JPS5995897A - 抗生物質の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗生物質の微生物による製造法に関する。さ
らに詳しくは２本発明者等によって分離されたミクロモ
ノスポラ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　）属に属す
る微生物を培養し、培養物から （式中Ｒ１は水素原子またはメチル基を意味する。） で示されるＹ−０２０７７Ｈγ（Ｒ１＝メチル基）およ
びＹ−０２０７７Ｈδ（Ｒ，−水素原子）物質を採取す
ることを特徴とするＹ−０２ｏ７７Ｈγおよびδ物質の
製造法に関する。

Ｙ−０２０７７Ｈｒおよびδ物質は特開昭５１−８６４
４４号公報に抗菌活性を示す物質として公知である。

同公報によれば、Ｙ−０２０７７Ｈγおよびδ物質はジ
エンタマイシン（Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ　Ｃ１）の酸化
的脱メチル化反応により化学的合成法により製造されて
も・る。

本発明は９発酵法によるＹ−０２０７７Ｈγおよびδ物
質の製造法を提供するものである。

本発明におし・て使用するミクロモノスポラ属に属する
Ｙ−０２０７７８γおよびδ物質生産菌としては、たと
えばミクロモノスポラ　エキノスポラサブスペーシス　
コモロエノシスヲ挙ケルことができる。

この微生物は長野県小諸市の土壌より本発明者等によっ
て分離された放線菌で、Ｙ−０２０７７Ｈなる菌株番号
を付された新菌株である。Ｙ−０２０７７Ｈ株の菌学的
性状は次の通りである。

■　形態的性質 Ｙ−０２０７７Ｈ株は一般に使用されて（・る各種の寒
天培地上で気菌糸を形成しない。液体培地で培養すると
光学顕微鏡的には分枝した基生菌糸（直径０．４〜０．
５μｍ）を生じその基生菌糸には隔壁は認められず、胞
子は菌糸から分枝した胞子柄の頂点に１個づつ着生して
いる。電子顕微鏡的には、胞子はほぼ球形でその直径は
約１μｍであり、胞子表面にはやや丸味を帯びた突起が
多数観察される。

２、各種培地での生育状態 各種の培地で２８ｔｒ、７〜２１日間培養した時の生育
状態及びコロニーの形状を第２表に示す。

第２表 ３　生理的性質 Ｙ−０２０７７Ｈ株の生理的諸性質を第３表に示す。

生育温度範囲、ミルクおよび繊維素に対する作用以外の
ものにつし・ては２８ｔｒで２週間後の観察結果を示す
。又生育温度は７〜３０日までの観察結果、ミルクおよ
び繊維素に対する作用は７〜２１日までの観察結果を示
す。

第３表 以上の性状をまとめると、Ｙ−０２０７７Ｈ株は各種寒
天培地上で真性の気菌糸を形成せず、基生菌糸より生じ
た胞子柄に胞子を単一に形成し。

細胞壁の分析によりメソ−ジアミノピメリン酸を有する
ことからミクロモノスポラ属に属する放線菌であると認
められる。本菌株に類似の既知菌株をＢｅｒｇｅｙ’ｓ
　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｔｖｅ　
Ｂａｃｔｅｒｉｏ−１ｏｇｙ　８　ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏ
ｎ　（１９７４）および種々の文献などにより検索する
とＹ−０２０７７Ｈ株と類似の菌株と　　　゛して、ミ
クロモノスポラ・エキノスポラ（Ｍｉｃｒｏ−ｍｏｎｏ
ｓｐｏｒａ　ｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ　）、　　ミクロ
モノスポラ・ジオネノシス（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏ
ｒａ　ｊｉｏｎｅｎ３ｉｓ、特開昭４９−５５８９５　
）ミクロモノスポラーサガミネノシス（Ｍｉｃｒｏｍｏ
ｎｏｓｐｏｒａ　ｓａｇａｍｉｎｅｎｓｉｓ、特開昭４
９−４７５９０）などがあげられる。しかしＹ−０２０
７７Ｈ株は、ミクロモノスポラ・ジオネノシス及びミク
ロモノスポラ・サガミネンシスに関する記載と比較する
とベネット寒天、オートミール寒天などにおける生育の
色が異なＦ）２又、前者がラムノースの利用性が極めて
良好なのに対し２後者の２株はこれを利用しな（・。一
方、Ｙ−０２０７７Ｈ株はミクロモノスポラ・エキノス
ポラと各種培地上での生育の色（暗い茶色〜黒）、胞子
表面に丸味を帯びた突起を有する点、糖の利用性、生育
温度範囲、至適生育ｐＨ，繊維素の分解作用、メラニン
様色素の生成（陰性）などの点で良く一致して℃・るこ
とから、Ｙ−０２０７７Ｈ株はミクロモノスポラ・エキ
ノスポラに属する菌株であると判定した。ミクロモノス
ポラ・エキノスポラに属する菌株として２　ミクロモノ
スポラ・エキノスポラ・サブスペーシス・バリダ（ＡＴ
ＣＣ１５８３８）　。

ミクロモノスポラ−エキノスポラ・サブスペーシス・エ
キノスポラ（ＡＴＣＣ１，５８３７）　、　　ミクロモ
ノスポラ・エキノスポラ・サブスペーシス・フエルギニ
ア（ＡＴＣＣ１５８３６）の３株が報告されているが、
第４表にＹ−０２０７７Ｈ株との比較による相違点を示
す。

第４　表Ｙ−０２０７７Ｈ株とミクロモノスポラ・エキ
ノスポラに属する３菌株との 相違点 これらの結果によりＹ−０２０７７Ｈ株は形態及び寒天
培地上での菌集落の色調、胞子の形状、生育温度範囲、
生育至適ｐＨ，メラニン様色素の生成（陰性）、繊維素
の分解作用、糖の利用性などに於て、ミクロモノスポラ
・エキノスポラの特徴を有しているが、ミクロモノスポ
ラ・エキノスポラに属する既知の３菌株とはゼラチンの
液化作用及びミルクの凝固作用において異った性状を示
す。又、グルコース１％含有培地（例えばグルコース・
アスパラギン寒天培地、ベネノト寒天培地など）におし
・てＹ−０２０７７Ｈ株は生育が悪（、一方ミクロモノ
スポラの既知３株は普通〜やや良好な生育を示す。又、
糖の利用性においてもわずかな相違がみもれる。以上の
事からＹ−０２０７７Ｈ株はミクロモノスポラ・エキノ
スポラに属する新亜種であると認め、ミクロモノスポラ
・エキノスポラ・ザブスペーシス・コモロエンシス（Ｍ
ｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　ｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ
　５ｂｓｐ。

Ｋｏｍｒｏｅｎｓｉｓ　）と命名した。Ｙ−０２０７７
Ｈ株はミクロモノスポラ・ニス・ビーＹ−０２０７７Ｈ
株として微工研に寄託されその寄託番号は微工研菌寄第
６５５７号である。

本発明に用℃・もれる菌株は、他の放線菌にも見られる
ごとく２人工的にまた自然に変異をおこしやすいが２本
発明のい５ｙ−０２０７７Ｈ株は天然から分離された放
線菌、あるいはこれを紫外線、Ｘ線、化学薬剤などで人
工的に変異させた菌株及びそれらの自然変異株をも包含
するものである。

本発明におけるミクロモノスポラ属に属するＹ−０２０
７７Ｈγおよびδ物質生産菌の培養においては通常の放
線菌の培養法が用℃・もれる。培養の為の栄養源として
は℃・ろし・ろのものが用いられる。炭素源としては同
化可能な炭素化合物であればよく２例えばブドウ糖、殿
粉、グリセリン、フラクトース、アラビノース、ラムノ
−４゜シュクロース、デキストリン、ヤシ油、大冥油等
が単独または組み合わせて用℃・もれる。さらに、アル
コール類、有機酸なども用うる場合がある。無機および
有機窒素源どしては、塩化アノモノ、硝酸ソーダ、硫酸
アノモノ、硝酸アノモン、尿素などが、有機窒素源とし
ては、ペブ）−’、ｉ？母Ｉキス、肉エキス、コーンス
チーブリカー、大豆粉、魚粉、綿実粕、カザミノ酸など
が単独または組み合せて用（・られる。培養法としては
液体培養法、特に深部通気攪拌培養法を行うのが有利で
ある。培養温度は２７〜３０Ｃ２ｐＨは中性付近で培養
を行うことが望まし−・。

培養時間は条件により多少異なるが通常３〜５日程度で
あり、　’ｔ−０２０７７８γおよびδ物質が最高力価
に達する時期を見計らって適当な時期に培養を終了する
。

培養液からＹ−０２０７７Ｈｒおよびδ物質の単離精製
は水溶性塩基性物質の分離に通常用いられる方法で行−
・うる。即ち、カチオン交換樹脂による吸脱着法、活性
炭、セルローズ、シリカゲルカラムクロマトグラフィー
等の方法を適当に組み合わせて行うことが出来る。

このようにして得られた抗生物質Ｙ−０２０７７Ｈγお
よびδ物質の理化学的性状は次のとおりである。

１）　　Ｙ−０２０７７Ｈγ物質の理化学的性状■　塩
基性の白色粉末 ■　融点＝１３７〜１４３Ｃ ■　比旋光度：〔α］’、’＝＋１１５．３　（Ｃ＝０
．６８．、Ｏ）■　紫外部吸収スペクトル：　　　（Ｒ
２０）末端吸収を示すのみ。

■　赤外吸収スペクトル　（ＫＢｒ）　　（ｃｒｎ’）
：本物質の赤外吸収スペクトルな第１図に示す。

■　核磁気共鳴スペクトル　（Ｒ２０）：第２図に示す ■　マススペクトル：　　第３図に示す本物質のマスス
ペクトルよりその分子量は４６３７分子式はＣｙ、ｕ４
ｔ　Ｎ５０７と決定した。

■　本物質のシリカゲル薄層クロマトグラフィーのＲｆ
値： Ｙ−０２０７７Ｈ−γ　　　０４９ ジエ／タマイシノ　Ｃ，０，５７ ／／　　　　　　Ｃ２０，５３ 〃　　　　　ＣＩａ　　　　　　０４７展開剤：クロロ
ホルム：メタノール：アンモニア水（２０：１５：８） ■　呈色反応： ニンヒドリン反応　　■ 坂口反応　　　　０ ２）　　Ｙ−０２０７７Ｈδ物質の理化学的性状■　塩
基性の白色粉末 ■　融点：］２６〜１４５Ｃ ■　比旋光度：　Ｃ（１１２Ｎ）１＝＋　９３．９　（
Ｃ＝０．６　Ｒ２０）■　紫外部吸収スペクトル　（Ｒ
２０）：末端吸収を示すのみ。

■　赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）　　（ｃｍ−’　）
　：本物質の赤外吸収スペクトルを第４図に示す。

■　核磁気共鳴スペクトル（Ｒ２０） 第５図に示す ■　マススペクトル：　　第６図に示す本物質のマスス
ペクトルよりその分子量は４４９１分子式はＣ，、Ｒ３
，Ｎ５０７と決定した。

■　本物質のシリカゲル薄層クロマトグラフィーのＲｆ
値： 抗生物質名　　　　　　　Ｒｆ値 Ｙ−０２０７７Ｈδ　　　　　０．４８ジエ／タマイシ
ノＣ＋　　　　　　　０．５７／ＩＣ２０，５３ ／／　　　　　Ｃ，、０，４７ ■　呈色反応： ニンヒドリン反応　　　■ 坂口反応　　　　　Ｏ 以上の理化学的性状より２本発明の発酵法による生成物
は。

式 で示されるＹ−０２０７７Ｈγ物質（Ｒ，＝Ｃ）］３）
およびＹ−０２０７７Ｈδ物質＜　Ｒ１＝　Ｈ）である
と同定された。

実施例 エキスｌ−ＩＪ　／２．０％、クルコース０．５％、コ
ーンスティープ・リカー０５％、ポリペプトン０５％、
酵母エキス（オリエンタル酵母社製）０５％、肉エキス
（極東製薬工業ＫＫ製）０．３％、プレイ／ハートイン
クェージョノブイヨン゛栄研”０５％、　Ｃａ　ＣＯｓ
　０．２％。

ｐＨ８，０なる組成の培地を５００　ｍｌ三角フラスコ
に５０ｍ１宛分注し、常法通り滅菌を行った後、Ｙ−０
２０７７Ｈ株を接種し、２８Ｃで７２時間培養をおこな
し・種培養液とする。

別にポテト・スターチ３％、脱脂大豆粉１．５％。

コーン・ステイブリカー０．５％、酵母エキス（オリエ
ンタル酵母社製）０．２％、　ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００
，０５％。

ＮａＣ１０，３％、　ＣＯＣｌ２０．０２ｇ／　ｌ　、
　ｐＨ７，３なる組成の培地を２０ｔのジャーファメン
ターに加え、消泡剤としてアデカノール（無電化社製）
　０．０３％を添加し。

常法通り滅菌后、上記の種培養液を３％の割合で植菌し
２９℃／１２０時間（２５０〜２７Ｏｒｐｍ　）培養を
行う。培養液として１５Ｚを得る。この操作を１４回繰
り返し培養液として約２０５乙を得る。

培養液２０５ｔＶｃ塩酸を加えｐＨ２に調整し室温３０
分攪拌する。ラジオライ）　６００　（昭和化学工業Ｋ
Ｋ）１０ｋｇを加え圧搾濾過する。沢液に水酸化ナトリ
ウム溶液を加えｐＨ７，ＯＫ調整した後、　　ＪＲＣ−
５０（ローム・アンド・ハース社製）　［ＮＨ４＋〕２
０１を充填したカラムに吸着させ、水洗后、ＩＮ−アン
モニア水５０ｔで溶出する。溶出液を減圧下濃縮し、濃
縮ｉヲｃＧ−５０（ローム・アット・）・−ス社製）Ｃ
ＮＨ４”　］　２．８　ｔ、を充填したカラムに吸着さ
せ水洗活水−アンモニア水濃度勾配法により溶出し、活
性画分を得た。これを減圧濃縮した后、シリカゲル（和
光紬薬）を充填したカラム（３，３Ｘ　５０ｃｍ　）を
用い、クロロホルム：メタノール：アンモニア水（２０
：　１５　：　８　）で溶出する。活性画分を集め濃縮
し濃縮液をＣＧ−５０ＴｙｐｅＩｌ（ローム・アンド・
）・−ス社Ｈ）　［ＮＨ４＋）　３０　ｍｌを充填した
カラムに吸着させ。

水洗活水−アンモニア水濃度勾配法により溶出し活性画
分を集め濃縮し、Ｙ−０２０７７Ｈγ、Ｙ−０２０７７
Ｈδ両物質の混合物を７７１１１ｇを得た。

この混合物をプレパレイテイブ薄層クロマトグラフィー
（シリカゲル）に供し、Ｙ−０２０７７８γ物質とＹ−
０２０７７Ｈδ物質を分離した。本市は（・ずれもＤｏ
ｗｅｘ　Ｉ　Ｘ　２　（ダウケミカル社）ＣＯＨＩを充
填したカラムを通導し、水で溶出させ、活性画分を凍結
乾燥しＹ−０２０７７８γ物質を白色粉末として３１ｎ
ｇ。

又Ｙ−０２０７７Ｈδ物質を白色粉末としてｌｌｒｒ１
ｇ得た。

本物質の活性画分の確認はバチルス・ズプチルスＡＴＣ
Ｃ６６３３を用いる生物検定、シリカゲル薄層クロマト
グラフィーを用℃・て行った。

【図面の簡単な説明】

（１１第１図および第４図は、夫々Ｙ−０２０７７Ｈγ
物質およびＹ−０２０７７Ｈδ物質の赤外線吸収スペク
トルを示す。 （２）第２図および第５図は、夫々Ｙ−０２０７７１（
γ物質およびＹ−０２０７７Ｈδ物質の核磁気共鳴スペ
クトルを示す。 （３）第３図および第６図は、夫々Ｙ−０２０７７１（
γ物質およびＹ−０２０７７Ｈδ物質のマススペクトル
を示す。 ５８ 第１頁の続き ０発　明　者　岩波勝 横浜市港北区錦ケ丘８−１ ５８９−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　ミクロモノスポラ属に属するＹ−０２０７７Ｈγ
   およびδ物質生産菌を培養し、培養物中にＹ−０２０７
   ７Ｈγおよびδ物質を蓄積させ、培養物からＹ−０２０
   ７７Ｈγおよびδ物質を採取することを特徴とするＹ−
   ０２０７７Ｈ−γおよびδ物質の製造法。 ２、　ミクロモノスポラ属に属するＹ−０２０７７Ｈγ
   およびδ物質生産菌がミクロモノスポラ・ニスｂ・ビー
   ・Ｙ−０２０７７Ｈ株である特許請求の範囲第１項記載
   の製造法。