JPS6135201B2 - - Google Patents
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- JPS6135201B2 JPS6135201B2 JP58076265A JP7626583A JPS6135201B2 JP S6135201 B2 JPS6135201 B2 JP S6135201B2 JP 58076265 A JP58076265 A JP 58076265A JP 7626583 A JP7626583 A JP 7626583A JP S6135201 B2 JPS6135201 B2 JP S6135201B2
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- acidic
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- glucose
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/20—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents
- A23L29/269—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents of microbial origin, e.g. xanthan or dextran
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/02—Acetobacter
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- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
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- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
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Description
本発明は新規な酸性ヘテロ多糖類AM―２とそ
の製法に関するものである。 従来、粘質多糖類は粘着性、粘稠性などの性質
からその利用範囲は広く、食料品、化粧品への添
加剤として、さらに接着剤、被覆剤、凍結安定
剤、潤滑剤、ドリリングマツド添加剤及び油田に
おける石油回収用剤等として各方面への用途が開
発されつつある。また近年、ある種の多糖類の抗
腫瘍性作用、血圧降下作用等の薬理作用が認めら
れるに至り、医薬としての利用範囲の拡大も期待
されている。 そしてある種の微生物が多糖類を生産すること
は公知であり、たとえばアルカリゲネス属、バチ
ルス属、キサントモナス属、アースロバクター
属、アゾトバクター属、シユードモナス属、ロイ
コノストツク属あるいはオーレオバシジウム属等
の菌株の生産するものが知られている。 またアセトバクター属に属する菌株がある種の
多糖類を生産することも公知である。即ちアセト
バクター・キシリナムが生産するセルロースが著
名であり〔Biochem.J.，158，345（1954）〕、さら
にアセトバクター・サブオキシダンスがレバンを
〔Tr.Petergof.Biol.Inst.Leningrd Gos.Univ.，
19，20（1965）〕、そしてアセトバクター・カブシ
ユレイタムがデキストラン〔J.Biol.Chem.，
192，161（1951）〕を生産することが知られてい
る。そしてまた、アセトバクター・キシリナムの
自然変異株からグルコース、マンノース、ラムノ
ース、グルクロン酸を構成成分とする含窒素多糖
類が分離されたことも報告されている〔Can.J.
Microbiol.，27，599〜603（1981）〕。 本発明者らは、微生物による安全性の高い高粘
性の多糖類の生産を意図し、古くから人類の食料
に供され歴史的にその安全性が確かめられている
各種発酵食品の醸造過程に関与する微生物の多糖
類の生産能を広く検索した結果、食酢の発酵酸か
ら分離したアセトバクター属の一菌株が新規な酸
性ヘテロ多糖類を生産することを知り、本発明を
完成するに至つた。 アセトバクター（Acetobacter）属のつくる酸
性ヘテロ多糖類としては、アセトバクター・キシ
リナム（Acetobacter xylinum）の多糖類〔Can.
J.Microbiol.，27，599（1981）〕が知られており
構成成分はグルコース、ラムノース、マンノー
ス、グルクロン酸で比率は各々３：１：１：１と
報告されている。しかし本発明による多糖類は構
成成分がグルコース、ラムノース、マンノース、
グルクロン酸に加えてアセチル基を含有しており
またグルコース、ラムノース、マンノース、グル
クロン酸の比率は各々４：0.9〜1.1：0.9〜1.1：
0.9〜1.1であることからアセトバクター・キシリ
ナムの酸性ヘテロ多糖類とは構成々分の種類とそ
の比率に於て明らかに異なる。またアセトバクタ
ー・キシリナムの酸性ヘテロ多糖類は1.4重量％
の蛋白質に相当する窒素を含んでいるが、一方本
発明多糖類は窒素を含有しない点で異なつてい
る。したがつて本発明多糖類はアセトバクター・
キシリナムの酸性ヘテロ多糖類とは明らかに異な
る。 これによつて、本発明の酸性ヘテロ多糖類は全
く新規な多糖類をあることを確認し、これを酸性
ヘテロ多糖類AM―２と命名した。 次に、本発明の酸性ヘテロ多糖類AM―２の理
化学的性質を示す。 １ 本物質は2Nトリフルオロ酢酸で100℃、18時
間加水分解した後、アセトン：イソプロパノー
ル：0.1M乳酸（２：２：１）の展開溶媒を用
いて薄層クロマトグラフイーを行ない、アニリ
ン：ジフエニールアミン：アセトン：燐酸試薬
で呈色させると、グルコース、ラムノース、マ
ンノース、グルクロン酸が検出される。更に本
発明の多糖類のガスクロマトグラフイーによる
分析結果からも、少なくともグルコース、ラム
ノース、マンノース、グルクロン酸が主構成糖
であることが確認され、そのグルコース：ラム
ノース：マンノース：グルクロン酸の構成比は
約４：0.9〜1.1：0.9〜1.1：0.9〜1.1であること
〓〓〓
が認められる。 本発明の多糖類の13C―刻磁気共鳴スペクト
ルで21.2ppmにピークが見られることから本発
明多糖類にはアセチル基が含まれる。アセチル
含量は、ヒドロキシルアミンを用いた比色定量
法およびアルカリ処理によつて多糖より遊離す
る酢酸の定量によつて、４〜８％であることが
認められる。 また本発明の多糖類は、セチルトリメチルア
ンモニウムブロマイドあるいはセチルビリジウ
ムクロライドを添加すると白色沈殿が生じるの
で、酸性である。 ２ 赤外吸収スペクトルは第１図に示す通りであ
る。 ３ 呈色反応 アンスロン反応：陽性、カルバゾール反応：
陽性、エルソン―モルガン反応：陰性、ヨード
反応：陽性 ４ 溶剤に対する溶解度 水に可溶で、エタノール、エーテル、アセト
ン等に不溶である。 ５ 色及び形状 精製品は白色綿状または繊維状である。 ６ 粘度 水溶液は無色透明で粘性を有し、その１％溶
液の粘度は1200〜2000cp（25℃、30rpm、東京
計器製Ｂ型粘度計による）である。 多糖濃度と水溶液の粘度の関係を第２図、試
料濃度１％（Ｗ／Ｖ）溶液の粘度に及ぼすシエ
ア―・レート（Shear rate）の影響を第３図に
示した。 なお、粘度に与えるPHの影響を試料濃度１％
（Ｗ／Ｖ）で調べた結果は第４図に示すとおり
で、PHによる粘度変化は認められない。 また、粘度に与えるCaCl2とNaClの影響を試
料濃度１％（Ｗ／Ｖ）で調べた結果は第５図に
示すとおりで、本多糖類は２価および１価のカ
チオンに対して安定である。 また、粘度に与える温度の影響を試料濃度１
％（Ｗ／Ｖ）で調べた結果は第６図に示すとお
りで、120℃までの温度変化に対して大きな粘
度変化は示さない。 ７ 元素分析値 Ｃ＝39.9±１％；Ｈ＝6.2±１％；Ｎ＝０
％；灰分＝3.0±1.0％ ８ 比旋光度 〔α〕２７ Ｄ：０〜＋20（Ｃ＝0.33、水溶液） ９ 分子量 分析用超遠心機を用いてメニスカス デプリ
シヨン メソツド（meniscus depletion
method）の沈降平衡法で算出した平均分子量
は約2.1×106であり、また東洋曹達工業製高速
液体クロマトグラフイーを用い、ブルラン（林
原K.K.）を標準にして測定した平均分子量は
１×106から２×106である。したがつて分子量
は約105以上である。 10 融点 190℃で黒褐色が始まり、250℃で分解する。 11 刻磁気共鳴スペクトル 13C―刻磁気共鳴スペクトルは第７図に示す
とおりであり（溶媒：D2O、チユーブ：10mm、
内部標準：ジオキサン）、主要ピークは
174.2ppm、103.5ppm、101.5ppm、76.6ppm、
75.9ppm、73.3ppm、70.9ppm、69.5ppm、
61.4ppm、21.2ppm、17.6ppmである。 12 本物質の主要な繰り返し構造は次の通りであ
る。 〓〓〓
本発明の酸性ヘテロ多糖類AM―２は全く新規
であることは明らかであるが、すでに公開されて
いるシユードモナス属の細菌が生産するヘテロポ
リサツカライドＳ―88（特開昭56―45902）、およ
びアルカリゲネス属の細菌が生産するヘテロポリ
サツカライドＳ―130（特開昭56―45901）とも次
に示すように構成糖比及びアセチル基の含有によ
つて明らかに相違するものである。 １ ヘテロポリサツカライドＳ―88（特開昭56―
45902、USSNo.73575） Glc：Rha：Man：GlcUA：Acetyl ＝30〜40％：35〜45％：10〜30％：10〜20％：
３〜７％ ２ ヘテロポリサツカライドＳ―130（特開昭56
―45901、USSNo.73573） アルカリゲネス属 Glc：Rha：Man：GlcUA：Acetyl ＝20〜40％：30〜60％：10〜25％：10〜20％：
３〜５％ 本発明の酸性ヘテロ多糖類AM―２は新規であ
るとともに、古来から食酢醸造に使用され、歴史
的にその安全性が確かめられている。酢酸菌が生
産する高粘性多糖類であり、その安全性と高粘性
を生かして食品、医薬、化粧品素材としてはもと
より、接着剤、被覆剤、ドリリングマツド添加
剤、及び油田に於ける石油回収剤等への需要は著
しく高いものがある。本発明の酸性ヘテロ多糖類
AM―２は酢酸菌に属し酢性ヘテロ多糖類AM―
２を生産する能力を有する菌株を培地に培養する
ことによつて製造することができる。 酢酸菌に属し上記酸性ヘテロ多糖類AM―２を
生産する能力を有する菌株としては、自然界から
分離した菌株、これらを変異した菌株など、これ
らの菌株が酢酸菌に属し上記酸性ヘテロ多糖類を
生産する能力を有する限り、すべて使用すること
ができる。 このような菌株の具体例としては、例えば本発
明者らが食酢の発酵醪から新たに分離したアセト
バクターに属する細菌であるアセトバクターMH
―1597が挙げられる。なお、アセトバクター・
MH―1597株は微工研条寄第280号（FERM BP―
280）として工業技術院微生物工業技術研究所に
寄託されている。 なお菌学的性質に関する実験方法は、1975年６
月20日東京大学出版会発行、長谷川武治編著「微
生物の分類と同定」、「ザ・ジヤーナル・オブ・ジ
エネラル・アンド・アプライド・マイクロバイオ
ロジー（The Journal of General and Applied
Microbiology）第10巻、第２号、第95〜126頁
（1964年）」の「The Flagellation and
Taxonomy of Genera Gluconobacter and
Acetobacter with Reference to the Existence
of Intermediate Strains（中間菌株の存在に関連
してのグルコノバクター属およびアセトバクター
属のフラゲレーシヨンおよび分類学）」および
「ザ・ソサエテイー・フオー・アプライド・バク
テリオロジー・テクニカル・シリーズ・No.２
（The Society for Applied Bacteriology
Technical Series No.２）アイテンテイフイケイ
シヨン・メソツズ・フオー・マイクロバイオロジ
スツ（Identification Methods for
Microbiologists）1968年」の第１〜８頁の
「Methods for Identifying Acetic Acid
Bacteria（酢酸菌の同定法）」に従つた。 また酵母エキス―ブドウ糖寒天培地は酵母エキ
ス5g、ブドウ糖30g、ポリペプトン3g、寒天15g
〓〓〓
を蒸留水１に溶解しPHを6.5に調節したもの、
炭酸カルシウム含有酵母エキスブドウ糖斜面培地
は酵母エキス5g、ブドウ糖30g、ポリペプトン
3g、炭酸カルシウム20g、寒天15gを蒸留水１
に溶解したもの、酢酸エタノール含有酵母エキス
―ブドウ糖液体培地は酵母エキス5g、ブドウ糖
30g、ポリペプトン3g、酢酸2gを蒸留水１に溶
解し滅菌後、エタノールを３％（Ｖ／Ｖ）無菌的
に添加したもの、NYゼラチン高層培地はブドウ
糖10g、ポリペプトン5g、酵母エキス3g、モルト
エキス3g、ゼラチン200gを蒸留水１に溶解し
PHを6.5に調節したもの、肉汁液体培地は肉エキ
ス10g、ポリペプトン10gを蒸留水１に溶解し
PHを6.5に調節したもの、ブドウ糖含有肉汁液体
培地はブドウ糖10g、肉エキス10g、ポリペプト
ン10gを蒸留水１に溶解しPHを6.5に調節したも
のである。 そしてまた、ユビキノンの同定は紙クロマト
グラフイー、薄層クロマトグラフイー、赤外部お
よび紫外部吸収スペクトラムおよび質量分析法で
行なつた。 形態的所見 形状 桿状 大きさ 0.6〜0.7×1.0〜1.8μｍ 集団 単独あるいは二連、 稀に数個連鎖 運動性 無し 胞子形成 形成せず グラム染色 陰性 抗酸性 陰性 培養的所見 酵母エキス―ブドウ糖寒天平板培養（30℃で
５日間培養） 形状 円形 辺縁 平滑で全縁 隆起 半球状（Capitate） 光沢 有り 表面 平滑 色調 淡褐色で光沢あり 炭酸カルシウム含有酵母エキス―ブドウ糖斜
面培養（30℃で３日間培養） 生育の良否 良好 隆起 中程度 表面 平滑 色調 淡褐色で光沢あり 酢酸エタノール含有酵母エキス―ブドウ糖液
体静置培養（30℃で５日間培養） 液体静置培養での生育は乏しい。リングを形
成し、培養液は透明。 肉汁液体静置培養（30℃で７日間培養）生育
乏しい。わずかにリング状に生育する。 ブドウ糖含有肉エキス液体静置培養（30℃で
７日間培養） 生育は乏しい。リング状に生育する。 MYゼラチン高層培養（20℃で７日間培養） 生育良好。液化性無し。 リトマスミルク（30℃で７日間培養） 凝固性無し。 生理学的性質 硝酸銀の還元：無し 脱窒反応：無し VPテスト：陰性 インドールの生成：無し 硫化水素の生成：無し デンプンの加水分解：無し クエン酸の利用： Christensenの培地：無し 無機窒素源の利用： 硝酸塩：無し アンモニウム塩：無し 培地中への色素の生成：無し ウレアーゼ活性：無し オキシダーゼ活性：無し カタラーゼ活性：有り 生育PH範囲：3.5〜7.5 最適PH範囲：5.0〜6.5 生育温度範囲：17―37℃ 最適温度範囲：28―32℃ 酸素に対する態度：好気的 ５―ケトグルコン酸の生成：有り ２―ケトグルコン酸の生成：有り ２―５―ジケトグルコン酸の生成：無し ジヒドロキシアセトンの生成：有り エタノール資化性：有り 酢酸の資化性：有り 乳酸の資化性：有り ビタミン要求性：有り 〓 酢酸の分解性：有り 〓〓〓
乳酸の分解性：有り 〓 塩化第２鉄反応：陰性（グルコース培地） 陰性（フルクトース培地） 〓 ホイヤー、フラトウールエタノール培地 （ビタミン添加）での生育：無し 〓 ホイヤー フラトウールグルコース培地 （ビタミン添加）での生育：有り 炭素源の資化性およびそれからの酸およびガ
スの生成 第１表のとおりである。
の製法に関するものである。 従来、粘質多糖類は粘着性、粘稠性などの性質
からその利用範囲は広く、食料品、化粧品への添
加剤として、さらに接着剤、被覆剤、凍結安定
剤、潤滑剤、ドリリングマツド添加剤及び油田に
おける石油回収用剤等として各方面への用途が開
発されつつある。また近年、ある種の多糖類の抗
腫瘍性作用、血圧降下作用等の薬理作用が認めら
れるに至り、医薬としての利用範囲の拡大も期待
されている。 そしてある種の微生物が多糖類を生産すること
は公知であり、たとえばアルカリゲネス属、バチ
ルス属、キサントモナス属、アースロバクター
属、アゾトバクター属、シユードモナス属、ロイ
コノストツク属あるいはオーレオバシジウム属等
の菌株の生産するものが知られている。 またアセトバクター属に属する菌株がある種の
多糖類を生産することも公知である。即ちアセト
バクター・キシリナムが生産するセルロースが著
名であり〔Biochem.J.，158，345（1954）〕、さら
にアセトバクター・サブオキシダンスがレバンを
〔Tr.Petergof.Biol.Inst.Leningrd Gos.Univ.，
19，20（1965）〕、そしてアセトバクター・カブシ
ユレイタムがデキストラン〔J.Biol.Chem.，
192，161（1951）〕を生産することが知られてい
る。そしてまた、アセトバクター・キシリナムの
自然変異株からグルコース、マンノース、ラムノ
ース、グルクロン酸を構成成分とする含窒素多糖
類が分離されたことも報告されている〔Can.J.
Microbiol.，27，599〜603（1981）〕。 本発明者らは、微生物による安全性の高い高粘
性の多糖類の生産を意図し、古くから人類の食料
に供され歴史的にその安全性が確かめられている
各種発酵食品の醸造過程に関与する微生物の多糖
類の生産能を広く検索した結果、食酢の発酵酸か
ら分離したアセトバクター属の一菌株が新規な酸
性ヘテロ多糖類を生産することを知り、本発明を
完成するに至つた。 アセトバクター（Acetobacter）属のつくる酸
性ヘテロ多糖類としては、アセトバクター・キシ
リナム（Acetobacter xylinum）の多糖類〔Can.
J.Microbiol.，27，599（1981）〕が知られており
構成成分はグルコース、ラムノース、マンノー
ス、グルクロン酸で比率は各々３：１：１：１と
報告されている。しかし本発明による多糖類は構
成成分がグルコース、ラムノース、マンノース、
グルクロン酸に加えてアセチル基を含有しており
またグルコース、ラムノース、マンノース、グル
クロン酸の比率は各々４：0.9〜1.1：0.9〜1.1：
0.9〜1.1であることからアセトバクター・キシリ
ナムの酸性ヘテロ多糖類とは構成々分の種類とそ
の比率に於て明らかに異なる。またアセトバクタ
ー・キシリナムの酸性ヘテロ多糖類は1.4重量％
の蛋白質に相当する窒素を含んでいるが、一方本
発明多糖類は窒素を含有しない点で異なつてい
る。したがつて本発明多糖類はアセトバクター・
キシリナムの酸性ヘテロ多糖類とは明らかに異な
る。 これによつて、本発明の酸性ヘテロ多糖類は全
く新規な多糖類をあることを確認し、これを酸性
ヘテロ多糖類AM―２と命名した。 次に、本発明の酸性ヘテロ多糖類AM―２の理
化学的性質を示す。 １ 本物質は2Nトリフルオロ酢酸で100℃、18時
間加水分解した後、アセトン：イソプロパノー
ル：0.1M乳酸（２：２：１）の展開溶媒を用
いて薄層クロマトグラフイーを行ない、アニリ
ン：ジフエニールアミン：アセトン：燐酸試薬
で呈色させると、グルコース、ラムノース、マ
ンノース、グルクロン酸が検出される。更に本
発明の多糖類のガスクロマトグラフイーによる
分析結果からも、少なくともグルコース、ラム
ノース、マンノース、グルクロン酸が主構成糖
であることが確認され、そのグルコース：ラム
ノース：マンノース：グルクロン酸の構成比は
約４：0.9〜1.1：0.9〜1.1：0.9〜1.1であること
〓〓〓
が認められる。 本発明の多糖類の13C―刻磁気共鳴スペクト
ルで21.2ppmにピークが見られることから本発
明多糖類にはアセチル基が含まれる。アセチル
含量は、ヒドロキシルアミンを用いた比色定量
法およびアルカリ処理によつて多糖より遊離す
る酢酸の定量によつて、４〜８％であることが
認められる。 また本発明の多糖類は、セチルトリメチルア
ンモニウムブロマイドあるいはセチルビリジウ
ムクロライドを添加すると白色沈殿が生じるの
で、酸性である。 ２ 赤外吸収スペクトルは第１図に示す通りであ
る。 ３ 呈色反応 アンスロン反応：陽性、カルバゾール反応：
陽性、エルソン―モルガン反応：陰性、ヨード
反応：陽性 ４ 溶剤に対する溶解度 水に可溶で、エタノール、エーテル、アセト
ン等に不溶である。 ５ 色及び形状 精製品は白色綿状または繊維状である。 ６ 粘度 水溶液は無色透明で粘性を有し、その１％溶
液の粘度は1200〜2000cp（25℃、30rpm、東京
計器製Ｂ型粘度計による）である。 多糖濃度と水溶液の粘度の関係を第２図、試
料濃度１％（Ｗ／Ｖ）溶液の粘度に及ぼすシエ
ア―・レート（Shear rate）の影響を第３図に
示した。 なお、粘度に与えるPHの影響を試料濃度１％
（Ｗ／Ｖ）で調べた結果は第４図に示すとおり
で、PHによる粘度変化は認められない。 また、粘度に与えるCaCl2とNaClの影響を試
料濃度１％（Ｗ／Ｖ）で調べた結果は第５図に
示すとおりで、本多糖類は２価および１価のカ
チオンに対して安定である。 また、粘度に与える温度の影響を試料濃度１
％（Ｗ／Ｖ）で調べた結果は第６図に示すとお
りで、120℃までの温度変化に対して大きな粘
度変化は示さない。 ７ 元素分析値 Ｃ＝39.9±１％；Ｈ＝6.2±１％；Ｎ＝０
％；灰分＝3.0±1.0％ ８ 比旋光度 〔α〕２７ Ｄ：０〜＋20（Ｃ＝0.33、水溶液） ９ 分子量 分析用超遠心機を用いてメニスカス デプリ
シヨン メソツド（meniscus depletion
method）の沈降平衡法で算出した平均分子量
は約2.1×106であり、また東洋曹達工業製高速
液体クロマトグラフイーを用い、ブルラン（林
原K.K.）を標準にして測定した平均分子量は
１×106から２×106である。したがつて分子量
は約105以上である。 10 融点 190℃で黒褐色が始まり、250℃で分解する。 11 刻磁気共鳴スペクトル 13C―刻磁気共鳴スペクトルは第７図に示す
とおりであり（溶媒：D2O、チユーブ：10mm、
内部標準：ジオキサン）、主要ピークは
174.2ppm、103.5ppm、101.5ppm、76.6ppm、
75.9ppm、73.3ppm、70.9ppm、69.5ppm、
61.4ppm、21.2ppm、17.6ppmである。 12 本物質の主要な繰り返し構造は次の通りであ
る。 〓〓〓
本発明の酸性ヘテロ多糖類AM―２は全く新規
であることは明らかであるが、すでに公開されて
いるシユードモナス属の細菌が生産するヘテロポ
リサツカライドＳ―88（特開昭56―45902）、およ
びアルカリゲネス属の細菌が生産するヘテロポリ
サツカライドＳ―130（特開昭56―45901）とも次
に示すように構成糖比及びアセチル基の含有によ
つて明らかに相違するものである。 １ ヘテロポリサツカライドＳ―88（特開昭56―
45902、USSNo.73575） Glc：Rha：Man：GlcUA：Acetyl ＝30〜40％：35〜45％：10〜30％：10〜20％：
３〜７％ ２ ヘテロポリサツカライドＳ―130（特開昭56
―45901、USSNo.73573） アルカリゲネス属 Glc：Rha：Man：GlcUA：Acetyl ＝20〜40％：30〜60％：10〜25％：10〜20％：
３〜５％ 本発明の酸性ヘテロ多糖類AM―２は新規であ
るとともに、古来から食酢醸造に使用され、歴史
的にその安全性が確かめられている。酢酸菌が生
産する高粘性多糖類であり、その安全性と高粘性
を生かして食品、医薬、化粧品素材としてはもと
より、接着剤、被覆剤、ドリリングマツド添加
剤、及び油田に於ける石油回収剤等への需要は著
しく高いものがある。本発明の酸性ヘテロ多糖類
AM―２は酢酸菌に属し酢性ヘテロ多糖類AM―
２を生産する能力を有する菌株を培地に培養する
ことによつて製造することができる。 酢酸菌に属し上記酸性ヘテロ多糖類AM―２を
生産する能力を有する菌株としては、自然界から
分離した菌株、これらを変異した菌株など、これ
らの菌株が酢酸菌に属し上記酸性ヘテロ多糖類を
生産する能力を有する限り、すべて使用すること
ができる。 このような菌株の具体例としては、例えば本発
明者らが食酢の発酵醪から新たに分離したアセト
バクターに属する細菌であるアセトバクターMH
―1597が挙げられる。なお、アセトバクター・
MH―1597株は微工研条寄第280号（FERM BP―
280）として工業技術院微生物工業技術研究所に
寄託されている。 なお菌学的性質に関する実験方法は、1975年６
月20日東京大学出版会発行、長谷川武治編著「微
生物の分類と同定」、「ザ・ジヤーナル・オブ・ジ
エネラル・アンド・アプライド・マイクロバイオ
ロジー（The Journal of General and Applied
Microbiology）第10巻、第２号、第95〜126頁
（1964年）」の「The Flagellation and
Taxonomy of Genera Gluconobacter and
Acetobacter with Reference to the Existence
of Intermediate Strains（中間菌株の存在に関連
してのグルコノバクター属およびアセトバクター
属のフラゲレーシヨンおよび分類学）」および
「ザ・ソサエテイー・フオー・アプライド・バク
テリオロジー・テクニカル・シリーズ・No.２
（The Society for Applied Bacteriology
Technical Series No.２）アイテンテイフイケイ
シヨン・メソツズ・フオー・マイクロバイオロジ
スツ（Identification Methods for
Microbiologists）1968年」の第１〜８頁の
「Methods for Identifying Acetic Acid
Bacteria（酢酸菌の同定法）」に従つた。 また酵母エキス―ブドウ糖寒天培地は酵母エキ
ス5g、ブドウ糖30g、ポリペプトン3g、寒天15g
〓〓〓
を蒸留水１に溶解しPHを6.5に調節したもの、
炭酸カルシウム含有酵母エキスブドウ糖斜面培地
は酵母エキス5g、ブドウ糖30g、ポリペプトン
3g、炭酸カルシウム20g、寒天15gを蒸留水１
に溶解したもの、酢酸エタノール含有酵母エキス
―ブドウ糖液体培地は酵母エキス5g、ブドウ糖
30g、ポリペプトン3g、酢酸2gを蒸留水１に溶
解し滅菌後、エタノールを３％（Ｖ／Ｖ）無菌的
に添加したもの、NYゼラチン高層培地はブドウ
糖10g、ポリペプトン5g、酵母エキス3g、モルト
エキス3g、ゼラチン200gを蒸留水１に溶解し
PHを6.5に調節したもの、肉汁液体培地は肉エキ
ス10g、ポリペプトン10gを蒸留水１に溶解し
PHを6.5に調節したもの、ブドウ糖含有肉汁液体
培地はブドウ糖10g、肉エキス10g、ポリペプト
ン10gを蒸留水１に溶解しPHを6.5に調節したも
のである。 そしてまた、ユビキノンの同定は紙クロマト
グラフイー、薄層クロマトグラフイー、赤外部お
よび紫外部吸収スペクトラムおよび質量分析法で
行なつた。 形態的所見 形状 桿状 大きさ 0.6〜0.7×1.0〜1.8μｍ 集団 単独あるいは二連、 稀に数個連鎖 運動性 無し 胞子形成 形成せず グラム染色 陰性 抗酸性 陰性 培養的所見 酵母エキス―ブドウ糖寒天平板培養（30℃で
５日間培養） 形状 円形 辺縁 平滑で全縁 隆起 半球状（Capitate） 光沢 有り 表面 平滑 色調 淡褐色で光沢あり 炭酸カルシウム含有酵母エキス―ブドウ糖斜
面培養（30℃で３日間培養） 生育の良否 良好 隆起 中程度 表面 平滑 色調 淡褐色で光沢あり 酢酸エタノール含有酵母エキス―ブドウ糖液
体静置培養（30℃で５日間培養） 液体静置培養での生育は乏しい。リングを形
成し、培養液は透明。 肉汁液体静置培養（30℃で７日間培養）生育
乏しい。わずかにリング状に生育する。 ブドウ糖含有肉エキス液体静置培養（30℃で
７日間培養） 生育は乏しい。リング状に生育する。 MYゼラチン高層培養（20℃で７日間培養） 生育良好。液化性無し。 リトマスミルク（30℃で７日間培養） 凝固性無し。 生理学的性質 硝酸銀の還元：無し 脱窒反応：無し VPテスト：陰性 インドールの生成：無し 硫化水素の生成：無し デンプンの加水分解：無し クエン酸の利用： Christensenの培地：無し 無機窒素源の利用： 硝酸塩：無し アンモニウム塩：無し 培地中への色素の生成：無し ウレアーゼ活性：無し オキシダーゼ活性：無し カタラーゼ活性：有り 生育PH範囲：3.5〜7.5 最適PH範囲：5.0〜6.5 生育温度範囲：17―37℃ 最適温度範囲：28―32℃ 酸素に対する態度：好気的 ５―ケトグルコン酸の生成：有り ２―ケトグルコン酸の生成：有り ２―５―ジケトグルコン酸の生成：無し ジヒドロキシアセトンの生成：有り エタノール資化性：有り 酢酸の資化性：有り 乳酸の資化性：有り ビタミン要求性：有り 〓 酢酸の分解性：有り 〓〓〓
乳酸の分解性：有り 〓 塩化第２鉄反応：陰性（グルコース培地） 陰性（フルクトース培地） 〓 ホイヤー、フラトウールエタノール培地 （ビタミン添加）での生育：無し 〓 ホイヤー フラトウールグルコース培地 （ビタミン添加）での生育：有り 炭素源の資化性およびそれからの酸およびガ
スの生成 第１表のとおりである。
【表】
する、わずかに生成する。
電子伝達系の補酵素の種類 補酵素の主要成分：ユビキノン―10 上記の諸性質に従い、本菌の分類学的地位を
「バージイズ・マニユアル・オブ・デターミネイ
テイブ・バクテリオロジー（Bergey′s Manual
of Determinative Bacteriology）第８版」、なら
びに「ザ・ジヤーナル・オブ・ジエネラル・アン
ド・アブライド・マイクロバイオロジー第10巻、
95〜126頁（1964年）」の「The Flagellation and
Taxonomy of Genera Gluconobacter and
Acetobacter with Reference to the Existence
of Intermediate Strains（中間菌株の存在に関連
してのグルコノバクター属およびアセトバクター
属のフラゲレーシヨンおよび分類学）」、および
「ザ・ジヤーナル・オブ・ジエネラル・アンド・
アプライド・マイクロバイオロジー第15巻、181
〜196頁（1969年）」の「Enzymatic Studies on
the Oxidation of Sugar and Sugar alcohol（糖
および糖アルコールの酸化に関する酵素的研究）
V.Ubiquinone of Acetic acid bacteria and its
Relation to Classification of Genera
Gluconobacter and Acetobacter，especially of
the socalled intermediate strains（酢酸菌のユ
ビキノンおよびそのグルコノバクター属およびア
セトバクター属、特に所謂中間菌株の分類との関
係）」に従つて求めた。 即ち本菌はグラム陰性の好気性桿菌でエタノー
ルを酸化して酢酸を生成し、またPH3.5でも増殖
できることから、一般に酢酸菌と呼ばれるアセト
バクター属もしくはグルコノバクター属に属する
菌株であることは明らかである。 本菌は主たるユビキノンタイプがQ10でビタミ
ンが生育に必須であり、またジヒドロキシアセト
ンの生成能を有する点ではグルコノバクター属と
しての性質を有するが、一方酢酸および乳酸の分
解性を示す点ではアセトバクター属としての性質
を示し、アセトバクター属またはグルコノバクタ
ー属のいずれとも断定し難いが、酢酸および乳酸
の分解性を示すこと、および培地中にグルコー
ス、ラムノース、マンノース、グルクロン酸およ
びアセチル基を主要構成成分とする上記した新規
な酸性ヘテロ多糖類を蓄積する能力があることに
より、本菌はアセトバクター属に属する新菌種と
認定しアセトバクターMH―1597と命名した。 本発明における酸性ヘテロ多糖類AM―２生産
菌の培養に使用する培地の炭素源としては、たと
〓〓〓
えばグルコース、ガラクトース、フラクトース、
シユクロース、グリセロール、マンニトール、エ
タノール、クエン酸、リンゴ酸、糖蜜、各種澱粉
質含有穀類の糖化液などが単独または混合して用
いられる。 また窒素源としては、酵母エキス、ペプトン、
コーンステイープリカー、硫酸アンモニウムなど
の有機および無機窒素源が用いられる。 さらにカリウム、カルシウム、マグネシウム、
ナトリウムなどの塩類やパントテン酸、ニコチン
酸、Fe、Co、Moなどの微量要素が酸性ヘテロ多
糖類AM―２（以下AM―２という）の生産およ
び粘性を高めるために有効に使用される。 培養は、20〜35℃、好ましくは28〜32℃、培地
のPH3.5〜7.5、好ましくは５〜７において好気的
条件下で、通常振盪培養あるいは通気撹拌培養で
行なわれる。培養時間は種々の条件によつて異な
るが、通常24〜120時間の範囲で行なわれる。 このようにして培養物中に得られたAM―２の
回収は公知の方法を用いて行うことができる。た
とえば、培養液をそのまま、または適量の水で希
釈後、遠心分離、過などによつて菌体を分離
し、メタノール、エタノール、プロパノールある
いはアセトンなどの沈澱剤を加え繊維状の上記多
糖類を沈澱せしめた後、アセトン洗滌して乾燥を
行うことにより回収することができる。 またAM―２は酸性物質であるので、菌体を除
いた培養液にセチルトリメチルアンモニウムブロ
マイドなどを添加してAM―２を沈澱させること
により回収することができる。 粗製のAM―２は多糖類の精製法にしたがつて
精製することができる。例えば粗製のAM―２を
水に再溶解し、熱処理後、遠心分離して不溶物を
完全に除去し、アセトンなどの沈澱剤で再沈澱を
くり返すことにより純度の高い白色綿状の精製さ
れたAM―２が得られる。また、セチルトリメチ
ルアンモニウムブロマイドによる沈澱（CTAB処
理）、透析、およびイオン交換樹脂などを併用し
て高純度の精製品を得ることもできる。 次に、本発明の実施例を示す。 実施例 １ リン酸１カリ0.1g、リン酸２カリ0.1g、硫酸マ
グネシウム７水塩0.25g、塩化第２鉄0.005g、酵
母エキス2g、クエン酸２ナトリウム5gおよびシ
ユクロース30gを１の純水に溶解して培地とし
た。この培地３を調製し、PHを6.0としたの
ち、５容のジヤーフアーメンターに注入し、
120℃で20分間殺菌した。 上記と同一組成の培地を用い、坂口フラスコで
前培養したアセトバクターMH―1597、FERMBP
―280を上記のジヤーフアーメンターに接種し、
培養温度30℃、通気量0.5VVMで96時間培養し
た。培養終了液のPHは7.8、Ｂ型粘度計による粘
度は5600cpであつた。 96時間の培養の後、培養終了液に水を加えて10
とし、10000rpmで20分間遠心分離して菌体お
よび固形物を除去したのち、15のエタノールを
除々に加えると白色の繊維状沈澱が得られた。沈
澱を採取し、アセトンで洗浄し、減圧乾燥した。
このようにして得た白色繊維状の粗製のAM―２
の収量は46.2g（収率25％）であつた。 このようにして得た粗製のAM―222.0gを再び
水２に溶解し、これにセチルトリメチルアンモ
ニウムブロマイドを加えAM―２をセチルトリメ
チルアンモニウムブロマイドとの複合体として沈
澱させた。この複合体を水およびエタノールで十
分洗浄して過剰のセチルトリメチルアンモニウム
ブロマイドを除いた後、飽和塩化ナトリウム水溶
液を加えて複合体を溶解した。この溶液に３倍量
のエタノールを加えてAM―２を沈澱させた。沈
澱を分離し、減圧乾燥後、再び水に溶解した。得
られた溶液を透析用セロハンチユーブに入れ３日
間流水中で透析を行なつた後、３倍量のアセトン
を加えてAM―２を沈澱させ、沈澱物を分取、減
圧乾燥を行い精製されたAM―２ 18.5gを得
た。 実施例 ２ リン酸１カリ0.1g、リン酸２カリ0.1g、硫酸マ
グネシウム７水塩0.25g、塩化第２鉄0.005g、酵
母エキス2g、酢酸ナトリウム5gおよびシユーク
ロース25gを１の純水に溶解して培地とした。
この培地３を調製し、PH6.0としたのち、５
容のジヤーフアーメンターに注入し120℃で20分
間殺菌した。 上記と同一組成の培地を用い坂口フラスコで前
培養したアセトバクターMH―1597、FERMBP―
280を上記ジヤーフアーメンターに接種し、培養
温度30℃、通気量0.5VVMで120時間培養した。
〓〓〓
培養終了液のPHは8.6、Ｂ型粘度計による粘度は
5960cpであつた。 この培養終了液を実施例１と同様に処理して粗
製の上記多糖類を38g（収率50.7％）得た。 実施例 ３ リン酸１カリ0.1g、リン酸２カリ0.1g、硫酸マ
グネシウム・７水塩0.25g、コーンステイーブリ
カー1g、リンゴ酸ナトリウム5gおよび廃糖蜜
（シユクロース55％を含む）55gを１の純水に
溶解して培地とした。この培地10を調製し、PH
6.0としたのち、20容のジヤーフアーメンター
に注入し120℃で20分間殺菌した。 上記と同一組成の培地を用い、坂口フラスコで
前培養したアセトバクターMH―1597、FERMBP
―280を上記のジヤーフアーメンターに接種し、
培養温度30℃、通気量0.5VVMで80時間培養し
た。なお、水酸化ナトリウムと塩酸の水溶液を用
い培養中のPHは6.0前後に調節した。培養終了液
のＢ型粘度計による粘度6400cpであつた。 この培養終了液を具体例１と同様に処理して粗
製のAM―２を187g（収率62％）得た。 実施例 ４ リン酸１カリ1g、リン酸２カリ1g、硫酸マグ
ネシウム・７水塩0.25g、コーンスチーブリカー
2g、ペプトン2g、乳酸ナトリウム5gおよびグル
コース20gを１の純水に溶解して培地とした。
この培地10を調製し、PH6.0としたのち、20
のジヤーフアーメンターに注入し120℃で20分間
殺菌した。 上記と同一組成の培地を用い、坂口フラスコで
前培養したアセトバクターMH―1597、FERMBP
―280を上記のジヤーフアーメンターに接種し、
培養温度30℃、通気量0.5VVMで80時間培養し
た。なお水酸化ナトリウムと塩酸の水溶液を用い
培養中のPHは6.0前後に調節した。培養終了液の
Ｂ型粘度計による粘度は4300cpであつた。 この培養終了液を具体例１と同様に処理して粗
製のAM―２を112g（収率56％）得た。 実施例 ５ リン酸１カリ1g、リン酸２カリ1g、硫酸マグ
ネシウム・７水塩0.25g、塩化第２鉄0.09g、酵母
エキス2g、酢酸ナトリウム5g、およびグリセロ
ール30gを１の純水に溶解して培地とした。こ
の培地３を調製し、PH6.0としたのち、５容
のジヤーフアーメンターに注入し、120℃で20分
間殺菌した。 上記と同一組成の培地を用い、坂口フラスコで
前培養したアセトバクターMH―1597、FERMBP
―280を上記のジヤーフアーメンターに接種し、
培養温度28℃、通気量0.4VVMで96時間培養し
た。培養終了液のPHは8.6B型粘度計による粘度は
7400cpであつた。 この培養終了液を具体例１と同様に処理して粗
製のAM―２を63.4g（収率70.4％）を得た。 本発明のAM―２は、古来から食酢醸造に使用
され、歴史的にその安全性が確かめられている酢
酸菌が生産する高粘性多糖類であり、その安全性
と高粘性を生かして食品工業における添加剤とし
て、特に増粘安定剤として有効に用いることがで
きる。 すなわち、本発明の多糖類は、例えばドレツシ
ング、アイスクリーム、ジヤム、ネクター、ヨー
グルト、チヨコレート、ペースト、ソーセージ、
シロツプ、ゼリー、菓子、マヨネーズ、ホイツピ
ングクリーム、ケチヤツプ、ソース、スープ、ビ
ール、酒類、正油、食酢、漬物などの液体食品や
固体食品に増粘安定剤として添加配合することが
できる。 各種食品への本発明のAM―２の配合量は使用
目的などを考慮して適宜決定すれば良いが、通常
は最終製品に対して0.01〜20％（Ｗ／Ｖ）程度の
範囲で加えるのがよい。 従来、食品に用いられる増粘・乳化安定剤とし
ては、ローカストビーンガム、グアガム、ペクチ
ンなどの植物質多糖類、カラギーナン、寒天、ア
ルギン酸などの海藻質多糖類、およびキサンタン
ガム、ブルラン、デキストランなどの微生物多糖
類が知られている。 しかし、植物質多糖類や海藻質多糖類は天然物
であるので、その生産量は天候、その他の要因に
大きく左右されて供給が不安定になるのが大きな
問題であり、また同時に食品中での安定性とくに
耐酸性や耐熱性の点で欠陥が多い。 一方、微生物多糖類は安定した供給が可能な点
で優れているが、従来公知の微生物多糖類は人
蓄、植物に対して病原性を示すいわゆる病原性微
生物が生産するものであり、大量に生産する場合
には環境に与える危険な影響はもとより、安全性
〓〓〓
が最も重視されるべき食品に使用する増粘・乳化
安定剤としては基本的に重大な欠陥を有している
のである。 これに対し、本発明による多糖類AM―２は歴
史的に安定性が確かめられており、さらに耐酸
性、耐熱性、PH安定性、耐塩性に優れた多糖類で
あり、従来知られている多糖類に比べて食品用の
増粘・乳化安定剤として非常に有用である。 この点について具体例を示して説明する。 従来、分離タイプのドレツシングには安定剤と
してローカストビーンガム、グアガム、カラギー
ナン、トラガントガムなどが使用されているが、
これらのガム類は低PHに不安定、冷水に可溶化し
ない等の欠点がある。これに対し、本発明のAM
―２は、耐塩性、PH安定性などの特性があり、し
かも冷水に可溶であることから、分離タイプのド
レツシングに用いる安定剤〔最終製品に対し0.05
〜1.0％（Ｗ／Ｖ）添加〕として上記ガム類に比
べすぐれている。 また従来、ヨーグルト類には、増粘安定剤とし
てキサンタンガム、カラギーナン、グアガム、ト
ラガントガムなどが使用されているが、これらの
ガム類は乳蛋白（特にカゼイン）と結合して離漿
したり、低PHに不安定で粘性の消失があるなどの
欠点がある。これに対し本発明のAM―２は、上
述した様に低PH域でも極めて安定であり、しかも
乳蛋白と結合して離漿するといつた現象が全く認
められないことから、ヨーグルト類に用いる増粘
安定剤〔最終製品に対して0.05〜2.0％（Ｗ／
Ｖ）程度添加〕として上記ガム類に比べてすぐれ
ている。 例えば本発明のAM―２及びキサンタンガムを
それぞれ市販のプレーンヨーグルトの総量に対し
て1.0％添加した場合の保存（４℃）試験結果を
示すと、第２表のとおりである。
電子伝達系の補酵素の種類 補酵素の主要成分：ユビキノン―10 上記の諸性質に従い、本菌の分類学的地位を
「バージイズ・マニユアル・オブ・デターミネイ
テイブ・バクテリオロジー（Bergey′s Manual
of Determinative Bacteriology）第８版」、なら
びに「ザ・ジヤーナル・オブ・ジエネラル・アン
ド・アブライド・マイクロバイオロジー第10巻、
95〜126頁（1964年）」の「The Flagellation and
Taxonomy of Genera Gluconobacter and
Acetobacter with Reference to the Existence
of Intermediate Strains（中間菌株の存在に関連
してのグルコノバクター属およびアセトバクター
属のフラゲレーシヨンおよび分類学）」、および
「ザ・ジヤーナル・オブ・ジエネラル・アンド・
アプライド・マイクロバイオロジー第15巻、181
〜196頁（1969年）」の「Enzymatic Studies on
the Oxidation of Sugar and Sugar alcohol（糖
および糖アルコールの酸化に関する酵素的研究）
V.Ubiquinone of Acetic acid bacteria and its
Relation to Classification of Genera
Gluconobacter and Acetobacter，especially of
the socalled intermediate strains（酢酸菌のユ
ビキノンおよびそのグルコノバクター属およびア
セトバクター属、特に所謂中間菌株の分類との関
係）」に従つて求めた。 即ち本菌はグラム陰性の好気性桿菌でエタノー
ルを酸化して酢酸を生成し、またPH3.5でも増殖
できることから、一般に酢酸菌と呼ばれるアセト
バクター属もしくはグルコノバクター属に属する
菌株であることは明らかである。 本菌は主たるユビキノンタイプがQ10でビタミ
ンが生育に必須であり、またジヒドロキシアセト
ンの生成能を有する点ではグルコノバクター属と
しての性質を有するが、一方酢酸および乳酸の分
解性を示す点ではアセトバクター属としての性質
を示し、アセトバクター属またはグルコノバクタ
ー属のいずれとも断定し難いが、酢酸および乳酸
の分解性を示すこと、および培地中にグルコー
ス、ラムノース、マンノース、グルクロン酸およ
びアセチル基を主要構成成分とする上記した新規
な酸性ヘテロ多糖類を蓄積する能力があることに
より、本菌はアセトバクター属に属する新菌種と
認定しアセトバクターMH―1597と命名した。 本発明における酸性ヘテロ多糖類AM―２生産
菌の培養に使用する培地の炭素源としては、たと
〓〓〓
えばグルコース、ガラクトース、フラクトース、
シユクロース、グリセロール、マンニトール、エ
タノール、クエン酸、リンゴ酸、糖蜜、各種澱粉
質含有穀類の糖化液などが単独または混合して用
いられる。 また窒素源としては、酵母エキス、ペプトン、
コーンステイープリカー、硫酸アンモニウムなど
の有機および無機窒素源が用いられる。 さらにカリウム、カルシウム、マグネシウム、
ナトリウムなどの塩類やパントテン酸、ニコチン
酸、Fe、Co、Moなどの微量要素が酸性ヘテロ多
糖類AM―２（以下AM―２という）の生産およ
び粘性を高めるために有効に使用される。 培養は、20〜35℃、好ましくは28〜32℃、培地
のPH3.5〜7.5、好ましくは５〜７において好気的
条件下で、通常振盪培養あるいは通気撹拌培養で
行なわれる。培養時間は種々の条件によつて異な
るが、通常24〜120時間の範囲で行なわれる。 このようにして培養物中に得られたAM―２の
回収は公知の方法を用いて行うことができる。た
とえば、培養液をそのまま、または適量の水で希
釈後、遠心分離、過などによつて菌体を分離
し、メタノール、エタノール、プロパノールある
いはアセトンなどの沈澱剤を加え繊維状の上記多
糖類を沈澱せしめた後、アセトン洗滌して乾燥を
行うことにより回収することができる。 またAM―２は酸性物質であるので、菌体を除
いた培養液にセチルトリメチルアンモニウムブロ
マイドなどを添加してAM―２を沈澱させること
により回収することができる。 粗製のAM―２は多糖類の精製法にしたがつて
精製することができる。例えば粗製のAM―２を
水に再溶解し、熱処理後、遠心分離して不溶物を
完全に除去し、アセトンなどの沈澱剤で再沈澱を
くり返すことにより純度の高い白色綿状の精製さ
れたAM―２が得られる。また、セチルトリメチ
ルアンモニウムブロマイドによる沈澱（CTAB処
理）、透析、およびイオン交換樹脂などを併用し
て高純度の精製品を得ることもできる。 次に、本発明の実施例を示す。 実施例 １ リン酸１カリ0.1g、リン酸２カリ0.1g、硫酸マ
グネシウム７水塩0.25g、塩化第２鉄0.005g、酵
母エキス2g、クエン酸２ナトリウム5gおよびシ
ユクロース30gを１の純水に溶解して培地とし
た。この培地３を調製し、PHを6.0としたの
ち、５容のジヤーフアーメンターに注入し、
120℃で20分間殺菌した。 上記と同一組成の培地を用い、坂口フラスコで
前培養したアセトバクターMH―1597、FERMBP
―280を上記のジヤーフアーメンターに接種し、
培養温度30℃、通気量0.5VVMで96時間培養し
た。培養終了液のPHは7.8、Ｂ型粘度計による粘
度は5600cpであつた。 96時間の培養の後、培養終了液に水を加えて10
とし、10000rpmで20分間遠心分離して菌体お
よび固形物を除去したのち、15のエタノールを
除々に加えると白色の繊維状沈澱が得られた。沈
澱を採取し、アセトンで洗浄し、減圧乾燥した。
このようにして得た白色繊維状の粗製のAM―２
の収量は46.2g（収率25％）であつた。 このようにして得た粗製のAM―222.0gを再び
水２に溶解し、これにセチルトリメチルアンモ
ニウムブロマイドを加えAM―２をセチルトリメ
チルアンモニウムブロマイドとの複合体として沈
澱させた。この複合体を水およびエタノールで十
分洗浄して過剰のセチルトリメチルアンモニウム
ブロマイドを除いた後、飽和塩化ナトリウム水溶
液を加えて複合体を溶解した。この溶液に３倍量
のエタノールを加えてAM―２を沈澱させた。沈
澱を分離し、減圧乾燥後、再び水に溶解した。得
られた溶液を透析用セロハンチユーブに入れ３日
間流水中で透析を行なつた後、３倍量のアセトン
を加えてAM―２を沈澱させ、沈澱物を分取、減
圧乾燥を行い精製されたAM―２ 18.5gを得
た。 実施例 ２ リン酸１カリ0.1g、リン酸２カリ0.1g、硫酸マ
グネシウム７水塩0.25g、塩化第２鉄0.005g、酵
母エキス2g、酢酸ナトリウム5gおよびシユーク
ロース25gを１の純水に溶解して培地とした。
この培地３を調製し、PH6.0としたのち、５
容のジヤーフアーメンターに注入し120℃で20分
間殺菌した。 上記と同一組成の培地を用い坂口フラスコで前
培養したアセトバクターMH―1597、FERMBP―
280を上記ジヤーフアーメンターに接種し、培養
温度30℃、通気量0.5VVMで120時間培養した。
〓〓〓
培養終了液のPHは8.6、Ｂ型粘度計による粘度は
5960cpであつた。 この培養終了液を実施例１と同様に処理して粗
製の上記多糖類を38g（収率50.7％）得た。 実施例 ３ リン酸１カリ0.1g、リン酸２カリ0.1g、硫酸マ
グネシウム・７水塩0.25g、コーンステイーブリ
カー1g、リンゴ酸ナトリウム5gおよび廃糖蜜
（シユクロース55％を含む）55gを１の純水に
溶解して培地とした。この培地10を調製し、PH
6.0としたのち、20容のジヤーフアーメンター
に注入し120℃で20分間殺菌した。 上記と同一組成の培地を用い、坂口フラスコで
前培養したアセトバクターMH―1597、FERMBP
―280を上記のジヤーフアーメンターに接種し、
培養温度30℃、通気量0.5VVMで80時間培養し
た。なお、水酸化ナトリウムと塩酸の水溶液を用
い培養中のPHは6.0前後に調節した。培養終了液
のＢ型粘度計による粘度6400cpであつた。 この培養終了液を具体例１と同様に処理して粗
製のAM―２を187g（収率62％）得た。 実施例 ４ リン酸１カリ1g、リン酸２カリ1g、硫酸マグ
ネシウム・７水塩0.25g、コーンスチーブリカー
2g、ペプトン2g、乳酸ナトリウム5gおよびグル
コース20gを１の純水に溶解して培地とした。
この培地10を調製し、PH6.0としたのち、20
のジヤーフアーメンターに注入し120℃で20分間
殺菌した。 上記と同一組成の培地を用い、坂口フラスコで
前培養したアセトバクターMH―1597、FERMBP
―280を上記のジヤーフアーメンターに接種し、
培養温度30℃、通気量0.5VVMで80時間培養し
た。なお水酸化ナトリウムと塩酸の水溶液を用い
培養中のPHは6.0前後に調節した。培養終了液の
Ｂ型粘度計による粘度は4300cpであつた。 この培養終了液を具体例１と同様に処理して粗
製のAM―２を112g（収率56％）得た。 実施例 ５ リン酸１カリ1g、リン酸２カリ1g、硫酸マグ
ネシウム・７水塩0.25g、塩化第２鉄0.09g、酵母
エキス2g、酢酸ナトリウム5g、およびグリセロ
ール30gを１の純水に溶解して培地とした。こ
の培地３を調製し、PH6.0としたのち、５容
のジヤーフアーメンターに注入し、120℃で20分
間殺菌した。 上記と同一組成の培地を用い、坂口フラスコで
前培養したアセトバクターMH―1597、FERMBP
―280を上記のジヤーフアーメンターに接種し、
培養温度28℃、通気量0.4VVMで96時間培養し
た。培養終了液のPHは8.6B型粘度計による粘度は
7400cpであつた。 この培養終了液を具体例１と同様に処理して粗
製のAM―２を63.4g（収率70.4％）を得た。 本発明のAM―２は、古来から食酢醸造に使用
され、歴史的にその安全性が確かめられている酢
酸菌が生産する高粘性多糖類であり、その安全性
と高粘性を生かして食品工業における添加剤とし
て、特に増粘安定剤として有効に用いることがで
きる。 すなわち、本発明の多糖類は、例えばドレツシ
ング、アイスクリーム、ジヤム、ネクター、ヨー
グルト、チヨコレート、ペースト、ソーセージ、
シロツプ、ゼリー、菓子、マヨネーズ、ホイツピ
ングクリーム、ケチヤツプ、ソース、スープ、ビ
ール、酒類、正油、食酢、漬物などの液体食品や
固体食品に増粘安定剤として添加配合することが
できる。 各種食品への本発明のAM―２の配合量は使用
目的などを考慮して適宜決定すれば良いが、通常
は最終製品に対して0.01〜20％（Ｗ／Ｖ）程度の
範囲で加えるのがよい。 従来、食品に用いられる増粘・乳化安定剤とし
ては、ローカストビーンガム、グアガム、ペクチ
ンなどの植物質多糖類、カラギーナン、寒天、ア
ルギン酸などの海藻質多糖類、およびキサンタン
ガム、ブルラン、デキストランなどの微生物多糖
類が知られている。 しかし、植物質多糖類や海藻質多糖類は天然物
であるので、その生産量は天候、その他の要因に
大きく左右されて供給が不安定になるのが大きな
問題であり、また同時に食品中での安定性とくに
耐酸性や耐熱性の点で欠陥が多い。 一方、微生物多糖類は安定した供給が可能な点
で優れているが、従来公知の微生物多糖類は人
蓄、植物に対して病原性を示すいわゆる病原性微
生物が生産するものであり、大量に生産する場合
には環境に与える危険な影響はもとより、安全性
〓〓〓
が最も重視されるべき食品に使用する増粘・乳化
安定剤としては基本的に重大な欠陥を有している
のである。 これに対し、本発明による多糖類AM―２は歴
史的に安定性が確かめられており、さらに耐酸
性、耐熱性、PH安定性、耐塩性に優れた多糖類で
あり、従来知られている多糖類に比べて食品用の
増粘・乳化安定剤として非常に有用である。 この点について具体例を示して説明する。 従来、分離タイプのドレツシングには安定剤と
してローカストビーンガム、グアガム、カラギー
ナン、トラガントガムなどが使用されているが、
これらのガム類は低PHに不安定、冷水に可溶化し
ない等の欠点がある。これに対し、本発明のAM
―２は、耐塩性、PH安定性などの特性があり、し
かも冷水に可溶であることから、分離タイプのド
レツシングに用いる安定剤〔最終製品に対し0.05
〜1.0％（Ｗ／Ｖ）添加〕として上記ガム類に比
べすぐれている。 また従来、ヨーグルト類には、増粘安定剤とし
てキサンタンガム、カラギーナン、グアガム、ト
ラガントガムなどが使用されているが、これらの
ガム類は乳蛋白（特にカゼイン）と結合して離漿
したり、低PHに不安定で粘性の消失があるなどの
欠点がある。これに対し本発明のAM―２は、上
述した様に低PH域でも極めて安定であり、しかも
乳蛋白と結合して離漿するといつた現象が全く認
められないことから、ヨーグルト類に用いる増粘
安定剤〔最終製品に対して0.05〜2.0％（Ｗ／
Ｖ）程度添加〕として上記ガム類に比べてすぐれ
ている。 例えば本発明のAM―２及びキサンタンガムを
それぞれ市販のプレーンヨーグルトの総量に対し
て1.0％添加した場合の保存（４℃）試験結果を
示すと、第２表のとおりである。
【表】
第２表から、明らかなように、本発明のAM―
２を添加したヨーグルトでは60日の保存後も全く
粘性を失なわず、しかも全く離漿が認められない
のに対し、キサンタンガムを添加したヨーグルト
では３日の保存で早くも離漿が認められる。 また本発明のAM―２は、その安全性と高粘性
を生かして免疫賦活剤、コレステロール低下剤、
血圧降下剤、血糖低下剤などの医薬品用素材とし
ての用途が十分期待できるとともに、潤滑剤、被
覆剤、糊料、懸濁補助剤、化粧品素材、石油を回
収する際の増粘剤などの工業用の用途にも充分利
用することが可能である。
２を添加したヨーグルトでは60日の保存後も全く
粘性を失なわず、しかも全く離漿が認められない
のに対し、キサンタンガムを添加したヨーグルト
では３日の保存で早くも離漿が認められる。 また本発明のAM―２は、その安全性と高粘性
を生かして免疫賦活剤、コレステロール低下剤、
血圧降下剤、血糖低下剤などの医薬品用素材とし
ての用途が十分期待できるとともに、潤滑剤、被
覆剤、糊料、懸濁補助剤、化粧品素材、石油を回
収する際の増粘剤などの工業用の用途にも充分利
用することが可能である。
第１図は本発明のAM―２の赤外吸収スペクト
ルで、第２図は本発明のAM―２の濃度と粘度の
関係を示す図で、第３図はAM―２ 1.0％水溶液
のシエアー・レート（Shear rate）（sec-1）と粘
度の関係を示す図で、第４図はAM―２ １％水
溶液におけるPHと粘度の関係を示す図で、第５図
はAM―２ １％水溶液における塩類（CaCl2、
NaCl）と粘度の関係を示す図で、第６図はAM―
２ １％水溶液の温度の関係を示す図で、第７図
はAM―２の13C―刻磁気共鳴スペクトルを示す
図である。 〓〓〓〓
ルで、第２図は本発明のAM―２の濃度と粘度の
関係を示す図で、第３図はAM―２ 1.0％水溶液
のシエアー・レート（Shear rate）（sec-1）と粘
度の関係を示す図で、第４図はAM―２ １％水
溶液におけるPHと粘度の関係を示す図で、第５図
はAM―２ １％水溶液における塩類（CaCl2、
NaCl）と粘度の関係を示す図で、第６図はAM―
２ １％水溶液の温度の関係を示す図で、第７図
はAM―２の13C―刻磁気共鳴スペクトルを示す
図である。 〓〓〓〓
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 下記の理化学的性質を有する酸性ヘテロ多糖
類AM―２。 １ グルコース、ラムノース、マンノース、グル
クロン酸およびアセチル基を主構成成分とし、
その構成糖比がグルコース：ラムノース：マン
ノース：グルクロン酸＝４：0.9〜1.1：0.9〜
1.1：0.9〜1.1で、アセチル基含量が４〜８％で
ある酸性ヘテロ多糖類。 ２ 赤外吸収スペクトル（第１図）では、3100〜
3700cm-1に水酸基に由来する吸収、1600cm-1付
近および1400cm-1付近にグルクロン酸のカルボ
キシル基に由来する吸収、および900cm-1付近
にＤ―グルコピラノース残基のβ配向に由来す
る吸収が認められる。 ３ 呈色反応 アンスロン反応：陽性、カルバゾール反応：
陽性、エルソン―モルガン反応：陰性、ヨード
反応：陽性 ４ 溶剤に対する溶解度 水に可溶で、エタノール、エーテル、アセト
ン等に不溶である。 ５ 色及び形状 精製品は白色綿状または繊維状である。 ６ 粘度 水溶液は無色透明で粘性を有し、その１％水
溶液の粘度は1200〜2000cp（25℃、30rpm、東
京計器製Ｂ型粘度計による）である。 ７ 元素分析値 Ｃ＝39.9±１％；Ｈ＝6.2±１％；Ｎ＝０
％；灰分＝3.0±1.0％ ８ 比旋光度 〔α〕２７ Ｄ：０〜＋20（Ｃ＝0.33、水溶液） ９ 分子量 約105以上である。 10 融点 190℃で黒褐色化が始まり、250℃で分解す
る。 11 刻磁気共鳴スペクトル 13C―刻磁気共鳴スペクトル（第７図）にお
ける主要ピークは174.2ppm、103.5ppm、
101.5ppm、76.6ppm、75.9ppm、73.3ppm、
〓〓〓
70.9ppm、69.5ppm、61.4ppm、21.2ppm、
17.6ppmである。 ２ アセトバクター属に属する酸性ヘテロ多糖類
AM―２生産菌を培養し、培養物より酸性ヘテロ
多糖類AM―２を採取することを特徴とする酸性
ヘテロ多糖類AM―２の製造法。 ３ アセトバクター属に属する酸性ヘテロ多糖類
AM―２生産性菌がアセトバクターMH―1597で
ある特許請求の範囲第２項記載の酸性ヘテロ多糖
類AM―２の製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58076265A JPS59203498A (ja) | 1983-05-02 | 1983-05-02 | 酸性ヘテロ多糖類ａｍ−２ |
| US06/545,270 US4575551A (en) | 1983-05-02 | 1983-10-25 | Acidic heteropolysaccharide AM-2 |
| DE8383111347T DE3376121D1 (en) | 1983-05-02 | 1983-11-14 | Acidic heteropolysaccharide am-2, a process for the production thereof, uses thereof and acetobacter mh-1597 (ferm bp-280) |
| EP83111347A EP0127698B1 (en) | 1983-05-02 | 1983-11-14 | Acidic heteropolysaccharide am-2, a process for the production thereof, uses thereof and acetobacter mh-1597 (ferm bp-280) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58076265A JPS59203498A (ja) | 1983-05-02 | 1983-05-02 | 酸性ヘテロ多糖類ａｍ−２ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59203498A JPS59203498A (ja) | 1984-11-17 |
| JPS6135201B2 true JPS6135201B2 (ja) | 1986-08-12 |
Family
ID=13600391
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58076265A Granted JPS59203498A (ja) | 1983-05-02 | 1983-05-02 | 酸性ヘテロ多糖類ａｍ−２ |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4575551A (ja) |
| EP (1) | EP0127698B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59203498A (ja) |
| DE (1) | DE3376121D1 (ja) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5047344A (en) * | 1983-12-30 | 1991-09-10 | Research Corporation Techniques, Inc. | Induction of settlement and metamorphosis in Crassostrea virginica by melanin-synthesizing bacteria and ammonia, and metabolic products of said bacteria |
| DK421285A (da) * | 1984-09-21 | 1986-03-22 | Oreal | Kosmetisk middel paa basis af ikke-ioniske, svag anioniske eller amfotere overfladeaktive stoffer samt heteropolysaccharider |
| US4720389A (en) * | 1986-04-22 | 1988-01-19 | Merck & Co., Inc. | Foam-stabilized malt beverage |
| US4851393A (en) * | 1986-07-28 | 1989-07-25 | Massachusetts Institute Of Technology | Method for utilizing an exocellular polysaccharide isolated from zoogloea ramigera |
| US5091376A (en) * | 1986-07-28 | 1992-02-25 | Massachusetts Institute Of Technology | Non-capsule exopolysaccharide from Zoogloea ramigera |
| US4948733A (en) * | 1986-07-28 | 1990-08-14 | Massachusetts Institute Of Technology | Zoogloea transformation using exopoly saccharide non-capsule producing strains |
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| FR2624135B1 (fr) * | 1987-12-04 | 1990-04-13 | Rhone Poulenc Chimie | Procede de production de polysaccharides |
| US4960763A (en) * | 1988-04-18 | 1990-10-02 | Weyerhaeuser Company | Method of using bacterial cellulose as a dietary fiber component |
| GB8907057D0 (en) * | 1989-03-29 | 1989-05-10 | Agricultural & Food Res | Polysaccharide compositions |
| US5334520A (en) * | 1990-05-25 | 1994-08-02 | Center For Innovative Technology | Production of poly-beta-hydroxybutyrate in transformed escherichia coli |
| US5518907A (en) * | 1989-06-07 | 1996-05-21 | Center For Innovative Technology | Cloning and expression in Escherichia coli of the Alcaligenes eutrophus H16 poly-beta-hydroxybutyrate biosynthetic pathway |
| US5362713A (en) * | 1989-12-13 | 1994-11-08 | Weyerhaeuser Company | Drilling mud compositions |
| US5009797A (en) * | 1989-12-13 | 1991-04-23 | Weyerhaeuser Company | Method of supporting fractures in geologic formations and hydraulic fluid composition for same |
| FR2672899B1 (fr) * | 1991-02-19 | 1993-05-28 | Oreal | Compositions de lavage des matieres keratiniques a base d'huile de synthese et procede de mise en óoeuvre. |
| FR2679447B1 (fr) * | 1991-07-25 | 1995-04-21 | Oreal | Composition de lavage et de traitement antipelliculaire des cheveux et du cuir chevelu, a base de sulfure de selenium et de tensio-actif non-ionique du type polyglycerole ou alkylpolyglycoside. |
| US5958785A (en) * | 1991-08-29 | 1999-09-28 | Research Foundation For Mental Hygiene | Detection of a carbohydrate biomarker directly associated with chronic alcoholism |
| US5747346A (en) * | 1991-08-29 | 1998-05-05 | Research Foundation For Mental Hygiene, Inc. | Detection of novel carbohydrates directly associated with chronic alcoholism |
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| DE69625812T2 (de) * | 1995-04-18 | 2003-11-06 | Ajinomoto Co., Inc. | Bakterien welche cellulose produzieren |
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| US6968222B2 (en) | 2003-05-02 | 2005-11-22 | Oculir, Inc. | Methods and device for non-invasive analyte measurement |
| US6975892B2 (en) * | 2003-10-21 | 2005-12-13 | Oculir, Inc. | Methods for non-invasive analyte measurement from the conjunctiva |
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| US9206414B2 (en) * | 2003-08-13 | 2015-12-08 | Axcelon Biopolymers Corporation | Anisotropic nanocomposite hydrogel |
| US20060224057A1 (en) * | 2003-10-21 | 2006-10-05 | Oculir, Inc. | Methods for non-invasive analyte measurement |
| US20080009688A1 (en) * | 2004-04-14 | 2008-01-10 | Oculir, Inc. | Methods for non-invasive analyte measurement |
| US20060258919A1 (en) * | 2004-04-14 | 2006-11-16 | Oculir, Inc. | Non-Invasive Analyte Measurement Device for Measuring Tears and Other Ocular Elements Using Electromagnetic Radiation and Method of Using the Same |
| WO2006102756A1 (en) | 2005-03-30 | 2006-10-05 | University Western Ontario | Anisotropic hydrogels |
| WO2007046532A1 (ja) | 2005-10-18 | 2007-04-26 | Kansai Paint Co., Ltd. | 水性プライマー組成物及びその塗装方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS597317B2 (ja) * | 1975-10-17 | 1984-02-17 | 武田薬品工業株式会社 | 多糖類ａｘ |
| GB1570487A (en) * | 1975-10-17 | 1980-07-02 | Takeda Chemical Industries Ltd | Mucilaginous polysaccharide ax |
| GB2058106B (en) * | 1979-09-07 | 1983-05-11 | Merck & Co Inc | Heteropolysaccharide s-88 |
| US4342866A (en) * | 1979-09-07 | 1982-08-03 | Merck & Co., Inc. | Heteropolysaccharide S-130 |
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| US4331440A (en) * | 1980-03-17 | 1982-05-25 | Merck & Co. Inc. | Use of gum S-88 in printing paste systems |
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-
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- 1983-05-02 JP JP58076265A patent/JPS59203498A/ja active Granted
- 1983-10-25 US US06/545,270 patent/US4575551A/en not_active Expired - Fee Related
- 1983-11-14 EP EP83111347A patent/EP0127698B1/en not_active Expired
- 1983-11-14 DE DE8383111347T patent/DE3376121D1/de not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| EP0127698B1 (en) | 1988-03-30 |
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| JPS59203498A (ja) | 1984-11-17 |
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