JPS61112092A - 新規グルコサミン誘導体及びこれを基質として用いるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダ−ゼの活性測定試薬 - Google Patents
新規グルコサミン誘導体及びこれを基質として用いるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダ−ゼの活性測定試薬Info
- Publication number
- JPS61112092A JPS61112092A JP59233327A JP23332784A JPS61112092A JP S61112092 A JPS61112092 A JP S61112092A JP 59233327 A JP59233327 A JP 59233327A JP 23332784 A JP23332784 A JP 23332784A JP S61112092 A JPS61112092 A JP S61112092A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acetyl
- substrate
- derivative
- beta
- reagent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title abstract description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 8
- 108010055851 Acetylglucosaminidase Proteins 0.000 title abstract description 4
- 102100030122 Protein O-GlcNAcase Human genes 0.000 title abstract 2
- 150000002301 glucosamine derivatives Chemical class 0.000 title 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims abstract description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical class CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 claims abstract 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 12
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 abstract description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- PGHNKGRDWREWOR-UTDOCYJHSA-N 1-hydroxy-1-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3,4,5-triacetyl-5-amino-6-chloro-3,4-dihydroxyoxan-2-yl]propan-2-one Chemical compound CC(=O)C(O)[C@H]1O[C@H](Cl)[C@@](N)(C(C)=O)[C@](O)(C(C)=O)[C@@]1(O)C(C)=O PGHNKGRDWREWOR-UTDOCYJHSA-N 0.000 abstract 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- UBBCYDPSFMEFFL-DHGKCCLASA-N n-[(2s,3r,4r,5s,6r)-2-(2-chloro-4-nitrophenoxy)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1Cl UBBCYDPSFMEFFL-DHGKCCLASA-N 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 6
- DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N teicoplanin aglycone Chemical compound N([C@H](C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)OC=1C=C3C=C(C=1O)OC1=CC=C(C=C1Cl)C[C@H](C(=O)N1)NC([C@H](N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)=O)C(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3NC(=O)[C@@H]1C1=CC5=CC(O)=C1 DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N 0.000 description 6
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- -1 2-chloro-4-nitrophenyl Chemical group 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 3
- WTOIRKBUWMPVHG-QMCAAQAGSA-N (2r,3r,4r,5s,6r)-3-amino-2-hexadecyl-6-(hydroxymethyl)oxane-2,4,5-triol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCC[C@@]1(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1N WTOIRKBUWMPVHG-QMCAAQAGSA-N 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 description 2
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWSIFTLPLKCTSX-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-2-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1[N+]([O-])=O NWSIFTLPLKCTSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PSGQCCSGKGJLRL-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-2h-chromen-2-one Chemical group C1=CC=CC2=C1OC(=O)C=C2C PSGQCCSGKGJLRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000275031 Nica Species 0.000 description 1
- 241000271897 Viperidae Species 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000002346 iodo group Chemical group I* 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/924—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分腎
本発明は各種腎疾患の指標となる、Ｎ−７セチルーβ−
〇−グルフサミニグーゼ（以下ＮＡ（ｉアーゼと略す。
〇−グルフサミニグーゼ（以下ＮＡ（ｉアーゼと略す。
）活性測定用基質およびそれを用いた試薬に関する。
堕木０扶轍
ＮＡＧアーゼの活性測定用基質としてはｐ−二）ロフェ
ニル Ｎ−７セチルーβ−Ｄ−クルコサミニド［口１ｏ
ｃｌ＋ｃｑｓｉｃａｌ ＰｒｅｐａｒａＬｉｏｎｓ＋
ｌＯ泪Ｓ（＋９６３）］および］４−メチルウンベリフ
ェリルＮ−７セチル−β−Ｄ−グルコサミニド［Ｃｌ１
ｎｉｃａ ｃｈｉ＋ａｉｃａ 八ｅｔａ、６９（１）、
５５−９１（１９７６）］が広く用いられている。
ニル Ｎ−７セチルーβ−Ｄ−クルコサミニド［口１ｏ
ｃｌ＋ｃｑｓｉｃａｌ ＰｒｅｐａｒａＬｉｏｎｓ＋
ｌＯ泪Ｓ（＋９６３）］および］４−メチルウンベリフ
ェリルＮ−７セチル−β−Ｄ−グルコサミニド［Ｃｌ１
ｎｉｃａ ｃｈｉ＋ａｉｃａ 八ｅｔａ、６９（１）、
５５−９１（１９７６）］が広く用いられている。
前者は検体ごとにブランクを測定する必要があり、測定
掻体が煩雑であるなどの欠点を有ｔ。後者は蛍光光度計
Ｃような特殊な機器が必要であるなどの欠点を有してい
る。さらにフランクテストを行なわなくてもよいように
改良した基質として、随一クレゾールスルホ７タリルＮ
−７セチルーβ−Ｄ−グルコサミニドが知られている（
ＩＮ昭５８−９９４）。しかし、これらは反応停止剤試
薬を加え、アルカリ性で発色させて測定するエンドポイ
ント法を用いるため、２試薬法で測定する必要があり時
間もかかるので、自動化するための機種も限定されるな
どの欠点がある。
掻体が煩雑であるなどの欠点を有ｔ。後者は蛍光光度計
Ｃような特殊な機器が必要であるなどの欠点を有してい
る。さらにフランクテストを行なわなくてもよいように
改良した基質として、随一クレゾールスルホ７タリルＮ
−７セチルーβ−Ｄ−グルコサミニドが知られている（
ＩＮ昭５８−９９４）。しかし、これらは反応停止剤試
薬を加え、アルカリ性で発色させて測定するエンドポイ
ント法を用いるため、２試薬法で測定する必要があり時
間もかかるので、自動化するための機種も限定されるな
どの欠点がある。
及肌＠民生籐護吸
本発明者らは、前記した既知の基質の欠点を克服し、高
感度にして精密かつ短時間に多数の検体を測定可能なＮ
ＡＧアーゼ活性測定用基質を発見し、これを用いるＮＡ
Ｇ７−ゼ測定試薬を完成した。
感度にして精密かつ短時間に多数の検体を測定可能なＮ
ＡＧアーゼ活性測定用基質を発見し、これを用いるＮＡ
Ｇ７−ゼ測定試薬を完成した。
即も、本発明は新規Ｎ−７セチルーβ−Ｄ−グルコサミ
ン誘導体および、これを基質として用いるＮＡＧアーゼ
活性測定試薬に関する。本発明における新規Ｎ−７セチ
ルーβ−グルコサミン誘導体は下記一般式（１）で示さ
れる。
ン誘導体および、これを基質として用いるＮＡＧアーゼ
活性測定試薬に関する。本発明における新規Ｎ−７セチ
ルーβ−グルコサミン誘導体は下記一般式（１）で示さ
れる。
（式中Ｒ１およびＲ７はハロゲンまたはニトロ基を示す
。） 従来のＮ Ａ Ｃ，アーゼ測定用基質はいずれら酵素反
応を行なった後に、反応停止液（アルカリ性忍液）を加
え発色させて測定するエンドポイント法でなければ使用
できないが、本発明のＮＡ（、アーゼ測定用基質は反応
停止液を用いることなく、酵素反応進行中の一定特開間
隔のＮ Ａ Ｇ７−ゼ活性の吸光度差を測定するレート
法で測定できる。従って、本発明の基質を使った方法は
市販の汎用測定機に適用され、短時間に高精度で多数の
検体を測定することができる。また従来の測定法と同様
エンドポイント法でも測定することができる。
。） 従来のＮ Ａ Ｃ，アーゼ測定用基質はいずれら酵素反
応を行なった後に、反応停止液（アルカリ性忍液）を加
え発色させて測定するエンドポイント法でなければ使用
できないが、本発明のＮＡ（、アーゼ測定用基質は反応
停止液を用いることなく、酵素反応進行中の一定特開間
隔のＮ Ａ Ｇ７−ゼ活性の吸光度差を測定するレート
法で測定できる。従って、本発明の基質を使った方法は
市販の汎用測定機に適用され、短時間に高精度で多数の
検体を測定することができる。また従来の測定法と同様
エンドポイント法でも測定することができる。
本発明基質の具体例
上記（１）式においてハロゲンとは７０口、クロロ、ブ
ロモおよびヨードを意味するが、クロロまたはブロモが
より好ましい。また置換基の組み合わせは２−クロｏ−
４−二トロが特に好ましい。具体的＋：ｌｉ ２− ク
ロロ−４−二トロフェニルＮ−７セチルーβ−Ｄ−ゲル
コサミニＹ、４−９０ロー２−二トロフェニルＮ−７セ
チルーβ−Ｄ−７’ルフサミニドがあげられる。
ロモおよびヨードを意味するが、クロロまたはブロモが
より好ましい。また置換基の組み合わせは２−クロｏ−
４−二トロが特に好ましい。具体的＋：ｌｉ ２− ク
ロロ−４−二トロフェニルＮ−７セチルーβ−Ｄ−ゲル
コサミニＹ、４−９０ロー２−二トロフェニルＮ−７セ
チルーβ−Ｄ−７’ルフサミニドがあげられる。
克（記ｌゆ倉皇
本発明化合物（１）は、下記式（Ｉｆ）で示される１−
クロロ−１−デオキシ−２，３，４，６−チトラアセチ
ルーα−Ｄ−グルフサミンと下記式（ｌｉｔ）で示さＫ
るフェノール誘導体（７グリコン）より容易に合成する
ことができる。
クロロ−１−デオキシ−２，３，４，６−チトラアセチ
ルーα−Ｄ−グルフサミンと下記式（ｌｉｔ）で示さＫ
るフェノール誘導体（７グリコン）より容易に合成する
ことができる。
（ｎ） （Ｉｌｌ）
（式中Ｒ１およびＲ２は前記と同意義であり、ＡＣはア
セチル基を示す。） 化合物（■）は公知物質［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ １
＋ｒｅｌ＋ａｒａＬｉｏｎＳ。
セチル基を示す。） 化合物（■）は公知物質［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ １
＋ｒｅｌ＋ａｒａＬｉｏｎＳ。
埃、＋１８ （１９６３）１であり、アグリコン（１）
は市販品として容易に人手することができる。（Ｉｌｌ
と（１）を反応させ縮合し、一部アセチル基を常法によ
り、脱離することにより、目的化合物が得られる。
は市販品として容易に人手することができる。（Ｉｌｌ
と（１）を反応させ縮合し、一部アセチル基を常法によ
り、脱離することにより、目的化合物が得られる。
微定鳳星
緩衝液（，８３，５〜７．０）に化合物（１）を溶解し
、検体と反応させると、検体中のＮＡＣ，アーゼの作用
により基質（１）が加水分解されアグリコン（Ｉ［ｌ）
を遊離し、直ちに発色するのでレート７ソセイ可能な装
置を用いて定量する。また一定時間反応後、アルカリ液
、阻害剤などを加えて反応を停止させ比色定量すること
もできる。
、検体と反応させると、検体中のＮＡＣ，アーゼの作用
により基質（１）が加水分解されアグリコン（Ｉ［ｌ）
を遊離し、直ちに発色するのでレート７ソセイ可能な装
置を用いて定量する。また一定時間反応後、アルカリ液
、阻害剤などを加えて反応を停止させ比色定量すること
もできる。
測定操作
１、レートアッセイ法
市販の汎用測定機を用いて、一定量の基質Ｉ＆（２〜５
−Ｍ、５０μｍ〜１．２５ｍ１）に一定量の検体（尿ま
たは血清、２．５μｍ〜１００μｍ）を加え、３７℃で
一定時間（４，５分〜１５分）反応させ、分光光度計で
４００１１１１１付近の吸光度の差を測定する。
−Ｍ、５０μｍ〜１．２５ｍ１）に一定量の検体（尿ま
たは血清、２．５μｍ〜１００μｍ）を加え、３７℃で
一定時間（４，５分〜１５分）反応させ、分光光度計で
４００１１１１１付近の吸光度の差を測定する。
２、用手法
検体用および検体ブランク用に１０−１試験管２本を用
意し、検体用に基質液（２〜５ｍＭ）、検体ブランク用
にブランク試液（ｐＨ３，５〜７．０）を１．ｏｍｌづ
つ入れ、３７°Ｃで５分間加熱する。検体用試験管に検
体（尿または血清）１００μｍを加えて３７°Ｃで１５
分反応させる。反応後、反応停止液を加えて反応を停止
させる。
意し、検体用に基質液（２〜５ｍＭ）、検体ブランク用
にブランク試液（ｐＨ３，５〜７．０）を１．ｏｍｌづ
つ入れ、３７°Ｃで５分間加熱する。検体用試験管に検
体（尿または血清）１００μｍを加えて３７°Ｃで１５
分反応させる。反応後、反応停止液を加えて反応を停止
させる。
試薬ブランク用試験管に精製水１００μｍを加え、同様
に反応させた後反応停止液を加える。検体吸光度は基質
ブランクを対照に、検体ブランク吸光度は水を′Ｎ照に
して、遊離する７グリフンの最大吸収波長（４００ｏｍ
）で測定する。
に反応させた後反応停止液を加える。検体吸光度は基質
ブランクを対照に、検体ブランク吸光度は水を′Ｎ照に
して、遊離する７グリフンの最大吸収波長（４００ｏｍ
）で測定する。
蝮１
公知のｐ−ニトロフェニルＮ−７セチルーβ−Ｄ−グル
コサミニドを基質としたキラ） （ＰＮＰ−Ｎ＾ＩＪ）
および−一クレゾールスルホ７タリルＮ−７セチルーβ
−Ｄ−グルコサミニドを基質としたキット（ＭＣＰ−Ｎ
ＡＩＩ、法）は１５〜３０分反応させた後、反応停止液
を加え、反応液を発色させて吸光度を測定する。
コサミニドを基質としたキラ） （ＰＮＰ−Ｎ＾ＩＪ）
および−一クレゾールスルホ７タリルＮ−７セチルーβ
−Ｄ−グルコサミニドを基質としたキット（ＭＣＰ−Ｎ
ＡＩＩ、法）は１５〜３０分反応させた後、反応停止液
を加え、反応液を発色させて吸光度を測定する。
一方本発明のレート７ツセイ法では酵素と反応させると
、直ちに発色するので反応途中の任意の二点の吸光度の
差を測定すれはよく、繰作ら簡単で短時間測定が可能と
なる。
、直ちに発色するので反応途中の任意の二点の吸光度の
差を測定すれはよく、繰作ら簡単で短時間測定が可能と
なる。
Ｕ口ち、従来の４−二トロフェノールを（１飾した基質
と比較し本基質を用いる場合は、遊離する２−クロロ−
４−二トロフェノールのｐＫａが５．５付近に認ぬられ
る。その結果本発明の基質を使用することにより、ＮＡ
Ｇ７−ゼを高感度で測定できる。
と比較し本基質を用いる場合は、遊離する２−クロロ−
４−二トロフェノールのｐＫａが５．５付近に認ぬられ
る。その結果本発明の基質を使用することにより、ＮＡ
Ｇ７−ゼを高感度で測定できる。
実施例１
（１）７セトクロルグルコサミ：ｚ［Ｂｉ６ｃｈｅｍｉ
ｃａｌ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏ＋ｕ１０１１８（１９６
３）］ ３３．６５ｇ１０ｓ ｍｏｌ）と２−クロロ−
４−二トロア↓ノール３．４７ｇ（２０端晴０１）を７
セトン８０ｍ ｌに溶かし、撹拌下にＩＮ ＮａＯＨ
２０ｍ１を加え、室温で５時間撹拌し、４°Ｃで一夜放
置する。
ｃａｌ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏ＋ｕ１０１１８（１９６
３）］ ３３．６５ｇ１０ｓ ｍｏｌ）と２−クロロ−
４−二トロア↓ノール３．４７ｇ（２０端晴０１）を７
セトン８０ｍ ｌに溶かし、撹拌下にＩＮ ＮａＯＨ
２０ｍ１を加え、室温で５時間撹拌し、４°Ｃで一夜放
置する。
反応液を減圧濃縮し、残渣を水洗する。メタノール
［から再結して白色針
状結晶の２−クロロ−４−二トロフェニル２，３．４，
６−チトラ７セチルーβ−Ｄ−グルコサミニド２．１ｇ
を得る。輪ｐ、 １９６℃ＩＲ（ＫＢｒ） １７６０
．１６７３．７５０ ｃｉ’（２）上記（＋）で得ら
れた生成物２．１ｇ（３，９＋ ｍｏｌ）を乾燥メタノ
ール５０ｍ１に加え、室温で２８％ナトリウムメトキシ
ド０．４ｍｌを滴下し、−夜装置する。生成した結晶を
濾取し、冷メタノールで洗う。水から再結して白色針状
結晶の２−クロロ−４−二）０フェニルＮ−７セチルー
β−Ｄ−グルコサミニド１゜ＯＲを得る。 １．１６８
℃ ＩＲ（ＫＢｒ） ３２８０．１６５０．１５３ｏ、７５
４ ｃｉｉ’実施例２ （１）実施例１（１）に準じ７セトクロルグルコサミン
３．６５ｇ（１０ｍ諧０１）、４−クロロ−２−二トロ
フェノール（２０ｖａ Ｉｆｉｏｌ）、７セ） ７ＳＯ
＋ｇｌトｌＮ−Ｎａ０１１２０ｍ１を用い、処理して白
色針状結晶の・ｔ−クロロ−２−二トロフェニル２，３
，４．６−チトラアセチルーβ−Ｄ−グルフサミニド２
．６８を１）る。
［から再結して白色針
状結晶の２−クロロ−４−二トロフェニル２，３．４，
６−チトラ７セチルーβ−Ｄ−グルコサミニド２．１ｇ
を得る。輪ｐ、 １９６℃ＩＲ（ＫＢｒ） １７６０
．１６７３．７５０ ｃｉ’（２）上記（＋）で得ら
れた生成物２．１ｇ（３，９＋ ｍｏｌ）を乾燥メタノ
ール５０ｍ１に加え、室温で２８％ナトリウムメトキシ
ド０．４ｍｌを滴下し、−夜装置する。生成した結晶を
濾取し、冷メタノールで洗う。水から再結して白色針状
結晶の２−クロロ−４−二）０フェニルＮ−７セチルー
β−Ｄ−グルコサミニド１゜ＯＲを得る。 １．１６８
℃ ＩＲ（ＫＢｒ） ３２８０．１６５０．１５３ｏ、７５
４ ｃｉｉ’実施例２ （１）実施例１（１）に準じ７セトクロルグルコサミン
３．６５ｇ（１０ｍ諧０１）、４−クロロ−２−二トロ
フェノール（２０ｖａ Ｉｆｉｏｌ）、７セ） ７ＳＯ
＋ｇｌトｌＮ−Ｎａ０１１２０ｍ１を用い、処理して白
色針状結晶の・ｔ−クロロ−２−二トロフェニル２，３
，４．６−チトラアセチルーβ−Ｄ−グルフサミニド２
．６８を１）る。
ｍｐ、 １７３°ＣＩＲ（ＫＢｒ） １７４０．１６５
８．７：１０ ｃｈｉ’（２）実施例】（２）に準じ、
上記（１）で１１１られな生成物２．０ｇ（３，９−−
ｏｆ）、乾燥メタノール５０輸１を用い処理して４−７
０ロー２−ニトロフェニルＮ−７４！チル−β−Ｄ−グ
ルグルミニド１．１ｇを得る。
８．７：１０ ｃｈｉ’（２）実施例】（２）に準じ、
上記（１）で１１１られな生成物２．０ｇ（３，９−−
ｏｆ）、乾燥メタノール５０輸１を用い処理して４−７
０ロー２−ニトロフェニルＮ−７４！チル−β−Ｄ−グ
ルグルミニド１．１ｇを得る。
Claims (2)
- （１）下記一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１およびＲ＿２はハロゲンまたはニトロ基
を示す。）で示されるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサ
ミン誘導体。 - （２）下記一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１およびＲ＿２はハロゲンまたはニトロ基
を示す。）で示されるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサ
ミン誘導体を含有するＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサ
ミニダーゼ測定試薬。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59233327A JPS61112092A (ja) | 1984-11-07 | 1984-11-07 | 新規グルコサミン誘導体及びこれを基質として用いるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダ−ゼの活性測定試薬 |
| DE8585114070T DE3583002D1 (de) | 1984-11-07 | 1985-11-05 | Glucosaminderivate und reagenz zur bestimmung von n-acetyl-beta-d-glucosaminidase welche dieses derivat als substrat enthaelt. |
| EP85114070A EP0180961B1 (en) | 1984-11-07 | 1985-11-05 | Glucosamine derivatives and reagent for assaying n-acetyl-beta-d-glucosaminidase using the same as substrate |
| US06/795,954 US4754025A (en) | 1984-11-07 | 1985-11-07 | Glucosamine derivatives and reagent for assaying N-acetyl-β-D-glucosaminidase using the same as substrate |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59233327A JPS61112092A (ja) | 1984-11-07 | 1984-11-07 | 新規グルコサミン誘導体及びこれを基質として用いるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダ−ゼの活性測定試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61112092A true JPS61112092A (ja) | 1986-05-30 |
| JPH0432835B2 JPH0432835B2 (ja) | 1992-06-01 |
Family
ID=16953401
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59233327A Granted JPS61112092A (ja) | 1984-11-07 | 1984-11-07 | 新規グルコサミン誘導体及びこれを基質として用いるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダ−ゼの活性測定試薬 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4754025A (ja) |
| EP (1) | EP0180961B1 (ja) |
| JP (1) | JPS61112092A (ja) |
| DE (1) | DE3583002D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990010084A1 (fr) * | 1989-02-23 | 1990-09-07 | Iatron Laboratories, Inc. | Substrat de determination d'activite enzymatique et procede et reactif de determination d'activite enzymatique utilisant ledit substrat |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4810636A (en) * | 1986-12-09 | 1989-03-07 | Miles Inc. | Chromogenic acridinone enzyme substrates |
| US5068180A (en) * | 1987-05-21 | 1991-11-26 | Technicon Instruments Corporation | Substrates for β-galactosidase |
| JPH0650991B2 (ja) * | 1987-06-11 | 1994-07-06 | 塩野義製薬株式会社 | ＮＡＧａｓｅ活性測定用試薬および測定方法 |
| US5191073A (en) * | 1989-02-13 | 1993-03-02 | Miles Inc. | Chromogenic merocyanine enzyme substrates |
| US5122602A (en) * | 1989-02-13 | 1992-06-16 | Miles Inc. | Chromogenic merocyanine enzyme substrates |
| US5350677A (en) * | 1989-02-23 | 1994-09-27 | Iatron Laboratories, Inc. | Method of assaying phosphatase with 3,4-dinitrophenylphosphate |
| JP2722874B2 (ja) * | 1991-08-01 | 1998-03-09 | 日東紡績株式会社 | 新規Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン誘導体及びこれを基質に用いたＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ活性測定法 |
| US5773420A (en) * | 1994-11-07 | 1998-06-30 | American Home Products Corporation | Acylated benzylglycosides as inhibitors of smooth muscle cell proliferation |
| AUPR079700A0 (en) | 2000-10-17 | 2000-11-09 | Alchemia Pty Ltd | Combinatorial libraries of monosaccharides |
| EP3820512B1 (en) * | 2018-07-02 | 2024-04-24 | Ayuvis Research, Inc. | Immunomodulating compositions comprising oligosaccharide derivatives |
| US12594286B2 (en) | 2018-07-02 | 2026-04-07 | Ayuvis Research, Inc. | Immunodulating small molecules |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3968011A (en) * | 1973-02-16 | 1976-07-06 | Alza Corporation | Test implement and test method for colorimetrically determining whether a female is fertile or pregnant |
| US4451563A (en) * | 1981-08-28 | 1984-05-29 | Kaufman Richard A | Method for increasing the sensitivity of assays |
| DE3323245A1 (de) * | 1983-06-28 | 1985-01-10 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Verfahren und reagenz zur bestimmung von (alpha)-amylase |
-
1984
- 1984-11-07 JP JP59233327A patent/JPS61112092A/ja active Granted
-
1985
- 1985-11-05 DE DE8585114070T patent/DE3583002D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-11-05 EP EP85114070A patent/EP0180961B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-11-07 US US06/795,954 patent/US4754025A/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CHEMICAL & PHARMASEUTICAL BULLETIN=1976 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990010084A1 (fr) * | 1989-02-23 | 1990-09-07 | Iatron Laboratories, Inc. | Substrat de determination d'activite enzymatique et procede et reactif de determination d'activite enzymatique utilisant ledit substrat |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3583002D1 (de) | 1991-07-04 |
| JPH0432835B2 (ja) | 1992-06-01 |
| EP0180961B1 (en) | 1991-05-29 |
| US4754025A (en) | 1988-06-28 |
| EP0180961A2 (en) | 1986-05-14 |
| EP0180961A3 (en) | 1988-01-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS61112092A (ja) | 新規グルコサミン誘導体及びこれを基質として用いるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダ−ゼの活性測定試薬 | |
| EP0158204B1 (en) | Composition and test device for determining the presence of leukocytes, containing a zwitterion coupling agent | |
| JPS60256398A (ja) | 試験試料中の白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼの存在を測定するための組成物及び試験具 | |
| JPS603840B2 (ja) | 血漿中のヘパリンの生物学的活性を測定する方法及びこの方法を実施するための試薬 | |
| JPS60192767A (ja) | フエノ−ルスルホンフタレイニル−β−Ｄ−ガラクトシド，その製法及び該化合物を含有するβ−Ｄ−ガラクトシダ−ゼを検出するための診断剤 | |
| JPH027589B2 (ja) | ||
| JPS631347B2 (ja) | ||
| JPH0859686A (ja) | ウミホタルルシフェリン誘導体および糖加水分解酵素の定量方法 | |
| CN102834721B (zh) | 用于测量钙离子的方法 | |
| JPH04202164A (ja) | 被酸化性呈色試薬 | |
| JPS6399083A (ja) | レゾルフイン誘導体の燐酸塩、その製法及びこの塩を含有するホスフアタ−ゼ検出用診断薬 | |
| JP2678609B2 (ja) | 新規な２−クロルニトロフェニルリン酸塩及びこれを用いるホスファターゼ活性測定法 | |
| JPH03206896A (ja) | 体液中の微量成分定量法 | |
| JPH0313880B2 (ja) | ||
| EP0411159A1 (en) | Method for determining enzymatic activity | |
| JPH0244519B2 (ja) | ||
| JPH01160990A (ja) | １−ナフトールフタレインモノホスフエート、その製法、アルカリホスフアターゼの測定法及びアルカリホスフアターゼ検出用診断剤 | |
| JPS5850986B2 (ja) | リジン誘導体 | |
| JPS6340857A (ja) | Ｓｈ化合物の定量方法 | |
| JPH05262716A (ja) | 被酸化性呈色試薬 | |
| JPH02180892A (ja) | 新規リン酸誘導体及びそれを用いた酸性ホスファターゼ活性測定法 | |
| O'neal et al. | Fluorescence polarization immunoassay of Kanamycin | |
| JPS6112898B2 (ja) | ||
| JPS631939B2 (ja) | ||
| JPS63201155A (ja) | ガンマグルタミルトランスフエラ−ゼの基質および測定方法 |