JPS60188067A - ペルオキシダ−ゼ含有組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は安定なペルオキシダーゼ（以下、「ＰＯ」と略
称することもある。）含有組成物に関する。

ＰＯは過酸化水素の酸素を賦活してこれをａ酸化性物質
に伝達する酵素であり、最近では診断試薬、特に酊素免
没測定法（以下、「ＥＩＡｊと略称することもある。）
における標識用酵素としてその重要性が増加してきた。

しかしながらＰＯは）ｄｔ夜状態においては単独の場合
にも、また他の成分（例えば免疫活性物質）と結合して
いる場合にも不安定で、特に実際に使用する約１μｇ／
μを以下の低濃度の場合には極端に不安定であシ、従っ
て測定用試薬の品質が維持され妬く、安定した結果が得
られない。更にＰＯの酵素活性は、凍結乾燥した場合で
も著しく低下することがよく知られている。

本発明者らは、か−る欠点に鑑み、ｐｏを安定化させる
方法を得る目的で鋭意研究したところ、ＰＯ，糖または
悲アルコールおよび動物血清を含有せしめた組成物が所
期の目的を達成することを見い出し、これに基づいてさ
らにイｉｌｒ究した結果、本発明を完成した。

本発明は、■べｐオキシダーゼまたはこれと免疫活性物
質との結合体、■糖またはイクコアルコールおよび■動
物血清を含有せしめた組成物である。

本発明に用いられるペルオキシダーゼは、いずれの由来
のものでもよい。たとえば、植物から得られるものとし
て、西洋わさび、パイナツツ”ル。

イチジク、せＦＪＭ　、ソヲマメ、トウモロコシナトカ
ら得られるペルオキシダーゼが挙げられ、特に西洋わさ
びから得られるホースラディツシュ・パーオキシダーゼ
が好ましい。を離動物から得られるものとして、トリプ
トファン・ピロラーゼなどが挙げられる。轍生物から得
られるものとして、シュードモナス属菌から得られるチ
トクロームＣ・ペルオキシダーゼなどが挙げられる。

ＰＯは単独でもよいが、免疫活性物質と結合した結合状
態のものであってもよい。該免疫活性物質としては、抗
原、抗体および薬物等のハフ”テンがあげられる。該抗
原としては、ホルモン〔例、ヒト絨毛性ゴナドトロピン
（以下「ｈｃＧＪと略称する。）、ヒト胎盤性ラクトー
ゲン、黄体ホμモン、インスリン、成長ホルモン、副甲
状腺ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、膵グρカゴン、力
〃シトニン、副腎皮質ホルモン、成長ホルモンなど〕、
タンパク質〔例、ＩｇＧ、■ｇＭ、工ｇＥ。

工ＧＡ、α−フェトプロティン、ＣＩＡ（癌胎児性抗原
）、フィブリノーゲン、β「ミクログロブリン、ミオグ
ロブリン、Ｃ反応性タンパクなど〕、ウィルス抗原（例
、風疹ウイｐスＨＡ抗原、センダイウィルスＩＩ　Ａ抗
原、肝炎ウィルス抗原など）、投与薬剤などが挙げられ
る。

抗体としては、従来既知の方法でウサギ、ラット、モル
モット、ヒツジ、ヤギ等の哺乳動物やニワトリ、アヒル
、ガチョウ等の鳥類に抗原を免疫して得られた抗体（例
、抗ｈｃＧ抗体、抗インシュリン抗体、抗α−フェトプ
ロティン抗体、抗膵グルカゴン抗体、抗ＩｇＧ抗体、抗
ＩｇＭ抗体。

技工ｇＥ抗体など）ならびにＭｉｌｓｔｅｉｎらの方法
〔ネイチュア（Ｎａｔｕｒｅ　）　＋第２５６巻（１９
７５年）、第４９５頁〕で得られたモノクローナμ抗体
であればいずれでもよい。

ハプテンとしては、たとえばステロイド類、ビタミン頬
、カテコーμアミン類、抗生物質（９Ｊ、ペニシリン類
、セファロスポリン頬、マクロライド類、β−アドレナ
リン作慟薬、ジアゼパム頚なと）などが挙げられる。

ＰＯと免疫活性物質との結合の形態としては、共有結合
があげられる。結合方法としては、種々の公知の方法に
従えばよく、たとえば（ａ）メソッド・工ｙ　−ｇ”−
ｐ　ａジー（ＭＯｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　
）第３７巻１３３頁（１９７５年）に記載された過ヨウ
素酸架４１法、すなわち、べμオキシダーゼの糖の部分
を過ヨウ緊酸で酸化してアμデヒドとし、これと免疫活
性物質のアミノ基とを架橋結合させる方法、（ｂ）ペル
オキシダーゼと免疫化学的活性物質例、ｔばタンパクと
をグルタルア グルタ！レアルデヒド架矯法、すなわちべμオキシダー
ゼとタンパクとを同時に加える１段階法〔イムノケミス
トリー（　工ｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉａｔｒｙ　）　、第
６巻（１９６９年）、第４３頁参照〕とベルオギシダー
ゼをグルタルアルデヒドで処理し洗浄後タンパクを結合
させる２段階法〔イムノケミストリー。

第８巻（１９７１年）、第１１７５頁参照）　、（ｃ）
アナリテイカル・レターズ（　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　
Ｌｅｔｔｅｒｓ）第１５巻１４７頁（１９８２年）、特
開昭５８−−１４９７００号公報に記載の方法、すなわ
ちＮ−（４−力ｐボキシシクロヘキシルメチＡ／）マレ
イミドのＮ−ハイドロキシサクシニイミドエステｌｖ等
の化合物を用いて、ＰＯのアミノ基と免疫活性物質のス
ルフヒドリル基とを架橋結合きせる方法等があげられる
。

本発明における勘としては、たとえば単糖＞：＋１とし
て５灰糖のアラビノース、キシロース、リボースなどが
、６炭糖のグルコース、フラクトース。

マンノース、ガラクトース、ツムノースなどが、二Ｎｊ
Ｊ　ｊＭｉ　トＬ／　テマルトース，セロビオース、ト
レハロース、ゲンチオビオーヌ，ラク１ーース，シヨ糖
などが、三藺預としてラフイノーヌ，マルトトリオーヌ
などが、多ＩＪ，’ｉ頬としてデキストリン、シクロデ
キストリン（α−．β−，γ−）、可溶性デンプンなど
が、それぞれ挙げられる。

糖アルコール ールとしてキシリットなどが、ｋＱ’Ｊｔ’ｓ数６の単
糖アルコール ）−／Ｌ’などが挙げられる。

なかでも、二糖類が好ましい。

塘または糖アμコーμは、それらの混合物でもよい。

本発明に用いられる動物血清としては、たとえば羊血清
、ヤギ血清、ウサギ血清、ウシ血清等があげられる。

本発明の組成物において、ペルオキシダーゼまたはこれ
と免疫活性物質との結合体に対する朝または糖アｐコー
μの比率は、通常的１０　ないし１０９倍であシ、好ま
しくは約１０５ないし１０７Ａ・ 倍である。ペルオキシダーゼまたはこれと免疫活性物質
との結合体に対する動物血清の比率は、通達・ 密約１０３ないし１０９倍であシ、好ましくは約５　７
２゛ １０　ないし１０　倍である。（外：ｔｉ−ｅ、）本発
明の組成物が混合物である場合、各成分の添加順序は特
に限定されない。

本発明の組成物とは、■ペルオキシダーゼまたはこれと
免疫活性物質との結合体、■糖まだは糖アルコールおよ
び■動物血清を含有せしめた水性組成物のみならず、こ
れを凍結乾燥して得られたものをも含む。

本発明の水性Ｊ、ｆｉ成物あるいは上記凍結乾燥に付す
直前の水性組成物において、ｐｏの含有量は通常、該水
性組成物中Ｌ／当シ約１０　ｅｇないし１ｑとなる量、
好ましくは約１００　ｐｇ、ないし１０μすとなるｈｔ
である。丑だ糖またはｊ唐アルコールの含有量は、通常
、該水性組成物中の濃度が約０１ないし３　０　Ｗ／ｖ
％　となる量、好ましくは約１ないし１　０　Ｗ／Ｖ％
　となる量である。動物血ン１１の含有量は、１ｉＪｆ
ｉ常、該水性組成物中の濃度が約０、１ないし３　０　
Ｖ／Ｖ％　となる量、好ましくは釣１ないし１　０　Ｖ
／Ｖ％　となる量である。

該水性組成物を調製する場合、各物質の添加順序は特に
限定されない。まだこれら水性ＸＭ成物に数パーセント
のアルギニン、リジン、グリシン。

アラニンなどのアミノ酸またはゼラチン、ゲリセイト，
スキムミルりなどの蛋白質を添加してもよい。

該水性組成物を纜結乾燥するには常法、例えば約−３（
ｌないし約−５０℃で該水性組成物を凍結させ、ついで
約１０℃ないし約２０℃の温度で減圧下で氷を昇華させ
て行なわれる。凍結乾燥後、窒素ガスシール又は減圧密
栓すると、カビ・、ｉｎ＋　ｔｚｔ等の混入による１１
（敗・劣化を防止するためによシ好ましい。該ジに素ガ
ヌシールは、通常、凍結乾燥物を十分に爪≦くガスで置
換した後、窒素ガス気流下で密栓することにより行われ
る。また減圧密栓は、ａ常、凍結乾燥物を減圧下（例え
ば約１０ないし０．　０　１　ｎｎｎｌ１ｇ　）で密栓
することによシ行なわれる。

このようにして得られたｐｏを含有する水性組成物の凍
結乾１’ｉ’！物は、ｐｏの酵素活性がほとんど失なわ
れておらず、また良い形状を保っているので、試桑とし
て有用である。

まだ上記方法で得られたＰＯと免疫活性物質との結合体
を含有する水性組成物の凍結乾燥物は、その酵素活性は
安定化されておシ、免疫活性の低下が防止され、また良
い形状を保っているので、診１ｉＪ？試薬として有用で
あシ、特にｐｏが比較的安価で高い比活性を有している
ことからＥＩＡ用の測定試薬として有用である。かかる
ＥニーＡでは、酵素と結合した抗原を一定量の抗体と共
に定量すべき検液中の抗原に加え、競争的に結合させ、
抗体に結合もしくは非結合の１″Ｊｉ素活性をｒｉｉＵ
定するべ多結合法〔フエプス・レターズ（Ｆ”ＥＢ８Ｌ
ｅｔｔｅｒｓ　）　第１　５　９　２　３　２頁（１９
７１年）、クリ二カ・キミカ・アクタ（　Ｃｌｉｎｉｃ
ａ　ＣｋｌｌｍｉｃａＡｃｔａ　）　ｐ（’；　６　７
巻２８３頁（１９７６年）　ｙｉ’．イ〕、あるいは固
４目上の抗体もしくは抗原に（ツ）液中の抗原もしくは
抗体を反応させ、固相に結合した６ｉ紫活性を＋ｊｉｌ
ｌ定するサンドインチ法が用いられ、まだ種々の変法が
使用される〔クリ二カ・ギミカ・アクタ（　Ｃｌｉｎｉ
ｃａ　Ｃｈｉｍｉｃａ　Ａｃｔａ　）　第３　１巻第１
頁（１９７７年）参照〕。

本発明の凍結”；ｂ　ｋＶｊ物は、たとえば、サンドイ
ツチ法によるｈｃＧの免疫化学的測定法に、下記定彦用
キットの成分として用いることができる。ｎ亥キットと
しては、主として （１）担体上に保持された抗体 （２）ｐｏにより標ｊ６ｉｌ化された抗体（本発明のｌ
束結乾燥物。縛または１７ムアｐコールおよび動物血清
も含有する。） （３）　０〜１００ＩＵ　のイ票ｉ＠ｈｃａ（４）　上
記（１）〜（３）の試薬および？ＩＪ、検試料の希釈に
用いる緩衝液（該試薬および該被検試料の希釈に用いる
ことができる緩衝剤であればいずれでもよいが、その−
例としてはｐＨ（５〜９のリン酸緩１付液まだはグリシ
ン緩衝液が挙げられる。）（５）インキュベーション後
、担体の洗浄に用いる緩衝液（該担体の洗浄に用いるこ
とができる緩’　１Ｊｊｊ剤でろればいずれでもよいが
、その−例としてはリン酸値向液′またはグリシン緩衝
液が挙げられる。） （６）　１４　Ａ（Ｊｉ’ｉ質（好ましくはオルトフェ
ニレンジアミン）、酵素基質の溶解に用いる緩衝液（好
ましくはリン酸４＋”ｉｄ　蒲ｉｉＺ　）および酵素反
応停止に用いる緩衝液（好ましくは硫酸） が挙げられる。

また、上記（１）と（２）とは、あらかじめ混合しであ
るものでもよい。

上記のキットはたとえば下記の方法により使用するのが
好゛ましい。

標準ｈｃＧもしくは被検成約１０〜２００μｍに試薬（
４）を加えて希釈し、一定！、（り試ｒｊｌ；（ｉ）　
、次いで試薬（２）を約１０〜３００μＥを加えたのち
、約０〜４０℃で反応させる。約１〜２４時間反応後、
試薬（５）で洗浄し４１体上に結合している標識剤の活
性を測定する。裁ノｑｉ夜約１０〜１０００［を加えて
約２０〜４０℃で約０．５〜２４時間反応させたのち、
酵素原］、ｕを停止させ、反応２夜中の吸光度を測定す
る。

上記した如く、本発明の組成物は、ペルオキシダーゼの
ｌｊγ素活１生が高く保持されている。したがって、該
組成物は、試薬あるいは酵素免疫測定法における診断試
二（社として有用でおる。

特に１」￥素免疫測定法による診１１）１試典の場合、
高い感度と再現性は爪要な課題でわシ、そのためには酵
素Ｉ？鎗抗体の酵素活性が高く保持されていることは必
須である。さらに商品１＋ｌｌｉ　６αの面から、凍結
乾燥品の外現、溶解性とも良好でなければならない。そ
の点、本発明の組成物は、これら必要な条件を全て満た
しておシ、診断試す３としてきわめて有用である。

以下に、参考例、実施例を挙げて本発明を更に具体的に
説明するが、これらが本発明の範囲を制限するものでな
いことはいうまでもない。

妻考例１ 静度情５１杭ｈ　ＣＧ・工ｇｏのＬ！！御：（１）　’
１ｉｖａｔｙｈ　ｃ　Ｇ　（単位約１００００工Ｕ／１
ｎダ）をプロインドの完全アジュバントと混合しウサギ
に免疫して得た抗ｂＧＧ血清（ウサギ）に飽和ＩＡ；　
酸アンモニウムを添加し、塩析を行なった。３０００ｒ
ｐｍ３０分間遠心後、生じた沈赦を生理食塩水に溶１′
イし、−晩生理食塩水に透析し、抗ｈＣＧ抗体ガンマグ
ロブリンを得た。

（２）上記抗ｈｃＧ抗体ガンマグロブリンをブロムシア
ン活性化セファロース４Ｂ（ファルマシア・ファイン・
ケミカル社製、スエーデン）に＠ｍ　ｈ−Ｃ，Ｇ　（単
位約１．００００工Ｕ／Ｐｉ　’）をザ・ジャーナル・
オプ・バイオロジカル・ケミストリー（ＴｈｅＪｏｕｒ
ｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｌｘｅｍｉｓ
ｔｒｙ　）　、第２４５巻（１９７０年）、第３０５９
頁に記載の方法にイたって結訃させて作ルμした・ｈｃ
Ｇ結合セファロース４Ｂカラムで、免役アフイニテイー
クロマトグフフイーを行なった。ｈＣＧ結合セファロー
ス４Ｂに保持された抗ｈｃａ抗体画分は、１　ｈ＋食鳴
加グリシン−塩（ズシ緩１付液（ｐＨ１，０）でｌ容出
した。

溶出液から分取した有効画分は０．１１．Ｉ生即食塩加
リン＋１ｉｆ２　Ｍ　萌１夜に対して透析し、４＋’ｆ
！１ｉｕＬ＋’Ｌｈ　Ｃ□抗体ガンマグロブリンを１１
）り。

参考例２ 抗ｈＣＧ−工ｇＧ−Ｆａｂ’−ＩＩＲＰＯ結合体の？！
！造： （１）参考例１でｆＤ製した精製杭ｈｃｏ・ＩｇＧをザ
・ジャーナル・オブ・イムノロジー、　第１１６巻（１
９７６年）、第１５５４頁に記載の方法に従って、ペプ
シンで消化しさらに２−メルカプトエチルアミンで３７
℃４時間Ｊ・４元した後、セファデツクヌＧ２５（ファ
ルマシア・ファイン・ケミカルズ社製、スエーデン）で
精α、１、抗ｈＣＧ−ＩｇＧのＰ　ａ　ｂ’フフクショ
ンを採取した。

（２）西洋わさび由来のホースラディツシュ・ベルオキ
ｖｌｆ−−Ｖ　（ＨＲＰ　Ｏと略称する。）にアナリテ
ィ力μ・レターズ、第１５巻（１９８２年）。

第１４７頁あるいは特開昭５８−１４９７００号公報に
記載の方法に従って、Ｎ−（４−カルボキシシクロへキ
シルメチ／ｌ／）マレイミドのＮ−ハイドロオキシナク
ンニイミドエステルを作用させてマレイミド基を導入し
た。このマレイミド結合ベルオギシダーゼ１，５りに上
記（１）で作製した抗ｈｅＧ・ＩｇＧのＦ　ａ　ｂ’フ
ラクション１．７ｑを加え、４℃、１晩反応させた。反
応混合物はウルトロゲ／Ｌ／（ＬＫＢ社製、フランス）
カラムで精製し、ｒ１￥素活性ならびに抗体活性を有す
るフラクションを分取し、抗ｈＣＧ・工ｇａのＦ’　ａ
　ｂ’とＨＲＰＯの結合体を得だ、 参考例３ メソッド・エンザイモロジー第３７巻（１９７５年）、
第１３３頁に記載の方法に従って、ペルオキシダーゼと
フルオロジニトロベンゼン（ＤＮＰ）とを室温で１時間
反応させ、Ｑ、　Ｑ　Ｉ　Ｍ　Ｎａ２ＣＯ３緩爾液（ｐ
Ｈ９，５）で１晩透析した。透析後は００６Ｍ過３つ素
酸を加えて室温３０・分酸化した後エチレングリコ−ｐ
を加えて反応を停止させ、。

再び０．０１　Ｍ　Ｎａ２ＧＯ３１Ｊｉ衝τ（＊ＣｐＨ
９，５＞で１１１免透析した。次いで得られたＤＮＰ−
アルデヒド−パーオキシダーゼはヒ）ＩｇＧと室温３時
間反応させ、ＮａＢＨ４で姐元、セファデックスＧ−２
００カラムで精製し、酵素活性ならびに抗体活性を有す
るフラクションを分取し、ヒトＩ　ｇ　Ｇ　、！：　Ｈ
ＲＰＯとの結合体を得た。

参考例４ 酵素活性の測定法： ００２％過酸化水素含有０．２％、オルトフェニレンジ
アミン溶液（ｐＨ４，９）５００μＪＫペルオキシダー
ゼまたはべｐオキシダーゼ結合抗体を所定員加え、混合
した後、室温で１時間反応する。

次いで２　Ｎ　−ｔｉ−２＋・ＰＩ　１．５　ｍｌを加
え混合し、酵素反応を停止させる。反応液中の吸光饋（
波長４９２ｎｍ　）を測定し、酵素活性を算出する。

実施例１ 西洋わさび由来のホースラディツシュ・ペルオキシダー
ゼを下記の緩（ｄｌｉ７液（ａ）　、　（ｂ）及び（Ｑ
）にそれぞれｍ　８１〆した。溶解液のそれぞれのＨＲ
ＰＯ濃度は４０　ｎｇ／ｍｅ　であった。

（ＰＬ）　５　％（Ｗ／Ｖ　）ｉ唐または糖アルコール
たは糖アルコールの種類は第１表に示す）。

０、８５％（　ｗ　／ｖ　）　ＮａＣ１含有０．０１Ｍ
リン酸、ｉ漫ＩＮ液（　ｐＨ　８．０　） （ｂ）５％（　Ｗ／Ｖ　）糖または糖７）ｖ：Ｉ−／Ｌ
／，５％（Ｖ／Ｖ）羊血′ＩＩ＋？　、　０．　８　５
％（Ｗ／Ｖ）ＮａＣ１含有０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ８．０）（Ｑ）　（ｂ）と同様であるが糖まだは塘ア
ルコールを含まないもの。

（ｄ）　（ａ）と同様であるが糖または糖アルコールを
含まないもの。

上記ＨＲＰＯ含有水性組成物を一４０℃で凍結し、次い
で１０℃ｅ　１　０　ｍｍｌ１ｇ以下で凍結乾燥し、凍
結乾燥物を得た。室温で２日間放置後凍結乾燥物を開封
し、得られた組成物について参考例４記戦の方法でＨＲ
ＰＯ酵素活性を測定したところ第１表の結果を１４だ。

第１表 ＊初期活性を１００とした時の値 上記の表１から明らかなように、ＨＲＰＯ含有水性組成
物（ａ、）のｅ１■結屹燥物を開封して得られた組成物
はいずれもｐｏのｒｉ′ｉ、素活性は低いが、塘または
剪ア〃コールおよび羊血清を添加したＨＲＰＯ含有水性
組成物（ｂ）の凍結乾燥物を開封して得られた組成物で
は、いずれも初期活性の８０％以上という品い酵素活性
を保持していた。まだ、ＩＩ　ＲＰＯ含有水性組成物（
ｃ）および（ｄ）の凍結乾燥物を開封して得られた組成
物では、酵素活性はきわめて低下していた。

実施例２ 参考例２で得られた抗ｈＣＧ・ｌ１７ＧのＦ’ａｂ’−
ＨＲＰＯ結合体を実施例１で選定した下記の緩衝液に溶
解した。それぞれの溶液中のＨＲＰ　Ｏ−Ｆ　ａ　ｂ’
湿度は５００〜／解ｔであった。

（ａ）５％（ｗ／ｖ）糖（糖の種類は第２表に示す）、
０．８５％（ｗ／Ｖ）Ｎａｃｌ含有０．１Ｍリン酔緩向
液（ｐｌｌ　８．０　） （ｂ）５％（Ｗ／Ｖ　）糖、５％（Ｖ／Ｖ　）羊血清。

０．８５％（Ｗ　／　Ｖ　）　ＮａＣ１含有０．ＩＭす
７　ｊ４ｊ７緩衝液（ｐＨ８，０） （ｃ）　（ａ）と同じであるが、糖類を含まないもの。

上記のＨＲＰＯ−Ｆ’ａｂ’含有水性組成物を一４０℃
で凍結し、次いで１０℃、　１０　ｍｍ１ｉ３以下で凍
結乾燥後、該凍結乾燥物を十分に窒素ガスｉ置換し、窒
素ガス気流下で密栓することにより窒素ガスクールを行
ない、凍結乾燥物を得た。淀結乾炊ミ物について、凍結
乾燥直後および５０℃、２４時間保存後のＨＲＰ　Ｏ酵
素活性を実施例１と同様１内定したところ、第２表の結
果を得た。

第２表 ＊　初期活性を１００とした時の値 ＊＊凍結乾燥ｔＢ後を１００とした時の値上記表２から
明らかなように、凍結乾燥物（ａ）および（ｂ）はいず
れも凍結乾燥物（ｂ）を２４時間保存して開封して得ら
れた組成物は、高々初期活性の８０％の酵素活性を保持
しているにすぎないが、ｙ＋１．ｉｉに羊血清を添加し
た凍結乾燥物（ｂ）は２４時間保存後も１００％近い残
存活性を示し、酵素の安定性は高く保持されていた。

実ｂ（ｉｉ例３ 参考例２で得られた抗ｈＣＧ・ＩｇＧのＦ’　ａ　ｂ’
−ＨＲＰＯ結合体を５％（ｗ／ｖ　）マルトースに弔３
表に示す各種動物血清、牛血清アルブミン〔以下ＢＳＡ
と略す〕、又はヒト血清アルブミン〔以下Ｈ３Ａと略す
〕を添加した０、８５％（Ｗ／Ｖ　）ＮａＣ１含有０．
１　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）に溶解した。次いで
、実施例２と同様に処理して凍結乾燥物を得だ。

凍結乾燥物について、凍結乾燥直後および５０℃、２４
時間保存後のＨＲＰＯ酵素活性を参考例４記載の方法で
測定したところ、第３表の結果を得た。

第３表 ＊　初期活性を１００とした時の値 ＊ネ　凍結乾燥直後を１００とした時の値表３から明ら
かなように、マルトースおよび動物血清を添加した凍結
乾燥直後は、凍結乾燥直後および５０℃、２４時間保存
後とも、９０％以上の残存酵素活性を示し、安定性も陵
れていた。

しかし、マルトースおよびＢＳＡあるいはＩ　ＳＡを添
加した場合は、凍結乾燥による残存活性およびさらに５
０℃、２４時間保存後の酵素活性は、著しく低下してい
た。

実施例４ 参考例３で得られたヒトＩｇＧとＨＲＰ　Ｏとの結合体
を緩蒲液〔マルトース（０〜２０％Ｗ／Ｖ　）、手直？
ｉ？（０〜２０％Ｗ／ｖ）、０．８５％Ｗ　／　ＶＮａ
、Ｃ１含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）　）Ｋ
溶解し、実施例２と同様に処理して凍結乾燥物を得た。

凍結乾燥物について、凍結乾燥直後および５０℃、２４
時間保存後のＨＲＰＯ酵素活性を参考例４記ｉ１ｉの方
法で測定したところ第４表の結果ｒ得た。

６４表 ＊　初期活性を１００とした時の値 ＊＊　凍結乾ｌｉ！拍■後を１００とした時の値茶４ｔ
、工から明らかなように、マルトースと手直清とを含む
凍結乾燥物を開封して得られた組成物の酵素活性はいず
れも初期活性の９０％以上の活性を保持していた。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）、■ペルレオキシダーゼまたはこれと免疫活性物
   質との結合体、■塘または糖アルコールおよび■動物血
   清を含有せしめた組成物。
2. （２）、上記０．■および■を含有せしめた水性組成物
   を凍結乾燥してなる特許請求の範囲第１項記載の組成物
   。