JPS6024711B2 - 新規セルラ−ゼ及びその製造法 - Google Patents
新規セルラ−ゼ及びその製造法Info
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- JPS6024711B2 JPS6024711B2 JP3708682A JP3708682A JPS6024711B2 JP S6024711 B2 JPS6024711 B2 JP S6024711B2 JP 3708682 A JP3708682 A JP 3708682A JP 3708682 A JP3708682 A JP 3708682A JP S6024711 B2 JPS6024711 B2 JP S6024711B2
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- JP
- Japan
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- cellulase
- range
- ceratocystis
- novel cellulase
- action
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、新規セルラーゼＡおよびその製造法、更に詳
細にはセラトシスチス（Ｃｅｒａのｃｙｓｔｉｓ）属に
属する新規セルラーゼＡを培養し、該培養物より新規セ
ルラーゼＡを分離、採取することを特徴とする新規セル
ラーゼＡの製造法に関する新規セルラーゼＡの製造法に
関するものである。
細にはセラトシスチス（Ｃｅｒａのｃｙｓｔｉｓ）属に
属する新規セルラーゼＡを培養し、該培養物より新規セ
ルラーゼＡを分離、採取することを特徴とする新規セル
ラーゼＡの製造法に関する新規セルラーゼＡの製造法に
関するものである。
本発明において、「セルラーゼＡ」とは、後述の理化学
的性質を有する酵素を指称するものとする。
的性質を有する酵素を指称するものとする。
本発明により得られるセルラーゼＡは、天然セルロース
及びセロバィオースに特異的に作用し、その８−１，４
ーグルコシド結合を末端から切断（ェキソ型）する一方
、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）及びアビセル
を６０分程度の極めて短時間にその内部で切断（エンド
型）する基質特異性を有する酵素である。
及びセロバィオースに特異的に作用し、その８−１，４
ーグルコシド結合を末端から切断（ェキソ型）する一方
、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）及びアビセル
を６０分程度の極めて短時間にその内部で切断（エンド
型）する基質特異性を有する酵素である。
このような特徴的な基質特異性を有するセルラーゼは、
従来のかび類、細菌類、軟体動物、高等動物等の起源の
セルラーゼには見出されていない。したがって本発明の
セルラーゼＡはその基質特異性において新規な酵素であ
る。以下に、本発明について詳述する。
従来のかび類、細菌類、軟体動物、高等動物等の起源の
セルラーゼには見出されていない。したがって本発明の
セルラーゼＡはその基質特異性において新規な酵素であ
る。以下に、本発明について詳述する。
まず、本発明において用いる微生物は、セルラーゼＡの
生産能を有するセラトシスチス（Ｃｅてａ−ｔｏｃ＄ｔ
ｉｓ）属に属する菌種であり、その一例として、セラト
シスチス・デンシフローラ・ノブ・エスピー（Ｃｅｒａ
ｔｏｃ＄ｔｉｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ 肌ｖ ｓｐ）
（以下、「セラトシスチス属菌」と称する。
生産能を有するセラトシスチス（Ｃｅてａ−ｔｏｃ＄ｔ
ｉｓ）属に属する菌種であり、その一例として、セラト
シスチス・デンシフローラ・ノブ・エスピー（Ｃｅｒａ
ｔｏｃ＄ｔｉｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ 肌ｖ ｓｐ）
（以下、「セラトシスチス属菌」と称する。
）と呼称される微生物が挙げられる。前記セラトシスチ
ス属菌は、松枯をおこした材質内部から分離されたもの
であり、工業技術院微生物工業技樹研究所に昭和５７年
２月２６日付寄託され、その微生物受託番号は、微工研
菌寄第６３６５号（ＦＥＲＭＰ−６３６５）である。
ス属菌は、松枯をおこした材質内部から分離されたもの
であり、工業技術院微生物工業技樹研究所に昭和５７年
２月２６日付寄託され、その微生物受託番号は、微工研
菌寄第６３６５号（ＦＥＲＭＰ−６３６５）である。
前記セラトシスチス属菌の菌学的性質は次のとおりであ
る。
る。
【ａー 各塔地における生育状態
■ ッアベック寒天培地
培地組成 生育状態
ＫＯＺＯ．５９、ＭｇＳ０４ ２０〜２．５℃で培養後
、１０．５９、Ｋ２ＨＰ０４ 週間で径５．５伽の円
形、白色１．０９、 の菌最を形成する。
、１０．５９、Ｋ２ＨＰ０４ 週間で径５．５伽の円
形、白色１．０９、 の菌最を形成する。
菌最の中ＮａＮ０３２．０９、 央部は灰色であり
、全般に羊ＦｅＳ０４・７日２０ 毛状である。緊落
の裏側は、０．０１９、庶糖３０９、 外縁は濃黄色、
中央部は灰味寒天１５〜２０９、水ＩＺ紫黄色を呈する
。発育は良好ｐＨ６．８ で、以後菌最は
中央部より灰濃青色（黒色に近い）に変化する。
、全般に羊ＦｅＳ０４・７日２０ 毛状である。緊落
の裏側は、０．０１９、庶糖３０９、 外縁は濃黄色、
中央部は灰味寒天１５〜２０９、水ＩＺ紫黄色を呈する
。発育は良好ｐＨ６．８ で、以後菌最は
中央部より灰濃青色（黒色に近い）に変化する。
培養１０日後には、廉落の
径が１０肌とをり、羊毛状に
発育し、中心と外縁近くＫ暗
黒色の変色壕を作り、発育良
好で白色菌最部は密である。
裏側は、外縁は白色であるが、
髪落の円部は暗黒色に近く、
幾分黄青味を有する部分があ
る。
以後、徐々に髪落は黒色化する。
■ ツアベツク・酵母エキス・ベプトン済地産業別審査
基準「微生物の発酵生産物」記載の菌学的性質の使用培
地（ッアベック寒天塔地を除く。
基準「微生物の発酵生産物」記載の菌学的性質の使用培
地（ッアベック寒天塔地を除く。
）においては生育が不十分であるため、以下の培地を用
いた。培地組成 生育状態 ＫＯ２０．５９、 ２００Ｃ附近で培養すると
、ＩＭｇＳ０４０．５９、 週間で液面に白色の羊毛
状緊落Ｋ２ＨＰ０４１．０９、 を浮遊せしめ、１０日
後Ｋは液ＮａＮ０３２．０ｇ、酵母 面を白色菌叢でお
おぅ。
いた。培地組成 生育状態 ＫＯ２０．５９、 ２００Ｃ附近で培養すると
、ＩＭｇＳ０４０．５９、 週間で液面に白色の羊毛
状緊落Ｋ２ＨＰ０４１．０９、 を浮遊せしめ、１０日
後Ｋは液ＮａＮ０３２．０ｇ、酵母 面を白色菌叢でお
おぅ。
２０日エキス２．５９、ベブトン後には菌叢は灰味色
をおび、液５９、グリセリン５ｍＺ、は黄褐色を呈し、
入れた炉紙を炉紙１０９、水ＩＺ、 半分程度消失する
。以後は、灰ｐＨ６．５ 黒色味が強くなり
、１ヵ月後Ｋは全体が灰黒色の液となり．大半の繊維を
消失する。
をおび、液５９、グリセリン５ｍＺ、は黄褐色を呈し、
入れた炉紙を炉紙１０９、水ＩＺ、 半分程度消失する
。以後は、灰ｐＨ６．５ 黒色味が強くなり
、１ヵ月後Ｋは全体が灰黒色の液となり．大半の繊維を
消失する。
ｏＨは６．５から１ヵ月後には８．２〜８．
８．５程度となる。
■ 松葉煮汁塔地
培地組成 生育．状態
ＫＯＺＯ．５９、ＭｇＳ０４ 発育良好で、湿性羊毛状
０．５９、Ｋ２ＨＰ０４ 友いしくもの巣かび状で後
１．０９、ＮａＮ０３２０公薦糖に至り暗色ないし黒色
とを５０９・ベプトン５９、酵母 る。
０．５９、Ｋ２ＨＰ０４ 友いしくもの巣かび状で後
１．０９、ＮａＮ０３２０公薦糖に至り暗色ないし黒色
とを５０９・ベプトン５９、酵母 る。
培地上ではチャララェキス２．５９、寒天 （ｏｈａｌ
ａｒａ）型分生子柄１５〜２０ｇの組成 を作り、無色
の卵形ないし物に、別途、松葉 楕円形の分生子１．
５〜２．５〃２００２に水ＩＺを ×２〜３〃を噴出
する。加え、２時間湯煮 少数ではあるが菌叢中確紐
し、布炉適した液 で結んだような接合菌糸がＩＺを
加えて成る みられる。古くなれば繭叢培地 ｐＨ７
．０ の乾いたところに黒色の繭核様物が形成され
る。子嚢殻は２５０〃程度、 縦４００〃程度のナスフラ スコ形で５０〜６０〃の短 かい頚部をもち、内に５× ８〃程度の子菱があり、６ 〜８個の子薮胞子があって、 寒色である。
ａｒａ）型分生子柄１５〜２０ｇの組成 を作り、無色
の卵形ないし物に、別途、松葉 楕円形の分生子１．
５〜２．５〃２００２に水ＩＺを ×２〜３〃を噴出
する。加え、２時間湯煮 少数ではあるが菌叢中確紐
し、布炉適した液 で結んだような接合菌糸がＩＺを
加えて成る みられる。古くなれば繭叢培地 ｐＨ７
．０ の乾いたところに黒色の繭核様物が形成され
る。子嚢殻は２５０〃程度、 縦４００〃程度のナスフラ スコ形で５０〜６０〃の短 かい頚部をもち、内に５× ８〃程度の子菱があり、６ 〜８個の子薮胞子があって、 寒色である。
子菱胞子は枕形で中央部が幾分細く、大
きさは１．０〜１．５ム×４〜
６〃である。
‘２｝ 生理的性質
■ 最適生育条件
ｐＨ：ＰＨ６．８
温度：２０℃
■ 生育の範囲
ｐＨ：ＰＨ６．５〜８．５
温度：２０〜２５ｑｏ
以上の性質に基づき、前記セラトシスチス属菌を文献〔
Ｔ．Ｒ．ＮａｇＲａｉａｎｄ Ｂｏｙｃｅ Ｋｅｎｄｒ
ｉｃｋ；“ Ａ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ ｏｆ Ｃｈ
ａｌａｒａ ａｎｄ ＡｍｅｄＣＥｎｅｒａ’’Ｗｉｌ
ｆｒｉｄ Ｌａｍｉｅｒ ＵｎｉＶ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａ
肌ｄａ（１９７５）〕に記載の分類方法に従って比較検
索した結果、明らかに既知の菌種中に一致する種を見出
し得ず、前記セラトシスチス属菌をセラトシスチス属に
属する新菌種として設定することが妥当であると結論し
た。
Ｔ．Ｒ．ＮａｇＲａｉａｎｄ Ｂｏｙｃｅ Ｋｅｎｄｒ
ｉｃｋ；“ Ａ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ ｏｆ Ｃｈ
ａｌａｒａ ａｎｄ ＡｍｅｄＣＥｎｅｒａ’’Ｗｉｌ
ｆｒｉｄ Ｌａｍｉｅｒ ＵｎｉＶ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａ
肌ｄａ（１９７５）〕に記載の分類方法に従って比較検
索した結果、明らかに既知の菌種中に一致する種を見出
し得ず、前記セラトシスチス属菌をセラトシスチス属に
属する新菌種として設定することが妥当であると結論し
た。
前記セラトシスチス属菌は、その培養液中に高単位のセ
ルラーゼＡご産生蓄積するものであり、その培養には、
培地中の炭素源として庶糖、グリコース、澱粉、セルロ
ース・パウダー、薮などの各種糖質原料を、窒素源とし
てべプトン、肉エキス、コーン・スチープリカー、脱脂
大豆などの有機物を用いることが好ましく、アンモニウ
ム塩類、燐酸塩、硝酸塩などの無機物も用いることがで
きる。
ルラーゼＡご産生蓄積するものであり、その培養には、
培地中の炭素源として庶糖、グリコース、澱粉、セルロ
ース・パウダー、薮などの各種糖質原料を、窒素源とし
てべプトン、肉エキス、コーン・スチープリカー、脱脂
大豆などの有機物を用いることが好ましく、アンモニウ
ム塩類、燐酸塩、硝酸塩などの無機物も用いることがで
きる。
その他、徴量の無機金属塩類、ビタミン類、酵母エキス
などを添加するとよい。また、培養に当っては、２０〜
２５午○附近で静鷹培養することが好ましいが、振顔な
いし通気縄梓培養してもよく、静贋培養の場合はほぼ４
週間、振顔ないし通気蝿梓培養の場合はほぼ１〜２週間
でセルラーゼＡの蓄積は最高となる。得られた培養液を
炉退助剤を加えて炉過するか、途ｂ分離して粗酵素液を
得ることができる。
などを添加するとよい。また、培養に当っては、２０〜
２５午○附近で静鷹培養することが好ましいが、振顔な
いし通気縄梓培養してもよく、静贋培養の場合はほぼ４
週間、振顔ないし通気蝿梓培養の場合はほぼ１〜２週間
でセルラーゼＡの蓄積は最高となる。得られた培養液を
炉退助剤を加えて炉過するか、途ｂ分離して粗酵素液を
得ることができる。
この粗酵素液はそのまま使用してもよいが、例えば硫安
塩析法、溶剤沈澱法、透析法などの公知の方法を適用す
ることによって得られる粗酵素液を使用するか、あるい
は更に公知の方法により精製、結晶化して精製酵素とし
て使用することもできる。また、本発明により得られる
セルラーゼＡ標品の活性は、次のようにして測定される
。
塩析法、溶剤沈澱法、透析法などの公知の方法を適用す
ることによって得られる粗酵素液を使用するか、あるい
は更に公知の方法により精製、結晶化して精製酵素とし
て使用することもできる。また、本発明により得られる
セルラーゼＡ標品の活性は、次のようにして測定される
。
１％ＣＭＣ／の【（あるいは１％アビセルか１仇Ｍセロ
バィオース）、酢酸緩衝液（ｐＨ５．７）０．５の‘に
本酵素液１の‘を加え、３７℃で１時間加溢する。
バィオース）、酢酸緩衝液（ｐＨ５．７）０．５の‘に
本酵素液１の‘を加え、３７℃で１時間加溢する。
反応終了後、ネルソンーソモジ一法（Ｎｅｌｓｏｎ−Ｓ
ｏｍｏ劉ｌｍｅｔｈｏｄ）で還元糖の定量を行なう。
ｏｍｏ劉ｌｍｅｔｈｏｄ）で還元糖の定量を行なう。
即ち、反応液０．５羽にソモジー試薬０．５机上を加え
、１０分間、１００ｑＣで加熱、発色させ、冷却後、ネ
ルソン試薬を０．５羽加え、５の‘の蒸留水で稀釈する
。これを波長５０仇吻で比色定量する。酵素力価の単位
は、前記の条件下で１分間で１の９のグルコースに相当
する還元糖を生成する場合を１００単位とした。本発明
のセルラーゼＡのセロバィオースに対する比活性は１０
，０００〜２０，０００単位（ｕｎｉｔ）／夕である。
、１０分間、１００ｑＣで加熱、発色させ、冷却後、ネ
ルソン試薬を０．５羽加え、５の‘の蒸留水で稀釈する
。これを波長５０仇吻で比色定量する。酵素力価の単位
は、前記の条件下で１分間で１の９のグルコースに相当
する還元糖を生成する場合を１００単位とした。本発明
のセルラーゼＡのセロバィオースに対する比活性は１０
，０００〜２０，０００単位（ｕｎｉｔ）／夕である。
セルラーゼＡは以下に記載する理化学的性質、特に作用
及び基質特異性を有する新規酵素である。〔酵素の理化
学的性質〕 【１１作用 セルラーゼＡは、天然セルロース及びセロバィオースに
特異的に作用し、その８一１、４−グルコシド結合を加
水分解する。
及び基質特異性を有する新規酵素である。〔酵素の理化
学的性質〕 【１１作用 セルラーゼＡは、天然セルロース及びセロバィオースに
特異的に作用し、その８一１、４−グルコシド結合を加
水分解する。
■ 基質特異性
セルラーゼＡは、天然セルロース及びセロバイオースの
６一１、４ーグルコシド結合を末端から切断（ェキソ型
）する一方、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）及
びアビセルを極めて短時間にその内部で切断（エンド型
）する基質特異性を有する。
６一１、４ーグルコシド結合を末端から切断（ェキソ型
）する一方、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）及
びアビセルを極めて短時間にその内部で切断（エンド型
）する基質特異性を有する。
即ち、炉紙屑を唯一の炭素源とて前記セラトシスチス属
菌を培養し、１週間後の培養炉液を、ＣＭＣを基質とし
てソモジー法で活性を測定すると、６ぴ分で７〃夕／泌
のグルコース相当量が定量される。また、セロバィオー
スに対しては、１２５ムタノの‘の活性が示され、共に
極めて遠い速度でエンド型の作用を発揮する特徴的な基
質特異性を示す。糊 至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 ＰＨ３〜８はマッキルベン（Ｍｃｌｌｉｖａｉｎｅ）緩
衝液、またｐＨ８〜１１はグリシル（ＧＩｙｃｊｎｅ）
緩衝液を用いて夫々調整した。
菌を培養し、１週間後の培養炉液を、ＣＭＣを基質とし
てソモジー法で活性を測定すると、６ぴ分で７〃夕／泌
のグルコース相当量が定量される。また、セロバィオー
スに対しては、１２５ムタノの‘の活性が示され、共に
極めて遠い速度でエンド型の作用を発揮する特徴的な基
質特異性を示す。糊 至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 ＰＨ３〜８はマッキルベン（Ｍｃｌｌｉｖａｉｎｅ）緩
衝液、またｐＨ８〜１１はグリシル（ＧＩｙｃｊｎｅ）
緩衝液を用いて夫々調整した。
セルラーゼＡの至薄ｐＨはｐＨ５．７５〜６．０であっ
た（添付図面参照）。
た（添付図面参照）。
また、セルラーゼＡを３０ｑ○、６０分インキユベート
したときの残存活性を調べたところ、ＰＨ４．０〜９．
０に安定ｐＨ範囲を有することがわかった。
したときの残存活性を調べたところ、ＰＨ４．０〜９．
０に安定ｐＨ範囲を有することがわかった。
‘４’力価の測定法１％ＣＭＣ／の‘、酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ５．７）０．５羽に本酵素液１の上を加え、３７０で
１時間加塩、反応させた後、反応液０．５の‘にソモジ
ー試薬０．５泌を加え、１吹ご間、１００００で加熱、
発色させ、冷却後、０．５の‘のネルソン試薬を加え、
５の‘の蒸留水で稀釈する。
Ｈ５．７）０．５羽に本酵素液１の上を加え、３７０で
１時間加塩、反応させた後、反応液０．５の‘にソモジ
ー試薬０．５泌を加え、１吹ご間、１００００で加熱、
発色させ、冷却後、０．５の‘のネルソン試薬を加え、
５の‘の蒸留水で稀釈する。
これを波長５００柳で比色定量する（ネルソンーソモジ
一法）。‘５｝ 作用適温の範囲 セルラーゼＡの作用適温は３０〜３７ｑ０の範囲にある
。
一法）。‘５｝ 作用適温の範囲 セルラーゼＡの作用適温は３０〜３７ｑ０の範囲にある
。
‘６｝ ｐＨ及び温度による失格の条件
ＰＨによる失活：
セルラーゼＡについて、前記安定ｐＨ範囲の測定と同一
の条件でｐＨによる失格の条件を調べた結果、ｐＨ９．
０以上及びｐＨ３．０以下で失格する。
の条件でｐＨによる失格の条件を調べた結果、ｐＨ９．
０以上及びｐＨ３．０以下で失格する。
温度安定性：セルラーゼＡについて、ＰＨ６．０の条件
で温度を変化させて、濃度による失格の条件を調べた結
果、熱失格の始まる温度は５０ｑｏである。
で温度を変化させて、濃度による失格の条件を調べた結
果、熱失格の始まる温度は５０ｑｏである。
【７｝ 精製方法前記セラトシスチス属菌の培養炉液を
限外炉過法により濃縮し、燐酸緩衝液（ｐＨ７．０に調
節）で平衡化したハイドロキシルアパタィト（Ｈｙｄｒ
ｏ奴ｌａｐａｔｉｔｅ）（燐酸カルシウム）カラムに吸
着かけ、前記緩衝液で溶出する。
限外炉過法により濃縮し、燐酸緩衝液（ｐＨ７．０に調
節）で平衡化したハイドロキシルアパタィト（Ｈｙｄｒ
ｏ奴ｌａｐａｔｉｔｅ）（燐酸カルシウム）カラムに吸
着かけ、前記緩衝液で溶出する。
次いで、燐酸緩衝液（ｐＨ７．０に調節）で平衡化した
ＤＥＡＥーセフアデツクス（Ｓｅｐｈａｄｅ×）（“Ｓ
ｅｐ−ｈａｄｅで：スェーデン・ファルマシア社製）カ
ラムに吸着させ、前記緩衝液で十分に洗った後、０．８
Ｍ食塩を含む前記緩衝液で溶出する。溶出後、酢酸緩衝
液（冊５．７に調節）で平衡化し たバイオゲル（Ｂｉ
ｏｇｅｌ）Ｐ − ６０ぐＢｌｏｇｅｌ”：バイオラッ
ド社製）カラムでゲル炉過を行ない、セルラーゼＡの精
製酵素標品を得る。職 分子量 セルラーゼＡはセフアロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）脂
によるゲル炉過法に基づき、分子量は約９０．０００と
推定され、またＳＤＳ−アクリルアミド電気泳動法に基
づき、約９５，０００〜１００，０００と推定された。
ＤＥＡＥーセフアデツクス（Ｓｅｐｈａｄｅ×）（“Ｓ
ｅｐ−ｈａｄｅで：スェーデン・ファルマシア社製）カ
ラムに吸着させ、前記緩衝液で十分に洗った後、０．８
Ｍ食塩を含む前記緩衝液で溶出する。溶出後、酢酸緩衝
液（冊５．７に調節）で平衡化し たバイオゲル（Ｂｉ
ｏｇｅｌ）Ｐ − ６０ぐＢｌｏｇｅｌ”：バイオラッ
ド社製）カラムでゲル炉過を行ない、セルラーゼＡの精
製酵素標品を得る。職 分子量 セルラーゼＡはセフアロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）脂
によるゲル炉過法に基づき、分子量は約９０．０００と
推定され、またＳＤＳ−アクリルアミド電気泳動法に基
づき、約９５，０００〜１００，０００と推定された。
｛９｝ 結晶構造
セルラーゼＡは、蟹？日の結晶を作り難いため、結晶構
造は不詳である。
造は不詳である。
‘ＩＱ 元素分析
セルラーゼＡはゲル炉過による挙動から分子量が約９０
，０００、及びＳＤＳ−アクリルアミド電気泳動による
挙動から分子量が約９５，０００〜ｌｏｏ，０００とそ
れぞれ推定されたが、このような高分子の酵素では元素
分析値を算出してもその特性を見出すことは不可能であ
るので、この測定は行なっていない。
，０００、及びＳＤＳ−アクリルアミド電気泳動による
挙動から分子量が約９５，０００〜ｌｏｏ，０００とそ
れぞれ推定されたが、このような高分子の酵素では元素
分析値を算出してもその特性を見出すことは不可能であ
るので、この測定は行なっていない。
以上詳述したように、本発明により、セラトシスチス属
に属するセルラーゼＡ生産菌を培養し、その培養液より
新規酵素のセルラーゼＡを有利に製造し得るものである
。
に属するセルラーゼＡ生産菌を培養し、その培養液より
新規酵素のセルラーゼＡを有利に製造し得るものである
。
以下に、本発明方法を実施例により説明する。
実施例ＫＣＩ Ｏ．５夕、ＭｇＳ０４ ０．５夕、Ｋ２
ＨＰ０４１．０夕、ＮａＮ０３２．０夕、グリシル ５
叫、酵母エキス ２．５夕、べプトン ５夕、セルロー
ス（炉週細片）１０タ水１〆前記組成の滅菌塔地に前記
セラトシスチス属菌（徴工研菌寄第６３６５号）を接種
し、２５ｑ０、５週間平面静直培養を行なった。
ＨＰ０４１．０夕、ＮａＮ０３２．０夕、グリシル ５
叫、酵母エキス ２．５夕、べプトン ５夕、セルロー
ス（炉週細片）１０タ水１〆前記組成の滅菌塔地に前記
セラトシスチス属菌（徴工研菌寄第６３６５号）を接種
し、２５ｑ０、５週間平面静直培養を行なった。
培養後、培養炉液を限外炉過法により５倍に濃縮し、燐
酸緩衝液（冊７．０に調節）で平衡化したＨｙｄｒｏ地
ｌａｐａ−ｔｉｔｅカラムに吸着させ、前記緩衝液で溶
出（濃度勾配：０．０〜０．２モル）する。次いで、燐
酸緩衝液（斑７．０に調節）で平衡化したＤＥＡＥ−Ｓ
ｅｐｈａｄｅｘカラムに吸着させ、前記緩衝液で十分に
洗った後、０．９Ｍ食塩を含む前記緩衝液で溶出（濃度
勾配：０．０〜１．０モル）する。
酸緩衝液（冊７．０に調節）で平衡化したＨｙｄｒｏ地
ｌａｐａ−ｔｉｔｅカラムに吸着させ、前記緩衝液で溶
出（濃度勾配：０．０〜０．２モル）する。次いで、燐
酸緩衝液（斑７．０に調節）で平衡化したＤＥＡＥ−Ｓ
ｅｐｈａｄｅｘカラムに吸着させ、前記緩衝液で十分に
洗った後、０．９Ｍ食塩を含む前記緩衝液で溶出（濃度
勾配：０．０〜１．０モル）する。
溶出後、酢酸緩衝液（ｐＨ５．７に調節）で平衡化した
Ｂｉｏ鞍ＩＰ−６０カラムでゲル炉過を行ない、更にエ
タノールを添加して析出させ、乾燥粉末とした。前記培
養液１夕当り１０雌のセルラーゼＡの精製酵素標品（比
活性：２０，００仇ｈｉｔ／夕）が得られた。
Ｂｉｏ鞍ＩＰ−６０カラムでゲル炉過を行ない、更にエ
タノールを添加して析出させ、乾燥粉末とした。前記培
養液１夕当り１０雌のセルラーゼＡの精製酵素標品（比
活性：２０，００仇ｈｉｔ／夕）が得られた。
添付図面は、本発明のセルラーゼＡの至適ｐＨを示すグ
ラフである。
ラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 下記の理化学的性質を有る新規セルラーゼＡ。 （１） 作用 天然セルロース及びセロバイオースに特異的に作用し
、そのβ−１、４−グルコシド結合を加水分解する。 （２） 基質特異性 天然セルロース及びセロバイオースのβ−１、４−グ
ルコシド結合を末端から切断（エキソ型）する一方、カ
ルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）及びアビセルを６
０分程度の極めて短時間にその内部で切断（エンド型）
する基質許異性を有する。 （３） 至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 至適ｐＨ範囲をｐＨ５．７５〜６．０に有し、安定を
ｐＨ範囲をｐＨ４．０〜９．０に有する。 （４） 作用適温の範囲 作用適温はｐＨ６．０の条件で３０〜３７℃の範囲に
ある。 （５） 生活の条件 ５０℃で失活し、ｐＨ９９．０以上及び３．０以下で
失活する。 （６） 分子量 ゲル濾過法で約９０，０００、ＳＤＳ−アクリルアミ
ド電気泳動法で約９５，０００〜１００，０００を示す
。 ２ セラトシスチス（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ）属に
属する新規セルラーゼＡ生産菌を培養し、該培養物より
新規セルラーゼＡを分離、採取することが特徴とする新
規セルラーゼＡの製造法。 ３ セラトシスチス（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ）属に
属する新規セルラーゼＡ生産菌がセラトシスチス・デン
シフローラ・ノブ・エスピー（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉ
ｓｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ ｎｏｖ ｓｐ．（微工研菌第
６３６５号）である特許請求の範囲第２項記載の製造法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3708682A JPS6024711B2 (ja) | 1982-03-09 | 1982-03-09 | 新規セルラ−ゼ及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3708682A JPS6024711B2 (ja) | 1982-03-09 | 1982-03-09 | 新規セルラ−ゼ及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58155088A JPS58155088A (ja) | 1983-09-14 |
| JPS6024711B2 true JPS6024711B2 (ja) | 1985-06-14 |
Family
ID=12487739
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3708682A Expired JPS6024711B2 (ja) | 1982-03-09 | 1982-03-09 | 新規セルラ−ゼ及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6024711B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60244287A (ja) * | 1984-05-21 | 1985-12-04 | Res Assoc Petroleum Alternat Dev<Rapad> | セルラ−ゼ生産用基質の製造法 |
-
1982
- 1982-03-09 JP JP3708682A patent/JPS6024711B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58155088A (ja) | 1983-09-14 |
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