JPS606194A - 新規抗生物質ｓｆ−２２８８及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規抗生物質及びその製造法に関するものであ
る。

〔発明の目的〕

本発明は種々のダラム陽性菌、陰性菌に抗菌活性を有す
る新規かつ有用な抗生物質を探索した結果、アクチノマ
デユラ属に属する放線菌を栄養培地中で醗酵させること
によって、新規抗生物質ＳＦ−２２８８が生産されるこ
とを見い出し、５Ｆ−２２８８物質を単離し、その理化
学的性状、生物学的性状より新規物質であり、かつグラ
ム陽性、グラム陰性菌に対しずくれた抗菌活性を有する
ことを見い出した。

（発明の構成〕 本発明は新規抗生物質Ｓ　Ｆ−２２８８及びその塩、及
びアクチノマデユラ属に属する抗生物質５Ｆ−２２８８
生産菌を培地に培養し、得られた培養物から抗生物質Ｓ
　Ｆ　−２２８８又はその塩を採取することにより新規
抗生物ｙＲ３Ｆ　−２２８８又はその塩の製造する方法
である。

本発明の新規抗生物質Ｓ　Ｆ　−２２８８の生産菌の１
例としては、本発明者らにより静岡県馬込用の土壌より
新たに分離されたＳ　Ｆ　−２２８８株がある。

Ｓ　Ｆ−２２８８株の蘭学的性状は下記の通りである。

■、形態 基土菌糸はよく伸長分枝し、その直径は約０．５ミクし
１ンである。寒天培地及び液体培地の何れにおいても基
土菌糸の分断は通常観察されない。

一般に気菌糸の着生は貧弱であるが、オートミール寒天
では比較的よく着生し、胞子形成も良好である。気菌糸
の分枝は単純分枝で車軸分枝は見られない。胞子のう、
鞭毛胞子、菌核は観察されない。胞子の連鎖は面状、鉤
状またはループ状となる。

電子顕微鏡で観察すると胞子ば楕円〜卵型で０．６〜１
．ＩＸ　Ｏ，８〜１．５ミクロンの大きさを有し、胞子
の連鎖は５〜１０ケの場合が多い。胞子の表面ばｓｍｏ
ｏｔｈ　（ややしわ状）である。

■、各種培地上の生育状態 Ｓ　Ｆ　−２２８８株の各種培地上の生育状態は次表に
示す通りである。色の記載について〔〕内に示す標準は
コンテイナー・コーポレーション゛オブ°アメリカ（Ｃ
ｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ＾ｍ
ｅｒｉｃａ　）　社’ＪＢの「カラー・ハーモニー・マ
ニュアル（Ｃｏｌｏｒ　ｌｌａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａ
ｌ）　Ｊに記載のものを用いた。観察は２８℃で１４〜
２１日培養後に行った。

１１１、住理的性質 ｆｉ＋　生育温度範囲：イースＩ・麦芽寒天において１
５〜４２°Ｃの温度範囲で生育し、２６〜３７℃が最適
温度である。

（２）ゼラチンの液化：陰性（２０℃、２］日培養）（
３）　スターチの加水分解：陽性 （４）　硝酸塩の還元：陽性 （５）脱脂乳のペプトン化：陰性（２８℃、３７℃。

１４ＥＩ培養） 脱脂乳の凝固二陰性（２８℃、３７℃、１４日培養） （６）耐塩性：１．５％では生育するが３．０％では生
育しない。

（７）　メラニン様色素の生成：陰性 ■、炭素源の利用性（ブリトハム・コツトリーブ寒天培
地） （１）利用する：Ｄ−クルコース、Ｄ−７う／Ｉ・−ス
、Ｄ−キシロース、Ｌ−ア ラビノース、Ｄ−マンニ１〜−ル。

Ｌ−ラムノース （２）利用しない；ｉ−イノシトール、ラフィノース、
シュクロース、グリセ ロール ■、細胞壁組成 Ｓ　Ｆ　−２２８８株の全細胞加水分解物中にメソ−ジ
アミノピメリン酸及びマデュロースがＪ忍められｔ二。

ツ」−の性状より、Ｓ　Ｆ−２２８８株は放線菌の中で
アクチノマデ上う（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）属に属
する菌株である。従って、本発明者らはＳ　Ｆ　−２２
８８株をアクーｙ〜ノマデュラ・エスピー・ｓ　＋ｒ　
−２２８８（八ｃｔｉｒ＋ｏｍａｄｕｒａ　Ｓｐ、　Ｓ
　Ｆ　−２２８８）と称することにした。

本菌株は微土研に寄託されており、その微工研受ＭＥ番
冒は第７０４５号（Ｆ　Ｅ　ＲＭ−１）　７０４５）　
テある。

Ｓ　Ｆ　−２２８８株は他の放線菌の多くの菌株の場合
にみられるようにその性質が変化しやすく、例えば紫外
線、エックス線、放射線、薬品等を用いる人工的変異手
段で変異しうるちのであるが、いずれの変異株であって
も抗生物質Ｓ　Ｆ　−２２８８の生産能を有するアクチ
ノマデユラ属の菌株はすべて本発明の方法に使用するこ
とができる。

本発明の方法では、前記菌株を通常の微生物が利用しう
る栄養物を含をする培地で培養する。栄養源としては従
来、放線菌の培養に利用されている公知のものが使用で
きる。例えば、炭素源としてグルコース、スターヂ、デ
キストリン、水あめ。

糖みつ、植物油、動物油等が使用できる。又、窒素源と
しては大豆粉、小麦胚芽、肉エキス、イブ１−ン、　Ｆ
ｉ？母エ生エキスーンステイープリカー、綿実かす、魚
粉、硫酸アンモニウム、硝酸ソータ。

尿素等を使用しうる。その他、必要に応し′ζ炭酸カル
シウム、塩化すトリウム、硫酸コバルト、ｖ４酸塩等の
無機塩類を添加する。また、菌の発育を助け、抗生物質
Ｓ　Ｆ　−２２８８の生産を促進することができる有機
及び無機物を適当に添加することができる。

培養法としてば好気的条件下での培養法、特に深部培養
法が最も適している。培養に適当な温度は１５〜４２℃
であるが多くの場合２６〜３７℃付近で培養する。

抗生物質Ｓ　Ｆ　−２２８８の生産は培地や培養条件に
より異なるが、振盪培養、タンク培養ともに通常２〜１
０日の間でその蓄積が最高に達する。

Ｓ　Ｆ−’２２８８物質の検定に当ってはレエートモナ
ス°エルギノーザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕ
ｇｉｎｏｓａ）を被検菌とする生物検定法を用いる。こ
の検定法ではＳ　Ｆ　−２２８８物質が２５０〜２００
０ｍｃｇ　／　ｍ　ｉｌ！の濃度範囲でその対数と阻止
円径との間に直線関係が成立し、それぞれ１１〜１７鰭
の阻止円径を与える。

Ｓ　Ｆ−２２８８物質は後述する理化学的性状を有する
ので、その性状に従って抽出精製することが可能である
が、以下の方法により効率的に抽出精製できる。

まず培養物に濾過助剤を加えて、１０規定水酸化すトリ
ウムにてｐ１１９とし、菌体を−含む固型物を濾別する
。次に培養濾液の有効成分をアンバーライトＩ　ＲＣ５
０（Ｎｌ１４＋型）（ローム・テント・ハース社）のよ
うな陽イオン交換樹脂に吸着させ、■規定アンモニア水
にて熔出する。さらにアンハ−ライトＣＧ　５０　（Ｎ
ｌ１４＋型）（ローム・アント′・ハース社）に吸着さ
せ、０．０２５〜０．１規定アンモニア水にて溶出する
。さらにアビセル・セルロース（フナコシ薬品社）、陽
イオン交換樹脂ダウエックス１ｘ２（ＯＨ−型）（ダウ
・ケミカル社）等のカラムクロマ１−グラフィーを適宜
組合せることによりＳ　Ｆ　−２２８８物質の純品を得
ることができる。なお、本物質は遊離塩基の形で単離す
ることができるが、Ｓ　Ｆ　−２２８８物質の酸付加塩
として、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、燐酸の如き薬
学的に許容できる無機酸との塩、並びに酢酸、クエン酸
、安息香酸、アスコルビン酸の如き薬学的に許容できる
有機酸との塩とすることができる。

以下にＳ　Ｆ　−２２８８物質（遊％］ｌｌ塩基）の理
化学的性状を示す。

■、外観：白色の無定形粉末 ２、融点：１６１〜１６３℃ ３、元素分析値：炭素３９．６１％、水素６．４０％、
窒素８．８９％ ４、　紫外部吸収スペクトル： ２２０〜３６　Ｑ　Ｉ、１１に特徴的な吸収極大を示さ
ない。

５、赤外部吸収スペクトル： 臭化カリウム錠中で測定したスペクトルを第１図に示し
た。

６、重水中で測定した水素核磁気共鳴スペクトル（２０
０ＭｌＩ２　＞は第２図に示した。

又、重水中で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル（５０
ＭＨｚ）は第３図に示した。

７、比旋光度：　＋　３２３．３°　（Ｃ１，０，水）
８、　中性、酸性２塩基性の区別： 塩基性物質、ピリジン・酢酸バッファ ー　（ｐＨ６，４）を用いた高圧濾紙電気泳動（３５０
０Ｖ、　’１５分間）で、陰極側へ８国移動する（Ｒｍ
　（Ｌｙｓ　）　０．９）。

９、分子量：滴定により　ＰＫａ’　７．１で滴定当量
からの分子量は（１５９）ＱＮ　である。また、アミコ
ン社製グイヤフローメン ブレンＹＭ５　（分画分子量５．０００）を通過し、グ
イヤフローメンブレン 実施例１゜ ＋１）Ｓ　Ｆ　−２２８８株の培養 様培地としてスターヂ２．０％、グルコース１．０％、
小麦胚芽０．６％、ペプトン０．５％、イーストエキス
０．３％、大豆粉０，２％、炭酸カルシウム０．１％を
含む培地を用いた。また、生産培地としてスターチ３．
０％、大豆粉１．５％、小麦胚芽１．０％、グルテンミ
ール１．０％、ミートエキス０．５％、塩化すトリウム
０．２５％、炭酸カルシウム０．３％を含む培地を用い
た。なお、殺菌前ｐｌ＋は全て　７．０に調節した。

イーストエキス・スターチ寒天スラン１−に充分生育し
たアクチノマデユラ・エスピー・Ｓ　Ｆ−２２８８株（
微工研菌寄第７０４５号）を前記殺菌済の種培地２０　
ｍβずつを分注した　１００　ｎｕ容三角フラスコ２本
に３〜４白金ηずつ接種し、２８℃で４日間振盪培養し
、これを第一種培養液とした。

ついで、種培地８０　ｍβずつを分注した５００ｍｊ２
容の三角フラスコ２本に、前記の第一種培養液を４ｎｌ
ずつ接種し、２８°Ｃで３日間振盪培養し、これを第二
種培養液とした。

ついで、種培地ｌｌずつを分注した５ｎ容の三角フラス
コ２本に、前記の第二種培養液を５゜ｍｅずつ接種し、
２８℃で３日間振盪培養し、これを第三種培養液とした
。

ついで、第三種培養液を３５ｎの殺菌済生産培地を含む
５０β容のジャーファーメンタ−２基に接種し、２８℃
で、６日間９適気、撹拌培養した（ｉｌｌｉ気１ｔ３５
　（！　／　ｍｉｎ　、回転数２７Ｏｒｐｍ　）。

培養終了後、培養液のｐｌ＋を９．０に調節し、ケイソ
ウ土を用いて濾過し、培９Ｅ濾液４０ｍ２を得た。

実施例２゜ 実施例１で得た培養濾液４ｏβ　（ｐＨ９）をアンバー
ライトＩ　ＲＣ５０（Ｎ１１４千型）　（ローム・アン
ド・ハース社）４βを充填した塔に通し、有す１成分を
吸着させる。２０βの水で洗浄後、１規定アンモニア水
２０１で有効物質を溶出させ５゜活性区分を減圧下で２
１に濃縮してアンモニアを除去する。

これをアンバーライトＣＧ−５０（Ｎｌ＋４＋型）（ロ
ーム・アンド・ハース社）２００ｍｊｌ！を充填した塔
に通過させ有効物質を吸着させる。、１１の水、０．０
２５規定及び０．０５規定のアンモニア水で洗浄後、０
．１規定のアンモニア水で展開すると、２０ｍ７！分画
で分画隘１５〜２８に有効成分が溶出されてくる。

この活性分画を減圧下で濃縮乾固してＳ　Ｆ　−２２８
８物質の淡黄色の粗粉末１．０４ｇを得た。

実施例３゜ 実施例２で得た粗粉末１．０ｇを少量の水に熔解し７５
％メタノール水にて充填したアビセル・セルロース（フ
ナコシ薬品社＞１２０ｍ６の塔にのゼ、７５％メタノー
ル水６００ｍ１で’ｆＡ　’ｌｆｒ　ｆ＆、５０％メタ
ノール水にて展開すると、　５ｍ６分画で分画１０〜Ｉ
７に有効成分が溶出されてくる。この活性画分を減圧下
で濃縮乾固してＳ　Ｆ　−２２８８物質の白色粗粉末４
６０■が得られた。次にこのｉｌｌ粉末４００ｍｇを少
量の水に溶解して、ダウエックスｌＸ２（Ｏｌｌ−型）
（ダウ・ケミカル社）４００ｍＡの塔にのセ、水にて展
開し、８＋Ｔ１分画で分画Ｎｏ、４５〜５６に活性画分
が得られ、この活性画分を減圧下で濃縮乾固するとＳ　
Ｆ　−２２８８物質遊離塩基の白色粉末１６８■が得ら
れた。

【図面の簡単な説明】

第１図はＳ　Ｆ　−２２８８物質遊Ａｌｌ塩基の赤外部
吸収曲線図（臭化カリウム錠）である。第２図はＳＦ−
２２８８物質遊離塩基の２００Ｍ１ｌｚ水素核磁気共鳴
スペクトル（重水中）である。第３図はＳ　Ｆ　−２２
８８物質遊離塩基の５０Ｍ１ｌｚ炭素核磁気共鳴スペク
トル（重水中）である。 特許出１９Ｊ１１人　明治製菓株式会社代理人　新井　
力（はが２名） 第　１　図 第　２　図 手　糸売　子市　１Ｆ　冑： 昭和５８年１０月３１日 ′、゛で 特許庁長官　若杉　和　人殿　＼二・、゛、１、■件の
表示 ＋１’ｌＬＩ　５８年　特許願　第１１３５１９号２、
発明の名称 新規抗生物７．！ｉｓ　Ｆ　−２２８８及びその肺告法
３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所 氏　名、（ｉ９）明治製Ｍ４Ａ式会社 ４、代理人 氏名　（６４５０）弁理士わｉ井　力１．５、　？ｉｌ
ｉ工ゎや。。イオ　−１ニー、□・′昭（ＩＩ＋　年　
月　日 ｆｉｌ　１１６泊請求の範囲を下記の通り補正する。 ［１，遊離塩基として下記の特性を有する新規抗生物質
Ｓ　Ｆ−２２８８及びその塩。 （］）外ｌ？ｌＪ：白色の無定形粉末 （２）元素分析値：炭素３９．６１％、水素６．４０％
。 窒素８．８９％（重量比） 水） （４）ｌ審問性：水に易溶、メタノール、Ｉ！！ｉ１′
酸エチル、クロロホルム、ヘンセン。 １〕−ヘキサンにゲ１ｆメ容。 （５）紫外部吸収スペクトル： 水溶液中ての特徴的な吸収極大 を示さない。 （（ｉｌ　赤外ｆｉｌｌ吸収ス吸収スペル１−ル：臭化
カリｅツノで測定したス ペクトルは第１図に示す通り。 （７）水素核磁気共鳴スペクトル： 重水中で測定したスペク１ルは 第２図に示す通り。 （８）炭素核磁気共鳴スペクトル： 重水中で測定したスペクトルは 第３図に示す通り。 （９）中性、酸性、塩基性の区別： 塩基性物質、ピリジン、酢酸バ ッファ−（Ｐ　Ｈ（ｉ、４）を用いた 高圧成紙電気泳動（３５００Ｖ、　１５分間）で陰極側
へ３ｃｍ移動する。 Ｒｍ（１、ＶＳ）０．９ ００）　セルロースン’：Ｉ７層りロマトグラ人のＲｆ
　（直：メタノール−１０％１す１酸アンモニ ウム（１：　１）　０．６３ ｎ−プロパノ−ルーピリシン− 酢酸−水（１５：１０：　３　：］２）原点 りＩＩＩロボルムーメタノーノｉ；−＋７％アンモニウ
ム（２：ｌ：ｌの 上層）　０．２３ （１１）　ｕ色反応：モリソシュ、アンスロン、コール
ソンモルガン、しｙ　ｌ’・テ １−ラゾリウム、グレイグ・リ ーバツク、ニンヒドリンｉ式薬 は陽性。 坂Ｉ］、１−レンス、フェーリン グ試薬は陰性。 ２、　アクチノマデユラ・エスピー・Ｓ　Ｆ−２２８８
を培養し、培養物からＳ　Ｆ　−２２８８物質を単離Ｊ
−るごとを特徴とする新規抗４１′、物質Ｓ　Ｉ”　−
２２８８物質又はその塩の製造法。」 （２）明細店第４頁１２行「その塩の製造」を「その塩
を製造」に補正する。 （３）同第１０頁２行１倍養条件に」を［−培養条件に
」に補正する。 （４）同第１２頁１０行［→−３２３，３°　（Ｃ１，
０，水）」する。 （５）同第１３頁１３行「クロロホルム」を「クロロホ
ルム」に補正する。 （６）同第１３頁１５行「Ｍ色反応」を１−呈色反応」
にＪｌｉ正する。 （７１同第１４頁６行［バチルス・アンスラシス」を「
バチルス・アンスラシス」に補止する。 （８）同第１４頁１０行「エルキノーサ」を「エルギノ
ー“ザ」に補正する。 （９）同第１８頁５行「臭化カリウム−１を「臭化カリ
ウム」に補正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、遊離塩基として下記の特性を有する新規抗生物質Ｓ
   　Ｆ−２２８８及びその塩。 ＋１１　外観：白色の無定形粉末 （２）元素分析値：炭素３９．６１％゛、水素６．４０
   ％。 窒素８．８９％（重量比） ６ （３）　比旋光度：　〔α）、＋−３２３，３°　（Ｃ
   １，０゜水） （４）　熔解性：水に易溶、メタノール、酢酸エチル、
   クロロボルム、ヘンゼン。 ｎ−ヘキサノに難溶。 （５）紫外部吸収スペクトル： 水溶液中での特徴的な吸収極大 を示さない。 （６）　赤外部吸収スペクトル： 臭化カリウム錠中で測定したス ベクトルは第１図に示す通り。 （７）　水素核磁気共鳴スペクトル： 重水中で測定したスペクトルは 第２図に示す通り。 （８）炭素核磁気共鳴スペクトル： 重水中で測定したスペクトルは 第３図に示す通り。 （９）中性、酸性、塩基性の区別： 塩基性物質、ピリジン、酢酸バ ッファー（ＰＨ６，４）を用いた 高圧濾紙電気泳動（３５００Ｖ、　１５分間）で陰極側
   へ８ｃｍ移動する。 Ｒｍ　（Ｌｙｓ　）　０．９ （１旬　セルロース薄層クロマトグラムのＲｆ値：メタ
   ノール−１０％酢％アンモニ ウム（１：１）　０．６３ ｎ−プロパノ−ルーピリジン− 酢酸−水（１５：１０：３：１２） 原点 クロロホルム−メタノール−１７ ％アンモニウム（２：　１　：　１の 上層）０．２３ （１１）呈色反応：モリソシュ、アンスロン、エルシン
   モルガン、レッド゛テ ［ラゾリウム、グレイグ、リ ーハック。ニンヒドリン試薬 は陽性。 坂口、トレンス、フェーリン グ試薬は陰性。 ２、　アクチノマデユラ・コニスビー・Ｓ　Ｆ−２２８
   ８を培養し、培養物からＳ　Ｆ−２２８８物質を単離す
   ることを特徴とする新規抗生物質Ｓ　Ｆ　−２２８８物
   質又はその塩の製造法。