的分解生成物と消化吸収
との関係を研究した結果。

（１）平均分子量を５００以下に下げること。

（２）分子量が７００以上のペプチドの含量が２０重量
％以下にすること、　（３）遊離アミノ酸の含量を２０
重量％以下にすること、すなわち、ディペプチドおよび
トリペプチドを主構成分とする低分子ペプチドを生成す
ることにより次のような多くの利点がもたらされること
を確認しった。

（１）同一アミノ酸組成のタンパク質あるいはアミノ酸
混合物とは腸管吸収能が異なり、全窒素吸収速度は上昇
し、アミノ酸相互の吸収拮抗が小さい。

（２）窒素収支が改善され、効率の高い窒素源となる。

（３）体重増加率が顕著に大きくなる。

（４）血中コレステロール値が低下する。

以」二のような多くの利点が確認されたが、それは以下
に詳細に証明する試験にもとずくものである。

次表Ｉに示す同一アミノ酸組成のダイエツトを開塾した
。

表　　１上表における窒素源は次の組成のものである。

Δ・・・ｌ　卵白タンパク質Ｂ・・・１．［平均分子量４２０．遊離アミノ酸８　重
量％のペプチド組成物Ｃ・　・・Ｉｎ　　遊離アミノ酸混合物Ｄ・・・ＩＶ　
　平均分子量１４００．ｉｄ離アミノ酸２重量％のペプ
チド組成物これらのダイエツトをそれぞれ１０匹のウィスター系ラ
ットに２週間自由摂取さ〜υた結果は表■の通りであっ
た。

表　　ＩＩ上表において。

Ｆｏｏｄ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙとは、それぞれのＷｅ
ｉｇｈｔＧａｉｎ／　Ｆｏｏｄ　１ｎｔａｋｅの値Ｉを
ベースとした比を表示するものである。この表から次の
ことが理解できる。本発明の方法により得られる同一ア
ミノ酸組成の低分子ペプチド組成物（ＩＩ）は窒素保有
量（収支）が他のものに比べて大幅に大きく、その結果
Ｆｏｏｄ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　　が顕著に高くなり
１体重増加がみられるにもかかわらず血中コレステロー
ル値が低下することが判明した。

更に窒素源というマクロな考察ではなく各アミノ酸に対
する吸収についての考察を行うために２４時間絶食させ
たウィスター系ラットの胃にチューブで強制的にｆｉｌ
述したダイエツトに使用した窒素源試料（１）　、　　
（ＩＩ）　、　　（ＩＩＩ）および（ｒＶ）を注入して
一定時間毎に門脈から採血してアミノ酸濃度を測定して
時間あたりの吸収量を測定した。その結果を表ＩＩＩお
よび表ＩＶに示す。なお、結果はそれぞれ５匹づつのラ
ットの平均値である。表■は吸収量がピーク値に達する
までの各アミノ酸の平均吸収速度であり１表１■はほぼ
理想アミノ酸組成の試料（Ｘ）と上記試料（＋）〜（１
ｖ）とのアミノ酸吸収パターンの比較表である。

表　　　■ この表から明かなように１本発明の方法によるペプチド
組成物（ｎ）は卵白タンパク譬（１）のように吸収が不
完全ではなく、アミノ酸混合物（ｆｉｌ）と比較してア
ミノ酸相互の吸収拮抗の程度が大きくなく、従来のタン
パク質分解物（ＩＶ）に比較してもその初期吸収速度は
約３割も大きい、表　　　■ アミノ酸の吸収は理想アミノ酸パターン（Ｘ）に近いの
が望ましい。然るに１表ＩＶは　卵白タンパク質（１）
およびアミノ酸混合物（ＩＩＩ）においては特にＰｈｅ
　Ｔｙｒ　　および　ｌ１ｉｓの理想吸収パターン（Ｘ
）からの単離率が大きいことを明瞭に示している。本発
明によるペプチド組成物（ＩＩ）は理想吸収パターンに
近く、バランスのとれた吸収を実現することが確認され
た。以上の事実は吸収されたアミノ酸自身あるいは他の
アミノ酸の代謝に大きな影響を与えるものと推定される
。その証拠の一つがコレステロール値の低下であろうと
思われる。

以上の試験結果から分るような明かに有用性のある低分
子ペプチドは従来着眼されていなかっただけに、その有
効な製造方法は開発されていない。従って１本発明の目
的は上記の有用性のある低分子ペプチド組成物の製造方
法を提供することにある。

本願発明は１任意め配属のタンパク質原料より遊離アミ
ノ酸含量および分子量７００以上のべ、プチド含量を２
０％以下としたディペプチドおよびトリペプチドを主構
成分とする平均分子量５００以下の低分子ペプチド組成
物の製造方法において。

任意の配属のタンパク質原料を氷に５〜２０プロテアー
セおよび／またはペプシンを同時にまたは逐次的に添加
して２５〜６０°Ｃの温度で８〜７２時間遊離アミノ酸
の生成を抑えつつ酵素加水分解反応を行わしめた後、加
熱して酵素を失活させる低分子ペプチド組成物の製造方
法である。

上記表１−ＩＶに記載する試験結果から結論づけられる
前述したような多くの利点を有するデイペプチドおよび
トリペプチドを主成分とする低分子ペプチドについて従
来は全く問題とされていなかった。本発明者等はかかる
低分子ペプチドを任意の配属のタンパク原料より生成す
ることを試みた結果１次のようなことが明らかになった
（表■参照）。

（１）タンペク質加水分解酵素の中ではペプシンが最も
可溶力が強いが、ペプシンでの分解はある程度の分子量
にまで小さくなるとそれからは容易に進行せず、平均分
子量を１０００以下にするのは極めて困難である。

（２）中性プロテア−セの分解力は酸性プロテアーゼの
それと比較して弱く、生成物の平均分子量を１０００以
下にまでする酵素はプロナーゼを除いてはない。しかし
、複合酵素であることもあって遊離アミノ酸の生成が著
しく大きく、平均分子量が５００近くになる段階では５
０％以上がｉｌｌ、離アミノ酸となっている。

（３）分解力の点では酸性プロテアーゼが優れており１
モルシン（藤沢薬品　起源Ａｓｐｅｒｇ目１ｕｓｓａｉ
ｔｏｉ）　　、サンプローゼＦ（成魚共栄物産　起源Ｒ
ｈ１ｚｏｐｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）　　などが遊離
アミノ酸の生成も少なく有用である。

（４）現在知られているいずれの酵素も単独では。

分子量を希望する程十分に小さくすることはできず１種
々の組合せの酵素分解反応を検討した結果、ペブシンー
サンプローセ１モルシン−サンプロ（１） −セの酵素の組合せが希望する稈十分に分子量を小さく
、かつＭｔ！ｉ！ｌＩアミノ酸の含量を少なくするのに
有効であることが確認された。以下に実施例を挙げるが
１本発明をこれらは例証するものにすぎず１本発明はこ
れらに限定されることなく種々の変更を加えるることが
できる。

〔実施例Ｉ〕

乾燥卵白（タンパク含量８２４％）５０ｇを１ｐの水に
溶解させ、塩酸でＰｌ＋を３に調節し。

モルシンＩｇおよびサンプローゼＦを１ｇ添加してｐＨ
を３に維持しつつ４０°Ｃで２４時間反応させた。反応
復液を１００°Ｃで１０分間加熱して＾ゲ素を失活さも
た後、３０００　ｒ、ｐ、ｍ　　（１５００Ｇ　）で１
０分間遠心分離し不溶分を除去して上澄液を凍結乾燥し
た。この生成物の収率は原料タンパク質に対して９３．
２％であり、平均分子量は３４０であった。この生成物
のゲル濾過結果からその８８　ｗｔ％以上は分子量７０
０以下であった。なお、７００以下の識別をゲル濾過で
行うことはできない。生成物中の遊離アミノ酸含量は８
．５％であった。

〔実施例■〕

使用酵素以外は実施例Ｉと同様の条件で、最初にモルシ
ン　１ｇを次いで８時間後、サンプローゼＦを１ｇ添加
して更に　１０時間反応させた後、実施例■と同様の処
理をした。得られた生成物の収率は９３．９％、平均分
子量は３５０．遊離アミノ酸含量は８．１％で、ケル濾
過結果から９０％　以上が分子量７００　　以下であっ
た。

〔実施例■〕

使用酵素以外は実施例■と同様の条件で、ペプシン１ｇ
およびサンプローゼＦをＩｇを同時に添加して実施例Ｉ
と同様の処理をした。得られた生成物の収率は９４％、
平均分子量は４３０　ＪｔＭアミノ酸含量は８．７％で
、ゲル濾過結果から９０％以上が分子量７００　　以下
であった。

〔実施例ＩＶ）使用酵素以外は実施例Ｉと同様の条件で、最初。

にペプシン　１ｇを次いで６時間後、サンプロ−セＦを
　１ｇ添加して更に　１０時間反応させた後、実施例Ｉ
と同様の処理をした。得られた生成物の収率は９６％、
平均分子量は４１０．遊離アミノ酸含量は９．２％で、
ケル濾過結果から９１％　以−ヒが分子量７００　　以
下であった。

〔実施例■〕

使用酵素以外は実施例Ｉと同様の条件で、最初にペプシ
ン０．２５ｇ　　を３時間後モルシン　１ｇを。

さらに３時間後サンプローゼＦを１ｇ添加して更に　１
０時間反応させた後、実施例Ｉと同様の処理をした。得
られた生成物の収率は９５％、平均分子量は３７０　、
！ｌｔｌ子離ノ酸含量は１１．３％で、ゲル濾過結果か
ら９３％　以上が分子量７００　　以下であった。

上記実施例における生成物の評価方法は次のとうりであ
る。

（１）生成物の収率生成物中の窒素量 −ｘｔｏ。

原料中の窒素量窒素の分析はケルダール分析法によった。

（２）生成物の平均分子量〔原料タンパク中のアミノ酸の平均分子量〕〔生成物１
ｇ中のアミノ基モル数〕〔生成物１ｇの完全加水分解物中のアミノ基モル数〕ア
ミノ基の定量はＴＮＢＳ　　（Ｔｒｉ−Ｎｉｔｒｏ−Ｂ
ｅｎｚｅｎ−３ｕｌｐｈａｎｉｃ　ａｃｉｄ　）法によ
り、生成物の完全加水分解は６Ｎ　ｌ１ｃｌ　　中で　
１１０°Ｃ９２４時間加水分解によった。

（３）遊離アミノ酸定量生成物溶液を塩基性炭酸銅で処理し、アミノ酸およびペ
プチドを銅錯体とし、これを陰イオン交換樹脂に吸着さ
せ、０．０５Ｍホウ酸緩衝液で溶出させたＭＩｔｉＩｔ
アミノ酸を自動アミノ酸分析機で定量した。ただし、酸
性アミノ酸についてはホウ酸緩衝液で遊離してこないの
で生成物をそのままアミノ酸分析機にかけて定量した。

アミノ酸分析機での酸性アミノ酸の分離位置ではペプチ
ドの影響がないので正確な定量が可能である。

（４）ケル濾過分画分子量が最小の５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−１０を用い
て分子量７００以下のペプチドの比率を求める。

実施例においては、原料タンパク質は卵白を用いている
が、これに限られずカモイン。大豆、小麦グルテン、魚
粉、クロレラ、酵母タンパク等のみならずプラスティン
反応により特定のアミノ酸を強化し、たタンパク質用物
質をも使用でき、特に低分子ペプチドを栄養剤に用いる
場合にはアミノ酸組成からみて卵白に勝る原料はない。

原料のタンパク質の基質濃度は５〜２０　ｗ／　ｖ％程
度にするのが好適である。これは、　５％　以下では実
用的でなく、２０％以上では粘稠になりすぎるからであ
る。添加する６ゲ素量は目的に適する分解度となるよう
基質に対して　１ｗｔ％以上、好ましくは２〜５ｗｔ％
　がよい。反応時間は基質濃度、酵素量、反応温度等の
関数となり、アミノ酸にまで分解しない程度のペプチド
組成物が得られる時間にとめる。反応温度は使用する酵
素の至適温度に応して決める。使用する酸は強酸でも弱
酸でも良い。

本発明の方法の実施例におけるように二種以上のプロテ
アーゼの組合せでタンパク質を分解した場合と単一のプ
ロテアーゼで分解した場合を比較のために下表■に示す
。

表　　■ − ベトノ々。

酸− 中アモサ実施例および上表■の比較から１本発明の方法によれば
種々のタンパク源から高収率で目的とするデイペプチド
およびトリペプチドを主構成分とする分子量が５００　
　以下に分解され、しかもＭｍアミノ酸の含量が］０ｗ
ｔ％以下と低くなっていてアミノ酸の吸収拮抗が少なく
１分子量が７００以上の比較的高分子のペプチド含量が
２０％以下と少ない特徴を有する低分子ペプチドが確実
に製造されることが容易に理解できる。

特許出願人　　テルモ株式会社

Claims

【特許請求の範囲】

（１）任意の起源のタンパク質原料より遊離アミノ酸含
量および分子量７００以上のペプチド含量を２０％以下
としたディペプチドおよびトリペプチドを主構成分とす
る平均分子量５００以下の低分子ペプチド組成物の製造
方法において。任意の起源のタンパク質原料を水に５〜２０プロテアー
ゼおよび／またはペプシンを同時にまたは逐次的に添加
して２５〜６０°Ｃの温度で８〜７２時間遊離アミノ酸
の生成を抑えつつ酵素加水分解反応を行わしめた後、加
熱して酵素を失活させることを特徴とする低分子ペプチ
ド組成物の製造方法