JPS6225356B2 - - Google Patents
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- JPS6225356B2 JPS6225356B2 JP22748682A JP22748682A JPS6225356B2 JP S6225356 B2 JPS6225356 B2 JP S6225356B2 JP 22748682 A JP22748682 A JP 22748682A JP 22748682 A JP22748682 A JP 22748682A JP S6225356 B2 JPS6225356 B2 JP S6225356B2
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- keto
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Description
本発明はケノデオキシコール酸（正しくは３
α・７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）
（CDC）から利胆剤ウルソデオキシコール酸
（UDC）の合成原料として有用な製造中間体であ
る７−ケト−３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸
（以下、本明細書において７−ケトコール酸又は
７−ケト体と略称することがある）を微生物を用
いて製造する方法に関する。 従来、ケノデオキシコール酸を原料として
UDCを合成する方法として、ケノデオキシコー
ル酸の７位のα−ヒドロキシル基をβ−ヒドロキ
シル基とするために、ケノデオキシコール酸を選
択的に酸化して７−ケト体とした後水素化する方
法などが知られている。しかしながら、これらの
方法は当然の事乍ら各反応段階において反応性や
選択性の問題があり、収率や得られる製品の純度
などの点で必ずしも満足出来るものではなかつ
た。 本発明者等はかかる現状に鑑み、ケノデオキシ
コール酸からその７−ケト体を微生物を用いて製
造する方法の可能性について鋭意研究を進めた結
果、シユードモナス属に属する微生物が７−ケト
体生産能を有することを見出し本発明をするに至
つた。 即ち、本発明に従えば、シユウドモナス属に属
する７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸生産能
を有する微生物をケノデオキシコール酸を含む栄
養培地で培養して培養物中に７−ケト−３α−ヒ
ドロキシコラン酸を生成せしめ、これを採取する
ことから成る７−ケト−３α−ヒドロキシコラン
酸の製造法が提供される。 本発明者等は神奈川県綾瀬市内の土壌よりケノ
デオキシコール酸を含む培地で７−ケト体を生産
する能力を有する菌を分離することに成功し、こ
の菌株をシユウドモナス（Pseudomonas）SD−
102と命名し、昭和57年12月17日工業技術院微生
物工業技術研究所に寄託（微生研菌寄第6842号）
した。 土壌中よりの菌の分離は次の方法によつた。 土壌を１％のケノデオキシコール酸ナトリウム
を含む肉汁液体培地に少量懸濁し、35℃、48時間
集積培養を行ない、得られた培養液の１白金耳量
を１％のケノデオキシコール酸ナトリウムを含む
肉汁寒天平板培地に画線培養し、菌株を純粋分離
した。これらの菌株を、各々１％のケノデオキシ
コール酸ナトリウムを含む肉汁液体培地で８〜72
時間培養し、その培養液中の７−ケト体の定量を
行ない、７−ケト体の変換能の高い菌株を得た。 この菌の菌学的性質は以下の通りであり、これ
らの試験及び分類方法はバージエイズ・マニユア
ル・オブ・デイターミネイテイブ・バクテリオロ
ジー第７版及び第８版に準拠し、既知の菌株の菌
学的性質との対比からシユウドモナス属に属する
菌株であると同定した。更にこの菌の菌学的性質
を既知の菌株の中で最も近似するシユウドモナ
ス・ストツツエリ（Pseudomonas stutzeri）
IAM12097の菌学的性質と比較すると次表の通り
である。この表に示した菌学的性質に基づき、シ
ユウドモナスSD−102の菌株は、その形態、グラ
ム染色、培養所見及び生理学的性質などから、バ
ージエイズ・マニユアル・オブ・デイターミネイ
テイブ・バクテリオロジー第７版及び第８版に基
づき、シユウドモナス・ストツツエリに近縁の菌
株であると同定された。しかしながら、シユウド
モナス・ストツツエリIAM12097とシユウドモナ
スSD−102とは、コール酸の資化性、デンプンの
加水分解性、OFテスト並びに糖類の酸化性の点
で相違するので新菌株であると断定した。 シユウドモナスSD−102の菌学的性質 １ 顕微鏡（含電顕）所見 グラム染色：陰性 形態：桿菌 大きさ：0.75〜0.80×1.25〜2.00μｍ 多形性：なし 運動性：あり 鞭毛：単鞭毛（極鞭毛と思われる） 胞子：なし 集合形態：単一で存在。 ２ 培養所見 肉汁寒天平板：３日間の培養で３mm径程のコ
ロニー。白色ほぼ円形。平担で湿つており
光択あり。周縁は波状。 肉汁寒天斜面：白色で湿り気が多い。 肉汁液体：うすく白濁。白色の沈渣。 肉汁ゼラチン穿刺：表面でよく生育。液化し
ない。 BCPミルク：アルカリ性。ミルクは変化な
し。 ３ 生理学的性質 硝酸塩の還元：＋ 脱窒反応：＋ MRテスト：− VPテスト：− インドールの生成：− 硫化水素の生成（クリグラー培地）：± デンプンの加水分解：− クエン酸の利用（コーザー培地）：＋ 〃 （クリステンセン培地）：＋ 硝酸（NO− ３）の利用：＋ アンモニア（NH＋ ４）の利用：＋ 色素の生成：− ウレアーゼ：− オキシダーゼ：＋ カタラーゼ：＋ 生育の範囲（PH）：５〜11 （温度）：10℃〜40℃ 酸素に対する態度：好気的 OFテスト：− コール酸の資化能：＋ ４ 糖類などの酸化とガス発生
α・７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）
（CDC）から利胆剤ウルソデオキシコール酸
（UDC）の合成原料として有用な製造中間体であ
る７−ケト−３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸
（以下、本明細書において７−ケトコール酸又は
７−ケト体と略称することがある）を微生物を用
いて製造する方法に関する。 従来、ケノデオキシコール酸を原料として
UDCを合成する方法として、ケノデオキシコー
ル酸の７位のα−ヒドロキシル基をβ−ヒドロキ
シル基とするために、ケノデオキシコール酸を選
択的に酸化して７−ケト体とした後水素化する方
法などが知られている。しかしながら、これらの
方法は当然の事乍ら各反応段階において反応性や
選択性の問題があり、収率や得られる製品の純度
などの点で必ずしも満足出来るものではなかつ
た。 本発明者等はかかる現状に鑑み、ケノデオキシ
コール酸からその７−ケト体を微生物を用いて製
造する方法の可能性について鋭意研究を進めた結
果、シユードモナス属に属する微生物が７−ケト
体生産能を有することを見出し本発明をするに至
つた。 即ち、本発明に従えば、シユウドモナス属に属
する７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸生産能
を有する微生物をケノデオキシコール酸を含む栄
養培地で培養して培養物中に７−ケト−３α−ヒ
ドロキシコラン酸を生成せしめ、これを採取する
ことから成る７−ケト−３α−ヒドロキシコラン
酸の製造法が提供される。 本発明者等は神奈川県綾瀬市内の土壌よりケノ
デオキシコール酸を含む培地で７−ケト体を生産
する能力を有する菌を分離することに成功し、こ
の菌株をシユウドモナス（Pseudomonas）SD−
102と命名し、昭和57年12月17日工業技術院微生
物工業技術研究所に寄託（微生研菌寄第6842号）
した。 土壌中よりの菌の分離は次の方法によつた。 土壌を１％のケノデオキシコール酸ナトリウム
を含む肉汁液体培地に少量懸濁し、35℃、48時間
集積培養を行ない、得られた培養液の１白金耳量
を１％のケノデオキシコール酸ナトリウムを含む
肉汁寒天平板培地に画線培養し、菌株を純粋分離
した。これらの菌株を、各々１％のケノデオキシ
コール酸ナトリウムを含む肉汁液体培地で８〜72
時間培養し、その培養液中の７−ケト体の定量を
行ない、７−ケト体の変換能の高い菌株を得た。 この菌の菌学的性質は以下の通りであり、これ
らの試験及び分類方法はバージエイズ・マニユア
ル・オブ・デイターミネイテイブ・バクテリオロ
ジー第７版及び第８版に準拠し、既知の菌株の菌
学的性質との対比からシユウドモナス属に属する
菌株であると同定した。更にこの菌の菌学的性質
を既知の菌株の中で最も近似するシユウドモナ
ス・ストツツエリ（Pseudomonas stutzeri）
IAM12097の菌学的性質と比較すると次表の通り
である。この表に示した菌学的性質に基づき、シ
ユウドモナスSD−102の菌株は、その形態、グラ
ム染色、培養所見及び生理学的性質などから、バ
ージエイズ・マニユアル・オブ・デイターミネイ
テイブ・バクテリオロジー第７版及び第８版に基
づき、シユウドモナス・ストツツエリに近縁の菌
株であると同定された。しかしながら、シユウド
モナス・ストツツエリIAM12097とシユウドモナ
スSD−102とは、コール酸の資化性、デンプンの
加水分解性、OFテスト並びに糖類の酸化性の点
で相違するので新菌株であると断定した。 シユウドモナスSD−102の菌学的性質 １ 顕微鏡（含電顕）所見 グラム染色：陰性 形態：桿菌 大きさ：0.75〜0.80×1.25〜2.00μｍ 多形性：なし 運動性：あり 鞭毛：単鞭毛（極鞭毛と思われる） 胞子：なし 集合形態：単一で存在。 ２ 培養所見 肉汁寒天平板：３日間の培養で３mm径程のコ
ロニー。白色ほぼ円形。平担で湿つており
光択あり。周縁は波状。 肉汁寒天斜面：白色で湿り気が多い。 肉汁液体：うすく白濁。白色の沈渣。 肉汁ゼラチン穿刺：表面でよく生育。液化し
ない。 BCPミルク：アルカリ性。ミルクは変化な
し。 ３ 生理学的性質 硝酸塩の還元：＋ 脱窒反応：＋ MRテスト：− VPテスト：− インドールの生成：− 硫化水素の生成（クリグラー培地）：± デンプンの加水分解：− クエン酸の利用（コーザー培地）：＋ 〃 （クリステンセン培地）：＋ 硝酸（NO− ３）の利用：＋ アンモニア（NH＋ ４）の利用：＋ 色素の生成：− ウレアーゼ：− オキシダーゼ：＋ カタラーゼ：＋ 生育の範囲（PH）：５〜11 （温度）：10℃〜40℃ 酸素に対する態度：好気的 OFテスト：− コール酸の資化能：＋ ４ 糖類などの酸化とガス発生
【表】
シユードモナス・ストツツエリIAM12097の
菌学的性質 １ 顕微鏡（含電顕）所見 グラム染色：陰性 形態：桿菌 大きさ：0.5〜1.0×1.0〜1.8μｍ 多形性：なし 運動性：あり 鞭毛：単極鞭毛 胞子：なし 集合形態：単一で存在。 ２ 培養所見 肉汁寒天平板：48時間で４mm程のコロニーに
なる。白色で中心部は微褐色。平担な円形
で波状の周縁。光択あり湿潤。 肉汁寒天斜面：白色。 肉汁液体：うすく白濁。白色の沈渣 肉汁ゼラチン穿刺：糸状に生育、ゼラチンを
液化せず。 BCPミルク：アルカリ性。ミルクは変化な
し。 ３ 生理学的性質 硝酸塩の還元：＋ 脱窒反応：＋ MRテスト：− VPテスト：− インドールの生成：− 硫化水素の生成（クリグラー培地）：− デンプンの加水分解：＋ クエン酸の利用（コーザー培地）：＋ 〃 （クリステンセン培地）：＋ 硝酸（NO− ３）利用：＋ アンモニア（NH＋ ４）の利用：＋ 色素の生成：− ウレアーゼ：− オカシダーゼ：＋ カタラーゼ：＋ 生育の範囲（PH）：６〜10 （温度）：10℃〜40℃ 酸素に対する態度：好気的 OFテスト：０ コール酸の資化能：− ４ 糖類などの酸化とガス発生
菌学的性質 １ 顕微鏡（含電顕）所見 グラム染色：陰性 形態：桿菌 大きさ：0.5〜1.0×1.0〜1.8μｍ 多形性：なし 運動性：あり 鞭毛：単極鞭毛 胞子：なし 集合形態：単一で存在。 ２ 培養所見 肉汁寒天平板：48時間で４mm程のコロニーに
なる。白色で中心部は微褐色。平担な円形
で波状の周縁。光択あり湿潤。 肉汁寒天斜面：白色。 肉汁液体：うすく白濁。白色の沈渣 肉汁ゼラチン穿刺：糸状に生育、ゼラチンを
液化せず。 BCPミルク：アルカリ性。ミルクは変化な
し。 ３ 生理学的性質 硝酸塩の還元：＋ 脱窒反応：＋ MRテスト：− VPテスト：− インドールの生成：− 硫化水素の生成（クリグラー培地）：− デンプンの加水分解：＋ クエン酸の利用（コーザー培地）：＋ 〃 （クリステンセン培地）：＋ 硝酸（NO− ３）利用：＋ アンモニア（NH＋ ４）の利用：＋ 色素の生成：− ウレアーゼ：− オカシダーゼ：＋ カタラーゼ：＋ 生育の範囲（PH）：６〜10 （温度）：10℃〜40℃ 酸素に対する態度：好気的 OFテスト：０ コール酸の資化能：− ４ 糖類などの酸化とガス発生
【表】
本発明方法に従えば、シユウドモナス属に属す
る７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸生産能を
有する微生物をケノデオキシコール酸を含む栄養
培地で培養することにより７−ケト−３α−ヒド
ロキシコラン酸を生成せしめる。栄養培地中のケ
ノデオキシコール酸濃度には特に限定はないが、
目的７−ケト体の収量、培養条件及び経済的観点
から一般には５〜500ｇ／、好ましくは40〜300
ｇ／の濃度とする。 本発明方法において使用することのできる培地
としては、前記微生物が培養により増殖し得るも
のであれば任意のものでよく、例えば、炭素源と
しては、ケノデオキシコール酸塩、グルコース、
フラクトース、マンノース、マルトース、シユク
ロース、エチルアルコール、グリセリン、酢酸な
ど、窒素源としては、ペプトン、肉エキス、酵母
エキス、コーンステープリカー等の有機窒素、硫
酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸ナトリ
ウム等の無機窒素が用いられる。また、このほか
にリン酸２水素カリウム、リン酸水素２カリウ
ム、硫酸第１鉄、硫酸マンガンなどの無機塩が添
加される。 本発明方法における培養は好気的条件下に、例
えば通気撹拌や往復振盪方法によつて培養するこ
とができる。培養条件は、特に限定はないが、一
般的に言えば、温度25〜40℃、PH6.0〜9.0及び20
〜96時間程度の条件で実施する。 培養液又は培養物からの目的の７−ケト体の採
取方法は慣用方法に従つて行うことができる。例
えば、培養液を遠心分離し、上清を希塩酸で酸性
にしたのち、酢酸エチルで抽出する。溶媒を留去
して生成物を集め、メチルアルコールに溶解後加
熱還流してメチルエステル化し、冷却して結晶
化、再結晶化して精製し、これを加水分解して目
的物を得る。 以下に本発明の実施例を説明するが、本発明の
範囲をこれらの実施例に限定するものでないこと
はいうまでもない。 実施例 １ シユウドモナスSD−102を下記の方法で培養し
た。 ケノデオキシコール酸10ｇ、水酸化ナトリウム
1.2ｇ、酵母エキス１ｇ、硫酸マグネシウム・７
水和物0.5ｇ、リン酸水素２カリウム５ｇ、リン
酸２水素カリウム２ｇ及び硝酸アンモニウム４ｇ
に水1000mlを加え、培地とした。この培地３を
５ジヤーフアーメンターに入れ、121℃で60分
間上記殺菌を行なつた。 あらかじめ500ml坂口フラスコに上記培地と同
一組成の培地100mlを入れて30℃で２日間振盪培
養して増殖させた培養液200mlを無菌的に遠心分
離して得たシユウドモナスSD−102菌体を上記ジ
ヤーフアーメンターに接種し、400rpm、30℃及
び通気量0.5／minの培養条件下で５日間培養
した。このようにして得た培養液１を遠心分離
し、菌体を沈澱させ、上清を得た。この上清に希
塩酸（１：１）を加えて塩酸酸性としケノデオキ
シコール酸の酸化生成物及びケノデオキシコール
酸の固形物を析出させ、濾集した。 濾液を酢酸エチル300mlで３回抽出し、酢酸エ
チル抽出液を合せ、40℃以下で減圧濃縮した。得
られた固形物と先に濾集した固形物との合計量は
10.17ｇであつた。 この固形物の一部をとり、１％酢酸溶液とし
Kiesegel60Fを用いて薄層クロマトグラフイーを
行ない生じたスポツトを標品３−ヒドロキシ−７
−ケト−５β−コラン酸及びケノデオキシコール
酸のスポツトと比較したところ、同一の位置に同
色の発色を示した。また、３−ヒドロキシ−７−
ケト−５β−コラン酸の部分に相当する化合物を
分取し、この化合物を下記の方法で３α−ヒドロ
キシ−７−ケト−５β−コラン酸と同定した。 (イ) 薄層クロマトグラフイーによる同定 (A) １％酢酸溶液３μをKiesegel60Fにスポ
ツトし、風乾後ベンゼン：ジオキサン：酢酸
（75：20：２）の組成の展開溶剤を用いて10
cm展開した。乾燥後、５％硫酸水溶液を噴霧
し、120℃で10分間加熱したところ、標品３
α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン酸
と同一位置に、同色のスポツトがみられた。 (B) 展開溶媒としてイソオクタン：酢酸エチ
ル：酢酸（10：10：２）を用い(A)と同様に展
開、発色させたところ、標品３α−ヒドロキ
シ−７−ケト−５β−コラン酸と同一位置に
同色のスポツトがみられた。 (ロ) 液体クロマトグラフイーによる同定 シヨーデツクスODS−F411カラム（昭和電
工(株)製）を備えた高速液体クロマトグラフイー
に、上記抽出液を15μ注入し、移動相として
メタノール／H2O／H3PO4（75／25／0.02M重
量比）の混合液を流速１ml／minで流し、検出
をRIで行なつた。 得られた結果を標品３α−ヒドロキシ−７−
ケト−５β−コラン酸と比較したところ、同一
のリテンシヨンタイムを示した。また、１％酢
酸溶液に標品３α−ヒドロキシ−７−ケト−５
β−コラン酸を0.5％となる様に加えて溶解さ
せ、前記と同様にして高速液体クロマトグラフ
イーに注入し展開させたところ、標品３α−ヒ
ドロキシ−７−ケト−５β−コラン酸が示すリ
テンシヨンタイムの位置に一つのピークが得ら
れた。 液体クロマトグラムの面積比から得られた３
α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン酸及
びケノデオキシコール酸の相対比を等出したと
ころ以下の通りであつた。 面積百分率（％） ３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン酸
30.5 ケトデオキシコール酸 69.5 その他のケノデオキシコール酸の酸化生成物の
合計 ０ 実施例 ２ シユウドモナスSD−102を下記の方法で培養し
た。 ケノデオキシコール酸10ｇ、水酸化ナトリウム
1.2ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス５ｇ、硫酸マ
グネシウム・７水和物0.5ｇ、リン酸水素２カリ
ウム５ｇ及びリン酸２水素カリウム２ｇに、水
1000mlを加えて、これを培地とした。この培地10
mlを24mmφ試験管に分注し、121℃で15分間蒸気
殺菌を行なつた。 あらかじめ、ケノデオキシコール酸５ｇ、水酸
化ナトリウム0.6ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス
５ｇ及び寒天15ｇに水1000mlを加え、121℃で15
分間蒸気殺菌を行ない、無菌的に準備した平板培
地上に生育させたシユウドモナスSD−102菌を、
上記の24mmφ試験管中の培地に１白金耳接種し、
30℃で３日間浸盪培養を行なつた。培養後、得ら
れた培養液を遠心分離機にかけ、菌体を沈澱さ
せ、上清と分離した。上清に希塩酸を加えること
により白色沈澱として析出したケノデオキシコー
ル酸の酸化生成物及びケノデオキシコール酸を酢
酸エチル10mlで抽出した。この抽出液をそのまま
実施例１に述べた薄層クロマトグラフイー及び液
体クロマトグラフイーと、同様の方法で分析した
ところ、結果は以下の通りであつた。
る７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸生産能を
有する微生物をケノデオキシコール酸を含む栄養
培地で培養することにより７−ケト−３α−ヒド
ロキシコラン酸を生成せしめる。栄養培地中のケ
ノデオキシコール酸濃度には特に限定はないが、
目的７−ケト体の収量、培養条件及び経済的観点
から一般には５〜500ｇ／、好ましくは40〜300
ｇ／の濃度とする。 本発明方法において使用することのできる培地
としては、前記微生物が培養により増殖し得るも
のであれば任意のものでよく、例えば、炭素源と
しては、ケノデオキシコール酸塩、グルコース、
フラクトース、マンノース、マルトース、シユク
ロース、エチルアルコール、グリセリン、酢酸な
ど、窒素源としては、ペプトン、肉エキス、酵母
エキス、コーンステープリカー等の有機窒素、硫
酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸ナトリ
ウム等の無機窒素が用いられる。また、このほか
にリン酸２水素カリウム、リン酸水素２カリウ
ム、硫酸第１鉄、硫酸マンガンなどの無機塩が添
加される。 本発明方法における培養は好気的条件下に、例
えば通気撹拌や往復振盪方法によつて培養するこ
とができる。培養条件は、特に限定はないが、一
般的に言えば、温度25〜40℃、PH6.0〜9.0及び20
〜96時間程度の条件で実施する。 培養液又は培養物からの目的の７−ケト体の採
取方法は慣用方法に従つて行うことができる。例
えば、培養液を遠心分離し、上清を希塩酸で酸性
にしたのち、酢酸エチルで抽出する。溶媒を留去
して生成物を集め、メチルアルコールに溶解後加
熱還流してメチルエステル化し、冷却して結晶
化、再結晶化して精製し、これを加水分解して目
的物を得る。 以下に本発明の実施例を説明するが、本発明の
範囲をこれらの実施例に限定するものでないこと
はいうまでもない。 実施例 １ シユウドモナスSD−102を下記の方法で培養し
た。 ケノデオキシコール酸10ｇ、水酸化ナトリウム
1.2ｇ、酵母エキス１ｇ、硫酸マグネシウム・７
水和物0.5ｇ、リン酸水素２カリウム５ｇ、リン
酸２水素カリウム２ｇ及び硝酸アンモニウム４ｇ
に水1000mlを加え、培地とした。この培地３を
５ジヤーフアーメンターに入れ、121℃で60分
間上記殺菌を行なつた。 あらかじめ500ml坂口フラスコに上記培地と同
一組成の培地100mlを入れて30℃で２日間振盪培
養して増殖させた培養液200mlを無菌的に遠心分
離して得たシユウドモナスSD−102菌体を上記ジ
ヤーフアーメンターに接種し、400rpm、30℃及
び通気量0.5／minの培養条件下で５日間培養
した。このようにして得た培養液１を遠心分離
し、菌体を沈澱させ、上清を得た。この上清に希
塩酸（１：１）を加えて塩酸酸性としケノデオキ
シコール酸の酸化生成物及びケノデオキシコール
酸の固形物を析出させ、濾集した。 濾液を酢酸エチル300mlで３回抽出し、酢酸エ
チル抽出液を合せ、40℃以下で減圧濃縮した。得
られた固形物と先に濾集した固形物との合計量は
10.17ｇであつた。 この固形物の一部をとり、１％酢酸溶液とし
Kiesegel60Fを用いて薄層クロマトグラフイーを
行ない生じたスポツトを標品３−ヒドロキシ−７
−ケト−５β−コラン酸及びケノデオキシコール
酸のスポツトと比較したところ、同一の位置に同
色の発色を示した。また、３−ヒドロキシ−７−
ケト−５β−コラン酸の部分に相当する化合物を
分取し、この化合物を下記の方法で３α−ヒドロ
キシ−７−ケト−５β−コラン酸と同定した。 (イ) 薄層クロマトグラフイーによる同定 (A) １％酢酸溶液３μをKiesegel60Fにスポ
ツトし、風乾後ベンゼン：ジオキサン：酢酸
（75：20：２）の組成の展開溶剤を用いて10
cm展開した。乾燥後、５％硫酸水溶液を噴霧
し、120℃で10分間加熱したところ、標品３
α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン酸
と同一位置に、同色のスポツトがみられた。 (B) 展開溶媒としてイソオクタン：酢酸エチ
ル：酢酸（10：10：２）を用い(A)と同様に展
開、発色させたところ、標品３α−ヒドロキ
シ−７−ケト−５β−コラン酸と同一位置に
同色のスポツトがみられた。 (ロ) 液体クロマトグラフイーによる同定 シヨーデツクスODS−F411カラム（昭和電
工(株)製）を備えた高速液体クロマトグラフイー
に、上記抽出液を15μ注入し、移動相として
メタノール／H2O／H3PO4（75／25／0.02M重
量比）の混合液を流速１ml／minで流し、検出
をRIで行なつた。 得られた結果を標品３α−ヒドロキシ−７−
ケト−５β−コラン酸と比較したところ、同一
のリテンシヨンタイムを示した。また、１％酢
酸溶液に標品３α−ヒドロキシ−７−ケト−５
β−コラン酸を0.5％となる様に加えて溶解さ
せ、前記と同様にして高速液体クロマトグラフ
イーに注入し展開させたところ、標品３α−ヒ
ドロキシ−７−ケト−５β−コラン酸が示すリ
テンシヨンタイムの位置に一つのピークが得ら
れた。 液体クロマトグラムの面積比から得られた３
α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン酸及
びケノデオキシコール酸の相対比を等出したと
ころ以下の通りであつた。 面積百分率（％） ３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン酸
30.5 ケトデオキシコール酸 69.5 その他のケノデオキシコール酸の酸化生成物の
合計 ０ 実施例 ２ シユウドモナスSD−102を下記の方法で培養し
た。 ケノデオキシコール酸10ｇ、水酸化ナトリウム
1.2ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス５ｇ、硫酸マ
グネシウム・７水和物0.5ｇ、リン酸水素２カリ
ウム５ｇ及びリン酸２水素カリウム２ｇに、水
1000mlを加えて、これを培地とした。この培地10
mlを24mmφ試験管に分注し、121℃で15分間蒸気
殺菌を行なつた。 あらかじめ、ケノデオキシコール酸５ｇ、水酸
化ナトリウム0.6ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス
５ｇ及び寒天15ｇに水1000mlを加え、121℃で15
分間蒸気殺菌を行ない、無菌的に準備した平板培
地上に生育させたシユウドモナスSD−102菌を、
上記の24mmφ試験管中の培地に１白金耳接種し、
30℃で３日間浸盪培養を行なつた。培養後、得ら
れた培養液を遠心分離機にかけ、菌体を沈澱さ
せ、上清と分離した。上清に希塩酸を加えること
により白色沈澱として析出したケノデオキシコー
ル酸の酸化生成物及びケノデオキシコール酸を酢
酸エチル10mlで抽出した。この抽出液をそのまま
実施例１に述べた薄層クロマトグラフイー及び液
体クロマトグラフイーと、同様の方法で分析した
ところ、結果は以下の通りであつた。
【表】
酸
その他のケノデオキ ＋ ＋ 35.3
シコール酸の酸化生
成物
その他のケノデオキ ＋ ＋ 35.3
シコール酸の酸化生
成物
Claims (1)
- １ シユウドモナス属に属する７−ケト−３αヒ
ドロキシコラン酸生産能を有する微生物をケノデ
オキシコール酸を含む栄養培地で培養して培養物
中に７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸を生成
せしめ、これを採取することを特徴とする７−ケ
ト−３α−ヒドロキシコラン酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22748682A JPS59120097A (ja) | 1982-12-28 | 1982-12-28 | ７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22748682A JPS59120097A (ja) | 1982-12-28 | 1982-12-28 | ７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59120097A JPS59120097A (ja) | 1984-07-11 |
| JPS6225356B2 true JPS6225356B2 (ja) | 1987-06-02 |
Family
ID=16861636
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22748682A Granted JPS59120097A (ja) | 1982-12-28 | 1982-12-28 | ７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59120097A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107980060B (zh) * | 2017-01-09 | 2021-05-25 | 深圳市邦泰绿色生物合成研究院 | 一种3α-羟基-7氧代-5β-胆烷酸的制备方法及其制备用酶2 |
-
1982
- 1982-12-28 JP JP22748682A patent/JPS59120097A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS59120097A (ja) | 1984-07-11 |
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