JPS6097997A - 生理活性物質０ｆ４９４９，その製造法，及び医薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規生理活性物質０Ｐ４９４９に関するもので
ある。

本発明者らは微生物の生産する新規生理活性物質の検索
を行い、土壌から新たに分離したペニシリウム（Ｐｅｎ
ｉｃｉｌｌｉｕｍ　）属に属する微生物中に、アミノペ
プチダーゼ（ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）　Ｂの活
性を強力に阻害する生理活性物質、すなわち１本発明者
により。

０Ｆ４９４９と命名された水溶性両性のペプチド系物質
が蓄積されることを見出した。

更に詳細な研究の結果１本発明者らは０Ｆ４９４９より
性状類似の二物質０Ｆ４９４９−　ｒ及び０Ｆ４９４９
−　Ｕを単離精製することに成功した。理化学的及び生
物学的性質より　０Ｆ４９４９−１及び０Ｆ４９４９−
　ＩＩは１箇所に異なる置換基が存在することを除けば
同一の構造を有する新規生理活性物質であることを確か
め２本発明を完成した。

本明細書では叶４９４９−　Ｔ及び／又は０Ｆ４９４９
−　ＴＩを０Ｆ４９４９と称する。

近年、腎炎、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデ
スなどの自己免疫疾患又は悪性腫瘍等に対して免疫調節
療法が試みられ９種々の薬物が開発されている。例えば
、レバミゾールが癌の免疫療法剤あるいはリウマチ性関
節炎等自己免疫疾患の治療剤への適用がある程度有効な
ことが報告されている。このほか種々の免疫調節剤が開
発されているが、これらの薬物の多くは長期連用の際に
副作用が発現するなどの問題があり、いまだ満足すべき
治療薬がないのが現状である。

０Ｆ４９４９は羊赤血球を抗原としてマウス足踏に接種
して得られる遅延型過敏症を指標とする細胞性免疫の著
しい増強作用を示す。

即ち、０Ｆ４９４９は免疫調節作用を有し生体の免疫能
を高めるので、悪性腫瘍等に対する免疫療法剤として用
いることができる。

また０Ｆ４９４９は抗アミノペプチダーゼＢ活性を有す
ることよりブラジキニンの生成を阻害して抗炎症作用を
示し１種々の疾患に対する治療剤として使用され得る。

０Ｐ４９４９を生産する代表菌株は本発明者らにより京
都府の土壌から分離されたもので、その菌学的性質は次
の通りである。

（１）各種培地における発育状態（２４℃、２週間）■
　麦芽エキス寒天 生育は遅く集落の径は２週間で２．０〜２．５ｃｍ。集
落の表面は暗緑色ないし青緑色となり、集落中心部はや
や隆起する。集落周辺部は平坦でビロード状の菌糸体を
形成する。集落の縁は、中１〜２ｍｍ　で白い。裏面は
一部黄色となるが寒天中への色素分泌はない。

■　バレイショ、ブドウ糖培地 生育は遅く、集落の径は２週間で２．５〜３．０　ｃｍ
。

集落の中心部は白色ないし灰緑色。周辺部は黄色ないし
黄緑色でビロード状の菌糸体を形成する。集落表面には
放射状の溝が認められる。裏面は淡黄色ないし黄橙色で
わずかにひだがあり寒天中への色素分泌はない。

■ツアペック寒天 生育は極めて遅く１分生胞子の着生も悪い。集落の径は
２週間で１．５〜２．０ｃｍ　、表面は淡黄色ないし黄
橙色のビロード状の菌糸体を形成する。部分的に白色な
いし灰色となることもある。裏面は着色せず、寒天中へ
の色素の分泌もない。

■コンステイープリカ添加ツアペック寒天生育は遅く集
落の径は２週間で２．０〜２．５　Ｃｍ、表面は黄緑色
ないし暗緑色のビロード状菌糸体を形成し。

集落中心部はひだを形成することもある。集落の縁は巾
１〜２ｍｍで白い。裏面は着色せず寒天中への色素の分
泌はない。

■麦芽汁寒天 生育良好で集落の径は２週間で３．０〜４．０　ｃｍに
達する。集落中心部はやや隆起し、暗緑色ないし青緑色
ビロード状で周辺は黄色ないし黄緑色を帯びる。表面。

裏面とも多くのひだを形成し、裏面は黄橙色ないし黄褐
色となるが寒天中への色素の分泌はない。

（２）形態 菌糸は無色で隔壁があり、ベニシラスは大部分整斉双輪
生状であるが、たまに単輪生状のものもある。分生胞子
は楕円形をなし、長さ３．０．１７　ｍないし４．０μ
ｍ中２．５μｍないし３．０μｍであり１分生胞子連鎖
の大きさは５０μｍから８０μｍに及ぶ。接子はとっく
り状ないし槍鋒状で、並行状様に４個ないし８個群生し
。

長さ１０．０μｍないし１３．０　μｍ　、中２．０．
１７　ｍないし２．５μｍである。基底接子は緻密状態
に、また幾分散開状態に２個ないし８個群生し、長さ１
０μｍないし１３μｍ、中２．５μｍないし３．０μｍ
である。分生子柄は、長さ５０μｍないし８０μｍ、中
２．５μｍないし３．０μｍで多くは気菌糸又は栄養菌
糸より分岐せずに突出するが１分岐したものも見られる
。

（３）生育条件 ｐ　Ｈ：　２〜１２の範囲で生育し、最適生育ｐＨは。

３〜６゜ 温度二６℃〜３３℃の範囲で生育可能で最適範囲は。

１８℃〜２８℃である。

以上の観察の結果１本菌は、ペニシリウム・ルグロサム
（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｒｕｇｕｌｏｓｕｍ　）と
同定された。

ペニシリウム・ルグロサム　についての菌学的性質は、
レイパー及びトム（Ｒａｐｅｒ　＆　Ｔｈｏｍ）共著。

１９６８年、　ハフナー（ｌｌａｆｎｅｒ）出版社の　
“ア・マニュアル・オブ・ザ・ベニシリア（Ａ　Ｍａｎ
ｕａｌ　ｏｆ　ｔｈｅＰｅｎｉｃｉｌｌｉａ）　、トム
シュ及びガムス（Ｄｏｍｓｈ　＆Ｇａｍ５　）共著　１
９７２年、　ロングマン（Ｌｏｎｇｍａｎ　）社の“フ
ァンジー・イン・アグリカルチュラル・ソイルズ（Ｆｕ
ｎｇｉ　ｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　５ｏｉｌｓ
　）　”並びに阿部著の“ジャーナル・オブ・ジェネラ
ル・アンド・アプライド・マイクロバイオロジー（Ｊｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌａｎｄ　Ａｐｐｌｉ
ｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　）　”　２巻１頁１
９５６年　に詳しく記載されている。

本発明者らは０Ｆ４９４９生産性により本菌を“ペニシ
リウム・ルグロサム０Ｆ４９４９　（Ｐｅｎｉｃｉｌｌ
ｉｕｍ　ｒｕｇｕｌｏｓｕｍＯＦ４９４９　）　”と命
名した。なお９本菌は通商産業省工業技術院微生物工業
技術研究所に微工研条寄第２０３号（ＰＥＲＭ　ＢＰ−
２０３）なる受託番号のもとに寄託されている。

本発明における使用菌としては、上記寄託菌は代表菌株
であり、これ以外にペニシリウム属に属する菌株であっ
て０Ｆ４９４９を生産する菌はすべて用いることができ
る。また、これらの菌株に紫外線を照射し９或いはニト
ロソグアニジンなどの微生物の変異のために用いられて
いる変異誘起剤による処理によって得られた人工的突然
変異株及び自然発生した変異株中にも０Ｆ４９４９を生
産するものが見いだされ、これらの変異株も本発明に用
いることができる。

本発明に使用される培養にあたっては、培地は液体でも
固体でもよいが１通常は液体培地による振盪培養。

又は通気攪拌培養が用いられる。培地はカビの生育に適
し、０Ｆ４９４９を生産し得るものであればどのような
ものでも良い。即ち、炭素源としては、グルコース。

フラクトース、マルトース、シュークロース、ラクトー
ス、デキストリン、澱粉、グリセリン、ソルビトール等
の糖類、及び大豆油等の植物性油脂類が用いられる。

窒素源としては９例えば、ペプトン、酵母エキス。

肉エキス、大豆粉、綿実粉、コーンステイープリカ。

麦芽エキス、グルタミン酸、アスパラギン酸、チロシン
、フェニルアラニン等のアミノ酸、及びその塩類。

尿素アンモニウム塩類、硝酸塩等が用いられる。その他
、燐酸マグネシウム、カルシウム、ナトリウム、カリウ
ム１鉄、マンガン等の無機塩類、ビタミンＢｌ。

パントテン酸カルシウムなどのビタミン類等の微量栄養
素を適宜加えることができる。

大量培養には液体培養が好ましい。

培地のＰＲ＋培養温度などの培養条件は、０Ｆ４９４９
を生産する範囲内で適宜変更し得るが、液体の振盪又は
通気攪拌培養の場合は、ｐ）１４〜７．培養温度２５℃
〜３０℃、培養期間２〜１０日間の培養が適当である。

このようにして得られる培養液中には、０Ｆ４９４９が
蓄積される。

本発明に係る物質は、培養濾液、及び菌体のいずれにも
存在し、いずれからも採取することができる。培養濾液
及び菌体から目的物を取り出すには１本発明に係る物質
の性状に基づいて９例えば、活性炭、非イオン性吸着樹
脂による吸着クロマトグラフィー、イオン交換樹脂によ
るイオン交換クロマトグラフィー、セルロース等による
分配クロマトグラフィー、アルキル基結合シリカゲル、
による逆相分配クロマトグラフィー。

ゲル濾過担体　によるゲル濾過等通常微生物の培養物か
ら有機物質を分離精製する手段が適宜組み合わせて使用
される。より具体的には、活性炭（和光純薬社製）、ダ
イヤイオンＩＩＰ−２０（三菱化成社製）、などの吸着
剤を詰めたカラムに培養濾液、菌体含水アセトン抽出液
、又は本物質を含有する液を通して吸着させた後。

酸、アルカリ、水、メタノール、エタノール、アセトン
などを単独で、或いは組み合わせた混合溶媒を用いて溶
出する。更にこの溶出液をダウエックス５０Ｗ（Ｈ“型
）（ダウ・ケミカル社製）などの強酸性陽イオン交換樹
脂、或いは、ダウエックスｌＸ２（ＯＨ−型）（ダウ・
ケミカル社製）などの強塩基性陰イオン交換樹脂を詰め
たカラムに吸着させ、酸、アルカリ、若しくは塩類溶液
を用いて溶出させる。

また、ダウエックスｌＸ２（ＣＩ型）を通過させて不純
物を除去することもできる。。このようにして得た溶液
から前述の如く、ダイヤイオンＩＰ−２０等を用いて吸
着し１次いで溶媒で溶出することにより脱塩した後。

減圧下濃縮すると目的物は黄褐色を帯びた粗物質として
得られる。次にこの粗物質を結晶セルロース・アビセル
（フナコシ社製）、アルキル基結合シリカゲルのりクロ
ブレツブＲＰ−８（メルク社製）、カートリッジカラム
０１８（ウォーターズ社製）などのカラムにかけ。

酸、アルカリ、　水、ｉｆｉ液、メタノール、アセトニ
トリル、プロパツール、ｎ−ブタノール、などを単独で
或いはそれらを組み合わせた混合溶媒で展開すると、目
的物を単品として得ることができる。

（以下次頁） １ 次に本発明の０Ｆ４９４９−１及び０Ｐ４９４９−　Ｉ
Ｉの性質について詳述する。

０Ｆ４９４９−１の構造は下記の式（ｎ）で表わされ、
０Ｐ４９４９−１１は主語会式（ＩＩＩ）で表わされる
。本明細書では、　〔■〕及び（１）を包含する一般式
〔１〕 こ０ＮＨ２ ２ （式中Ｒは水素又はメチル基を表わす）で表わされる化
合物を０Ｐ４９４９と称している。

〔理化学的性質〕

■　分子式　０Ｆ４９４９−Ｉ　：　Ｃ２３Ｈ２ｅＯｅ
　Ｎ４０Ｆ４９４９−ｎ　：　Ｃ２２Ｈ２４０Ｂ　Ｎ４
■　元素分析値 ０Ｆ４９４９−１　： 実測値　炭素５２．３０％、水素５．４６％、窒素１０
．６４％理論値　炭素５２．８７％、水素５．７９％、
窒素１０．７２％（Ｃ２３Ｈ２６０ｅ　Ｎ　４　・２Ｈ
２０として）ＯＰ４９４９−Ｉｔ　： 実測値　炭素５１．６０％、水素５．４８％、窒素１１
．０６％理論値　炭素５１．９７％、水素５．５５％、
窒素１１．０２％（Ｃ２２Ｈ２４０ｅ　Ｎ　４　・２Ｈ
２０として）■　分子量 Ｓ　Ｉ　Ｍ　Ｓ　（Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　Ｉｏｎ　Ｍａ
ｓｓ　Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　）法により測定した
０Ｆ４９４９−　Ｉ及び０１’４９４９−　Ｉｔの分子
量は次の通りである。

０Ｆ４９４９−Ｉ　ｎ　４８６ ０Ｆ４９４９−Ｕ　：　４７２ ■　融点 ０Ｆ４９４９−１．　０Ｆ４９４９−ｎ共に２８０℃付
近で分解する。

■　比旋光度 ０Ｆ４９４９−Ｉ　：　（α］甘せ−６４，８゜（Ｃ−
１，０、Ｈ２０） ＯＦ４９４９−ＩＩ　：　（α１ｆｆｌ　＝　−４２，
６゜（Ｃ＝１．０　、　Ｈ２０） ■　紫外線吸収スペクトル ０Ｆ４９４９−１及び０Ｆ４９４９−　ＩＩの下記の溶
剤に溶解した場合の極大吸収を示す波長及びＥｊ４値は
次の通りである。

（以下次頁） ■　赤外線吸収スペクトル ０Ｆ４９４９−１及び０Ｆ４９４９−　ＩＩの臭化カリ
ウム錠により測定した極大吸収を示す波数は次の通りで
ある。

５ ■　熔解性 ０Ｆ４９４９−１．　０Ｆ４９４９−ＩＩ共に水、アル
カリ水、ジメチルスルフォキサイド、に可溶。メタノー
ル、エタノールに難溶。ｎ−プロパツール、ｎ−ブタノ
ール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、エーテル
、ベンゼン、ヘキサンに不溶。

■　呈色反応 ０Ｆ４９４９−Ｉ、０Ｆ４９４９−Ｉ［共にニンヒドリ
ン、過マンガン酸カリ、ライドンスミス、沃素反応陽性
。坂ロ、プロカッ力、ハーネス、アンスロン反応陰性。

０Ｆ４９４９−１は塩化第二鉄反応陰性。０Ｆ４９４９
−　ＩＩは塩化第二鉄反応陽性。

［相］　中性、酸性、塩基性の区別 ０Ｆ４９４９−１．　０Ｆ４９４９−１１共に両性物質
である。

０　薄層クロマトグラフィー シリカゲルプレート（メルク社製）上でのＲｆ値は次の
通りである。

６ ■　高速液体クロマトグラフィー ヌクレオシル５Ｃ＋ｅ　（エム・ナーゲル社製）を用い
た０Ｆ４９４９−　Ｉ及び０Ｆ４９４９−ＩＩ　ノ保持
容Ｌ　保持時間は次の通りである。

カラムの大きさ：φ４．Ｏｍｍ　Ｍ　１５０．０ｉｎｍ
充填剤　：ヌクレオシル５ｃ１８ 溶媒　：　０．Ｉ　Ｍりｘン酸緩ｆｉｆｉ　（ｐ　Ｈ５
，７）　ニアセトニトリル＝９０：１０ 流速　：　０．５ｍｌ　／分 検出　：　Ｕ　Ｖ　２７５ｎｍ ■　物質の色 ＯＦ４’１１４Ｑ−Ｉ、ＯＦ４’３４９−Ｉ［共に白色
粉末。

■　プロトン核磁気共鳴スペクトル ０Ｆ４９４９−１及び０Ｆ４９４９−　Ｉ［の０．０６
Ｎ重アンモニア水中で測定した化学シフト、プロトン数
、多重度は次の通りである。

単位：化学シフト　ｐｐｍ 内部標準：ＤＳＳ １．４１　ｔＮｌ、ｄ（ｌン ［相］　Ｃ−１３核磁気共鳴スペクトル０Ｆ４９４９−
１及び０Ｆ４９４９−　ＩＩの０．０６Ｎ重アンモニア
水中で測定下化学シフトは次の通りである。

単位：化学シフト　ｐｐｍ 内部標準：　ｐ−ｄｉｏｘａｎｅ　（６７，４ｐｐｍ）
上記の如＜、０Ｆ４９４９−１及び０Ｆ４９４９−　Ｉ
Ｉは性状類（以の近縁物質であり、０Ｆ４９４９−Ｉｔ
は１個のフェノール性水酸基を有するが、０Ｆ４９４９
−１ではこれが１個のメトキシ基に置換されていること
を除けば１両者は同一の構造を有する新規な物質である
。

本発明には、０Ｆ４９４９−１及び０Ｆ４９４９−　Ｉ
Ｉのカルボン酸金属塩並びに鉱酸又は有機酸との塩が含
まれるのは当然である。

９ 〔生物学的性質〕 ０Ｆ４９４９はエールリッヒ癌細胞のアミノペプチダー
ゼＢ活性を著しく阻害する生理活性を有する。

アミノペプチダーゼＢの測定方法は、ホプスら（Ｖ。

Ｋ、　Ｈｏｐｓ、　Ｋ、に、Ｍａｋｉｎｅｎ、　Ｇ、Ｇ
、　Ｇｌｅｎｎｅｒ、Ａｒｃｈｉｖｅｓｏｆ　Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｉｓｉｃｓ　＋
　１４４＋５５７　（１９６６〉〕の方法を改良して行
った。即ち、ハンクス液にッスイ製薬社製）に熔解した
３ＩＩＩＭアルギニンーβ−ナフチルアミド（シグマ社
製）　０．ｌ１ｍ１に検体を含むハンクス液０．７ｍｌ
を加えた混合液を　３７℃、３分間加熱した後、ハンク
ス液に２．５Ｘ　１０７個／ｍｌの濃度となるように調
製したエールリッヒ癌細胞懸濁液０．２ｍｌを加え。

３７℃、３０分間反応した後＋０．３ｍｇ／ｃｃの濃度
にガーネットＧＢＣ（オルトアミノアゾトルエン・ジア
ゾニウム塩）（シグマ社製）を含み、３％の濃度にツウ
イーン２０　（Ｔｅｖｅｅｎ　２０）　（和光純薬社製
）を含む１．０Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４，２）　３ｍｌを
加え、室温に１５分間放置した後、その上清の５２５ｎ
ｍにおける吸光度（ａ）を測定した。

同時に検体を含まないハンクス液のみを用いた対照０ の吸光度（ｂ）を測定し、アミノペプチダーゼＢの阻害
率を ｂ　−ａ １００ により計算した。上記に用いたエールリッヒ癌細胞は。

ｄｄＹ系　４−６週令（雄）マウスの腹腔内で継代維持
されているもので、２Ｘ１０Ｂ個の細胞をマウス腹腔内
に移植後　７日〜１０日目の腹水液より採取した。細胞
懸濁液は、エールリッヒ癌細胞を含む腹水液をトリス−
塩化アンモニウム溶液（ｐＦ１７．２　＞で処理し、赤
血球を除去後、ハンクス液で３回洗浄し、所定の細胞数
にハンクス液で調整したものである。このものは、エー
ルリッヒ癌細胞の生細胞数として９６％以上の均一な細
胞集団である。上記試験法による０Ｆ４９４９−　Ｉ及
び０Ｆ４９４９−１１のいくつかの濃度における阻害率
をめ、それぞれに５０％阻害濃度を帰納した。その結果
を第１表に示した。

第１表 また本物質は羊赤血球を抗原としてマウスの足瞭に接種
して得られる遅延型過敏症（Ｄｅｌａｙｅｄ　Ｔｙｐｅ
　Ｈｙｐｅｒ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　：　ＤＴＨと
略記）を指標とした細胞性免疫の増強作用を示した。即
ち、羊赤血球を抗原として１×１０５個をＣＤＦ、系　
１０週令　雌マウス１群８匹に静脈注射して感作し、感
作直後に０Ｆ４９４９−　Ｉ又は０Ｆ４９４９−　ＩＩ
を滅菌水に熔解したものを、５．５０．　５００μｇ／
ｋｇの濃度となるように腹腔内注射し、４日後に左後足
の足瞭に羊赤血球　１０８個を皮下注射して、２４時間
後にその足唸に見られる腫張の程度（足踏の厚さ）をノ
ギスで測定することにより判定した。その結果を第２表
に示した。

０Ｆ４９４９−１又は０Ｆ４９４９−　Ｉｆを投与した
マウスではその腫張の程度が対照に比して著しく増強さ
れていた。

このことは、０Ｆ４９４９−Ｔ及び０Ｆ４９４９−Ｕが
細胞性免疫の成立に増強作用のあることを示している。

なお、０Ｆ４９４９−１及び０Ｆ４９４９−　］Ｉは、
ＩＣＲ系マウスの腹腔内投与３００ｍｇ／　ｋｇでの急
性毒性試験の結果、毒性が認められなかった。

（以下次頁） ３ 本発明化合物を医薬として投与する場合９本発明化合物
はそのまま又は医薬的に許容される無毒性かつ不活性の
担体中に９例えば０．１％〜９９．５％、好ましくは０
．５％〜９０％含有する医薬組成物として２人を含む動
物に投与される。

担体としては、固形、半固形、又は液状の希釈剤、充填
剤、及びその他の処方用の助剤一種以上が用いられる。

医薬組成物は、投与単位形態で投与することが望ましい
。

本発明医薬組成物は、経口投与５組織内投与１局所投与
。

（経皮投与等）又は経直腸的に投与することができる。

これらの投与方法に適した剤型で投与されるのはもちろ
んである。例えば、注射剤が特に好ましい。

免疫調節剤としての用量は３年齢９体重１等の患者の状
態、投与径路、病気の性質と程度等を考慮した上で調整
することが望ましいが１通常は、成人に対して本発明の
有効成分量として、１日あたり、０．１〜１０００ｍｇ
の範囲が一般的である。場合によっては、これ以下で足
りるしまた逆にこれ以上の用量を必要とすることもある
。多量に投与するときは、１日数回に分割して投与する
ことが望ましい。

４ 経口投与は固形または液状の用量単位１例えば末剤。

散剤１錠剤、糖衣剤、カプセル剤、顆粒剤、懸濁剤、液
剤、シロップ剤、ドロップ剤、舌下錠その他の剤型によ
って行うことができる。

末剤は活性物質を適当な細かさにすることにより製造さ
れる。散剤は活性物質を適当な細かさと成し１次いで同
様に細かくした医薬用担体１例えば澱粉、マンニトール
の如き可食性炭水化物その他と混合することにより製造
される。必要に応じ風味剤、保存剤３分散剤１着色剤。

香料その他のものを混じても良い。

カプセル剤は、まず上述のようにして粉末状となった末
剤や散剤あるいは錠剤の項で述べるように顆粒化したも
のを１例えばゼラチンカプセルのようなカプセル外皮の
中へ充填することにより製造される。滑沢剤や流動化剤
１例えばコロイド状のシリカ、タルク、ステアリン酸マ
グネシウム、ステアリン酸カルシウム、固形のポリエチ
レングリコールの如きものを粉末状態のものに混合し。

然るのちに充填操作を行うこともできる。崩壊剤や可溶
化剤２例えばカルボキシメチルセルロース、カルボキシ
メチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロ
ビルセルロース、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムを添
加すれば、カプセル剤が摂取されたときの医薬の有効性
を改善することができる。

また１本品の微粉末を植物油、ポリエチレングリコール
、グリセリン、界面活性剤中に懸濁分散し、これをゼラ
チンシートで包んで軟カプセル剤とすることができる。

錠剤は粉末混合物を作り、顆粒化もしくはスラグ化し。

次いで崩壊剤又は滑沢剤を加えたのち打錠することによ
り製造される。

粉末混合物は、適当に粉末化された物質を上述の希釈剤
やベースと混合し、必要に応じ結合剤（たとえばカルボ
キシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸塩、ゼラ
チン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールな
ど）、溶解遅延化剤（たとえばパラフィンなど）、再吸
収剤（たとえば四級塩）及び／又は吸着剤（たとえばベ
ントナイト、カオリン、リン酸シカルシウムなど）をも
併用しても良い。粉末混合物は、まず結合剤たとえばシ
ロップ、でんぷん糊、アラビアゴム、セルロース溶液又
は高分子物質溶液で湿らせ１次いで篩を強勢通過させて
顆粒とすることできる。このように粉末を顆粒化するか
わりに、まず打錠機にかけたのち、得られる不完全な形
態のスラグを破砕して顆粒にすることも可能である。

このようにして作られる顆粒は、湯沢剤としてステアリ
ン酸、ステアリン酸塩、タルク、ミネラルオイルその他
を添加することにより、互いに付着することを防ぐこと
ができる。このように滑沢化された混合物を２次いで打
錠する。また薬物は、上述のように顆粒化やスラグ化の
工程を経ることなく、流動性の不活性担体と混合したの
ちに直接打錠しても良い。シェラツクの密閉被膜から成
る透明または半透明の保護被覆、糖や高分子材料の被覆
、及びワックスより成る層上被覆の如きも用いうる。

他の経口投与剤型、たとえば溶液、シロップ、エリキシ
ルなどもまたその一定量が薬物の一定量を含有するよう
に用量単位形態にすることができる。シロップは、化合
物を適当な香味化水溶液に溶解して製造され、またエリ
キシルは非毒性のアルコール性担体を用いることにより
製造される。懸濁剤は化合物を非毒性担体中に分散させ
ることにより処方される。可溶化剤や乳化剤（たとえば
エトキシ化されたイソステアリルアルコール類、ポリオ
キシエチレンソルビトールエステル類）、保存剤、風７ 味賦与剤（たとえばペパミント油、サッカリン）その他
もまた必要に応じ添加できる。

必要とあれば、経口投与のための用量単位処方はマイク
ロカプセル化しても良い。該処方はまた被覆をしたり。

高分子・ワックス等中にうめ込んだりすることにより作
用時間の延長や持続放出をもたらすこともできる。

非経口的投与は、皮下・筋肉内又は静脈内注射用とした
ところの液状用量単位形態たとえば溶液や懸濁剤の形態
を用いることによって行いうる。これらのものは、化合
物の一定量を、注射の目的に適合する非毒性の液状担体
たとえば水性や油性の媒体に懸濁し又は溶解し９次いで
該懸濁液又は溶液を減菌することにより製造される。

あるいは化合物の一定量をバイアルにとり、然るのち該
バイアルとその内容物を減菌し密閉しても良い。投与直
前に溶解又は混合するために、粉末又は凍結乾燥した有
効成分に添えて、予備的のバイプルや担体を準備しても
良い。注射液を等張にするために非毒性の塩や塩溶液を
添加しても良い。さらに安定剤、保存剤、乳化剤の如き
ものを併用することもできる。

直腸投与は、化合物を低融点の水に可溶又は不溶の固８ 体たとえばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級エ
ステル類（たとえばパルミチン酸ミリスチルエステル）
及びそれらの混合物を混じた量刑を用いることによって
行いうる。

本発明化合物の製剤には１本発明に係る有効成分に加え
て他の薬物例えば、シトシンアラビノサイド、アドリア
マイシン又はマイトマイシンなどを配合してもよく。

又は併用しても良い。

（以下次頁） 以下に本発明に係る製造方法の実施例を具体的に説明す
るが９本発明はこれらに限定されるものではない。

実施例１ ペニシリウム・ルグロサム０Ｆ４９４９　（通商産業省
工業技術院微生物工業技術研究所　受託番号微工研条寄
第２０３号）を麦芽エキス寒天の斜面培地に７日間培養
した。この斜面培養から、−白金耳をグルコース２％、
ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．１％、リン酸第
−カリウム０．０５％硫酸マグネシウム０．０５％、を
含む培地５００ｍ１づつを２７！容量の三角フラスコに
分注し、１２０℃、２０分間滅菌したものに接種し、２
７℃で毎分１９０回転の振盪で６日間培養した。

この培養物を予め滅菌しておいたグルコース２％、　ポ
リペプトン０．５％、酵母エキス０．１％、リン酸第−
カリウム０．０５％硫酸マグネシウム０．０５％、を含
む培地２０７！を入れた３０７！のステンレス醗酵槽１
５基に１基あたりＩＲずつ植菌して培養を開始した。培
養は、毎分通気量２０１゜毎分回転数３００回転、２７
℃で行い、必要に応じて消泡剤を添加した。４日間培養
して培養物を取り出し、菌体を濾過して培養濾液を分離
し、圧縮容量６．５ｊ！の菌体及び３００βの培養濾液
が得られた。

実施例２ 実施例１で得られた菌体は５０％アセトン水２４βにて
３回抽出し、抽出液７２１を３ＯＡまで減圧濃縮するこ
とによりアセトンを除去した。濃縮液３０７Ｉと実施例
１で得られた培養濾液３００７！とともに活性炭カラム
に吸着させ。

８０１の水で充分洗浄後、５０％アセトンをふくむｐ１
１２塩酸水溶液１５０ｊ２にて溶出した。アミノペプチ
ダーゼ阻害活性画分８０βを減圧下で３０１まで濃縮し
、アセトンを除去後、濃縮液３０７！を強塩基性陰イオ
ン交換樹脂ダウエックスｌＸ２（ＣＩ−型）の　１．２
１カラムにかけ、水にて溶出した。次に溶出液８０４を
ｐＨ３に補正し、　強酸性陽イオン交換樹脂　ダウエッ
クス５０Ｗ（Ｈ＋型）の２．Ｏｌカラムに吸着させた１
０７！の水にて洗浄後、　１．ＯＮのアンモニア水　１
００１にて溶出した。活性区６０　Ｉｌを２Ｎ塩酸にて
中和後非イオン性吸着樹脂ダイヤイオンＨＰ−２０２ｉ
に吸着させた。２０　ｆｆｉの水で洗浄後、５０％メタ
ノール水２０１にて溶出した。得られた活性区を減圧下
濃縮し粗物質　２８．８ｇを得た。

実施例３ 実施例２において得られた粗物質２８．８　ｇを結晶セ
ル口１ −スアビセル３０ｇにまぶし、減圧下充分乾燥後アビセ
ルカラム　１１の上部に充填した。展開溶媒ＩＮアンモ
ニア水：ｎ−ブタノール−１５：８５　１２７！で展開
すると０Ｆ４９４９−　Ｉを主に含む活性区が１次いで
　０Ｆ４９４９−　ｎを主に含む活性区が分離して得ら
れた。それぞれの活性区をｌＮｌｌＣｌで中和し。

減圧濃縮後、水に再溶解し、ダイヤイオンＩＩＰ−２０
５００ｍ１に吸着させた。水洗後２βの５０％メタノー
ル水で溶出し。

活性区を減圧濃縮することにより、０Ｆ４９４９−Ｉ　
の粗粉末３．１ｇ及び０Ｆ４９４９−　Ｉｆ　の粗粉末
４．１ｇを得た。

実施例４ 実施例３において得られた０Ｆ４９４９−１粗粉末３．
１ｇを１５ｎ＋１の水に熔解し、大量分取専用高速液体
クロマトグラフィー（システム５００．ウォーターズ社
）を用い、カラム：カートリ・ヅジカラム（ＣＩ８．　
ウォーターズ社）、展開溶媒：　０．ＩＭクエン酸緩衝
液ニアセトニトリル＝９０：１０の条件下で逆相分配ク
ロマトグラフィーを行い、アミノペプチダーゼＢ阻害活
性を検定した。その活性区をダイヤイオンＨＰ−２０２
００ｍ１に吸着させ、水洗後、１ｚの５０％メタノール
水で溶出した。活性区を集め減圧下濃縮後、凍結乾燥す
ることにより、０Ｆ４９４９−１　４５５　ｍｇを得た
。

２ 実施例３にて得られた０Ｆ４９４９−　ＩＩの粗粉末　
４．１ｇについても同様に展開溶媒０．１Ｍクエン酸緩
衝液ニアセトニトリル−９５：５を用い、０１８逆相分
配クロマトグラフィーを行った後、ダイヤイオンＨＰ−
２０のカラムクロマトグラフィーを行い、０Ｆ４９４９
−ｎ　６７１ｍｇを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は０Ｆ４９４９−　Ｉの紫外部吸収スペクトルを
示す。 −は溶媒がＨ２０（７）場合を、−・−は溶媒が０．０
５ＮＨＣ１の場合を、−−−は溶媒が０．０５Ｎ　Ｎａ
０１１の場合をそれぞれ示す。第２図は０Ｆ４９４９−
１の臭化カリウム中で測定した赤外線吸収スペクトルを
示す。第３図は０Ｆ４９４９−　Ｉの０．０６　Ｎ重ア
ンモニア水中で測定したプロトン核磁気共鳴スペクトル
を示す（内部標準：ＤＳＳ）。第４図は、０Ｆ４９４９
−１の０．０６　Ｎ重アンモニア水中で測定したＣ−１
３核磁気共鳴スペクトルを示す（内部標準：　ｐ−ｄｉ
ｏｘａｎｅ　６７．４　ｐｐｍ　）。 第５図は０Ｆ４９４９−１１の紫外部吸収スペクトルを
示す。 −は溶媒がＨ２Ｏの場合を１−’−−−−−は溶媒が０
．０５ＮＨＣＩの場合を、−ｍ−は溶媒が０．０５Ｎ　
Ｎａ０ｔｌの場合をそれぞれ示す。第６図はＱＦ４９４
９−　ＴＩの臭化カリウム中で測定した赤外線吸収スペ
クトルを示す。第７図は０Ｆ４９４９−　ＩＴの０．０
６Ｎ重アンモニア水中で測定したプロトン核磁気共鳴ス
ペクトルを示す（内部標準：ＤＳＳ）。第８図は０Ｆ４
９４９−　ＩＩの０．０６Ｎ重アンモニア水中で測定し
たＣ−１３核磁気共鳴スペクトルを示す（内部標準：　
ｐ−ｄｉｏｘａｎｅ　６７．４　ｐｐｍ　）。 出願人　宝酒造株式会社 ５ 第　１　図 昭和５８年１１月２日付提出の特許願（Ｉｉｉ番通知未
受領）２０発明の名称 生理活性物質０Ｆ４９４９．その製造法、及び医薬３、
補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　京都市伏見区竹中町６０９番地 名称　宝　酒　造　株　式　会　社（化１名）代表者　
大　宮　隆 ４、代理人 居所　〒６０１京都市南区吉祥院西ノ庄門口町１４番地
明細書の発明の詳細な説明の欄 ６、補正の内容 （１）明細書第１３頁に掲げる化学構造式中（１）に、 ［ ０ロ 」 とあるのを、 ［ に訂正する。 以上 手続補正書（自発） ２０発明の名称 生理活性物質ｏｐ４９４９．その製造法、及び医薬３、
補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　京都市伏見区竹中町６０９番地 名称　宝酒造株式会社（他１名） 代表者　大宮　隆 ４、代理人 居所　〒６０１京都市南区吉祥院西ノ庄門口町１４番地
明細書の発明の詳細な説明の欄 ６、補正の内容 （１）明細書第５頁下がら４行目に「ブドウ糖培地」と
あるのを、「ブドウ糖寒天」に訂正する。 （２）明細書第１１頁下がら４行目にｒｃＩ型」とある
のを、「ＣＬ型」に訂正する。 （３）明細書第２１頁第１３行にｒ　０．３ｍｇ／ｃｃ
Ｊとあるのを、ｒ　０．３ｍｇ／ｍｌＪに訂正する。 以上

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）次の一般式（Ｉ） とｌ−１０ｔ−１ ＣＯＮｌ−１２ （式中、Ｒは水素又はメチル基を表わす。）で表わされ
   る０Ｆ４９４９と称する化合物、又はその塩。
2. （２）　０Ｆ４９４９−１と称する。Ｒがメチル基であ
   る特許請求の範囲第１項記載の化合物、又はその塩。
3. （３）　０Ｆ４９４９−　ＩＩと称する。Ｒが水素であ
   る特許請求の範囲第１項記載の化合物、又はその塩。
4. （４）ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　）属に
   属する０Ｆ４９４９生産菌を培地に培養し、その培養物
   から次の一般式（１） で表わされる０Ｆ４９４９−１と称する化合物（式中、
   Ｒがメチル基の場合）及び／又は０Ｆ４９４９−ｎ　（
   式中、Ｒが水素である場合）と称する化合物を採取する
   ことを特徴とする。　０Ｆ４９４９−１及び／又は０Ｆ
   ４９４９−　ＩＦの製造法。
5. （５）ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　）属に
   属する０Ｆ４９４９生産菌が、ペニシリウム・ルグロサ
   ム０Ｐ４９４９（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉ＋＋ｍ　ｒｕｇｕ
   ｌｏｓｕｍ　０Ｆ４９４’Ｊ　）である特許請求の範囲
   第４項記載の製造法。
6. （６）次の一般式ＣＩ） と）１０Ｈ ｏＮＨ２ （式中、Ｒは水素又はメチル基を表わす。）で表わされ
   る０Ｆ４９４９と称する化合物又はその塩を主成分とす
   る免疫調節剤。
7. （７）Ｒがメチル基である特許請求の範囲第６項記載の
   免疫調節剤。
8. （８）Ｒが水素である特許請求の範囲第６項記載の免疫
   調節剤。