JPS615778A - ストレプトミセス・グリセウス・４４６−ｓ３ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ストレプトミセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｌｓｅｕｓ　）　　の新菌株１Ｉ
ｌ−５３に係り、更に詳細には、抗生物質≠≠６−５３
−／を生産する能力のあるストレプトミセス・グリセウ
ス・≠ｇ６−５３（微工研菌寄第７ｔ／６号）に係るも
のである〇 本発明者らは、自然界微生物の生産する抗生物質探索の
過程で、山形系の土壌から、通常の方法で新しく放線菌
弘４ｔ６−３３菌株を分離し、この微生物が新抗生物質
≠≠６−５３−／を生産することを見出し、本発明を完
成するに至ったのである。

本発明者らは、昭和５７年♂月、山形県山形市大字山寺
の土壌を採取し、それらの土壌の水懸濁上層液を通常の
組成の寒天平板に塗抹して１．２７〜３０℃で３〜５日
間培養し、発生した微生物のコロニーを通常の組成の寒
天斜面に分離して、２７〜３０℃でｌ≠日間培養し、多
数の菌株を得た。それらの菌株を逐一、通常の組成の培
地で２７〜３０℃で３〜５日間振盪培養して、それらの
培養液の抗菌活性を種々の試験菌を用いて試験し、抗菌
活性を有する菌株を選出した。それらの菌株について更
に精細に試験した結果、Ｉｌ、≠６−５３と名付けられ
た菌株が培養液中に≠≠６−５３−７と名付けられた新
抗生物質を生産することを発見した。また、本菌株につ
いて、単胞子分離操作をおこなうことにより、その純粋
性を確認した。

この新しく分離された微生物は、下記の菌学的性質を有
し、下記するような理由からストレプトミセス・グリセ
ウスの新菌株としてストレプトミセス・グリセウス・ｔ
Ａ４４ｇ−ｓ・３と同定された。

なお、本菌株はストレプトミセス・エスピー・４４６−
　Ｓ　３　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、弘４４
６−５３　）として、工業技術院微生物工業技術研究所
に寄託され、その受託番号は微工研菌寄第７’ｌ／６号
（ＦＥＲＭＰ−７≠７６）である。

尚、以下の実験に用いた培地の組成は、特記しない限り
、特許庁編産業別審査基準の応用微生物工業（改訂２版
、昭和５７年ｇ月）、第２ｇ〜３３頁に放線菌の同定に
使用する培地として例示されている組成に従った。

４ＬＩＩＬ６−３Ｊ株の菌学的性状 、／）形態 弘４ｔｌ、−５３株のスターチ・無機塩寒天培地および
イースト・麦芽寒天培地を用いて２７℃で２週間培養し
たものは、淡い緑黄色の気菌糸を豊富に着生し顕微鏡下
で観察すると気菌糸は単純分枝をなし、ゆるく屈曲し、
又部分的には直線状であり、又房状分校を示す。車軸状
分枝や、らせん状の胞子着生菌糸は認められない。電子
顕微鏡で観察すると、気菌糸の先端は１０個以上の円筒
状の胞子の連鎖をなし、胞子の大きさは直径Ｏ，Ｓ　−
／、０μｍ、長さσター／９ｇμｍ位で胞子の表面は平
滑である。鞭毛や胞子嚢および菌核は認められない。

コ）各種培地における生育状態 実験および観察は、イー・ビー・７ヤーリング及びディ
ー・ゴツトリーブ（Ｉｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ。

Ｂａｃｔｅｒｌｏｌ、第１６巻、３１３頁、ｌり６６年
）の方法に準じて行った。色の記載に当っては、日本色
研事業株式金社発行の日本色研色名帖第３版（ｌり７ｉ
年）に準拠ＬＡ（）内にＪＩＳ記号を示した。尚、以下
は特記しない限り、２７℃培養、λ週間目の観察結果で
ある。

（１）　　シュークロース・硝酸塩寒天培地生育は良好
で、拡散して発育する。気菌糸の着生は不良で粉状を呈
し、白色（ＮＺＯ）ないし、ごくりすい緑黄色（１０Ｙ
　　タ／／、ｊ）を呈する。基土菌糸裏面の色はうすい
黄色（よｊＹ　　タ／６）で、あかるい緑黄色（１０Ｙ
　　１．３／り）の溶解性色素を生成する。

（２）　　グルコース・アス・ダラギ／寒天培地生育は
やや不良で平坦である。気菌糸の着生も貧弱で、ごくり
すい緑゛黄色（ｌＯＹり７ｉ、ｒ）の粉状を呈し、気菌
糸上には小水滴が観察されることもある。基土菌糸裏面
の色はごくりすい緑黄色（１０Ｙ　タ／／、ｊ）であり
、ごくりすい緑黄色ＣＬＯＹ　　タ／／、！ｊ；）の溶
解性色素を生成する。

（３）　　グリセリン・アスノ母うギ／寒天培地（Ｉｓ
Ｐ−ｊ培地） 盛り上がって良好な発育をする。気菌糸の着生は中程朦
で、ごくうすい赤味がかった黄色（２，ｊ　Ｙ　　タ／
２）のベルベット状の中に＼ごくうすい黄色（ｔ、　Ｊ
−Ｙ　　タ／　／、　ｊ　）の粉状の部分が点在する。

基土菌糸裏面の色は灰黄色（よｊＹ　　ざ／３）で、う
すい緑黄色ＣＬＯＹり／３）の溶解性色素を生成する。

（４）　　スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−≠培地
）生育は良好で、拡散して発育する。気菌糸の着生はき
わめて良好で、集落中央部は粉状、周縁部は凹凸のある
粉状で、ごくうすい黄緑色ＣｊＧＹ　　１．ｊ／／、！
；）を呈する。基土菌糸裏面はにぷい黄色（３，ＪＹ　
　７／ｊ）で、うすい緑黄色（１０Ｙ　　タ／ｊ＞の溶
解性色素を生成する。

（５）　　チロシン寒天培地 きわめて良好な生育を示し、盛り上がる。気菌糸もよく
着生し１灰白色（夕Ｇ　　タ１０．ｊ）のベルペット状
の部分と、ごくうすい黄緑色Ｃ！；ＧＹ　　１３；／／
、３）の１凹凸のある粉状の部分とが混在する。基中菌
糸裏面の色は黄褐色（りＹＲ≠／≠）で、ところどころ
暗い黄褐色（りＹＲ３／３）を呈し、ごくうすい黄色（
よｊＹ　　タ／３）の溶解性色素を生成する。

（６）栄養寒天培地 生育は不良で、白色（ＮＹ、０　）の気菌糸をわずかに
着生する。基中菌糸裏面の色はごくうすい黄色１：ｊＹ
　　タ／３）で、溶解性色素の生成はみられない。

（７）　　イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−２培地）
きわめて良好な生育を示し、少し盛り上がり凹凸がある
。気菌糸は粉状にきわめて良く着生し、その色はごくう
すい緑黄色（１０Ｙり／／Ｊ）である。基中菌糸裏面の
色はにぷい黄色（よｊＹ　　７／３）で、あざやかな黄
色−（よｊＹｇ、３；／り）の溶解性色素を生成する（
８）　　オートミール寒天培地（ＩｓＰ−３培地）生育
はやや不良で平坦である。気菌糸の着生も不良で、ごく
うすい緑黄色（ｌθＹ　タ／／、３）の粉状に点在する
。基中菌糸裏面の色はごくうすい黄色（±５Ｙ　　タ／
３）から灰黄色（よｊＹど／３）、さらに集落周縁部の
裏面はふがい黄色＜２．３−Ｙ　　７／／θ）を呈する
。ご（うすい黄色（！ｉ、３ｒＹ　　９／３）の溶解性
色素を生成する。

３）生理的性質 （１）生育温度範囲 スターチ・無機塩寒天培地及びイースト・麦芽寒天培地
を用い、／Ｊｔ、２０℃、２７℃、３７℃、ｔｉｏ℃及
び＜ｚｔ℃の各温度で試験した結果、／　ｊ、　Ｃ〜３
７ｃの各ｍ度では生育するが、グθ℃及びｌ／Ｌｊ℃で
は生育しない。生育の最適温度は２７℃付近である。

（２）　　ゼラチ／の液化（グルコース・−ｅ７′′ト
ン・ゼＯラチ／培地を用い、２０℃で穿刺培養した。）
陽性である。即ち培養７Ｂ１１では液化はみられず・／
ｌ／−白目頃から液化が始まり、ご〈徐々゛　　に進行
する。

（３）　　スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天
培地上で、２７℃で培養し、常法に従って判定した。） スターチの加水分解力は比較的強い。

（４）　　脱脂牛乳の凝固、ミゾトン化（Ｕｉ２脂牛乳
牛乳培地２７℃及び３７℃で培養した。） 脱脂牛乳の凝固は、２７℃、３７℃のいずれでも認めら
れない。ベゾトン化は１．２７℃では≠白目から、３７
℃では１０日白目から始まり、徐々に進んで約３Ｍ量目
にはいずれの温度においてもほぼ完了する。

（５）　　メラニン様色素の生成（チロシン寒天培地、
セクト／・イースト鉄寒天培地、及びトリグトン・１−
スト・ブロス：いずれも２７℃で培養した。） 上記いずれの培地においてもメラニン様色素の生成は認
められない。

４ｔ）炭素源の利用性 プリドハム・ゴツトリーブ寒天１１り地（ＩＳＰ−タ培
地）を使用して１．２７℃で培養して試験した結果、 Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、
Ｏ−マンニット、Ｄ　−Ｚ７　／’　りｈ　−，２オヨ
ヒサリシンを利用し７、ンユークロースおよびイノシト
ールの利用性は疑わしく、 し−アラビノース、Ｌ−ラムノース、ラフィノース及ヒ
セルロースは利用Ｌ　、’ｚい。

５）　　ｉｌｌ胞壁のノアミノピメリン酸の分析細胞壁
の構成アミノ酸の−っであるジアミノピメリン酸をティ
、ハセガヮら：ジャーナル・オフ０ザ・ジェネラル・エ
ンド・アプライド・マイクロバイオロノー（Ｔ、　Ｈａ
ｓｅｇａｗａ　、ｅｔ　ａｌ−＊Ｊ、　Ｇｅｎ、　Ａｐ
ｐｌ、　Ｍｌｃｒｏｂｉｏｌ、　）　２り。

３１ター３．２２　（／りと３）の方法に学ごて分析し
ｆｃ結果は、ＬＬ−型であった。

以上の結果を要約すると、≠４’／；−８３の気菌二は
単純分枝をなし、大部分がゆるく屈曲し、分生胞子の着
生部分は房状分校を示し、輪生枝及びラセン形成は認め
られず、胞子の表面は平滑である。鞭毛や胞子前および
菌核は詔められない。種々の培地上で、ごくうすい黄色
ないし、ごくうすい緑黄色から黄褐色、暗い黄褐色ない
」７成苗色の基中菌糸を形成し、気菌糸はごくうすい緑
黄色、ごくうすい黄緑色、ごくうすい黄色ないし、ごく
うすい赤味がかった黄色を呈する。なお、ごくりすい緑
黄色、ごくうすい黄色、うすい緑黄色ないし、にぶい黄
色の溶解性色素を生ずる。１５℃から／１．５℃で試験
した結果、／、ｆ℃から７７℃の間において生育し、≠
θ℃以上では生育しない。ゼラチ／を液化し、スキムミ
ルクを凝固せず、ベグトン化する。スターチをよく水解
し、メラニン様色素を生成しない。

Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、
Ｄ−マンニット、Ｄ−がラクトース及びサリシンヲ利用
り、　、シュークロース及びイックトールの利用は疑わ
しく、 Ｌ−７ラビノース、Ｌ−ラムノース、ラフィノース及び
セルロースは利用しない。

細胞壁のノアミノピメリン酸はＬＬ−型である。

これらの結果から本菌株はストレプトミセス属に属し、
！リドハムとトレスチーの分Ｌ（におけるイエローシリ
ーズに属することは明らかである。

そこでバーシーズ・マニュアル・オン゛・デターミネイ
ティブ・バクテリオロジー第ｇ版及びインターナショナ
ル・ツヤ−ナル・オグ・／ステマチイック・バクテリオ
ロノー、ｌｆ音、３３２頁によって比較した所、第１表
に示した如く、ストレプトミセス・グリセウスの記載と
よく一致する。しかしながら、新抗生物質弘グＡ　　Ｓ
ｊ　　／葡、生産する点において明らかな相違が認めら
れるので、≠≠６−５３株はストレプトミセス・グリセ
ウスに属する新菌株とずゐことが妥当と結論し、ストレ
プトミセス・グリセウス（５ｔｒｅｐ”−ｏｍｙｃｅｓ
ｇｒｉｓｅｕｓ　）　４ｔ１１．６−３３と命名した。

本発明に係る微生物、ストレプトミセス・グリセウス・
ｔ≠６−５３は新抗生物質を生産する能力を有するもの
であり、以下その有用性について説明する。

ストレプトミセス・エスピー・ｌｌ−４１１，−５３（
微工研菌寄第７≠７６号）を栄養源含有培地に接種して
好気的に発育させることによって、抗生物質≠弘＆−３
３−／を含有する培養物が得られる。栄養源としては放
線菌の栄養源として公知のものを使用できる。例゛えば
、市販されている殿粉、テキストリン、マルトース、蔗
糖、クルコース、グリセリン、糖蜜などの炭水化物、あ
るいは有機酸、油脂などの炭素源および脱脂大豆粉、大
豆粉、綿実粉、Ｎｚ−アミン、コーンスチーゾリカー、
カゼイン氷解物、デイステイラーズ・ンリュプル、魚粉
、４ゾトン、肉エキス、酵母エキス、硫酸アンモニヤ、
硝酸ンーダ、硝酸アンモニヤ、アンモニヤなどの窒素源
と、燐酸塩、マグネシウム塩、亜鉛塩、カリウム塩、ナ
トリウム塩、カルシウム塩などの無機塩その他必要に応
じて微量の金属塩を加えることもできる。これらの物は
生産菌が利用し、抗生物質ｌｌ−１１６−５３−／の生
産に役立つ物であればよく、放線菌の公知の培養材料は
すべて用いることができる。抗生物質≠４ｔｇ−５３−
／の能率的な生産には液体培養が好ましく、培養温度は
生産菌が発育し抗生物質’Ｉ’１６−５３−／を生産す
る範囲内であればよい。培養は普通の場合、抗生物質≠
≠Ａ−３３−／が充分蓄積するまで続けられる。例えば
グリセリン／、ｆ％、ポリベグトン０．６チ、肉エキス
０．ｊ％、食塩０．３％からなる液体培地（ｐＨ７０）
に寒天斜面培地で培養した≠≠６−５３株を接種し、２
ｒ０±／’Ｃで好気的に回転振盪培養を行うと、培養２
８目から目的とする抗生物質の蓄積がみられ、≠８目な
いし６８目に最高に達する。抗生物質ｔＡ≠４−５３−
／の定量には、試験菌としてミコバクテリウム・スメグ
マチス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｍｅｇｍａｔ
ｌｓ　）ＡＴＣＣ６０７を使用する通常の円筒平板法又
はイーツタ−ディスク平板法を行なえばよい。

この様にして得られる培養物において、抗生物質ｌ／１
．１Ａ６−ｓ３−／の大部分は培養戸液又は遠心上澄液
中に存在する。それらの溶液から抗生物質１１１１６−
３３−／を採取するには種々の方法が用いられる。即ち
種々な吸着剤を用いて吸脱着をおこなう方法、あるいは
種々なイオン交換樹脂を用いて精製する方法などを実施
することができる。

例えば、吸着剤として、多孔性非イオン性吸着樹脂であ
るダイヤイオンＨＰ２０Ｃ三菱化成工業社製、商品名）
を使用すると、抗生物質≠１１．６−５３−／はＨＰ、
２０に８着され、アセトン水、メタノール水等によって
溶出される。又弱酸性陽イオン交換樹脂であるアンバー
２イトＩＲＣ−ｊＯ（米国、ローム・アンド・ハース社
製、商品名）水素型に吸着され、希薄な酸、例えば０．
　Ｏｊ　Ｎ塩酸で溶出される。このような方法で得られ
た抗生物質４４６−５３−／の粗粉末は例えばクロロホ
ルム、メタノール、ベンゼン、酢酸エチル、アセトン等
の溶媒の、適当な組み合わせよりなる混合溶媒系を用い
たシリカダル・カラムクロマトグラ。

７法によって精製することができる。そのほかに、クロ
マトグラフ用の弱酸性陽イオン交換樹脂、例えばアンバ
ー２４士ＣＧ−！ｒＯ（米国、ローム・アンドパ・・−
ス社製、商品名）水素型や、ダル濾過りａマドグラフ用
樹脂、例えばトヨノや一ルＨＷ−１１０（東洋曹達工業
社製、商品名）を用いて精製することもできる。また、
含水アルコールやアルコールと酢酸エチル等の混合溶媒
を用いて再結晶を繰返して高純度の抗生物質≠≠６−３
３−／を得ることも出来る。

次に、本発明に係る微生物の使用例を例示する。

使用例　／ ストレプトミセス・エスピー・≠ＩＡ６−５３株（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　Ｓｐ、　ＩＩ　ｌ／ｌｌｙ　−
Ｓ　３　）　（微工研菌寄第７≠７６号）の斜面培養を
種菌とし、培地としてグリセロールＡ了チ、ポリベグト
ン０．６チ、牛肉エキスＯ０ｊ％、塩化ナトリウム０．
３％の組成のものをｐ）＋乙、りに調整した後、１．２
７℃で７５分間滅菌したものを用いた。種菌、−白金耳
を１ｊＱＯ−容エルレｙマイヤー７″）ス、コに■入し
ｔ上記の培地１ｏｏｖｓｔに接種し、２ｇ℃でλ日間振
盪培養した。この種培養液を、／　００　ｗｒｌの前記
培地ヲ含ｔｒ　ｊ　００　ｍｌ　容エルレンマイヤーフ
ラスコ２ｊ本に各３チの割合で接種し、２１！１′℃で
乙日間回転振盪培養機（／♂θ回転毎分）で培養した。

ｓｏｏｗ容エルレンマイヤ−７ラスコ、？Ｊ’本分の培
養物を合して得た培養物２．！ｔを１．２　Ｎ　−＊酸
でｐＪ（７に調整後、遠心分離した。得られた上澄液を
ダイヤイオンＨＰ、２θ樹脂のカラム（２０θ−）ニ通
し、目的物質を吸着させ、水洗後／、０００−のｊＯチ
含水アセトンで溶出した。溶出して得られた活性区分２
００　ｍｌを減圧下で濃縮し、さらに凍結乾燥して褐色
粉末／、♂ｏｐｆ：得た。この褐色粉末をメタン・−ル
を用いて充填シたトヨノ臂−ル１−ＩＷ−≠θＦ’ｆ″
ルのカラム（東洋曹達工業社製。

≠ｊＯｔｄ）にのせ、メタノールで展開溶出し、油性分
＠（分画番号／、２番〜／弘番、　２０　ｖｌ　／分画
）を得た。この活性分画６０−を減圧下で蒸発乾固し、
褐色固形物ｏ、　ｓ　ｏ　ｉを得た。得られた褐色固形
物、ｏ、ｓｏｉを少量のメタノールに溶かし、クロロホ
ルムで充填したシリカゲルのカラム（和光純薬工業社製
ワコーｒルＣ−２００，≠００ｄ）にのせ、クロロホル
ムで展開し、次にクロロボルム：メタノール（３：／）
の混合溶媒で展開溶出して、活性分画（分画番号２ｊ番
〜３６番、１０−／分画）を得た。この活性分画ｌコＱ
　ｃｄを減圧下で蒸発乾固し、淡黄色粉末２００Ｗを得
た。これをさらにクロロホルムで充填したシリカゲルの
カラム（／３０ｄ）にのせ、クロロホルムで展開シ、次
にクロロホルム：メタノール（ｊ：／）、クロロホルム
；メタノール（３：ｌ）のａ合ｍ媒を用いて順次展開溶
出した。この活性区分３０．ｄを減圧下で濃縮し、酢酸
エチルを加えることによって得られた沈殿をｒ別し、乾
燥して抗生物質４ｔ４ｔ６−５３−／の白色粉末／♂０
１１１ｉ＋を得た。このものの理化学的性質は次の通り
であった。

（１）元素分析値 ｃ　　ｔｉｔｓｏ％、　Ｈよ≠り％、　　０　３３．７
／％。

Ｎ　　／２．３０チ。

（２）分子量 二次イオンマススペクトル（Ｓ　ｌ　−ＭＳ　）分析に
おいて、 質量数３７０に（Ｍ十Ｈ）”、 ３９２に（Ｍ＋Ｎａ）”、ｂｏｘに（’Ｍ十Ｋ）＋−が
観測されることより分子量はｊ６りと結論される。

（３）　　融　点： ／７３−１７６℃ （４）紫外線吸収スペクトル： メタノール中での吸収極大（λＭｅＧ−１０ｍ（ｔ））
ａｘ は２／グ（／ｌｓ、２００　）　、　２！７　（肩７ざ
００）を示す。第１図のとおりである。また、水溶液、
θ、／規定塩酸、および０−　／規定水酸化す）　１７
ウム水溶液中での紫外部吸収スペクトルは、特徴的な吸
収極大を示さず、末端吸収を示すのみである。

（５）　　赤外部吸収スペクトル： にＢ「で測定した赤外部吸収スペクトラムは第２図に示
す通りである。吸収極大を示す波長はつぎの通りである
。単位は傷　。３４ｔ００　。

２ｑ、ｑＯ，／ｂ♂０．／！／！；、／、２７θｌ／１
０θ。

（６）溶剤に対する溶解性： 水、およびメタノールにきわめてよく溶け、エタノール
、アセトンに溶け、クロロホルムにやや溶け、酢酸エチ
ル、ベンゼン　ｊｌ　−Ｑキサンに不溶である。

（７）呈色反応： （＠性）過マンガフ酸カリウム反応、 モーリッシュ反応 （陰性）アンスロン反応、 アニリン水素フタル酸塩反応、 塩化第二鉄反応、ニンヒドリン反応 （８）塩基性、中性、酸性の区分： 塩基性 （９）　　物質の色： 白　　色 Ｑｌ）　　Ｒｆ値ニ ジリカグル薄層クロマドグ２フィー（メルク社製ＴＬＣ
グレート、シリカゲル”　”　２５４ζ厚さ０．．２６
ｍｍ）を通常の方法で行なった時のＲｆ値は、〃の）−
おりである。

Ｒｆ値 （（）　　ｐｏロホルム：メタノール（、！：／）　　
　　　　０．１Ａ３（ロ）ベンゼン　　：メタノール（
，２：／）　　　　　　０．２／（ハ）　ｎ−ブタノー
ル：酢酸：水（３：パ／）　　　　０．１Ａ３（１１）
　　酸加水分解物中にウラシルおよびり・シンが存在す
る。

（ｌｅ１＋ＮｖＲ（≠００ＭＨｚ　、　Ｄ、Ｏ）　　δ
（ｐｐｍ）；／、３７Ｃ／Ｈ）、／、１．≠（／Ｈ）、
／、７ｆ（／＋）。

／、１≠（／　Ｈ）　、　／、りＪ（／Ｈ）、、２．０
（７（／Ｈ）。

３．３（／Ｈ）、３．３２Ｃ３Ｈ，ｓ）、３．７７（／
Ｈ，ｔ）　。

１Ａ２３（／Ｈ）、１ＡｔＡ（／Ｈ，ｔ）、１ＡｊＯＣ
／Ｈ，ｔ）。

弘５３（／Ｈ）　、ｌＡ＋ｌ−（／Ｈ）　、４’、ノＯ
Ｃ／Ｈ）。

１ｍ／Ｈ，ｄ）、ｉ’；＃（／Ｈ，ｄ）、！ｒＪＩ（／
Ｈ，ｄ）。

乙、ｏｔｔ（／Ｈ）、７７１ＣｔＨ，ｄ）。

０４　１３ＣＮＭＲ（／　ＯＯＭＨｚ　−０２０）　　
δ（ｐｐｍ）：、２ざ：ｌ’（ｔ）、、２ｆ、６／（ｔ
）、３７．３３（ｔ）。

弘１３３Ｃｔ）、！；３．ｌ０Ｃｄ＞、３と７０（ｑ）
。

６２．７２Ｃｄ）、６よ７．２（ｄ）、７．２．♂０（
ｄ）。

シＡ、Ｌ２（ｄ）、７ｇ、り７（ｄ）、Ｉ２．３９（ｄ
）。

９０．７１（ｄ）、１００．００Ｃｄ）、１ＯＬＩＡＩ
Ｃｄ）。

１０Ｚ７．２Ｃｄ）、／！／、Ｌｊ−（ｄ）、／ＬＺθ
ｇ（ｓ）。

／ｊ乙乙、２（ｓ　）’、／６７．７≠（ｓ　）、Ｉ６
６．３０Ｃｓ　）　。

Ｉ７３．２θ（Ｓ）、Ｉ７６．４ｔ７（ｓ）。

使用例　一 種菌として、使用例／の培地で培養した種培養液の２−
を予め滅菌した弘Ｏチシュークロース水溶液２−の入っ
たスクリュープラグ付試験管に加えて混合し、−２０℃
に凍結保存したものを用いた。この種培養液を室温に戻
し１使用例／の培地１００ｔｔが入ったｊ　００　ｇｓ
ｌ容エルＬ／７？イヤー７ラスコに接種し、２ｆ℃で７
日間振盪培養した。

この種培養液を１００−の培地が入った３００ｗｔ１容
エルレンマイヤ−７２スコｊＯ本に各３’１６の制合で
接種し、２ｇ℃で６日間振盪培養を行なった。

この場合、培地としては、グリセロール２θチ。

グルコースＯ１ｊチ、ポリペプトン０．６Ｔｏ、牛肉エ
キス０．４−チ、塩化ナトリウム０．３−の組成のもの
を−６，りにｉｉｉ！ＩＩした後、／、２／℃で７５分
間滅菌して用いた。

得られた培養物よ０１を遠心分離し、培養上清を得た。

これをダイヤイオンＨＰ２０ｔＭＷｊのカラム（ｊＯＯ
ｇｎｌ）に通して目的物質を吸着させ、水洗後、／、Ｓ
ｔのｊＯチ含水アセトンで溶出して、得られた活性区分
５．５′Ｏ−を減圧下で蒸留してアセトンを留去し、そ
の後、凍結乾燥して褐色粉末３、３　ｇを得た。これを
メタノールに溶かしてクロロホルムで充填したンリカｒ
ルのカラム（７０ＣＷ）にのせ、クロロホルムで展開し
、次にりａロホルＡ：／／／−ｂ（ｓ：ｔ）、クワロホ
ルム：メタノール（３：ｌ）の混合溶媒を用いて順に展
開溶出し、活性分画（分画番号２１０番〜２ｔＯ番。

２０−／分画）を得た。この活性分画を減圧下で濃縮し
、酢酸エチルを・加えることによって得られた白色沈殿
を戸別し、減圧下で乾燥することにより淡黄色粉末ａり
Ｏｇを得た。これを水に溶かして声を７．３に調整した
後、弱酸性陽イオン交換樹脂７ンパー２イトｃａ−ｓｏ
（水素型、２ｓＯｖｚ）に通して目的物質を吸着させた
。次に、水で洗浄し、さらに０．０ＪＮ＝塩酸で溶出し
、活性区分３３０−を得た。得られた活性区分を減圧下
で２０−まで濃縮し、これを水で充填したトヨパールＨ
Ｗ−≠ＯＦのカラム（３≠／）ｖ）にのせ、水で展開溶
出し、活性区分ｊ０−を得た。これを凍結乾燥し、抗生
物質４１４６−３．？−／の白色粉末　　”３７０９−
を得た。このものの理化学的性質は前記の理化学的性質
と一致した。

上記抗生物質４４６−５３−／の生物学的性質は次の如
くである。

（υ抗菌性 日本化学療法学会制定の方法〔最小発育阻止濃度（ＭＩ
Ｇ）測定法再改訂について（クモセラピー、コタ、７＆
−７２，／９ざ／）〕に準じて、寒天希釈法によって測
定したバクテリアに対する最小発育阻止！＆（ＭＩＧ）
は第２表のとおりである。

なお、アスベルジ２ス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓｏｒｙｚａｅ　　）　ｌ　ＦＯ！；２３り、−１！ニ
シリクム・クリツク９すＡ　（Ｐｅｎｌｃｌｌｌｌｕｍ
　　ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ　）ＡＴＣＣ／θθ０２　
　、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｌｄ６　　ａｌ
ｂｌｃａｎｓ　）　３　／　ｌＩ−７及びサツカロ之セ
ス・セレビシェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅ
ｖｌｓｌａｅ　）　　ｌ　Ｆ　ＯＯ，２０ｊ　　などの
真菌に対する最小発育阻止濃度はいずれもｔ　００　ｍ
ｃｇ／−以上である。

（２）毒性 プラスの静脈内に生理食塩水溶液を投与した場合、／　
、０００　ｒｌ＃ｇ／に！９で全く毒性を示さなかった
。

以上の如く抗生物質≠≠Ａ−３３−／は主として連鎖状
球菌および抗酸性菌に有効であり、毒性は極めて少ない
ので、ヒト、動物などの感染症の治療薬その他の用途が
期待される。

上記の理化学的性質および生物学的性質を既知抗生物質
のそれらと比較した結果、該当する物質が見当たらない
ので、抗生物質グ≠６−５３−／を新抗生物質と判定し
た。

更に、１Ｈ−ＮＭＲ，１３Ｃ−ＮＭＲおよび酸加水分解
物のアミノ酸分析により、抗生物質≠ｕ　６　　Ｓ　３
−　／　ＧＡ　ｔ　５　シル基を含み、又リジン単位の
残基金含有する、いわゆるヌクレオシド抗生物質である
ことが確認された。一方、既知のヌクレオシド抗生物質
の中には、リジンを含む物質は存在しないことからｌＩ
ｔ≠６−９３−／は新規な　　　゛抗生物質と判定し得
る。、

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質、≠≠Ａ−８３−／の紫外線吸収スペ
クトル（メタノール中で測ｇ）ヲ、第２図は赤外線吸収
スペクトルＣＫＢｒ法〕を示す。 第１図 波長ｃ面） ｔ／夕ｉｇ 手Ｖｔ補正書 昭和　　年５９・１用２３　日 １、事件の表示　　　　昭和５９年特許願第１２６７６
５号３、補正をする者 事件との関係　　出　願　人 名　称　　　　関東医師製薬株式会社 ４、代理人 ６、補正の対象　　　　明細書の発明の詳細な説明の欄
／／Ｐ−，、 （１１明細書第２０頁第１１〜１５行の“また、・・・
・・示すのみである。”を削除する。 （２１同書第２１頁第１３行の゛塩基性”を「弱酸性」
に訂正する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 抗生物質４４６−Ｓ３−１を生産する能力のあるストレ
   プトミセス・グリセウス・４４６−Ｓ３微工研菌寄第７
   ４１６号。