JPS5925366A - 新生理活性物質ジプロチン及びその製造法 - Google Patents
新生理活性物質ジプロチン及びその製造法Info
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- JPS5925366A JPS5925366A JP57132161A JP13216182A JPS5925366A JP S5925366 A JPS5925366 A JP S5925366A JP 57132161 A JP57132161 A JP 57132161A JP 13216182 A JP13216182 A JP 13216182A JP S5925366 A JPS5925366 A JP S5925366A
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- diprotin
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ジペプチジルアミノ被ゾチダーゼ■に対して
酵素阻害活性を・示す新規な生理活性物質ジグロチン（
Ｄｌｐｒｏｔｌｎ ） Ａ、 ＢおよびＣに関し、
またノプロチンＡ・ Ｂの製造法に関するものである。
酵素阻害活性を・示す新規な生理活性物質ジグロチン（
Ｄｌｐｒｏｔｌｎ ） Ａ、 ＢおよびＣに関し、
またノプロチンＡ・ Ｂの製造法に関するものである。
本発明者らは、東京都杉並区久我山の土壌よシ分離され
たバクテリアであってＢＭＦ ６７３− ＲＦＩ 株と
名付けた菌を培養し、得られる培養物中にジペプチジル
アミノペプチダーゼＩＹ阻害活性を有するトリペプチド
物質二つが存在することを見出した。
たバクテリアであってＢＭＦ ６７３− ＲＦＩ 株と
名付けた菌を培養し、得られる培養物中にジペプチジル
アミノペプチダーゼＩＹ阻害活性を有するトリペプチド
物質二つが存在することを見出した。
その酵累阻轡物質の採取方法について検討し、それらの
物質の４ｉ離に成功し、°まだ本物質が新規物質である
ことを確認してジプロテンＡ、ノプロチンＢと命名した
。またその類縁化合物としてのジグロチンＣを合成し、
本発明を完成した。
物質の４ｉ離に成功し、°まだ本物質が新規物質である
ことを確認してジプロテンＡ、ノプロチンＢと命名した
。またその類縁化合物としてのジグロチンＣを合成し、
本発明を完成した。
本発明者らは、さらに医薬としてのジグロチンの有用性
について検討して、本物質が細胞性免疫゛。
について検討して、本物質が細胞性免疫゛。
に対して増強作用を有して免疫賦活剤として有用である
ことを見出した。
ことを見出した。
グリシルゾロリン−ノーナフチルアミドのソベプチゾル
アミノペプテタ９−ゼＩＶによる分解を阻止するジプロ
チンＡ、 Ｂ、 Ｃの効力についてル１ぺた結呆、
後述の試験例に示されるごとく、抗ジＲ７″テジルアミ
ノベプチダーゼ■活性を有することが確しヨされた。
アミノペプテタ９−ゼＩＶによる分解を阻止するジプロ
チンＡ、 Ｂ、 Ｃの効力についてル１ぺた結呆、
後述の試験例に示されるごとく、抗ジＲ７″テジルアミ
ノベプチダーゼ■活性を有することが確しヨされた。
従って、第１の本発明の要旨とするところは、次の一般
式： ％式％（） （但しジプロチンＡでは、Ｒはエチル基ｒ Ｒ２は水
Ｘ、Ｒ３はメチル基であシ、ゾプロチンＢでは、Ｒ’
はメチル基、Ｒ，２はメチル基、Ｒ３は水嵩であり、
ジプロチンＣでは、Ｒはメチル基−Ｒ２は水嵩・ Ｒ３
はエチル基である）で表わされる抗ノペゾテジルアミノ
ペプチメーゼ■活性を有する新生理活性物質ジゾロチン
Ａ、 ＢおよびＣ又はその塩又はエステルにある。
式： ％式％（） （但しジプロチンＡでは、Ｒはエチル基ｒ Ｒ２は水
Ｘ、Ｒ３はメチル基であシ、ゾプロチンＢでは、Ｒ’
はメチル基、Ｒ，２はメチル基、Ｒ３は水嵩であり、
ジプロチンＣでは、Ｒはメチル基−Ｒ２は水嵩・ Ｒ３
はエチル基である）で表わされる抗ノペゾテジルアミノ
ペプチメーゼ■活性を有する新生理活性物質ジゾロチン
Ａ、 ＢおよびＣ又はその塩又はエステルにある。
本発明のジプロチンＡ・ ＢならびにＣは夫々に次の構
造を有する。
造を有する。
（Ｌ） （Ｌ） （Ｌ）ノプロチン人（
即ちＬ−イソロイシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−イソロイシ
ン）。
即ちＬ−イソロイシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−イソロイシ
ン）。
Ｈ３
匡
（Ｌ） （Ｌ） （Ｌ）
ジプロチンＢ（即ちＬ−）９リルーＬ−プロリル−Ｌ−
ロイシン）。
ロイシン）。
１
（Ｔ、） （Ｌ） （Ｌ）、Ｐ、ＩＩロ
チンＣ（［ｆＪちＬ−パリルーＬ−７０ロリルーＬ−イ
ソロイシン）。
チンＣ（［ｆＪちＬ−パリルーＬ−７０ロリルーＬ−イ
ソロイシン）。
ジプロチンＡ及びＢは後記の実施例に示すごとく・ シ
フ’ロチン生産菌の垢養Ｐ液をダウエックス５０Ｗのク
ロマトグラフィー等で分画することによりｂづれも無色
の粉末として取得できる。
フ’ロチン生産菌の垢養Ｐ液をダウエックス５０Ｗのク
ロマトグラフィー等で分画することによりｂづれも無色
の粉末として取得できる。
本発明化合物の物性は次の通りである。
即ち、ジプロチンＡは、融点１７８〜！８０°Ｃ質光分
析法で得られる分子量は３４１である。元素分析値は、
Ｃ５９，４２係、）Ｉ８．９０％、 Ｎ １２．０
５チ、であシ、Ｃ＋ ７Ｔ−Ｉ３１Ｎ３０４ の分子
式を得る。ジプロチン人の赤外部吸収スペクトル（臭化
カリウム錠〕は、添付図面第１図に示す通りであｐ 、
３４ＣＩ０゜２９６０、 ２８７５． ＋６５０．
１５９０． １４６０． １３９０゜＋２４０． １
２００． １１４５． １１００．９ｑｏ、 ｑｏｓ
、 ｇｓｏ。
析法で得られる分子量は３４１である。元素分析値は、
Ｃ５９，４２係、）Ｉ８．９０％、 Ｎ １２．０
５チ、であシ、Ｃ＋ ７Ｔ−Ｉ３１Ｎ３０４ の分子
式を得る。ジプロチン人の赤外部吸収スペクトル（臭化
カリウム錠〕は、添付図面第１図に示す通りであｐ 、
３４ＣＩ０゜２９６０、 ２８７５． ＋６５０．
１５９０． １４６０． １３９０゜＋２４０． １
２００． １１４５． １１００．９ｑｏ、 ｑｏｓ
、 ｇｓｏ。
６８０ （ｔ“ｍ ） に特異吸収帯を示す。ノプ
ロテンＡのプロトン核磁気共鳴スペクトル（重水溶液、
９０ＭＨｚ ）はｌ・Ｉ’３〜２．０６ （ＣＨ３Ｘ
４． ＣＨ２Ｘ ２ ）。
ロテンＡのプロトン核磁気共鳴スペクトル（重水溶液、
９０ＭＨｚ ）はｌ・Ｉ’３〜２．０６ （ＣＨ３Ｘ
４． ＣＨ２Ｘ ２ ）。
２．０６〜３・００（ＣＨ２Ｘ２．ＣＨＸ２）、３・８
６〜４−４３ （ＣＨ２）、 ４．４３〜４・８３ （
ＣＩＩ Ｘ ２ ）および４−８３〜５・３３ （ＣＨ
） ｐｐｍ に吸収を示す。
６〜４−４３ （ＣＨ２）、 ４．４３〜４・８３ （
ＣＩＩ Ｘ ２ ）および４−８３〜５・３３ （ＣＨ
） ｐｐｍ に吸収を示す。
ジグロチンＢは融点１５８〜１６０°Ｃ１質ｆｉｉ分析
法で得られる分子量は３２７である。元素分析値はＣ５
８，２０％、 ＨＩ３．８８ ｑ６． Ｎ １２．５２
係、であり、Ｃ＋６ＨＩＮ３０４ の分子式を得る。
法で得られる分子量は３２７である。元素分析値はＣ５
８，２０％、 ＨＩ３．８８ ｑ６． Ｎ １２．５２
係、であり、Ｃ＋６ＨＩＮ３０４ の分子式を得る。
ジプロチンＢの赤外部吸収スペクトル（臭化カリウム錠
）は第２図に示す通りであシ、３３９０゜２９６０、
２１３７５． １６５０． １５８５． １５２０．
１４７５゜＋４５５． １４００． ＋３７０． １
２４０． １２００． １１６５゜＋１１０． １０５
０． １，０００． ９４０． ８８０． ７６０．
７１０１ Ｃａ１ｒ）に特異吸収帯な廟する。ノプロチンＢのプロ
トン核磁気共鳴スペクトル（重水溶液、９ＱＭＩＩｚ
）は１．１６〜Ｉ・７３ （ＣＨ３ｘ ４ ）、 ’
１．８６〜２−２０ （ＣｌＩ２． Ｃ）ｔ ）、
２．２０〜３．０３ （（Ｊ１２ Ｘ ２゜ＣＨ）、
３．８６〜４．３６ （ＣＨ２）、 ４．４６〜４
劃０（ＣＨＸ２）、 および４．８０〜５．３３ （
ＣＩＩ） ｐｐｍに吸収を示す。
）は第２図に示す通りであシ、３３９０゜２９６０、
２１３７５． １６５０． １５８５． １５２０．
１４７５゜＋４５５． １４００． ＋３７０． １
２４０． １２００． １１６５゜＋１１０． １０５
０． １，０００． ９４０． ８８０． ７６０．
７１０１ Ｃａ１ｒ）に特異吸収帯な廟する。ノプロチンＢのプロ
トン核磁気共鳴スペクトル（重水溶液、９ＱＭＩＩｚ
）は１．１６〜Ｉ・７３ （ＣＨ３ｘ ４ ）、 ’
１．８６〜２−２０ （ＣｌＩ２． Ｃ）ｔ ）、
２．２０〜３．０３ （（Ｊ１２ Ｘ ２゜ＣＨ）、
３．８６〜４．３６ （ＣＨ２）、 ４．４６〜４
劃０（ＣＨＸ２）、 および４．８０〜５．３３ （
ＣＩＩ） ｐｐｍに吸収を示す。
ジプロチンＣは後記の実施例に示すとと＜Ｌ−イソロイ
シンから通常のペプチド合成法により製造できる。
シンから通常のペプチド合成法により製造できる。
ジゾロチンＣの物性値は次の通υである。質量分析法で
得られる分子量は３２７である。元素分析値はＣ５８，
３７係、 Ｈ８，８２％、 Ｎ １２．７３条 であり
、ＣＩ ６Ｈ２９Ｎ３０４ ０分子式を得る。赤外部吸
収ヌベクトル（臭化カリウム錠）は第３図に示す通りで
あり、３４３０． ２９７５． ２８９０． ＋６５
Ｑ、 １５３０゜１４１０、 １２４５． １２１０
． １１５０． １０６０． ＋０００゜８６５１
６９０ ＣＣｍ ） に特異吸収帯を有する。ノグ
ロチンＣのプロトン核磁気共鳴スペクトル（重水溶液、
９０ＭＨｚ ）ｋｌ：１．１６〜２．０６ （ＣＨ３
Ｘ４ 。
得られる分子量は３２７である。元素分析値はＣ５８，
３７係、 Ｈ８，８２％、 Ｎ １２．７３条 であり
、ＣＩ ６Ｈ２９Ｎ３０４ ０分子式を得る。赤外部吸
収ヌベクトル（臭化カリウム錠）は第３図に示す通りで
あり、３４３０． ２９７５． ２８９０． ＋６５
Ｑ、 １５３０゜１４１０、 １２４５． １２１０
． １１５０． １０６０． ＋０００゜８６５１
６９０ ＣＣｍ ） に特異吸収帯を有する。ノグ
ロチンＣのプロトン核磁気共鳴スペクトル（重水溶液、
９０ＭＨｚ ）ｋｌ：１．１６〜２．０６ （ＣＨ３
Ｘ４ 。
ＣＨ２）、 ２．０６〜３．０６ （ＣＨ２Ｘ ２．
ＣＩ（Ｘ ２ ）。
ＣＩ（Ｘ ２ ）。
３．８６〜４．４３ （ＣＨ２）、 ４．４３〜４．
８６ （ＣＨ×２）および４．８６〜５．３３ （ＣＨ
） ｐｐｍ に吸収を示す。
８６ （ＣＨ×２）および４．８６〜５．３３ （ＣＨ
） ｐｐｍ に吸収を示す。
捷た、第２の本発明の要旨はバチルス妨に妨するノプロ
チン生産菌を培養してノブロチ／Ａ又は／及びノン°ロ
チンＢを培養物中に生産、Ｓ′積させ、きらにこれらを
単独に又は混合物として採取することを・特徴とする新
規生理活性物質ジプロチン人又は／及びＢの製造法にあ
る。
チン生産菌を培養してノブロチ／Ａ又は／及びノン°ロ
チンＢを培養物中に生産、Ｓ′積させ、きらにこれらを
単独に又は混合物として採取することを・特徴とする新
規生理活性物質ジプロチン人又は／及びＢの製造法にあ
る。
本発明の方法において、ノブロテン生’ＢｚＷｉとは、
ジプロチン人又はＢ、又はこれらの両者を生産する菌を
意味する。本発明のノプロチンの生産に使用される生Ｗ
１ｆｆｉの一例には、本発明者らによって東京都杉並
区久我山で採取された土壌より分離されたバクテリアで
あって、ＢＭＦ ６７３− ＲＦＩ株と命名した菌があ
る。本菌株は、工業技術院徽生物工柴技術研’）？ｒ９
ｒに、昭オ０５７年７月１５日保管委託し、徴工研拍寄
第６６２３号（ＦＥｌｔＭ −Ｐ ６６２３ ）の受託
Ｎｉ号がｆ−１されて保管され°Ｃいる。
ジプロチン人又はＢ、又はこれらの両者を生産する菌を
意味する。本発明のノプロチンの生産に使用される生Ｗ
１ｆｆｉの一例には、本発明者らによって東京都杉並
区久我山で採取された土壌より分離されたバクテリアで
あって、ＢＭＦ ６７３− ＲＦＩ株と命名した菌があ
る。本菌株は、工業技術院徽生物工柴技術研’）？ｒ９
ｒに、昭オ０５７年７月１５日保管委託し、徴工研拍寄
第６６２３号（ＦＥｌｔＭ −Ｐ ６６２３ ）の受託
Ｎｉ号がｆ−１されて保管され°Ｃいる。
以下にこの百ｊ体の蘭学的性状について記述する。
ＩＩＭＦ６７３−ＲＦ Ｉ株の菌学的Ｉｇ−秋／形 愈
（１１，７１１１胞は稈’Ｉ＆Ｊ ｘ大きさｔユ０・６
〜１・ＯＸＩ・５〜２．５ミクロンである。
〜１・ＯＸＩ・５〜２．５ミクロンである。
（２） 細胞の多形性は、特に認められない。
（３） 活発な運動性を示し、周鞭毛を有する。
（４）胞子を有する。その形は卵円形、大きさは０．６
〜０．７ Ｘ １．４〜１・６ミクロン位置は中立（ｃ
ｅｎｔｒａｌ ）、菌体の膨隆は認められない。
〜０．７ Ｘ １．４〜１・６ミクロン位置は中立（ｃ
ｅｎｔｒａｌ ）、菌体の膨隆は認められない。
また耐熱性である。
、（５） ダラム染色は陽性である。
（６） 非抗酸性である。
ユ各種培地における生育状態
肉汁ゼラチン穿刺培養以外は、すべて３０°Ｃで試験し
た。
た。
（１）肉汁寒天平板培養
コロニーは光沢のない、不透明な円形で、辺縁は不規則
、色はうす黄（ｐａｌｅ ｙｅｌｌｏｗ ）からうず黄
茶（ｐａｌｅ ｙｅｌｌｏｗｉｓｈ ｂｒｏｗｎ ）
を示す。
、色はうす黄（ｐａｌｅ ｙｅｌｌｏｗ ）からうず黄
茶（ｐａｌｅ ｙｅｌｌｏｗｉｓｈ ｂｒｏｗｎ ）
を示す。
培養後、４０〜４８時間を経過すると・コロニーは辺縁
部からしわの入った発育を呈する。拡散性色素は認めら
れない。
部からしわの入った発育を呈する。拡散性色素は認めら
れない。
（２１肉汁寒天系１面培地
Ｌ３種線に沿つＣ一様に生育し、不透明で光沢がなく、
うず黄（ｐａｌｅ ｙｅｌｌｏｗ 、）がらうす黄茶Ｃ
ｐａｌｅ ｙｅｌｌｏｗｉｓｈ ｂｒｏｗｎ ） を
示す。拡散性色素はＬだめられない。
うず黄（ｐａｌｅ ｙｅｌｌｏｗ 、）がらうす黄茶Ｃ
ｐａｌｅ ｙｅｌｌｏｗｉｓｈ ｂｒｏｗｎ ） を
示す。拡散性色素はＬだめられない。
（：＋＋肉泪９＋’１． ｔ・ト培必・培金後２４時間
で培地表面に菌膜をっ（ｐ）、３日目には培地表面な菌
膜がおおい、試験管底部にＹ、′」体が沈設して、培地
がγ；、ｊってくる。
で培地表面に菌膜をっ（ｐ）、３日目には培地表面な菌
膜がおおい、試験管底部にＹ、′」体が沈設して、培地
がγ；、ｊってくる。
（４）肉汁ゼラチン；）シ刺培養
２０°Ｃ培費でｔま、表面と詠刺線に沿って１ｔ４の生
育が眩、′、３められ、培６ｕ後５日目頃に液化が認め
られた０イーの型に１層状である。
育が眩、′、３められ、培６ｕ後５日目頃に液化が認め
られた０イーの型に１層状である。
３０°Ｃ培養でｔ、ｊ、２４時間−Ｃ表面に菌Ｈ（スを
形成し、３日目頃からｆｅｅｌ股上にしわがＨ３められ
る。
形成し、３日目頃からｆｅｅｌ股上にしわがＨ３められ
る。
ゼラチンの液化（：［、培養後２８月頃がら如才り、１
４４日目ｔｌは完了した〇 （５）ミ ル り ＢＣＰミルク培地で培養すると、培養後２日目に完全な
凝ば１が観察され〜直ちにゝプトン化が始−まり、培養
後１週間でほぼ完了した。反応は、アルカリ性である。
４４日目ｔｌは完了した〇 （５）ミ ル り ＢＣＰミルク培地で培養すると、培養後２日目に完全な
凝ば１が観察され〜直ちにゝプトン化が始−まり、培養
後１週間でほぼ完了した。反応は、アルカリ性である。
３、生理的性質（特に記さない限り、培養温度は全て３
０°Ｃ）（１） 硝酸塩の還元：陽 性 （２）脱窒反応（駒形らの方法：長谷用武治細著；微生
物の分類と同定、２２３頁・東京大学出版会、 １９７
５年）：陰 性 ＋３１ＭＲテスト：陰 性 ＋４）Ｖ−Ｐテスト：陽 性 （５） インドールの生成：陰 性 （６１硫化水素の生成：陰 性 （７１デンプンの加水分解：陽 性 （８） クエン酸の利用：Ｋｏｓｅｒの培地、 Ｃｈ
ｒｉｓｔ−ｅｎｓｅｎの培地ともに生育する。
０°Ｃ）（１） 硝酸塩の還元：陽 性 （２）脱窒反応（駒形らの方法：長谷用武治細著；微生
物の分類と同定、２２３頁・東京大学出版会、 １９７
５年）：陰 性 ＋３１ＭＲテスト：陰 性 ＋４）Ｖ−Ｐテスト：陽 性 （５） インドールの生成：陰 性 （６１硫化水素の生成：陰 性 （７１デンプンの加水分解：陽 性 （８） クエン酸の利用：Ｋｏｓｅｒの培地、 Ｃｈ
ｒｉｓｔ−ｅｎｓｅｎの培地ともに生育する。
（９） 無機窒累源の利用：硝酸ナトリウム、硫酸ア
ンモニウムのいずれも利用する。
ンモニウムのいずれも利用する。
ａｃｉ色ｘの生成（キングＡおよびキングＢ培地。
栄研）：キングＡ培地では、はんのわずかに黄色味を帯
び、キングＢ培地では、黄色の溶解性色素を認めた。
び、キングＢ培地では、黄色の溶解性色素を認めた。
０υ ウレアーゼ（尿素培地、栄？ｉｊＦ ） ：陰
性ａ邊 オキツメ１−ゼ：陰 性 ＯＪ カタラーゼ：陽 性 ａ６生育の範囲： ｐＨ４，４〜ｐＨ８・Ｂ ノｏｉｉ
ｘｕ テ生育を認め、最適ｐＨは、７．０〜８．０であ
る。丑た、１０°Ｃ〜４５°Ｃの範囲で生育を認め・最
適温度ｔ」２４°Ｃ〜３０°Ｃである。
性ａ邊 オキツメ１−ゼ：陰 性 ＯＪ カタラーゼ：陽 性 ａ６生育の範囲： ｐＨ４，４〜ｐＨ８・Ｂ ノｏｉｉ
ｘｕ テ生育を認め、最適ｐＨは、７．０〜８．０であ
る。丑た、１０°Ｃ〜４５°Ｃの範囲で生育を認め・最
適温度ｔ」２４°Ｃ〜３０°Ｃである。
ｆｌｓ 酸素に対する態度：通性嫌気性［１０−Ｆテ
スト（Ｈｕｇｈ −Ｌｅｌｆａｏｎ法による）二発ｊｊ
？型である。
スト（Ｈｕｇｈ −Ｌｅｌｆａｏｎ法による）二発ｊｊ
？型である。
ａη 糖類からの酸およびガスの生成（Ｈｕｇｈ −Ｌ
ｅｌｆａｏｎの培地を使用） 糖類からの酸の生成 ガスの生成はすべて陰性であった。
ｅｌｆａｏｎの培地を使用） 糖類からの酸の生成 ガスの生成はすべて陰性であった。
θυ リゾナーム感受性
ｕ ｔｌ 上Δ地（ペプトン１０ｇ、牛肉エキス１０ｇ
、 ＮａＣＪ ５ｇ、ｐＨ７，４）に、別に滅菌し
たリゾチームを０．００！係になるように加え、１３Ｍ
Ｆ６７３− ＲＦＩ株を接種し、ロータリー・シェーカ
（１８０ｒ−ｐ・＋ｎ（、）で３０°Ｃ１２４時間振と
り培養を行い、菌の増殖を詔めた。
、 ＮａＣＪ ５ｇ、ｐＨ７，４）に、別に滅菌し
たリゾチームを０．００！係になるように加え、１３Ｍ
Ｆ６７３− ＲＦＩ株を接種し、ロータリー・シェーカ
（１８０ｒ−ｐ・＋ｎ（、）で３０°Ｃ１２４時間振と
り培養を行い、菌の増殖を詔めた。
０１ レシトピテリン（ＬＶ）反応（卯エバ（反応）
ニレシト・ビテリン寒天培地（ＢＢｌｌｌｌｎ ａｎｄ
Ｌｕｃｌｃｈｕｒｓｔ ： Ｊ、 ａｐｐｌ、 Ｂｉｃ
ｔ、 ２０巻、 ９０頁）に菌を接種し、２日目になる
と生食した菌の周辺は透り」になり、貞しく；様層が認
められた。ＬＶ反応は、陽性である。
ニレシト・ビテリン寒天培地（ＢＢｌｌｌｌｎ ａｎｄ
Ｌｕｃｌｃｈｕｒｓｔ ： Ｊ、 ａｐｐｌ、 Ｂｉｃ
ｔ、 ２０巻、 ９０頁）に菌を接種し、２日目になる
と生食した菌の周辺は透り」になり、貞しく；様層が認
められた。ＬＶ反応は、陽性である。
以上の性状を安約すると、ＢＭＦ ６７３− ＲＦＩ株
は通性嫌気性のグラム１５９性のイ」芽胞桿菌で、周鞭
毛を翁し、連１ｊｌｌ性を示す。芽胞は卵円形で中立（
ｃｅｎｔｒａｌ ）＋耐熱性である。菌体の膨隆は認め
られず、非抗酸性である。外大培地での生育は不透明で
、辺縁は不規則、接抽線に清って一様に生育し、のちに
、培地表面にわずかにひろがって増殖する。ゼラチンを
液化し、ミルクを凝固、ベゾトン化する。硝酸塩を還元
し、脱窒反応陰性・ＭＲテスト陰性、ｖ−ｐテスト１％
性である。インドールは検出されず、硫化水嵩を生成し
ない０デンプンを分解し、クエン酸を利用する。
は通性嫌気性のグラム１５９性のイ」芽胞桿菌で、周鞭
毛を翁し、連１ｊｌｌ性を示す。芽胞は卵円形で中立（
ｃｅｎｔｒａｌ ）＋耐熱性である。菌体の膨隆は認め
られず、非抗酸性である。外大培地での生育は不透明で
、辺縁は不規則、接抽線に清って一様に生育し、のちに
、培地表面にわずかにひろがって増殖する。ゼラチンを
液化し、ミルクを凝固、ベゾトン化する。硝酸塩を還元
し、脱窒反応陰性・ＭＲテスト陰性、ｖ−ｐテスト１％
性である。インドールは検出されず、硫化水嵩を生成し
ない０デンプンを分解し、クエン酸を利用する。
ウレアーゼ反応陰性、オキシダーゼ反応ＩＳ性、カタラ
ーゼ反応陽性である。１ｌ１１１４・４〜８・８の範囲
で生育し、最適ｐＨは、７．０〜８・Ｏである。また、
１０６Ｃ〜４５°Ｃの範囲で生育し、最適湯度は２４０
Ｃ〜３０”Ｃである。ブドウ糖を発酵的に分解し、敵を
生成する。糖類からの酸の生成は、Ｌ−アラビノス、Ｄ
−キシロース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース・麦
芽糖・’Ａ２ｋ・ ） Ｌ／ ／゛ｏ −ス・ Ｄ−ソ
ルビット、イノジット１ Ｄ−マンニット、グリセリン
、デンプンからすべてみとめられガい。
ーゼ反応陽性である。１ｌ１１１４・４〜８・８の範囲
で生育し、最適ｐＨは、７．０〜８・Ｏである。また、
１０６Ｃ〜４５°Ｃの範囲で生育し、最適湯度は２４０
Ｃ〜３０”Ｃである。ブドウ糖を発酵的に分解し、敵を
生成する。糖類からの酸の生成は、Ｌ−アラビノス、Ｄ
−キシロース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース・麦
芽糖・’Ａ２ｋ・ ） Ｌ／ ／゛ｏ −ス・ Ｄ−ソ
ルビット、イノジット１ Ｄ−マンニット、グリセリン
、デンプンからすべてみとめられガい。
ガスの生成は、いずれの糖からも認められない。
リゾチームには抵抗性で、レシトピテリン（卵黄）反応
は陽性である。
は陽性である。
以」二の性状をもとにＢＭＦ ６７３− ＲＦＩ株をＢ
ｅｒｇ−ｃｙａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｏｔｅｒｍｌ
ｎａｔｌｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ８ｔｈｅｄ
ｉｔｉｏｎ （Ｒ，Ｅ、Ｂｕｃｈａｎａｎ ＆ Ｎ、
Ｅ、Ｇｉｂｂｏｎｓ、ＴｈｅＷｌｌｌｉａｍｍ ＆Ｗｉ
ｌｋｌｎｓ Ｃｏｍｐａｎｙ＋ Ｂａｌｔｌｍｏｒｅ、
１９７４）で検索すると、５３１頁のバチルス（Ｂ
ｎｃｌｌｌｕｓ ）属に属すると考えられる。更に、種
を検索すると・グルコースからアセトインを生成し、芽
胞形成時の菌体の膨隆が認められずＬ−アラはノース・
Ｄ−キシロース、Ｄ−マンニットから酸を生成しない
狸、すなわちＢａｅｔｌｌｕａ ０ｅｒｅｕａ、 ｎ、
ｔｈｕｒｉｎｇｉ −ｅｎｓ１ｇ＋ Ｂ・ｍＩｇ＆ｔ
ｌｌｌｒｌｕｍ郷が近緑のものと思わわ２る。このうち
、Ｈ，ｔｈｕｒｉｎｇｌｅｎｉｌｇ は昆虫の病源菌
である（前記のＢ＠ｒｇｅｙｈ Ｍａｎｕａｌ の５
３６−ｅ−ジ参照）ことから、ＢＭＦ ６７３− ＲＦ
Ｉ株と明確に区別される。ＢＭＦ ６７３− ＲＦＩ株
の性状と、１３． Ｈｒ−ｅｕ８及びＢ・ｍｅｇａｔｅ
ｒｌｕｍの文献上の記載を比較すると次表のようになる
。
ｅｒｇ−ｃｙａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｏｔｅｒｍｌ
ｎａｔｌｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ８ｔｈｅｄ
ｉｔｉｏｎ （Ｒ，Ｅ、Ｂｕｃｈａｎａｎ ＆ Ｎ、
Ｅ、Ｇｉｂｂｏｎｓ、ＴｈｅＷｌｌｌｉａｍｍ ＆Ｗｉ
ｌｋｌｎｓ Ｃｏｍｐａｎｙ＋ Ｂａｌｔｌｍｏｒｅ、
１９７４）で検索すると、５３１頁のバチルス（Ｂ
ｎｃｌｌｌｕｓ ）属に属すると考えられる。更に、種
を検索すると・グルコースからアセトインを生成し、芽
胞形成時の菌体の膨隆が認められずＬ−アラはノース・
Ｄ−キシロース、Ｄ−マンニットから酸を生成しない
狸、すなわちＢａｅｔｌｌｕａ ０ｅｒｅｕａ、 ｎ、
ｔｈｕｒｉｎｇｉ −ｅｎｓ１ｇ＋ Ｂ・ｍＩｇ＆ｔ
ｌｌｌｒｌｕｍ郷が近緑のものと思わわ２る。このうち
、Ｈ，ｔｈｕｒｉｎｇｌｅｎｉｌｇ は昆虫の病源菌
である（前記のＢ＠ｒｇｅｙｈ Ｍａｎｕａｌ の５
３６−ｅ−ジ参照）ことから、ＢＭＦ ６７３− ＲＦ
Ｉ株と明確に区別される。ＢＭＦ ６７３− ＲＦＩ株
の性状と、１３． Ｈｒ−ｅｕ８及びＢ・ｍｅｇａｔｅ
ｒｌｕｍの文献上の記載を比較すると次表のようになる
。
表から明らかなように、ｌ３Ｍｌ１’６７３−ＲＦＩ
株は嫌気培養でも生肖゛し、レシトビテリン反応が陽性
、リゾチームに抵抗性であるという点でＢ、、 ｍｅｇ
ａｔ−ｅｒｉｕｍとは異なり、−万一 Ｂ−ｃｅｒｅｕ
ｓとは極めて類似した性秋を示している。
株は嫌気培養でも生肖゛し、レシトビテリン反応が陽性
、リゾチームに抵抗性であるという点でＢ、、 ｍｅｇ
ａｔ−ｅｒｉｕｍとは異なり、−万一 Ｂ−ｃｅｒｅｕ
ｓとは極めて類似した性秋を示している。
従って、ＢＰＶｉＦ’ ６７３− ＲＦ Ｉ 株をバ
チルス・セレウス（Ｂａｃｌｌｌｕａ ｃｅｒｅｕｓ
） ＢＭＦ６７３−ＲＦ Ｉ と同定した。
チルス・セレウス（Ｂａｃｌｌｌｕａ ｃｅｒｅｕｓ
） ＢＭＦ６７３−ＲＦ Ｉ と同定した。
次に、本発明の方法を具体的に説明する。
本発明の方法を実ｈｌするに肖って、ジゾロチン生産菌
を培養するのに用いる栄養源としては、細菌の栄養源と
して公知のものを適宜使用できる。
を培養するのに用いる栄養源としては、細菌の栄養源と
して公知のものを適宜使用できる。
例えば、市販されているグリセリン、 グルコース、
ラフ１゛−ス、 シュクロース、 デンプン。
ラフ１゛−ス、 シュクロース、 デンプン。
マルトース、 糖蜜などの炭水化物、 脂肪などを炭素
源として、市販されているペプト／、肉エキス、 コー
ン・ステイープ・リカー、綿実粉ｒ ｌｒ各化生粉、
大豆粉、 コーン・グルテンだ一ル＋ 魚粉＋
酵母エキス、Ｎ−Ｚアミン。
源として、市販されているペプト／、肉エキス、 コー
ン・ステイープ・リカー、綿実粉ｒ ｌｒ各化生粉、
大豆粉、 コーン・グルテンだ一ル＋ 魚粉＋
酵母エキス、Ｎ−Ｚアミン。
カゼイン′・ イ１肖１Ｆンナトリウム、 硝＃アン
モニウム、 硫酸アンモニウムなどを窒素分として、食
塩−リン酸塩― 炭酸カルシウム、 硫酸マグネシウム
などを無機の栄養源として、それぞれ使用できる。特に
好ましい培地成分としてＶ」１、炭素源としてグリセリ
ン、 ポテト・スターチ、 グルコースなど、窒素源と
して、ン」セリペゾトン。
モニウム、 硫酸アンモニウムなどを窒素分として、食
塩−リン酸塩― 炭酸カルシウム、 硫酸マグネシウム
などを無機の栄養源として、それぞれ使用できる。特に
好ましい培地成分としてＶ」１、炭素源としてグリセリ
ン、 ポテト・スターチ、 グルコースなど、窒素源と
して、ン」セリペゾトン。
肉エキスなどがある。ポリペプトン０．５％、 ゲルコ
ーストＯ％、 ポテトスターテト０条、 グリセリン１
．０％、肉エキス０・５％、食塩０・５％、 炭酸カル
シウム０・３２幅、 消泡剤■１７０（信越化学社製）
０・０１係を含む培地などを用いるのが好゛止しい。
ーストＯ％、 ポテトスターテト０条、 グリセリン１
．０％、肉エキス０・５％、食塩０・５％、 炭酸カル
シウム０・３２幅、 消泡剤■１７０（信越化学社製）
０・０１係を含む培地などを用いるのが好゛止しい。
ジプロチンの大は生産には液体培養が好“ましい。
培会漉度としては・ ジゾロチン生産舊が発育し・ジプ
ロチンを生産する範囲の温度が適用し得るが、特に好せ
しい温度は２５〜３５°Ｃである。培養は、普通は、本
物質が培養物中に生産され充分に蓄積する壕で継続され
る。
ロチンを生産する範囲の温度が適用し得るが、特に好せ
しい温度は２５〜３５°Ｃである。培養は、普通は、本
物質が培養物中に生産され充分に蓄積する壕で継続され
る。
例えば、７］？リペプトン０・５％、 ダルコースト０
％、 ポテトスターチト０％、 グリセリン１．０係、
肉エキス０．５係、 食塩０．５％、 炭酸カルシウ
ム０・３２φ、消泡剤ＫＭ ７０ （登録商標）０・０
１％を含む培地を滅菌したのち、これにジプロチン生血
菌の斜面培養物の一白耳を接種し、２７０Ｃで好気的に
振盪培養を行なったところ、培養２４時間後から１５０
時間後にジプロチンの蓄積が認められた。ジブロチンは
、タルク培養法でも振盪培養法と同様によく生産される
。例えは、２００ｔの醗酵槽に１００ｔの培地を入れて
滅菌し、あらかじめ培養した種培養液を３ｔｗ：′１Ｊ
Ｊｉシ、毎分ｇｏｔの無菌空気を通気し、毎分２５０回
転で攪拌した。この条件で本物質の生産は６５時間で最
高に達した。
％、 ポテトスターチト０％、 グリセリン１．０係、
肉エキス０．５係、 食塩０．５％、 炭酸カルシウ
ム０・３２φ、消泡剤ＫＭ ７０ （登録商標）０・０
１％を含む培地を滅菌したのち、これにジプロチン生血
菌の斜面培養物の一白耳を接種し、２７０Ｃで好気的に
振盪培養を行なったところ、培養２４時間後から１５０
時間後にジプロチンの蓄積が認められた。ジブロチンは
、タルク培養法でも振盪培養法と同様によく生産される
。例えは、２００ｔの醗酵槽に１００ｔの培地を入れて
滅菌し、あらかじめ培養した種培養液を３ｔｗ：′１Ｊ
Ｊｉシ、毎分ｇｏｔの無菌空気を通気し、毎分２５０回
転で攪拌した。この条件で本物質の生産は６５時間で最
高に達した。
ジプロチンの培養工程ならびに精製工程中での追跡は、
次の方法による抗ジベグチジルアミノベゾチダーゼ■活
件のｄ１１］定に基づい゛〔行なった。抗ジベゾチノル
アミノペプチダーゼＩＶ活性の測定は、ＯＹＡ （Ｈ，
ＯＹＡ、 １． ＮＡＧＡＴＳＵ、 ｉ’、 ＮＡＧＡ
ＴＳＵ、 Ｂｌｏａ−ｈｉｍｌｃａ ｅｔ Ｂｌｏｐｂ
ｙａｉｃａ ２５８．５９１．１９７２ ） ｉｄ載の
方法の改良法で行った。即ち、０．００２ Ｍグリシル
プロリン−β−ナフチルアミｌ’ （１，２ｍｌにＯ，
ＩΔＴトリヌ〜マレインＩ￥９！Ｍ衝液（ｐＨ’７．２
） ０．５９１、検体を含む溶液０・２５ ｍｌを加
えた混合溶液を３７°０３分間加温した後、ＯＹＡらの
方法による酵素のＬＮ７ 製法で、ラット腎より、硫安
分画法（５５〜８０（ｌｙ飽和）で精側したジ梨プチノ
ルアミノペプテダーゼ■ｖの溶液を５０μＬ加え３７°
Ｃ３０分間反応したのち、Ｉｒｒｑ／ｄ、の濃度にファ
ーストガーネットＧＢＣを含み、１０条の濃度に界面活
性剤ツイーン２０ （Ｔｗａｅｎ ２０ ） を含む
１．ＯＭ酢酢緩価液（ｐＨ４−２） ｌ ｒｒｔ ’ａ
： 加Ｌ、室温ｋｃ Ｉ Ｓ 分ａｆ’＃ ％＆ ５２
５ｎｎｌ にお＆ツる吸光度（ａ）を？ｌｌす定した
。同時にノブロチンを含−ｆない緩衝液のみを用いた８
倹の吸光度（ｂ）を測定し、ノベプチジルアミノベプチ
ダーゼＩＶ阻害率を、式Ｃ（ｂ−ａ）／ｂ ］ Ｘ １
００によ、？ ［１’ ！ｆ： した。
次の方法による抗ジベグチジルアミノベゾチダーゼ■活
件のｄ１１］定に基づい゛〔行なった。抗ジベゾチノル
アミノペプチダーゼＩＶ活性の測定は、ＯＹＡ （Ｈ，
ＯＹＡ、 １． ＮＡＧＡＴＳＵ、 ｉ’、 ＮＡＧＡ
ＴＳＵ、 Ｂｌｏａ−ｈｉｍｌｃａ ｅｔ Ｂｌｏｐｂ
ｙａｉｃａ ２５８．５９１．１９７２ ） ｉｄ載の
方法の改良法で行った。即ち、０．００２ Ｍグリシル
プロリン−β−ナフチルアミｌ’ （１，２ｍｌにＯ，
ＩΔＴトリヌ〜マレインＩ￥９！Ｍ衝液（ｐＨ’７．２
） ０．５９１、検体を含む溶液０・２５ ｍｌを加
えた混合溶液を３７°０３分間加温した後、ＯＹＡらの
方法による酵素のＬＮ７ 製法で、ラット腎より、硫安
分画法（５５〜８０（ｌｙ飽和）で精側したジ梨プチノ
ルアミノペプテダーゼ■ｖの溶液を５０μＬ加え３７°
Ｃ３０分間反応したのち、Ｉｒｒｑ／ｄ、の濃度にファ
ーストガーネットＧＢＣを含み、１０条の濃度に界面活
性剤ツイーン２０ （Ｔｗａｅｎ ２０ ） を含む
１．ＯＭ酢酢緩価液（ｐＨ４−２） ｌ ｒｒｔ ’ａ
： 加Ｌ、室温ｋｃ Ｉ Ｓ 分ａｆ’＃ ％＆ ５２
５ｎｎｌ にお＆ツる吸光度（ａ）を？ｌｌす定した
。同時にノブロチンを含−ｆない緩衝液のみを用いた８
倹の吸光度（ｂ）を測定し、ノベプチジルアミノベプチ
ダーゼＩＶ阻害率を、式Ｃ（ｂ−ａ）／ｂ ］ Ｘ １
００によ、？ ［１’ ！ｆ： した。
この定封方法で１・１μ＆ ／ Ｍｅのノブロチ／Ａ、
せた５・５μｊＪ ／ ｍｅのノブロチンＢ ＆ｉノベ
ゾチノルアミノペノナダーゼＩＶを５０％阻害（ＩＣ５
０）シタ。
せた５・５μｊＪ ／ ｍｅのノブロチンＢ ＆ｉノベ
ゾチノルアミノペノナダーゼＩＶを５０％阻害（ＩＣ５
０）シタ。
ジノロチンＡ、Ｂは、ノプロナン生産茜の培養液中及び
ｉ′Ｊ体「１弓こ存在する。ノプロチンを培養物から採
取するに当っては、培ＵＦ液から吸着剤に吸着および脱
離させる方法で好収率で採取できる。
ｉ′Ｊ体「１弓こ存在する。ノプロチンを培養物から採
取するに当っては、培ＵＦ液から吸着剤に吸着および脱
離させる方法で好収率で採取できる。
吸着剤としては、活性炭、イオン交換樹脂などが使用で
きる。例えシ」゛ジゾロチンは、活性炭に吸着はれ、９
０％メタノール水（塩酸酸性−１２）で溶出される。培
イ２液の２係の活性炭な培譬Ｐ液に入れ４ｒｔ拌するこ
とによ＃）ジデロチンを吸着し、沖過後活性炭を水洗し
、用いた培４＞Ｆ液の１７４量の９０係メタノール水（
塩酸酸性ｐａｌ ２ ）で溶出される。
きる。例えシ」゛ジゾロチンは、活性炭に吸着はれ、９
０％メタノール水（塩酸酸性−１２）で溶出される。培
イ２液の２係の活性炭な培譬Ｐ液に入れ４ｒｔ拌するこ
とによ＃）ジデロチンを吸着し、沖過後活性炭を水洗し
、用いた培４＞Ｆ液の１７４量の９０係メタノール水（
塩酸酸性ｐａｌ ２ ）で溶出される。
培参Ｆ液中のジプロチンは約５０％溶出される。
この９０％メタノール水を、減圧濃縮することにより粗
物質を得ることができる。壕だイオン交換体のクロマト
グラフィーも精製に用いられる。特にダウエックス５０
Ｗのクロマトグラフィーが有効であり、ビリノン−酢〔
疫緩佃Ｊ液で溶出することによりジゾロチンＡおＪ：び
Ｂを相反に分離できる。
物質を得ることができる。壕だイオン交換体のクロマト
グラフィーも精製に用いられる。特にダウエックス５０
Ｗのクロマトグラフィーが有効であり、ビリノン−酢〔
疫緩佃Ｊ液で溶出することによりジゾロチンＡおＪ：び
Ｂを相反に分離できる。
一方、ノプロチンＣの製造はＬ−インロイシンから出発
し、て通常のペプチド合成法によって行われる。
し、て通常のペプチド合成法によって行われる。
すなわち、カル？ギシル基をベンノル基−Ｃ保護したＬ
−インロイシフ （１１ｅ ０Ｂｚｌ ） を、ア
ミン基をｔ−ブトキシカル＋１？ニルｇ（Ｂｏａ）で保
７」シたし一プロリン（Ｂｏｅ −Ｐｒｏ ）とラセミ
化防止剤例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ｎ
ＯＢＴ）の存在下で活性エステル化剤例えは・クシクロ
ヘキシルカルづＳジイミド（ＤＣＣ）を用いてｆｆＱ
＠させる。
−インロイシフ （１１ｅ ０Ｂｚｌ ） を、ア
ミン基をｔ−ブトキシカル＋１？ニルｇ（Ｂｏａ）で保
７」シたし一プロリン（Ｂｏｅ −Ｐｒｏ ）とラセミ
化防止剤例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ｎ
ＯＢＴ）の存在下で活性エステル化剤例えは・クシクロ
ヘキシルカルづＳジイミド（ＤＣＣ）を用いてｆｆＱ
＠させる。
反応生成物として伊だノベデテド（ｌ３ｏｃ −Ｐｒｏ
−１１ｅ ０Ｂｚｌ ） のアミノ末端の保ｉ１
基（Ｂ ｏ ｃ ）をトリフルオル酢酸でト」づした
後、これに、アミノ基をペンノルオキシカル７げニルＷ
で保：漁したＬ−バリン（Ｚ−Ｖａｌ）を同様のペプチ
ド合成法でね合する。イ（ｆられた） ＩＪ−ｅブチド
反応生成！１ｏ（Ｚ−Ｖａｌ −Ｐｒｏ −ｒｌａ −
０Ｂｚｌ ） を、凄Ｉ！ＬＬは世元することにより
保護古！；（２及びＴ３ｚｌ ）を脱熱すると、ノブロ
チンＣがイＵられる（実を金的３参１１榎）。
−１１ｅ ０Ｂｚｌ ） のアミノ末端の保ｉ１
基（Ｂ ｏ ｃ ）をトリフルオル酢酸でト」づした
後、これに、アミノ基をペンノルオキシカル７げニルＷ
で保：漁したＬ−バリン（Ｚ−Ｖａｌ）を同様のペプチ
ド合成法でね合する。イ（ｆられた） ＩＪ−ｅブチド
反応生成！１ｏ（Ｚ−Ｖａｌ −Ｐｒｏ −ｒｌａ −
０Ｂｚｌ ） を、凄Ｉ！ＬＬは世元することにより
保護古！；（２及びＴ３ｚｌ ）を脱熱すると、ノブロ
チンＣがイＵられる（実を金的３参１１榎）。
本発明のノブロチンの生′吻活性について、その薬理作
用を検討した。その結果、ノプロナンＡ。
用を検討した。その結果、ノプロナンＡ。
Ｂ・ Ｃは細胞性免疫に対する増強作用を有しているこ
とが見出された。
とが見出された。
本発明のノブロチンの細胞性免疫賦活活性にっいて試験
例をＭげて説明する。
例をＭげて説明する。
試験例１
本例は、正常マウスにおける細胞性免疫に及ぼす効果を
示す。細胞性免疫に及ぼすノブロチンへの作用を、羊赤
色球（５ＲＢＣと略す〕を抗原としてマウス足蹴に接釉
して得られる連結型過敏症ＣＤ 、 Ｔ 、Ｉｌ、と略
す）を指イ〕１χ（参考文献Ｊ、 Ｅｘｐ、λｈｄｙ易
、 １５２９〜１５３９．１９７４ ） として検討
した。
示す。細胞性免疫に及ぼすノブロチンへの作用を、羊赤
色球（５ＲＢＣと略す〕を抗原としてマウス足蹴に接釉
して得られる連結型過敏症ＣＤ 、 Ｔ 、Ｉｌ、と略
す）を指イ〕１χ（参考文献Ｊ、 Ｅｘｐ、λｈｄｙ易
、 １５２９〜１５３９．１９７４ ） として検討
した。
即ち、５ＲＢＣ１０個をＯ−０５ｒｌｌｅの生理食塩水
に浮遊させたＦＮ！濁液をＪＣＬ ： ＩＣＲ（）４Ｎ
化、６週令）マウスの足蹴皮下に接種し、これと同時に
ジプロチンＡをＯ・Ｂ Ｔｈ’／／ ｋｇ、 ０・２
ｎノ２７ ｋｇ、 ０・０５ ｍｙ ／ ｋｇ。
に浮遊させたＦＮ！濁液をＪＣＬ ： ＩＣＲ（）４Ｎ
化、６週令）マウスの足蹴皮下に接種し、これと同時に
ジプロチンＡをＯ・Ｂ Ｔｈ’／／ ｋｇ、 ０・２
ｎノ２７ ｋｇ、 ０・０５ ｍｙ ／ ｋｇ。
０．０１２５＋＋ｆ／に９． ０，００３１３１’＋ｇ
／ｋｇの投与用でジプロチンＡ生理食塩水溶液の形で１
回、腹腔内投与した０投与Ａ Ｅｌ後、他の一方の足ｉ
■に５ＲＢＣ１０’仙を０・０５ ｍｌの生理食塩水に
浮遊させたｐ、（ＨＨ濁液な皮下投与して二次感作させ
た。イの２４時間後、その足廟にみられる肚脹朋（足蹴
の厚さの増加）をキャリ・にスで測定した。供゛試化合
物を投与しないでＳＲ１１Ｃ及び生理食塩水の皮下注射
を受けた対照動物σ）足力点肥厚度を１００係と訂価し
、これと処理した供試動物の足蹟肥厚度を比較すること
により供試化合物の細胞性免疫増強効果を判定した。
／ｋｇの投与用でジプロチンＡ生理食塩水溶液の形で１
回、腹腔内投与した０投与Ａ Ｅｌ後、他の一方の足ｉ
■に５ＲＢＣ１０’仙を０・０５ ｍｌの生理食塩水に
浮遊させたｐ、（ＨＨ濁液な皮下投与して二次感作させ
た。イの２４時間後、その足廟にみられる肚脹朋（足蹴
の厚さの増加）をキャリ・にスで測定した。供゛試化合
物を投与しないでＳＲ１１Ｃ及び生理食塩水の皮下注射
を受けた対照動物σ）足力点肥厚度を１００係と訂価し
、これと処理した供試動物の足蹟肥厚度を比較すること
により供試化合物の細胞性免疫増強効果を判定した。
ジデロナンＢ及びＣについても同様に試験した。
試験結果を第１表に示す。
以上の結果より、ジプロチンＡ、Ｂ、Ｃは正常動物の細
胞性免疫能を増強する物質であると認められた。従って
本発明によシ得られた化合物は、免疫増強剤として有用
である。また抗腫瘍免疫賦活剤として、各釉層化学療法
剤の補助薬として有用性をもつ。
胞性免疫能を増強する物質であると認められた。従って
本発明によシ得られた化合物は、免疫増強剤として有用
である。また抗腫瘍免疫賦活剤として、各釉層化学療法
剤の補助薬として有用性をもつ。
マウスに対する急性毒性試験では、ジプロチンＡの５ｏ
ｏ ｔｒｂｙ／ｋｐをマウスに静脈内投与しても、ま
たジプロチンＢおよびＣの５００■／ｋｇをマウスに静
脈内投与しても死亡例は認められない。従ってジプロチ
ンは毒性の低い物質であると認められる。
ｏ ｔｒｂｙ／ｋｐをマウスに静脈内投与しても、ま
たジプロチンＢおよびＣの５００■／ｋｇをマウスに静
脈内投与しても死亡例は認められない。従ってジプロチ
ンは毒性の低い物質であると認められる。
ジプロチンを有効成分とする上記薬剤とＬ −Ｃ＋Ｊ、
ジプロチンあるいはその薬学的にＦｔ容される基又ｄエ
ステルのいづれかを常用の担体と配合して磨削でき、更
には各種の化学療法剤と混合したものでもよい。ジプロ
チンの塩の例としＣは、ノゾロチンのカルボキシル基に
おける語学的にｌｔ’ｆ容できる陽イオン、例えＶｊナ
トリウム、カリウムのごときアルカリ金属、カルシウム
、マグネシウムの如きアルカリ土類金属の陽イオンがあ
る。ノゾロチンのアミノ赴における薬学的に［１’容で
きる勲椋塩例λ−げ塩酸塩など又は有機酸、例えば酢配
にどとの酸付加塩も包含される。エステルとしては、ア
ルキルエステルあるいけ生体内で代謝、分解し易いアセ
トキシメチル・エステル、ピパロイルオキシメチルエス
テル吟がある。
ジプロチンあるいはその薬学的にＦｔ容される基又ｄエ
ステルのいづれかを常用の担体と配合して磨削でき、更
には各種の化学療法剤と混合したものでもよい。ジプロ
チンの塩の例としＣは、ノゾロチンのカルボキシル基に
おける語学的にｌｔ’ｆ容できる陽イオン、例えＶｊナ
トリウム、カリウムのごときアルカリ金属、カルシウム
、マグネシウムの如きアルカリ土類金属の陽イオンがあ
る。ノゾロチンのアミノ赴における薬学的に［１’容で
きる勲椋塩例λ−げ塩酸塩など又は有機酸、例えば酢配
にどとの酸付加塩も包含される。エステルとしては、ア
ルキルエステルあるいけ生体内で代謝、分解し易いアセ
トキシメチル・エステル、ピパロイルオキシメチルエス
テル吟がある。
本発明の化合物ないし薬剤の投与形態は、経口。
注射、直腸坐剤のいずれでもよい。注射剤を調製する場
合は、上記鳴動成分化合物にｐＨ調整剤・緩イ（′ｉｊ
剤、安定化剤９賦形剤を添加し常法により、凍結乾燥を
行ない、凍結乾燥注射剤を作ることができ、−また有効
成分化合物に、ｐｉ ：Ｉ？ｊ整剤、に艮衝剤。
合は、上記鳴動成分化合物にｐＨ調整剤・緩イ（′ｉｊ
剤、安定化剤９賦形剤を添加し常法により、凍結乾燥を
行ない、凍結乾燥注射剤を作ることができ、−また有効
成分化合物に、ｐｉ ：Ｉ？ｊ整剤、に艮衝剤。
安定化剤１等張剤１局麻剤等を添加し、常法によシ皮下
、筋肉内、静脈内注射剤を作ることもできる。経口用固
形製剤を調製する場合は、櫓効成Ｓ、？化合物に、賦形
剤、更に必要に応じて結合剤・崩壊剤、滑沢剤１着色剤
・づ８味剤・驕臭剤を加えた後、常法により錠剤、扱覆
錠剤・頼粒剤・散剤・カプセル剤等を作ることができる
。経口液状製剤を調装する場合には、イ」助成分化合物
に、矯味剤。
、筋肉内、静脈内注射剤を作ることもできる。経口用固
形製剤を調製する場合は、櫓効成Ｓ、？化合物に、賦形
剤、更に必要に応じて結合剤・崩壊剤、滑沢剤１着色剤
・づ８味剤・驕臭剤を加えた後、常法により錠剤、扱覆
錠剤・頼粒剤・散剤・カプセル剤等を作ることができる
。経口液状製剤を調装する場合には、イ」助成分化合物
に、矯味剤。
緩価剤、安定化剤・矯臭剤等を加え゛Ｃ１當法によりシ
ロツプ剤およびドライシロソゲ剤を作ることができる。
ロツプ剤およびドライシロソゲ剤を作ることができる。
直腸生薬製剤を調製する場合には、翁効成分化合物に、
賦形剤、更に必要に応じて・界面活性剤を加えた後、常
法により坐剤とすることができる。
賦形剤、更に必要に応じて・界面活性剤を加えた後、常
法により坐剤とすることができる。
ジプロチンの投与鼠は症状により異なるが、成人では１
回ジプロチンとして０．０２〜２Ｑ Ｏｒｒ４を１日１
回投与するのがよい。又、癌化学療法剤または免疫増強
剤と併用するときは、癌化学療法剤または免疫増強剤の
通常の使用且に、上記の範囲内の量のジプロチンを併用
すればよい。
回ジプロチンとして０．０２〜２Ｑ Ｏｒｒ４を１日１
回投与するのがよい。又、癌化学療法剤または免疫増強
剤と併用するときは、癌化学療法剤または免疫増強剤の
通常の使用且に、上記の範囲内の量のジプロチンを併用
すればよい。
次に、本発明のジゾロチンの製造に関して、実施例を示
すが、本物質の理化学的性状ならびに生産方法、そのイ
青製法が本発明者らによって明らかにされたので、本り
Ｊ １ＹＩＩｌ杏に示された方法を修飾することは容易
であシ、本発明は以下に記載する実施例のみに限定され
るものではない。例えば、本ＩＪ］＋１川省では、ノゾ
ロチンＡおよびＢのｂＭ １９ｊ的製、容性を示したが
、これらの化学的合成も可能１′あシ、ＨｊＣ−ｔＪ：
Ｌ −インロイシンから出光して公知の被ゾテド台成
法を適宜使用することによシ、きわめて容易に合成でき
る。
すが、本物質の理化学的性状ならびに生産方法、そのイ
青製法が本発明者らによって明らかにされたので、本り
Ｊ １ＹＩＩｌ杏に示された方法を修飾することは容易
であシ、本発明は以下に記載する実施例のみに限定され
るものではない。例えば、本ＩＪ］＋１川省では、ノゾ
ロチンＡおよびＢのｂＭ １９ｊ的製、容性を示したが
、これらの化学的合成も可能１′あシ、ＨｊＣ−ｔＪ：
Ｌ −インロイシンから出光して公知の被ゾテド台成
法を適宜使用することによシ、きわめて容易に合成でき
る。
実施例
ノブロチン生産菌としてバチルス・セレウスＢＭＦ’６
７３−１七Ｆ１ 株（微］二研閘寄第６６２３号）の斜
ｉｆｉ’ｉｊ宮養から一白金１ｔを、あらかじめ＋２０
’ｃ。
７３−１七Ｆ１ 株（微］二研閘寄第６６２３号）の斜
ｉｆｉ’ｉｊ宮養から一白金１ｔを、あらかじめ＋２０
’ｃ。
２０分間誠白した培地（５００ｒ屁のロータリーフラス
コに１ｌｏｓ＋ｆ！づつ分注した＋Ｊ？ ｌ）ペン′ト
ン０・５弼。
コに１ｌｏｓ＋ｆ！づつ分注した＋Ｊ？ ｌ）ペン′ト
ン０・５弼。
グルコ−７１％＋ ＋ｌｅテトスターナ１％、グリセ
リン１％、肉エキス０・５％１食塩０・５？ｂＴ炭酸カ
ルシウム０・３２％、消泡剤（ＫＭ−７０） ０．０１
％７５゜らなる）に接種した。２７°Ｃ１毎分１８０
回転の培養条件で経時的にノプロチン産生焉を検討した
。
リン１％、肉エキス０・５％１食塩０・５？ｂＴ炭酸カ
ルシウム０・３２％、消泡剤（ＫＭ−７０） ０．０１
％７５゜らなる）に接種した。２７°Ｃ１毎分１８０
回転の培養条件で経時的にノプロチン産生焉を検討した
。
その結果、培養４８時間後、ジプロテンＷｔｉ生ｌｔ１
は、プラトーに逃し、以後培養６日月まで、ジベプチノ
ルアεノペプチタ゛−ゼＩＶの阻害活性により定上＋し
たジプロチン６゛躇間は減少しなかった。
は、プラトーに逃し、以後培養６日月まで、ジベプチノ
ルアεノペプチタ゛−ゼＩＶの阻害活性により定上＋し
たジプロチン６゛躇間は減少しなかった。
実施例２
実施例１と同様の培地と培イｒ東ＶトでＢＭＦ６７３−
ＲＦＩ株を培養して得られた培′ａ液４６ｔを連続遠心
分離機にかけ４５４の上澄液を得た。この上１ｆｔ液ｏ
）ノペグチノルアミノペプチダーゼＴＶ（！Ｉｉ害活性
（ＩＣ５０）３９μｔ／ジｌｅ であった。
ＲＦＩ株を培養して得られた培′ａ液４６ｔを連続遠心
分離機にかけ４５４の上澄液を得た。この上１ｆｔ液ｏ
）ノペグチノルアミノペプチダーゼＴＶ（！Ｉｉ害活性
（ＩＣ５０）３９μｔ／ジｌｅ であった。
得られた培書上澄液４５１に、培性炭９００ｇを入れ攪
拌し、吸着させ、活性炭をＰ紙で濾過し水洗後ｐ［ｌ
２のｌｉ’ｌ ｆｉ安酸性下で９０５６メタノール水ｌ
ｏｔで６４出した。この溶出液を減圧下で儂？＋Ａ し
た。この濃縮液を水でうすめ２ｔとし、ダウエックス５
０Ｗ （Ｈ”７ ） １．４ ｔのカラムに吸着させ、
水洗後ＩＮアンモニア水で溶出した。溶出液を減圧下で
濃縮乾固することにより５６ｇの（■粉末を？また。こ
の粗粉末の２ペプチノルアミノペゾチダーゼ■阻害活性
（ＩＣ５ｏ ’） は１４３μ９／ｒｒｌであった。
拌し、吸着させ、活性炭をＰ紙で濾過し水洗後ｐ［ｌ
２のｌｉ’ｌ ｆｉ安酸性下で９０５６メタノール水ｌ
ｏｔで６４出した。この溶出液を減圧下で儂？＋Ａ し
た。この濃縮液を水でうすめ２ｔとし、ダウエックス５
０Ｗ （Ｈ”７ ） １．４ ｔのカラムに吸着させ、
水洗後ＩＮアンモニア水で溶出した。溶出液を減圧下で
濃縮乾固することにより５６ｇの（■粉末を？また。こ
の粗粉末の２ペプチノルアミノペゾチダーゼ■阻害活性
（ＩＣ５ｏ ’） は１４３μ９／ｒｒｌであった。
得られた粗粉末を、２ｔのｐＨ３・２の０・２Ｍピリノ
ン−酢岐緩イｌ１Ｉｊ液ＶＣ溶かし、酢酸を加えｐＨ３
，２とした。あらかじめ同緩衝液で平衡化したダウエッ
クス５０Ｗ（ピリジニウム型、ｘ４，１００〜２００メ
ツシユ）Ｉ−４ｔのカラムに吸着させ、同緩＋ｍｊ液で
溶出した。活性分画を減圧下にか）縮乾固し９・８ｇの
粗粉末を得゛た。この粗粉末のツバブチツルアミノペプ
チダーゼｍＶ阻害活性（ＩＣ５ｏ ）は、６７μｇ／ｍ
ｌ であった。次にこの粗粉末を５０ ｔｒｌの水に溶
かし、１・６ｔのセファデックスＧ２５のカラムにかけ
、水で展開した。活性分画を減圧下に濃縮乾固し、粗粉
末２・６７ｙ（）被ブナノルアミノペゾチダーゼＩＶ
ｊｉｌ害活性ＩＣ５ｏ ＝ ２０ｙｇ／ ｍｔ ）をや
ｊだ。
ン−酢岐緩イｌ１Ｉｊ液ＶＣ溶かし、酢酸を加えｐＨ３
，２とした。あらかじめ同緩衝液で平衡化したダウエッ
クス５０Ｗ（ピリジニウム型、ｘ４，１００〜２００メ
ツシユ）Ｉ−４ｔのカラムに吸着させ、同緩＋ｍｊ液で
溶出した。活性分画を減圧下にか）縮乾固し９・８ｇの
粗粉末を得゛た。この粗粉末のツバブチツルアミノペプ
チダーゼｍＶ阻害活性（ＩＣ５ｏ ）は、６７μｇ／ｍ
ｌ であった。次にこの粗粉末を５０ ｔｒｌの水に溶
かし、１・６ｔのセファデックスＧ２５のカラムにかけ
、水で展開した。活性分画を減圧下に濃縮乾固し、粗粉
末２・６７ｙ（）被ブナノルアミノペゾチダーゼＩＶ
ｊｉｌ害活性ＩＣ５ｏ ＝ ２０ｙｇ／ ｍｔ ）をや
ｊだ。
この粗粉末２・６７１をｌｏｄの２８チアンモニア水に
溶かし、アンモニア水の５０（６月のエタノールを加え
て、３００ｍ１のシリヵク゛ルに吸着さぜ、エタ／−ル
； ２ Ｂ ％アンモニア水（５０：Ｉ）の混液−（゛
展開し活性分画を減圧下に濃縮乾固することにより、粗
粉末６２０ ｍｙ （ジベプテノルアミノベプテダーゼ
ＩＶ阻害活性ＩＣ５０＝ ５，７５ μ９ ／ ｍｔ
）を得た。次にこの粗粉末を３０ ｔｎｌの０・２Ｍビ
リノン−酢酸緩衝液（ｐＨ３・２）に溶かし、酢酸を加
え、ｐＨ３，２とし、あらかじめ同緩衝液で平衡化した
ダウエックス５０Ｗ（ピリジニウム型、ｘ４，１００〜
２００メツシユ） ５００ ＋ｎ／のカラムにかけ同緩
釉ｊ液で展開することにより、２つの活性分画を得た。
溶かし、アンモニア水の５０（６月のエタノールを加え
て、３００ｍ１のシリヵク゛ルに吸着さぜ、エタ／−ル
； ２ Ｂ ％アンモニア水（５０：Ｉ）の混液−（゛
展開し活性分画を減圧下に濃縮乾固することにより、粗
粉末６２０ ｍｙ （ジベプテノルアミノベプテダーゼ
ＩＶ阻害活性ＩＣ５０＝ ５，７５ μ９ ／ ｍｔ
）を得た。次にこの粗粉末を３０ ｔｎｌの０・２Ｍビ
リノン−酢酸緩衝液（ｐＨ３・２）に溶かし、酢酸を加
え、ｐＨ３，２とし、あらかじめ同緩衝液で平衡化した
ダウエックス５０Ｗ（ピリジニウム型、ｘ４，１００〜
２００メツシユ） ５００ ＋ｎ／のカラムにかけ同緩
釉ｊ液で展開することにより、２つの活性分画を得た。
先に溶出される活性分画を濃縮乾固することにより、２
２０ｖｖ（ジペプチジルアきノペプチダーゼｉｖ阻害活
性ＩＣＡＯ＝ ７．５μ９／ｍｅ）のジプロチンＢの粗
粉末を、後に溶出される活性分画をｍ縮乾固することに
より、Ｉ Ｉ Ｏｍｙ（ジペプチジルアミノペプチメー
ゼＩＶ阻害活性ＩＣ５０＝ ６μｇ ／ ｍｔ ）のジ
プロチンＡの粗粉末を得た。
２０ｖｖ（ジペプチジルアきノペプチダーゼｉｖ阻害活
性ＩＣＡＯ＝ ７．５μ９／ｍｅ）のジプロチンＢの粗
粉末を、後に溶出される活性分画をｍ縮乾固することに
より、Ｉ Ｉ Ｏｍｙ（ジペプチジルアミノペプチメー
ゼＩＶ阻害活性ＩＣ５０＝ ６μｇ ／ ｍｔ ）のジ
プロチンＡの粗粉末を得た。
得られたジプロテンＡとＢの粗粉末をそれぞれ１０ ｆ
ｆ＋７！の水を加え、溶かしシリカダル５ｇを加えて減
圧下に乾固し、それぞれ５０ ｖｒｌのシリカク゛ルカ
ラムにかけて、クロロホルム：メタノール：酢酸：水（
６０：８：２：ｌ）の混液で展開し・それぞれの活性分
画を減圧下に濃縮乾固することにより、ジプロテンＡの
粗粉末４３・６ ｖｒｙ （ＩＣ５ｏ＝１．４μ９ ／
ａｒｔ ） とジプロテンＢの粗粉末＋４５・５η
（ＩＣ５０＝ ５．５ μ９ ／ ｍｌりを得た。
ｆ＋７！の水を加え、溶かしシリカダル５ｇを加えて減
圧下に乾固し、それぞれ５０ ｖｒｌのシリカク゛ルカ
ラムにかけて、クロロホルム：メタノール：酢酸：水（
６０：８：２：ｌ）の混液で展開し・それぞれの活性分
画を減圧下に濃縮乾固することにより、ジプロテンＡの
粗粉末４３・６ ｖｒｙ （ＩＣ５ｏ＝１．４μ９ ／
ａｒｔ ） とジプロテンＢの粗粉末＋４５・５η
（ＩＣ５０＝ ５．５ μ９ ／ ｍｌりを得た。
イ（すられたジプロチンＡと１３０第１１粉末をそれぞ
れ４ ｍ１Ｈ７）ｐＨ３，２１） ０・２ Ｍピリノン
−酢ｒ；Ｌ））緩ｌｉｊ液に清かし、酢酸でｐｉ（３・
２とし、それぞれ５０ ｍｌのあらかじめ同緩衝液で平
衡化したダウニック７＝ ５０ Ｗ（ピリジニウム型ｌ
Ｘ４１１００〜２００メソシュ）のカラムにかけ同緩侑
液で展開し、活性分画をそれぞれ減圧下にＧ％ ２ｉ’
ｒｊ乾固することにより、純粋のプロチンへの白色粉末
２２・５グ（ジ４プチノルアミノベゾチダーゼＩＶ ｌ
ｌ害ｆ（５ｊ４ ＩＣＡＯ＝ Ｉ 、 ｌμｇ／ ａｔ
）と、純粋のソプロチンＢの白色粉末６４・８ｐ！７
（ノベプチノルアミノベプチダーゼＩＶ阻害活性ＩＣ５
ｏ ＝ ５．５μ９７ｍｒｔ）を得た。
れ４ ｍ１Ｈ７）ｐＨ３，２１） ０・２ Ｍピリノン
−酢ｒ；Ｌ））緩ｌｉｊ液に清かし、酢酸でｐｉ（３・
２とし、それぞれ５０ ｍｌのあらかじめ同緩衝液で平
衡化したダウニック７＝ ５０ Ｗ（ピリジニウム型ｌ
Ｘ４１１００〜２００メソシュ）のカラムにかけ同緩侑
液で展開し、活性分画をそれぞれ減圧下にＧ％ ２ｉ’
ｒｊ乾固することにより、純粋のプロチンへの白色粉末
２２・５グ（ジ４プチノルアミノベゾチダーゼＩＶ ｌ
ｌ害ｆ（５ｊ４ ＩＣＡＯ＝ Ｉ 、 ｌμｇ／ ａｔ
）と、純粋のソプロチンＢの白色粉末６４・８ｐ！７
（ノベプチノルアミノベプチダーゼＩＶ阻害活性ＩＣ５
ｏ ＝ ５．５μ９７ｍｒｔ）を得た。
実施例３
（イ） １．９６７ ！９ｆ７）Ｌ −イソロイシン
ベンノルエステルトシル酸塩（蛋白質研究奨励金製）を
ジクロルメタン５０ ｔｎｔに溶かし、水冷下にトリエ
チルアミンＯ−７ｍｌを加え、次いで１．０７６ ｇの
ｔ−ブトキシカルボニル−し一ゾロリン（蛋白質研究奨
励金製）トド０２ｇの１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル（蛋白質研究奨励金製）・そして１・２４ｇのジシク
ロへキシルカルン」ζジイミドを加え、水冷下で２時間
反応した後、室温で１４時間さらに反応させた。反応液
を濃縮した後、再び酢酸エテル２００ Ｉｎｌを加え浴
解し、それぞれ２００ ｍｅづつの１０係クエン酸、水
、４襲炭酸水累ナトリウム永す水で順次洗ルにした。洗
滌後、酢酸エチル層に無水硫酸ノ゛トリウムを加え、脱
水した後・もイＬ酸す） ＩＪウムを除去し、減圧下に
濃縮して２ｇのｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−ゾロリル
ーＬ−インロイシルペンノルエステルヲに’４ タ。
ベンノルエステルトシル酸塩（蛋白質研究奨励金製）を
ジクロルメタン５０ ｔｎｔに溶かし、水冷下にトリエ
チルアミンＯ−７ｍｌを加え、次いで１．０７６ ｇの
ｔ−ブトキシカルボニル−し一ゾロリン（蛋白質研究奨
励金製）トド０２ｇの１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル（蛋白質研究奨励金製）・そして１・２４ｇのジシク
ロへキシルカルン」ζジイミドを加え、水冷下で２時間
反応した後、室温で１４時間さらに反応させた。反応液
を濃縮した後、再び酢酸エテル２００ Ｉｎｌを加え浴
解し、それぞれ２００ ｍｅづつの１０係クエン酸、水
、４襲炭酸水累ナトリウム永す水で順次洗ルにした。洗
滌後、酢酸エチル層に無水硫酸ノ゛トリウムを加え、脱
水した後・もイＬ酸す） ＩＪウムを除去し、減圧下に
濃縮して２ｇのｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−ゾロリル
ーＬ−インロイシルペンノルエステルヲに’４ タ。
仲〕 前項で得られた上記のｌ吻貿２ｇにトリフルオル
酢酸ｌ Ｏｍｅを加え室温で３０分放誼後減圧丁−に６
！！ ｋ 俵ノクロルメタンを加え減圧下に濃縮するこ
とにより残存のトリフルオル酢酸を溜去し２・８ｇの飴
状物質を得た。これを水１５０ ｒｒｒｌとエタノール
ｌ ５０ ｔｎｌＯ）ｉ昆液に溶かし、ダウエックスＣ
Ｃ１−型、Ｘ４．１００〜２００メツシユ） ｌ ＯＯ
ｒｎｔのカラムを通過させた後水洗した。通過液と水洗
液をあわせて凍結乾燥し１．６７９のＬ−ゾロリルーＬ
−イソロイシルづンジルエステル・塩酸塩を得た。
酢酸ｌ Ｏｍｅを加え室温で３０分放誼後減圧丁−に６
！！ ｋ 俵ノクロルメタンを加え減圧下に濃縮するこ
とにより残存のトリフルオル酢酸を溜去し２・８ｇの飴
状物質を得た。これを水１５０ ｒｒｒｌとエタノール
ｌ ５０ ｔｎｌＯ）ｉ昆液に溶かし、ダウエックスＣ
Ｃ１−型、Ｘ４．１００〜２００メツシユ） ｌ ＯＯ
ｒｎｔのカラムを通過させた後水洗した。通過液と水洗
液をあわせて凍結乾燥し１．６７９のＬ−ゾロリルーＬ
−イソロイシルづンジルエステル・塩酸塩を得た。
ｅ′ｔ 前項で得られた反応生成物６８３ ＋１１９
をとり、ジクロルメタン２０ ｍｌに溶解し、水冷下に
トリエチルアミンＯ−２’７ｍｌと４８３ ｍｌのカル
ｙ！？ベンゾキシ−Ｌ−パＩＪン（蛋白質研究金製）を
加え３９２■の１−ヒドロキシベンゾトリアゾールと４
８０ηのジシクロへキシルカルボジイミドを加え、水冷
下に２時間反応した後室温でさらに１４時間反応した。
をとり、ジクロルメタン２０ ｍｌに溶解し、水冷下に
トリエチルアミンＯ−２’７ｍｌと４８３ ｍｌのカル
ｙ！？ベンゾキシ−Ｌ−パＩＪン（蛋白質研究金製）を
加え３９２■の１−ヒドロキシベンゾトリアゾールと４
８０ηのジシクロへキシルカルボジイミドを加え、水冷
下に２時間反応した後室温でさらに１４時間反応した。
反応液を減圧下に濃縮し、再び酢酸エチル２００ ｍｌ
に溶解し、それぞれ２００ｄのＯ，ＩＮ塩酸・水、４幅
炭酸水素ナトリウム水、水で、順次洗酢した。洗洞後酢
ｈ５エチル層Ｐこ、無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し
、減圧下に濃縮乾固して、１・ＯＩ Ｉ） カルＨ，４
ヘンゾキシーＬ−バリルーＬ−ゾロリルーＬ−インロイ
シンペンジルエステルヲ得た。
に溶解し、それぞれ２００ｄのＯ，ＩＮ塩酸・水、４幅
炭酸水素ナトリウム水、水で、順次洗酢した。洗洞後酢
ｈ５エチル層Ｐこ、無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し
、減圧下に濃縮乾固して、１・ＯＩ Ｉ） カルＨ，４
ヘンゾキシーＬ−バリルーＬ−ゾロリルーＬ−インロイ
シンペンジルエステルヲ得た。
に） 両頂で得られた反応生成物７００ ｍｇを酢酸３
・５ｔｎｌ−水ｌＯｆｆＩｇおよびメタノール５ｄの混
液１で溶解し、５００■の１０％パラジウム炭素（用研
ファインケミカル社製）を加え、常圧で３時間水素ガス
気流中で接解還元した後、濾過しｐ液を減圧下に濃縮乾
固した。これを１００．ｄの水に溶解し、ダウエックス
５０Ｗ（１１型、ｘ４．ＩＱＯ−２００メツシユ）４０
ｒｎｌに吸着させＩＮのアンモニア水で溶出した。溶出
液を減圧下に濃縮乾固し２７１〜の純粋のＬ−バリル−
Ｌ−プロリル−Ｌ−イソロイシン（Ｖａｌ −Ｐｒｏ
−Ｉ嘩１ｅ ）即ちジゾロチンＣの結晶性白色粉末を得
た。
・５ｔｎｌ−水ｌＯｆｆＩｇおよびメタノール５ｄの混
液１で溶解し、５００■の１０％パラジウム炭素（用研
ファインケミカル社製）を加え、常圧で３時間水素ガス
気流中で接解還元した後、濾過しｐ液を減圧下に濃縮乾
固した。これを１００．ｄの水に溶解し、ダウエックス
５０Ｗ（１１型、ｘ４．ＩＱＯ−２００メツシユ）４０
ｒｎｌに吸着させＩＮのアンモニア水で溶出した。溶出
液を減圧下に濃縮乾固し２７１〜の純粋のＬ−バリル−
Ｌ−プロリル−Ｌ−イソロイシン（Ｖａｌ −Ｐｒｏ
−Ｉ嘩１ｅ ）即ちジゾロチンＣの結晶性白色粉末を得
た。
このジプロチンＣのジペプチジルアミノベゾチダーゼ阻
害活性Ｃｒｃｓｏ ） は１．９μ９／ｄであった。
害活性Ｃｒｃｓｏ ） は１．９μ９／ｄであった。
第１図はジゾロチン人の赤外部吸収スペクトル、俯２図
はジプロチンＢの赤外部吸収スイクトル、第３図はジプ
ロテンＣの赤外部吸収スペクトルを示す。
はジプロチンＢの赤外部吸収スイクトル、第３図はジプ
ロテンＣの赤外部吸収スペクトルを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ■、一般式 （式中Ｒ、ＲおよびＲは夫々に水素−メチル基又はエチ
ル基を示す）で表わさ、れる抗ジペプチジルアミノベプ
チダーゼ■活性を翁する新生理活性物質ジノロチンまた
はその塩又はエステル。 ２・式 ％式％（） で表わされるジプロテンＡである％ Ｈａｒｔ求の範囲
紀１項記載の化合物。 ８、式 で表わされるジゾロチンＢである特許請求の範囲第１項
記載の化合物。 ４、式 （ｉ’Ｈ３ （Ｌ） （Ｌ） （Ｌ）で表わされる
ジゾロチンＣである特許請求の範囲第１項記載の化合物
。 ５、バチルス属に属するジプロテン生産菌を培その両者
を採取することを特徴とする新生理活性物質ジプロチン
人又は／及びＢの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57132161A JPS5925366A (ja) | 1982-07-30 | 1982-07-30 | 新生理活性物質ジプロチン及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57132161A JPS5925366A (ja) | 1982-07-30 | 1982-07-30 | 新生理活性物質ジプロチン及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5925366A true JPS5925366A (ja) | 1984-02-09 |
| JPS6257198B2 JPS6257198B2 (ja) | 1987-11-30 |
Family
ID=15074787
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57132161A Granted JPS5925366A (ja) | 1982-07-30 | 1982-07-30 | 新生理活性物質ジプロチン及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5925366A (ja) |
-
1982
- 1982-07-30 JP JP57132161A patent/JPS5925366A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6257198B2 (ja) | 1987-11-30 |
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