JPS6078598A - トランスアミナ−ゼを測定する方法及び試薬 - Google Patents
トランスアミナ−ゼを測定する方法及び試薬Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産茅」二の第１］用分鈎
ヒトの組紳はトランスアミナーゼのグルタメート／ピル
ベート−トランスアミナーゼ（Ｇ 、ＰＴ ） Ｋ Ｏ
２，６，１，２及びグルタメート／Ａギサロアセテート
ートランスアミナー、ｅ （Ｇ ＯＴ ） ＥＣ！ ２
．６．１．１を筋肉、血イ＾及び器′口中ζ二含イ了す
る。特に血ｔｉ′ｆ中ｒ）） （） Ｐ ’、［’含Ｋ
）ｉｉｉ１１足は、ＩＩＦ ＋、＜ ；ａ：、 ト心
疾患とを区別するたり〕の１つの止９な臨床上のパラメ
ータである。
ベート−トランスアミナーゼ（Ｇ 、ＰＴ ） Ｋ Ｏ
２，６，１，２及びグルタメート／Ａギサロアセテート
ートランスアミナー、ｅ （Ｇ ＯＴ ） ＥＣ！ ２
．６．１．１を筋肉、血イ＾及び器′口中ζ二含イ了す
る。特に血ｔｉ′ｆ中ｒ）） （） Ｐ ’、［’含Ｋ
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疾患とを区別するたり〕の１つの止９な臨床上のパラメ
ータである。
たい１いの、ｌ：ｊ％会、（）ＰＴは専ら肝甲に現出し
％ （Ｔ Ｃ”ｊ’ ハ’５％ 質ｉ１４：ｌ Ｉｔｉ
、！ｌ ）１？：ｌＩ 胞５ｉ 中１．１− ノリ、存
在しており、−・力１”）ＯＴは雅胞質及びミトコンド
リア中Ｃ二それぞれぞり５０％ずつ存在する。ｊｌｉｌ
方のトランスアミナーゼのこの局在化から神々の肝疾患
で有用な診…１上の示唆か得らｔＬる。より商いＧＯＴ
値は爪痕の肝実質韮ｊ胞疾患を躾わず。
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在しており、−・力１”）ＯＴは雅胞質及びミトコンド
リア中Ｃ二それぞれぞり５０％ずつ存在する。ｊｌｉｌ
方のトランスアミナーゼのこの局在化から神々の肝疾患
で有用な診…１上の示唆か得らｔＬる。より商いＧＯＴ
値は爪痕の肝実質韮ｊ胞疾患を躾わず。
急性肝炎で１１血ｍ中のＧ ＯＴ及びＧＰＴは１旨まり
、無黄ｊ＋を純の場合もそうでンろる。しばしば、既に
黄柏−の症状の前１：酵究枯性度上昇を検出することが
できる。
、無黄ｊ＋を純の場合もそうでンろる。しばしば、既に
黄柏−の症状の前１：酵究枯性度上昇を検出することが
できる。
１賛性肝炎及びｌ１ｌ−硬変ではＧ Ｏ’Ｉ’及びＧＰ
Ｔはビールス性肝炎の場合よりも低い。それらのｌｌ＋
’１定は慢性肝炎の場合、とりわけ疾患の進行及び治療
の観察（−有用！ある。
Ｔはビールス性肝炎の場合よりも低い。それらのｌｌ＋
’１定は慢性肝炎の場合、とりわけ疾患の進行及び治療
の観察（−有用！ある。
そＪｌと共ｊ二Ｇ ＯＴの測定は、心筋疾患の診断４：
も使用謬れる。
も使用謬れる。
従来の技術
（ｔ Ｐ Ｔ ｚ シ（はＧＯＴを測冗するためのポ用
のかつ１史わ１１る多くの方法は、これらの＃素Ｃ二よ
り接触されかつグルタミン酸とピルベートもしくはオキ
サロアセテートを形成する゛１′ラニン％Ｌ＜はアスパ
ルテートとα−ケトグルクルｔρとのアミノ基転移を適
用づ−る。ピルベートもしくはオキサロアセテートはラ
クテートデヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）及び場合によりＭ
ＤＨの存在においてＮ Ａ Ｄ １（で還元することに
よりラクテートもしくはマレート及びＮＡＬＩ（二変（
・４１］１、そのｐｆ Ｃ二Ｎ Ａ Ｄ−’−を公知方
法により直接ＵＶ中で父は佼続の呈色反兄、じよりａｙ
＋定する。
のかつ１史わ１１る多くの方法は、これらの＃素Ｃ二よ
り接触されかつグルタミン酸とピルベートもしくはオキ
サロアセテートを形成する゛１′ラニン％Ｌ＜はアスパ
ルテートとα−ケトグルクルｔρとのアミノ基転移を適
用づ−る。ピルベートもしくはオキサロアセテートはラ
クテートデヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）及び場合によりＭ
ＤＨの存在においてＮ Ａ Ｄ １（で還元することに
よりラクテートもしくはマレート及びＮＡＬＩ（二変（
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法により直接ＵＶ中で父は佼続の呈色反兄、じよりａｙ
＋定する。
この方法の基本的な欠点は、ＬＤＢ自体が非特異性（副
油１イト）を竹することであり、これはα−ケト１在、
特（二α−ケトグルクル６ドロキシグルタル酸の）１ら
成″Ｆ（二変換させかつα−ヒドロキシグルタレートデ
ヒドロゲナーゼ活性として表わすことができる。
油１イト）を竹することであり、これはα−ケト１在、
特（二α−ケトグルクル６ドロキシグルタル酸の）１ら
成″Ｆ（二変換させかつα−ヒドロキシグルタレートデ
ヒドロゲナーゼ活性として表わすことができる。
更し、この非特異性は、この公知方法を実施するための
相応する試薬が不１分な安定性しか有していないという
に３果をもたらす。それというのもα−ヒドロキシグル
タレートの形成の隙（二ｉｔ Ａ Ｄ １（がＴｈｌ’
ＡＤｌ−偕化嘔れるからである。
相応する試薬が不１分な安定性しか有していないという
に３果をもたらす。それというのもα−ヒドロキシグル
タレートの形成の隙（二ｉｔ Ａ Ｄ １（がＴｈｌ’
ＡＤｌ−偕化嘔れるからである。
こｉｌ、は活行反１Ｇを惹起する。
問題点を触法−４るための手段
本発明はこのｔＬｎ題を解決−Ｉるといつ腺題（ニハず
く。
く。
本発明により、この腺距は相応するアミノ酸とα−ケト
グルタル酸とを反応させてグルタル酸と、使用したアミ
ノ酸に相応するα−ケト酸に変換しかつ形成したα−ケ
ト酸を、ラクラ”−トデヒドロゲナーゼ（１，ＤＨ）及
び場甘じよりマレ−トデヒド！７ゲナーゼ（Ｍ Ｄ ）
Ｉ ）の存在においてＮ Ａ Ｄ 及びα−オキシ酸の
ｊｂ成下にＮＡ Ｄ ）ｌで還元して、測定することじ
よりトランスアミナーゼを測定する方法じおいて、乳酸
瑳つＤ−ＩＩＤＨを使用う゛ることを特徴とする方法Ｃ
二より解決される。
グルタル酸とを反応させてグルタル酸と、使用したアミ
ノ酸に相応するα−ケト酸に変換しかつ形成したα−ケ
ト酸を、ラクラ”−トデヒドロゲナーゼ（１，ＤＨ）及
び場甘じよりマレ−トデヒド！７ゲナーゼ（Ｍ Ｄ ）
Ｉ ）の存在においてＮ Ａ Ｄ 及びα−オキシ酸の
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よりトランスアミナーゼを測定する方法じおいて、乳酸
瑳つＤ−ＩＩＤＨを使用う゛ることを特徴とする方法Ｃ
二より解決される。
本発明は、乳酸菌のｌ）−’ＬＤＨがＮＡＤＨの存在Ｃ
二おいてもα−オキシグルタル缶を還元しないという驚
異的な発見Ｃ二基ずいている。そ、Ｉｔ故、不発四重よ
り前記の方法Ｃ二おいて従来常用の豚のｒＯ励からのＬ
ＤＩ（を乳６女伽の１） −’ Ｌ Ｄ Ｈに代える堝
自ｌ二、妨害的なＭ行反厄は起らずかつ七〇貯紙安定’
ｔｉの点で茗駿＜改良された試薬が得られる。
二おいてもα−オキシグルタル缶を還元しないという驚
異的な発見Ｃ二基ずいている。そ、Ｉｔ故、不発四重よ
り前記の方法Ｃ二おいて従来常用の豚のｒＯ励からのＬ
ＤＩ（を乳６女伽の１） −’ Ｌ Ｄ Ｈに代える堝
自ｌ二、妨害的なＭ行反厄は起らずかつ七〇貯紙安定’
ｔｉの点で茗駿＜改良された試薬が得られる。
本発明（−よる有利な結果は乳ｈ々飴からのすべてのＤ
−ＩＩＤＨにより彷らＪ］る。Ｄ −Ｌ Ｄ ｔ（を形
成する乳酌１は、主Ｃニラクレ毫チルス＾（Ｌａｃ ｔ
ｏｂａｃｉｉｌｕｏ ）、ペジン１′コックス１４ （
Ｐｅ−ｄｉ（、ｃＯｃｃｕｏ ） ａイコノストックｉ
ｉ２ （Ｌｅｕｃｏｎｏｓ −ｔｏｃ ）に３１；れる
［： ＡｎｔＯｌｌｌ、ｅ ｎａｎ Ｌｅｅｕｗｅｎｈ
ｏｅｋ、４９＠、２１０頁（１９８３年）〕。乳酊番１
がＬ−ＬＤＨをノ１５成する場合は好熱ではない。
−ＩＩＤＨにより彷らＪ］る。Ｄ −Ｌ Ｄ ｔ（を形
成する乳酌１は、主Ｃニラクレ毫チルス＾（Ｌａｃ ｔ
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Ｐｅ−ｄｉ（、ｃＯｃｃｕｏ ） ａイコノストックｉ
ｉ２ （Ｌｅｕｃｏｎｏｓ −ｔｏｃ ）に３１；れる
［： ＡｎｔＯｌｌｌ、ｅ ｎａｎ Ｌｅｅｕｗｅｎｈ
ｏｅｋ、４９＠、２１０頁（１９８３年）〕。乳酊番１
がＬ−ＬＤＨをノ１５成する場合は好熱ではない。
菌株がＤ −Ｌ Ｄ ＨもＬ−ＬＤ’ｌ（％３１３成う
る場合、両方の酵素の分離を行なうべきである。それ故
、Ｄ−ＬＤＨだけを含有する菌株からのＤ−ＬＤＨ製剤
が優れている。特に良好な結果は、ラクトバチルス・ラ
イヒマンニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃ−１１１ｕｅ ’ｌｅ
ｉｃｈｍａｎｎｉｉ ） Ｄ Ｓ Ｍ ２６９９からの
ＬＤＨじより得らオ１１ これはＤ−ＬＤＨＩｍ該当す
る。他の優れた菌株はラフトノ層チルス・ラクチス（Ｌ
ａｃｔｏｔ）ａｃｌｌｕｓ ’１ａｃｔｉｅ ） Ｄ
Ｓ Ｍ ２００７２、ラクトバチルス・ゾランタルム（
Ｌａｃｔ□ｂａｃ−１１１ｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ
） Ｄ １３ Ｍ ２０１７４ 、ロイコノストック・
メセンテロイーｐス（ｔｅｕｃｏｎ□ｓｔ□ｃｍｅｓｅ
ｎｔｅｒｏｉａｅｓ ） Ｄ Ｓ Ｍ ２０１９３又は
はジオコックス・イントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃ
ｕｓ ｐｅ−ｎｔｏｓａＯｅｕ８ ） Ｄ Ｓ Ｍ ２
０２８．０−ｔ’ある。
る場合、両方の酵素の分離を行なうべきである。それ故
、Ｄ−ＬＤＨだけを含有する菌株からのＤ−ＬＤＨ製剤
が優れている。特に良好な結果は、ラクトバチルス・ラ
イヒマンニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃ−１１１ｕｅ ’ｌｅ
ｉｃｈｍａｎｎｉｉ ） Ｄ Ｓ Ｍ ２６９９からの
ＬＤＨじより得らオ１１ これはＤ−ＬＤＨＩｍ該当す
る。他の優れた菌株はラフトノ層チルス・ラクチス（Ｌ
ａｃｔｏｔ）ａｃｌｌｕｓ ’１ａｃｔｉｅ ） Ｄ
Ｓ Ｍ ２００７２、ラクトバチルス・ゾランタルム（
Ｌａｃｔ□ｂａｃ−１１１ｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ
） Ｄ １３ Ｍ ２０１７４ 、ロイコノストック・
メセンテロイーｐス（ｔｅｕｃｏｎ□ｓｔ□ｃｍｅｓｅ
ｎｔｅｒｏｉａｅｓ ） Ｄ Ｓ Ｍ ２０１９３又は
はジオコックス・イントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃ
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本発明方法をグルタメート／ビルペードトランスアミナ
ー−Ｎ（ＧＰＴ）の測定≦２使用する場合、アミノ酸と
してアラニンを使用し、これ＋ｔピルベート（２脱アミ
ノ反応しかつその後テラクテート（：還元される。グル
タメート／オキサロアセテートートランスアミナー−ｔ
７（ＧＯＴ）を測定する場合、アミノ酸としてアスノぞ
ルテートを使用し、これはオキサロアセテート（二ｌｌ
弛アミノ反応し、その後でマレート？＝還元される。
ー−Ｎ（ＧＰＴ）の測定≦２使用する場合、アミノ酸と
してアラニンを使用し、これ＋ｔピルベート（２脱アミ
ノ反応しかつその後テラクテート（：還元される。グル
タメート／オキサロアセテートートランスアミナー−ｔ
７（ＧＯＴ）を測定する場合、アミノ酸としてアスノぞ
ルテートを使用し、これはオキサロアセテート（二ｌｌ
弛アミノ反応し、その後でマレート？＝還元される。
それ故、ＬＤＨ，α−オキシグルタレート、相応するア
ミノＩＱ、ＮＡＤＨ，緩衝物＊（ＰＩ”６．５〜８．５
）及び場合によりＭＤＨを含有するトランスアミナーゼ
を測定するための本発明（−よる試薬は乳１￥１！菌の
Ｄ−ＬＤＨを含有することを特徴とする。
ミノＩＱ、ＮＡＤＨ，緩衝物＊（ＰＩ”６．５〜８．５
）及び場合によりＭＤＨを含有するトランスアミナーゼ
を測定するための本発明（−よる試薬は乳１￥１！菌の
Ｄ−ＬＤＨを含有することを特徴とする。
ＧＦＴ測定の場合は試薬はアミノ酸としてアラニンを含
有する。ＧＯＴ測定の場合＆ま試薬（まアミノ酸として
アスノＲ１レテートを含有し、更Ｃニマレートデヒドロ
ゲナーゼ（ＭＤＩ）を含有する。
有する。ＧＯＴ測定の場合＆ま試薬（まアミノ酸として
アスノＲ１レテートを含有し、更Ｃニマレートデヒドロ
ゲナーゼ（ＭＤＩ）を含有する。
優れた実施形ではＧＰＴを測定するたν）の本発明ａ二
よる試薬は、 乳酸菌からのＤ−Ｔ、ＤＨ２５０〜２００００Ｕ／ノα
−オキソグルタレート ２＋５〜１００ミ一ノモル／！
アラニン ５０〜１０００ミリモル／ノＮＡＤＨ０，０
１〜０．２５ミリモル／ノ及び 緩衝物質（ｐＨ６，５〜８．５） １０〜５００ミリモル／ノ を含有する。
よる試薬は、 乳酸菌からのＤ−Ｔ、ＤＨ２５０〜２００００Ｕ／ノα
−オキソグルタレート ２＋５〜１００ミ一ノモル／！
アラニン ５０〜１０００ミリモル／ノＮＡＤＨ０，０
１〜０．２５ミリモル／ノ及び 緩衝物質（ｐＨ６，５〜８．５） １０〜５００ミリモル／ノ を含有する。
他の優れた実施形ではＧＯＴを測定するための本発明Ｃ
二よる試薬は。
二よる試薬は。
乳酸弊からのＤ−ＴＪＤＨ２５０〜２００００ Ｕ／ノ
α−オキソグルタレート ２．５〜１００ミリモル／！
アスパルテート ２０〜１００００ミリモＩし／ノＮＡ
ＤＨＯ，０１〜０．企５ミリモル／ノＭＤＨ１００〜２
００００Ｕ／ノ 及び 緩衝物質（ＰＨ６，ｓ〜８．５） １０〜５００ミリモル／ノ を含有する。
α−オキソグルタレート ２．５〜１００ミリモル／！
アスパルテート ２０〜１００００ミリモＩし／ノＮＡ
ＤＨＯ，０１〜０．企５ミリモル／ノＭＤＨ１００〜２
００００Ｕ／ノ 及び 緩衝物質（ＰＨ６，ｓ〜８．５） １０〜５００ミリモル／ノ を含有する。
本発明範囲１ｍ、おいてＧ Ｐ Ｔ Ｋ薬の各成分の特
（：優ｔｔ −ｒ Ｖｈ ル最終濃ｖｔはＴＪＤ Ｈ１
０００〜１４００ｕ／）、アラニン６００〜８００ミリ
モル／Ｊ、ＮＡＤ）１０．１ θ〜０．２０ミリモル／
！、α−オキソグルタレート１０〜２５ミリモル／ノ及
び緩衝物質（ｐ Ｈ７，３〜７．５ ） ５０〜１００
ミリモル／ノである。
（：優ｔｔ −ｒ Ｖｈ ル最終濃ｖｔはＴＪＤ Ｈ１
０００〜１４００ｕ／）、アラニン６００〜８００ミリ
モル／Ｊ、ＮＡＤ）１０．１ θ〜０．２０ミリモル／
！、α−オキソグルタレート１０〜２５ミリモル／ノ及
び緩衝物質（ｐ Ｈ７，３〜７．５ ） ５０〜１００
ミリモル／ノである。
ＧＯＴ試薬の場合相応する濃度に関する数値は、ＬＤＨ
１００Ｏ〜１４００ Ｕ／ｌ、ＭＤＨ５００〜１０００
Ｕ／ノ、？ＪＡＤＨ０，１０〜０゜２０ミリモル／ノ
、アスノぞルテート１５０〜２５０ミリモル／ｌ及びα
−オキソグルタレート１０〜２０ミリモル／ノ及び緩衝
物質（Ｉ）Ｈ７゜３〜７．５ ） ５０〜１００ミリモ
ル／ノｆある。
１００Ｏ〜１４００ Ｕ／ｌ、ＭＤＨ５００〜１０００
Ｕ／ノ、？ＪＡＤＨ０，１０〜０゜２０ミリモル／ノ
、アスノぞルテート１５０〜２５０ミリモル／ｌ及びα
−オキソグルタレート１０〜２０ミリモル／ノ及び緩衝
物質（Ｉ）Ｈ７゜３〜７．５ ） ５０〜１００ミリモ
ル／ノｆある。
緩衝物質としては記載のｐＨ範囲で有効な緩衝物質が該
当する。優れているのはトリス緩衝剤、トラ緩衝剤（ト
リエタノールアミン）及びホスフェート緩衝剤１ある。
当する。優れているのはトリス緩衝剤、トラ緩衝剤（ト
リエタノールアミン）及びホスフェート緩衝剤１ある。
本発明により達成される効果は、添付図面から明らかで
ある。添付図面には、貯蔵時間（時間）に対する開始吸
光度の低下率（％）を公知方法もしくは試薬と本発明方
法％Ｌ＜は試薬とを比較して示す。その測定（：当って
は、”モノテストリア＠Ａ ］Ｊ Ａ Ｔ ／ Ａ Ｌ
Ｔ ／Ｇ 、Ｐ Ｔ （Ｍｏｎ−□ｔｅｅｔ■ａ Ａ
ＬＡＴ／ＡＬＴ／ＧＰＴ）”という名前で市販されてい
るベーリンガー・マンハイム社（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｎｈｅｉｍ ＧｍｂＨ） 製のＧＰＴを測定す
るための試薬を本発明（二よる試薬と比較した。試験Ｃ
二おける濃度は次の通りであった： ＬＤＨ１２００Ｕ／４ ＮＡＤＨ０，１８０ミリモル／！ α−オキシグルタレート １５ミリモル／ノアラニン
５００ミリモル／ノ ドリス緩衝液（ｐＨ７，５） １００ミリモル／！公知
の試薬は豚心からのＬＤＨを含有し、本発明（二よる試
薬はラクトバチルス・ライヒマンニイＤＳＭ２６９９か
らｃ７）Ｄ−ＬＤＨを含有した。
ある。添付図面には、貯蔵時間（時間）に対する開始吸
光度の低下率（％）を公知方法もしくは試薬と本発明方
法％Ｌ＜は試薬とを比較して示す。その測定（：当って
は、”モノテストリア＠Ａ ］Ｊ Ａ Ｔ ／ Ａ Ｌ
Ｔ ／Ｇ 、Ｐ Ｔ （Ｍｏｎ−□ｔｅｅｔ■ａ Ａ
ＬＡＴ／ＡＬＴ／ＧＰＴ）”という名前で市販されてい
るベーリンガー・マンハイム社（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｎｈｅｉｍ ＧｍｂＨ） 製のＧＰＴを測定す
るための試薬を本発明（二よる試薬と比較した。試験Ｃ
二おける濃度は次の通りであった： ＬＤＨ１２００Ｕ／４ ＮＡＤＨ０，１８０ミリモル／！ α−オキシグルタレート １５ミリモル／ノアラニン
５００ミリモル／ノ ドリス緩衝液（ｐＨ７，５） １００ミリモル／！公知
の試薬は豚心からのＬＤＨを含有し、本発明（二よる試
薬はラクトバチルス・ライヒマンニイＤＳＭ２６９９か
らｃ７）Ｄ−ＬＤＨを含有した。
添付図面から公知の試薬の場合水浴中２５℃で約３４時
間後Ｃ二は全ＮＡＤＥが消失しく曲線１）、本発明Ｃ二
よる試薬の場合水浴中２５℃で１２０時間後も開始吸光
度の約７１％が測定される（曲線３）ことが明らかであ
る。４℃（水浴）及び１２０時間の貯蔵時間の相応する
数値は公知の試薬では残留吸光度３０％（曲線２）、本
発明（二よる試薬では９０％である（曲線４）。
間後Ｃ二は全ＮＡＤＥが消失しく曲線１）、本発明Ｃ二
よる試薬の場合水浴中２５℃で１２０時間後も開始吸光
度の約７１％が測定される（曲線３）ことが明らかであ
る。４℃（水浴）及び１２０時間の貯蔵時間の相応する
数値は公知の試薬では残留吸光度３０％（曲線２）、本
発明（二よる試薬では９０％である（曲線４）。
肘ル？からのＬＤＨの代りに、Ｌ、カゼイ（Ｌ。
ｃａｅｅｉ、 ） 、Ｌ、キシａスス（’ Ｉ＋、 ｘ
ｙｌｏｅｕｓ ） 、 Ｂ。
ｙｌｏｅｕｓ ） 、 Ｂ。
ステアロテルモフィルス（Ｂ、 Ｓｅａｒｏｔｈｅｒｍ
ｏｐｌｘ−ｉｌｕｓ ）又は、Ｌ、プランクルＡ （ｌ
Ｌ＋、 Ｐｌａｎｔａｒｕｍ）からのＬ−ＬＤＨを使用
する場合Ｅ ％豚七−ＬＤＨの場合と同様の結果が得ら
れる。
ｏｐｌｘ−ｉｌｕｓ ）又は、Ｌ、プランクルＡ （ｌ
Ｌ＋、 Ｐｌａｎｔａｒｕｍ）からのＬ−ＬＤＨを使用
する場合Ｅ ％豚七−ＬＤＨの場合と同様の結果が得ら
れる。
ＧＰＴ測定するための前記の市販の試薬の代りじ１モノ
テスト■アＡ Ｓ Ａ Ｔ ７ Ａ Ｓ Ｔ ７ Ｇ
ＯＴ （Ｍｏｎ０ｔｅ８ｔ■ａＡ８ＡＴ／ＡＢＴ／ＧＯ
Ｔ）’の名前で市販きれているＧＯＴ測定用の相応する
試薬を使用する場合Ｃ二も同一の曲線が得られる。この
場合、試験じおける濃度は次の通りであ つブこ。
テスト■アＡ Ｓ Ａ Ｔ ７ Ａ Ｓ Ｔ ７ Ｇ
ＯＴ （Ｍｏｎ０ｔｅ８ｔ■ａＡ８ＡＴ／ＡＢＴ／ＧＯ
Ｔ）’の名前で市販きれているＧＯＴ測定用の相応する
試薬を使用する場合Ｃ二も同一の曲線が得られる。この
場合、試験じおける濃度は次の通りであ つブこ。
ＬＤＨ’１３００Ｕ／ノ
ＭＤＨ４２’Ｏｔ］／Ｊ
ＮＡＤＨＯ，ＩＥｌＯミリモル／ノ
α−オキソグルタレート １２ミリ−１−ル／／アスパ
ルテート ｚ４０ミリ七ル／ノ ドリス緩衝物賀（ｐＨ７，８） ８０ミリモル／！この
試薬では、それぞれの試料が内生ビルベ−ト及び一般に
は内生ＬＤＨも含有するのでＬＤ Ｈを盆有する必すが
ある。これじより、ピルベートの緩慢な分解による潜行
反応が惹起される。この分解は本発明で使用される過剰
量のＬＤＨの添加【二より短時間で進行する。
ルテート ｚ４０ミリ七ル／ノ ドリス緩衝物賀（ｐＨ７，８） ８０ミリモル／！この
試薬では、それぞれの試料が内生ビルベ−ト及び一般に
は内生ＬＤＨも含有するのでＬＤ Ｈを盆有する必すが
ある。これじより、ピルベートの緩慢な分解による潜行
反応が惹起される。この分解は本発明で使用される過剰
量のＬＤＨの添加【二より短時間で進行する。
この“副反応″は明らかｌ： Ｇ Ｐ Ｔ測定でも同様
に起るが、この場合（二はα−ヒドロキシグルタレート
デヒドロゲナーゼ活性という更（＝大きな問題が重なっ
ている。しかじ本命ＢＡｔ＝より両方の問題は同時に解
決される。
に起るが、この場合（二はα−ヒドロキシグルタレート
デヒドロゲナーゼ活性という更（＝大きな問題が重なっ
ている。しかじ本命ＢＡｔ＝より両方の問題は同時に解
決される。
それ故、本発明により何倍もの貯爪安定性が達成される
ことが明らかでおる。
ことが明らかでおる。
本発明に好力なラグトパチルスＯライヒマンニイＤＳＭ
２６９９からの酵素製剤は微生物ＬＤＨを取得するため
の公知方法（二より、例えば゛ジャーナル・オブ拳ジェ
ネラルΦマイクロバイオロジー（ｓ、 ａｆＧｅｎｅｒ
ａｌ ｍｌｃｒｏｂｔｏｘｏｇｙ）’、６２巻、２４３
頁（１９７０年）（二記載の方法Ｃ二より製造すること
ができる。原理的に、この方法は次のように行なう： ０．５モル−リン酊カリウム緩衝液（ｐＨ１中（二懸濁
したラクトバチルスの超音波Ｃ二よる細胞崩壊、遠＋し
及び細Ｂ←１．カスの廃棄。
２６９９からの酵素製剤は微生物ＬＤＨを取得するため
の公知方法（二より、例えば゛ジャーナル・オブ拳ジェ
ネラルΦマイクロバイオロジー（ｓ、 ａｆＧｅｎｅｒ
ａｌ ｍｌｃｒｏｂｔｏｘｏｇｙ）’、６２巻、２４３
頁（１９７０年）（二記載の方法Ｃ二より製造すること
ができる。原理的に、この方法は次のように行なう： ０．５モル−リン酊カリウム緩衝液（ｐＨ１中（二懸濁
したラクトバチルスの超音波Ｃ二よる細胞崩壊、遠＋し
及び細Ｂ←１．カスの廃棄。
得られた微生物粗製エキスを酢酸でｐ Ｈ５，５Ｃ二し
、硫酸ゾロタミンを加えて０．３％Ｗ／Ｖにしかつ沈殿
を遠心分離する。上澄みをｐＨ７に調節しかつ硫酸アン
モニウムで５０〜８５％飽和で沈殿するフラクシヨンを
取得する。このフラツジぢンを緩働液（ｐＨ７）中を弱
いアニオン交換体（Ｄ ’Ａ Ａ Ｆｌ！−５ｅｐｈａ
ｄｅｘ■Ａ３０）を介してクロマトグラフィ処理しかつ
Ｍａｉｌ傾斜液で溶離する。
、硫酸ゾロタミンを加えて０．３％Ｗ／Ｖにしかつ沈殿
を遠心分離する。上澄みをｐＨ７に調節しかつ硫酸アン
モニウムで５０〜８５％飽和で沈殿するフラクシヨンを
取得する。このフラツジぢンを緩働液（ｐＨ７）中を弱
いアニオン交換体（Ｄ ’Ａ Ａ Ｆｌ！−５ｅｐｈａ
ｄｅｘ■Ａ３０）を介してクロマトグラフィ処理しかつ
Ｍａｉｌ傾斜液で溶離する。
約２５％の収率でＬＤＨ剤が得られ、これは粗製エキス
に比べて３０倍又はそれ以上精製されている。この方法
は、ラクトバチルス属及びロイコノストック壽の他のＮ
株、例えばＬｊクテスＤ Ｂ Ｍ ２０１）フ２、ｂ、
ブランフルムＤＢＭ２０１７４及びロイコノストック・
メセンテロイデスＤＳＭ２０１９３にも好≠である。ベ
ジオコックス菌株の場合は°ジャーカル・オブ・パクテ
リオロジー（Ｊ、 ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）
’ ％１２１巻、６０２頁による方法を適用する。
に比べて３０倍又はそれ以上精製されている。この方法
は、ラクトバチルス属及びロイコノストック壽の他のＮ
株、例えばＬｊクテスＤ Ｂ Ｍ ２０１）フ２、ｂ、
ブランフルムＤＢＭ２０１７４及びロイコノストック・
メセンテロイデスＤＳＭ２０１９３にも好≠である。ベ
ジオコックス菌株の場合は°ジャーカル・オブ・パクテ
リオロジー（Ｊ、 ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）
’ ％１２１巻、６０２頁による方法を適用する。
実ｍψ１１
次（二本発明を実施例により詳Ｈイ、する。
例Ｉ
ＧＰＴ活性の測定（ホスフェ−１Ｉ液を用いる）
試料物質：血清、ヘパリン−又はＺＤＴ八−原形質
試薬（試験じおける最終濃度）：
ホスフェート緩衝液（ｐＨ７，４） ８０ミリモル／！
ｂ−アラニン ＳＯＯミリモル／ノ ＬＤＨ（１２０００／ｊ！ ＮＡＩ）ＨＯ，１８ミリモル／ノ α−ケトグルタレート １８．０ミリモル／！測定条件 波長：Ｈｇ３６５ｎｍ、３４Ｑｎｍ又は３３４．ｎｕｌ
＋キュベツト一層厚１ ｅｍ 測定制御２５℃ 空気Ｃ対して測定（吸光度低下）アナログ表示板を備え
た光度計で０．５００を上桁る開始吸光度を縦続接ｔｃ
（二より補正する。
ｂ−アラニン ＳＯＯミリモル／ノ ＬＤＨ（１２０００／ｊ！ ＮＡＩ）ＨＯ，１８ミリモル／ノ α−ケトグルタレート １８．０ミリモル／！測定条件 波長：Ｈｇ３６５ｎｍ、３４Ｑｎｍ又は３３４．ｎｕｌ
＋キュベツト一層厚１ ｅｍ 測定制御２５℃ 空気Ｃ対して測定（吸光度低下）アナログ表示板を備え
た光度計で０．５００を上桁る開始吸光度を縦続接ｔｃ
（二より補正する。
キュベツト中１ニピペット装入し、試薬混合物（２５℃
）２．５屑Ｊと試料ｏ、５ｒｒｔｅを混合する。約１分
後に吸光度を読み取り、同時Ｃニストップウォッチを始
動させる。更に正確（二１分後、２分後及び３分後（二
読み取る。
）２．５屑Ｊと試料ｏ、５ｒｒｔｅを混合する。約１分
後に吸光度を読み取り、同時Ｃニストップウォッチを始
動させる。更に正確（二１分後、２分後及び３分後（二
読み取る。
吸光度差７分（６８７分） ｏ、ｏ ６〜ｏ、ｏ ｓ
（Ｈｇ ３６５ ｎｍ ）もしくはｏ、ｔ １〜ｏ、ｔ
ｓ （Ｈｇ３３４及び３４０ ｎｍ ）の場合、最初
の２分間の測定だけを考慮する（１分間は恒温保持しか
つ２分間は測定する）。
（Ｈｇ ３６５ ｎｍ ）もしくはｏ、ｔ １〜ｏ、ｔ
ｓ （Ｈｇ３３４及び３４０ ｎｍ ）の場合、最初
の２分間の測定だけを考慮する（１分間は恒温保持しか
つ２分間は測定する）。
ｅ、光度差７分（６８７分）から平均値を計算しかつこ
れを次の計算式に入れる。
れを次の計算式に入れる。
計７！：試相中のＧＰＴの活性は次式Ｃ二より計算する
。
。
Ｕ／ｊ （２５℃）＝１７６５ＸΔ”ａａＩ、ｎｍ／分
Ｕ／ｊ（２５℃）＝９ ｓ ２Ｘ△”ｉ１４０ｎｍ／１
４０頁（２５℃）＝９７１Ｘ△”ａ３４ｎｍ／分例２ ＧＯＴ活性の測定（トリス緩衝液を用いる）試料物質：
血清、ヘノミリン−又はＥＤＴＡ−原形質 試薬（試験Ｃおける最終濃度）ニ トリス緩衝液（ｐＨ７，５） １００ミリモル／ノＮＡ
ＤＨ０，１８ミリモル／Ｊ ＭＤＨ６００Ｕ／ノ ＬＤＨ１２００Ｕ／ノ α−ケトグルタレート １２ミリモル／ノＬ−アスパル
テート ２００ミリモル／ノン１１り定ジ１ミ件： 波長： Ｈｇ ３６５ｎｍ 、３４０ｎｍ又は３３４ｎ
ｍキュベツト：屑厚１ ａｍ 測定湯度：２５℃ 空気Ｃ二対してｊｌ１１定（吸光度低下）試４溶ｅ（２
５℃）２．５ｒ＋ｅと試才１０．５ｍｌを混合し、溶液
をキュベツト中じ装入する。約１分後じ吸光度を読み取
りかつ同時にストップウォッチを始動きせる。更に正１
ｉｆＮζ二１分後、２分後及び３分後Ｃ二６）６み城る
。
Ｕ／ｊ（２５℃）＝９ ｓ ２Ｘ△”ｉ１４０ｎｍ／１
４０頁（２５℃）＝９７１Ｘ△”ａ３４ｎｍ／分例２ ＧＯＴ活性の測定（トリス緩衝液を用いる）試料物質：
血清、ヘノミリン−又はＥＤＴＡ−原形質 試薬（試験Ｃおける最終濃度）ニ トリス緩衝液（ｐＨ７，５） １００ミリモル／ノＮＡ
ＤＨ０，１８ミリモル／Ｊ ＭＤＨ６００Ｕ／ノ ＬＤＨ１２００Ｕ／ノ α−ケトグルタレート １２ミリモル／ノＬ−アスパル
テート ２００ミリモル／ノン１１り定ジ１ミ件： 波長： Ｈｇ ３６５ｎｍ 、３４０ｎｍ又は３３４ｎ
ｍキュベツト：屑厚１ ａｍ 測定湯度：２５℃ 空気Ｃ二対してｊｌ１１定（吸光度低下）試４溶ｅ（２
５℃）２．５ｒ＋ｅと試才１０．５ｍｌを混合し、溶液
をキュベツト中じ装入する。約１分後じ吸光度を読み取
りかつ同時にストップウォッチを始動きせる。更に正１
ｉｆＮζ二１分後、２分後及び３分後Ｃ二６）６み城る
。
吸光度差７分（６８７分）から平均値を出しかつ計算式
（：入れる。
（：入れる。
計算：試料中のＧＯＴの活性は表から明らか１ありある
いは次式から計算する。
いは次式から計算する。
Ｕ／）（２５℃）＝２０５９Ｘ△Ｉ！ｉａｓｓｎｍ／分
Ｕ／ノ（２５℃）＝１１１１Ｘ△”ｓ４ｏｎｍ／分Ｕ／
Ｊ（２５℃）＝１１３３Ｘ△”ａａ４ｎｍ／分
Ｕ／ノ（２５℃）＝１１１１Ｘ△”ｓ４ｏｎｍ／分Ｕ／
Ｊ（２５℃）＝１１３３Ｘ△”ａａ４ｎｍ／分
添付図面は、貯蔵時間Ｈ対する開始吸光度低下率を公知
の方法もしくは試薬と本発明による方法もしくは試薬と
を比較して示す図表である。 曲線１：市販の試薬、２５℃で（水浴）曲線２：市販の
試薬、４℃で（水浴） 曲線３：本発明による試薬、２５℃で（水浴）曲線４：
本発明Ｃ：よる試薬、４℃ｆ（水浴）手続補正書（［８
Ｉ効 昭和５９年１１月７２日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５９年特許願第１７３４６１号 ２、発明の名称 トランスアミナーゼを測定する方法及び試薬３、補正を
する者 事件との関係 特許出願人 ４、代理人 ７、補正の内容 （］、） 明細書第２０頁３〜４行の「表から明らかで
ありあるいは次式から」を「次式から」と補正する。
の方法もしくは試薬と本発明による方法もしくは試薬と
を比較して示す図表である。 曲線１：市販の試薬、２５℃で（水浴）曲線２：市販の
試薬、４℃で（水浴） 曲線３：本発明による試薬、２５℃で（水浴）曲線４：
本発明Ｃ：よる試薬、４℃ｆ（水浴）手続補正書（［８
Ｉ効 昭和５９年１１月７２日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５９年特許願第１７３４６１号 ２、発明の名称 トランスアミナーゼを測定する方法及び試薬３、補正を
する者 事件との関係 特許出願人 ４、代理人 ７、補正の内容 （］、） 明細書第２０頁３〜４行の「表から明らかで
ありあるいは次式から」を「次式から」と補正する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 相応するアミノ酸とα−ケトグルタル酸とを反応
させてグルタル酸と、使用したアミノ酸Ｅ相応するα−
ケト酸に変換しかつ形成したα−ケト酸を、ラクテート
デヒドロゲナー−Ｎ（ＬＤＨ）及び場合によりマレート
デヒドロゲナーゼ（ＭＤＨ）の存在（二おいてＮＡＤ＋
及びα−オキシ酸の形成下ＣＮ Ａ Ｄ Ｈ’１１’還
元して測定することＩ：よりトランスアミナーゼを測定
する方法において、乳酸菌のＤ−ＬＤＨを使用すること
を特徴とするトランスアミナーゼの測定法。 ２、 ラクトバチルス川、ペジオコックス朗及び／又は
ロイコノストック川の微生物からのＤ−ＬＤＨを使用す
る特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、 グルタメート／ピルベート−トランスアミナーゼ
（ＧＰＴ）を測定し、かつアミノ酸としてピルベートＣ
：脱アミノ反応しかつラクテートじ還元されるアラニン
を使用する特許請求の範囲第１項又は第２項記載の方法
。 ４、 グルタメート／オキチロアセテート−トランスア
ミナーゼ（ＧＯＴ）を測定し、かつアミノ酸としてオキ
サロアセテート（二脱アミノ反応しかつマレートに還元
されるアスノぞルテートを使用する特許請求の範囲第１
項又は第２項記載の方法。 ５、 ラグト／々チルス・ライヒマンニイＤＳＭ２６９
９、ラクトバチルス響ラクチスＤ８Ｍ２００７２、ラク
トパチルΦブランクルムＤＢＭ２０１７４、ロイコノス
トック−メセンテロイデスＤＳＭ２０１９３又はペジオ
コックスａペントサセウスＤＳＭ２０２８０からのＤ−
ＬＤＨを使用する特許請求の範囲第２項から第４項まで
のいずれか１項記載の方法。 ６、ＬＤＨ，α−オキソグルタレート、相ＬＬ：するア
ミノ酸、ＮＡＤＨ，緩衝物質（ｐ Ｈ６，５〜８．５）
及び場合（二よりＭＤＨを含有するトランスアミナーゼ
測定試薬において、それが乳酸菌のＤ−ＬＤＨを含有す
ることを特徴とするトランスアミナーゼを測定する試薬
。 ７、 アミノ酸としてアラニンを含有する特許請求の範
囲第６項記載の試薬。 ８ アミノ酸としてアスノぐルテートを含有する特許請
求の範囲第６項記載の試薬。 ９、 乳酸菌からのＤ−ＬＤＨ２５０〜２００００ Ｕ
／）α−オキソグルタレート ２．５〜１００ミリモル
／ノアラニン ５０〜１０００ミリモル／ノＮＡＤＨ０
，０１〜０．２５ミリモル／１及び 緩衝物質（６，５〜［５） １０〜５００ミリモル／ノ
を含有する特許請求の範囲第７項記載の試薬。 １０ 乳酸菌からのＤ−ＬＤＨ２５０〜２００００Ｕ／
ノα−オキソグルクレート ２．５〜１００ミリモル／
ノアスパルテ−ト ２０〜１０００ミリモル／！ＮＡＤ
Ｈ０，０１〜０．２５ミリモル／、ＩＭＤＨ１００〜２
００００Ｕ／ノ 及び Ｃａ Ｍｒ物’１（ｐＨ６，５〜８．５） １０〜５０
０ミリモル／ノを含有する特許請求の範囲第８項記載の
試薬。 １１、ラクトバチルス屈、ペジオコックス鵬及び／又は
ロイコノストック属の微生物からのＤ−ＬＤＨを含有す
る％ Ｍ’Ｆ 請求０） ％ｕ囲第６項から第１０項ま
でのいすｉｒ、か１項記載の試薬。 １２、ラクトバチルス響うイヒマンニ、（ＴＩＥＩＭ２
６９９、ラクトバチルス・ラクｔスＤ Ｓ １１２００
７２、ラクトバチルス・クランタルムＤ８Ｍ２０１７４
、ロイコノストックφメセンテロイデス：ｏｓＭ２ｏｔ
９３又はペジすコックス脅ベントサセウスＤＳＭ２０２
８０からのＤ−ＬＤＨを含有する特ｉｆｆ 請求の範囲
第１１項記載の試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3330246.4 | 1983-08-22 | ||
| DE19833330246 DE3330246A1 (de) | 1983-08-22 | 1983-08-22 | Verfahren und reagenz zur bestimmung von transaminasen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6078598A true JPS6078598A (ja) | 1985-05-04 |
| JPH0453519B2 JPH0453519B2 (ja) | 1992-08-26 |
Family
ID=6207132
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59173461A Granted JPS6078598A (ja) | 1983-08-22 | 1984-08-22 | トランスアミナ−ゼを測定する方法及び試薬 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4728604A (ja) |
| EP (1) | EP0139985B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6078598A (ja) |
| AT (1) | ATE31427T1 (ja) |
| AU (1) | AU548110B2 (ja) |
| CA (1) | CA1225316A (ja) |
| CS (1) | CS257782B2 (ja) |
| DD (1) | DD222332A5 (ja) |
| DE (2) | DE3330246A1 (ja) |
| ES (1) | ES8504939A1 (ja) |
| SU (1) | SU1431690A3 (ja) |
| YU (1) | YU143584A (ja) |
| ZA (1) | ZA846478B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015080456A (ja) * | 2013-10-23 | 2015-04-27 | 株式会社カイノス | Ａｌｔ活性測定試薬およびその試薬を用いたアラニンアミノトランスフェラーゼ活性の測定方法。 |
Families Citing this family (3)
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|---|---|---|---|---|
| EP0387697A3 (en) * | 1989-03-13 | 1991-11-13 | Abbott Laboratories | Determination of aminotranferases |
| AU7493791A (en) * | 1990-03-01 | 1991-09-18 | Baxter Diagnostics Inc. | Method to use a reaction by-product as a calibrator for enzymatic assays |
| DE4427492A1 (de) * | 1994-08-03 | 1996-02-08 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Analyse einer medizinischen Probe unter Vermeidung von Störbeiträgen aufgrund von Hämolyse |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3527332A (en) * | 1966-06-30 | 1970-09-08 | Calbiochem | Method for assaying glutamate pyruvate transaminase |
| BE786291A (fr) * | 1971-07-20 | 1973-01-15 | Technicon Instr | Compositions de diagnostic pour determination de la glutamate-oxalate-transaminase (got) et de la glutamate-pyruvate-transaminase (gpt) |
| IT1162349B (it) * | 1979-07-17 | 1987-03-25 | Biodata Spa | Metodo per la determinazione delle transaminasi e relativo kit diagnostico |
-
1983
- 1983-08-22 DE DE19833330246 patent/DE3330246A1/de not_active Withdrawn
-
1984
- 1984-08-15 CA CA000461074A patent/CA1225316A/en not_active Expired
- 1984-08-16 AU AU31974/84A patent/AU548110B2/en not_active Ceased
- 1984-08-20 ES ES535299A patent/ES8504939A1/es not_active Expired
- 1984-08-20 US US06/642,423 patent/US4728604A/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-08-20 YU YU01435/84A patent/YU143584A/xx unknown
- 1984-08-20 DD DD84266444A patent/DD222332A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-20 CS CS846297A patent/CS257782B2/cs unknown
- 1984-08-21 ZA ZA846478A patent/ZA846478B/xx unknown
- 1984-08-21 SU SU843784992A patent/SU1431690A3/ru active
- 1984-08-22 JP JP59173461A patent/JPS6078598A/ja active Granted
- 1984-08-22 DE DE8484110018T patent/DE3468126D1/de not_active Expired
- 1984-08-22 AT AT84110018T patent/ATE31427T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-22 EP EP84110018A patent/EP0139985B1/de not_active Expired
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BIOCHEMICALS ENZYMES COENZYMES SUBSTRATES MARKERS INHIBITORS OTHERS=S57 * |
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| JP2015080456A (ja) * | 2013-10-23 | 2015-04-27 | 株式会社カイノス | Ａｌｔ活性測定試薬およびその試薬を用いたアラニンアミノトランスフェラーゼ活性の測定方法。 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0139985B1 (de) | 1987-12-16 |
| DD222332A5 (de) | 1985-05-15 |
| SU1431690A3 (ru) | 1988-10-15 |
| ATE31427T1 (de) | 1988-01-15 |
| CS629784A2 (en) | 1987-11-12 |
| CS257782B2 (en) | 1988-06-15 |
| CA1225316A (en) | 1987-08-11 |
| AU3197484A (en) | 1985-02-28 |
| DE3468126D1 (en) | 1988-01-28 |
| DE3330246A1 (de) | 1985-03-14 |
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