JPS6225976A - γ―サイクロデキストリン合成酵素及びその製造法 - Google Patents
γ―サイクロデキストリン合成酵素及びその製造法Info
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- JPS6225976A JPS6225976A JP60167128A JP16712885A JPS6225976A JP S6225976 A JPS6225976 A JP S6225976A JP 60167128 A JP60167128 A JP 60167128A JP 16712885 A JP16712885 A JP 16712885A JP S6225976 A JPS6225976 A JP S6225976A
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、新規なγ−サイクロデキストリン合成酵素、
その製造法および該酵素を用いたＴ−サイクロデキスト
リンの製造法に関する。
その製造法および該酵素を用いたＴ−サイクロデキスト
リンの製造法に関する。
従来、サイクロデキストリンを合成する酵素はバチルス
属細菌においてその存在が知られている。
属細菌においてその存在が知られている。
すなわら、バチルス・マセランス（Ｒａｃｉｌｌｕｓｍ
ａｃｅｒａｎｓ）がα−サイクロデキストリンを主成分
とするサイクロデキストリンの混合物を生成する酵素を
生産すること（アミラーゼシンポジウムνｏ１．８．
（１９７３）、 ｐ、２１）、好アルカリ性バチルス属
細菌がβ−サイクロデキストリンを主成分とするサイク
ロデキストリンの混合物を生成する酵素を生産すること
（特公昭５３−３１２２３号公報）が知られている。こ
のようにα−およびβ−サイクロデキストリンを主成分
とする混合物を生成する酵素を生産する微生物について
は多くの文献に報告されているが、γ−サイクロデキス
トリンを主成分とするサイクロデキストリン混合物を生
成する酵素を生産する微生物については全く報告されて
いない。
ａｃｅｒａｎｓ）がα−サイクロデキストリンを主成分
とするサイクロデキストリンの混合物を生成する酵素を
生産すること（アミラーゼシンポジウムνｏ１．８．
（１９７３）、 ｐ、２１）、好アルカリ性バチルス属
細菌がβ−サイクロデキストリンを主成分とするサイク
ロデキストリンの混合物を生成する酵素を生産すること
（特公昭５３−３１２２３号公報）が知られている。こ
のようにα−およびβ−サイクロデキストリンを主成分
とする混合物を生成する酵素を生産する微生物について
は多くの文献に報告されているが、γ−サイクロデキス
トリンを主成分とするサイクロデキストリン混合物を生
成する酵素を生産する微生物については全く報告されて
いない。
本発明者は、γ−サイクロデキストリンを特異的に合成
し、かつ、α−およびβ−サイクロデキストリンを生成
しない酵素を見い出すことができれば、γ−サイクロデ
キストリンの生産にきわめて有用な酵素になり得るとの
見地から、γ−サイク電」デキストリン合成酵素を生産
することのできる菌を求めて探索したところ、土壌中よ
り見出されたバチルス属に属するものと認められる一菌
株がＴ−サイクロデキストリンを特異的に合成し、かつ
α−およびβ−サイクロデキストリンを合成しない酵素
を生産すること、この酵素は従来のサイクロデキストリ
ン合成酵素の性状に比し明らかに相違する全く新しい酵
素であることを見出した。
し、かつ、α−およびβ−サイクロデキストリンを生成
しない酵素を見い出すことができれば、γ−サイクロデ
キストリンの生産にきわめて有用な酵素になり得るとの
見地から、γ−サイク電」デキストリン合成酵素を生産
することのできる菌を求めて探索したところ、土壌中よ
り見出されたバチルス属に属するものと認められる一菌
株がＴ−サイクロデキストリンを特異的に合成し、かつ
α−およびβ−サイクロデキストリンを合成しない酵素
を生産すること、この酵素は従来のサイクロデキストリ
ン合成酵素の性状に比し明らかに相違する全く新しい酵
素であることを見出した。
本発明は、上記新しい知見に基いて完成されたものであ
る。本発明は、下記の理化学的性質を有するγ−ザイク
ロデキストリン合成酵素Ａ（以下「本酵素ｊともいう）
、バチルス属に属するγ−サイクロデキストリン合成酵
素Ａ生産菌を培養し、培養物からγ−サイクロデキスト
リン合成酵素Ａを採取する方法および本酵素を用いてγ
−４４イクロデキストリンを製造する方法を提供するも
のである。
る。本発明は、下記の理化学的性質を有するγ−ザイク
ロデキストリン合成酵素Ａ（以下「本酵素ｊともいう）
、バチルス属に属するγ−サイクロデキストリン合成酵
素Ａ生産菌を培養し、培養物からγ−サイクロデキスト
リン合成酵素Ａを採取する方法および本酵素を用いてγ
−４４イクロデキストリンを製造する方法を提供するも
のである。
（１１作用および基質特異性：澱粉、アミロース、アミ
ｌ：Ｊペクチン、グリコーゲンなどからγ−ザイクロデ
キストリンを特異的に合成し、かつ、α−およびβ−サ
イクロデキストリンの生成は認められない。
ｌ：Ｊペクチン、グリコーゲンなどからγ−ザイクロデ
キストリンを特異的に合成し、かつ、α−およびβ−サ
イクロデキストリンの生成は認められない。
（２）作用ｐＨ範囲：ｐＨ４〜９（０，０２Ｍ緩衝液）
〔酢酸ナトリウム−酢＃Ｉ緩衝液（ｐｕ ４〜６）、１
１Ｊスー塩酸緩衝液（ｐＨ７〜８）、グリシン−塩化す
］・リウムー水酸化ナトリウム緩衝１（ｐｔ１９〜１０
）、５％可溶性澱粉中で、５０℃で６０分間反応〕。
〔酢酸ナトリウム−酢＃Ｉ緩衝液（ｐｕ ４〜６）、１
１Ｊスー塩酸緩衝液（ｐＨ７〜８）、グリシン−塩化す
］・リウムー水酸化ナトリウム緩衝１（ｐｔ１９〜１０
）、５％可溶性澱粉中で、５０℃で６０分間反応〕。
（３）最適作用ｐＨ： ｐＨ ８付近（測定方法は（２
）と同じ）（４）作用温度：約７５℃まで（０，０２Ｍ
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８） 、５％可溶性澱粉中で
、各温度で６０分間反応〕。
）と同じ）（４）作用温度：約７５℃まで（０，０２Ｍ
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８） 、５％可溶性澱粉中で
、各温度で６０分間反応〕。
（６）最適作用温度：約６５℃（測定方法は（４）と同
じ）（６）熱安定性： ０．０５ Ｍ ｌ−リス−塩酸
緩衝液（ｐＨ７）中で各温度で３０分間加熱し、残存活
性を測定した。その結果、本酵素は５０℃までの温度で
は殆んど失活が認められず、５５℃、３０分間の加熱で
約１９％失活し、６０℃、３０分間の加熱で約３７％失
活し、６５℃１３０分間の加熱で約７５％失活し、そし
て７０℃、３０分間の加熱でほぼ完全に失活する。
じ）（６）熱安定性： ０．０５ Ｍ ｌ−リス−塩酸
緩衝液（ｐＨ７）中で各温度で３０分間加熱し、残存活
性を測定した。その結果、本酵素は５０℃までの温度で
は殆んど失活が認められず、５５℃、３０分間の加熱で
約１９％失活し、６０℃、３０分間の加熱で約３７％失
活し、６５℃１３０分間の加熱で約７５％失活し、そし
て７０℃、３０分間の加熱でほぼ完全に失活する。
＋７１ｐ１１安定性：ｐ８６〜８で安定（０，１Ｍ緩衝
液０．１ｍｌに酵素液を添加し、全量を０．２ ｍ ｌ
として後、５０℃で３０分放置後、残存活性を測定した
）。
液０．１ｍｌに酵素液を添加し、全量を０．２ ｍ ｌ
として後、５０℃で３０分放置後、残存活性を測定した
）。
（８）精製方法：培養上澄液に３倍Ｙの冷アセトン（−
２０℃）を加えて生成する沈澱物を集め、０．０１Ｍの
トリス−塩酸緩衝液（ｐｔｌ ７．５ ）で透析し、前
記緩衝液で充分に平衡化したＣＭ−トヨパール（東洋曹
達ＯＳ製、商品名）に吸着させる。前記緩衝液で充分に
洗った後、０．１ Ｍ 危篤を含む前記緩衝液で溶出す
る。濃縮後、０．２Ｍ食塩を含む０．０５ Ｍ ）リス
−塩酸緩衝液（ｐＨ７）で充分に平衡化したセファクリ
ル１２００（ファルマシア社製、商品名）でゲル濾過を
行なうことにより、電気泳動的に争−のＴ−ザイクロデ
キスｉ・リン合成酵素へを得た。
２０℃）を加えて生成する沈澱物を集め、０．０１Ｍの
トリス−塩酸緩衝液（ｐｔｌ ７．５ ）で透析し、前
記緩衝液で充分に平衡化したＣＭ−トヨパール（東洋曹
達ＯＳ製、商品名）に吸着させる。前記緩衝液で充分に
洗った後、０．１ Ｍ 危篤を含む前記緩衝液で溶出す
る。濃縮後、０．２Ｍ食塩を含む０．０５ Ｍ ）リス
−塩酸緩衝液（ｐＨ７）で充分に平衡化したセファクリ
ル１２００（ファルマシア社製、商品名）でゲル濾過を
行なうことにより、電気泳動的に争−のＴ−ザイクロデ
キスｉ・リン合成酵素へを得た。
（９）分子量： ５ＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動
法により測定した結果、６４．０００という値が得られ
た。
法により測定した結果、６４．０００という値が得られ
た。
（Ｉ［ｌ１等電点：キャリヤーアンホライン（セルバ社
製セルパライト）を用いた電気泳動法により測定した結
果７．０５という値が得られた。
製セルパライト）を用いた電気泳動法により測定した結
果７．０５という値が得られた。
（１０力価測定法：１０％可溶性澱粉を含む０．０４
Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８） ０．５ ｍ ｌ！に
通計の酵素液を加え、蒸留水で余聞１ｍｌとし、５０℃
で６０分間反応させた。そして生成されるγ−ザイクロ
デキストリンをブロム・クレゾール・グリーン法により
定量した。
Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８） ０．５ ｍ ｌ！に
通計の酵素液を加え、蒸留水で余聞１ｍｌとし、５０℃
で６０分間反応させた。そして生成されるγ−ザイクロ
デキストリンをブロム・クレゾール・グリーン法により
定量した。
上記反応条件下で１時間あたりＩｍｇのγ−サイクロデ
キストリンを生成する酵装置を１単位とした。
キストリンを生成する酵装置を１単位とした。
本発明のγ−サイクロデキストリン合成酵素Ａと、従来
、報告されているサイクロデキストリン合成酵素の理化
学的性質を下表に比較して示す。
、報告されているサイクロデキストリン合成酵素の理化
学的性質を下表に比較して示す。
この表から明らかなように本酵素は従来知られているサ
イクロデキストリン合成酵素のいずれにも分類されない
新規なγ−サイクロデキストリン合成酵素と認められる
。
イクロデキストリン合成酵素のいずれにも分類されない
新規なγ−サイクロデキストリン合成酵素と認められる
。
本酵素は、バチルス属に属するＴ−サイクロデキストリ
ン合成酵素Ａの生産能を有する微生物を培養し、培養物
から採取することができる。このような微生物の一例と
して、バチルス・エスピーＮａ ３１３ （Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ｓｐ Ｎａ ３１３ ）を挙げることができる
。バチルス・エスピーＮｏ、３１３は昭和６０年７月２
２日付で工業技術院微生物工業技術研究所に寄託され、
その受託番号は微工研菌寄第８３６６号（ＦＦ、ＲＭ
Ｐ−８３６６）である。
ン合成酵素Ａの生産能を有する微生物を培養し、培養物
から採取することができる。このような微生物の一例と
して、バチルス・エスピーＮａ ３１３ （Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ｓｐ Ｎａ ３１３ ）を挙げることができる
。バチルス・エスピーＮｏ、３１３は昭和６０年７月２
２日付で工業技術院微生物工業技術研究所に寄託され、
その受託番号は微工研菌寄第８３６６号（ＦＦ、ＲＭ
Ｐ−８３６６）である。
バチルス・エスピー阻３１３の菌学的性質は次のとおり
である。
である。
（１）形Ｂ＝桿菌（０，６〜０．８メツ×２〜３メｌ）
で、運動性はあり、胞子を形成し、その大きさは０．８
〜１．０メｌ×０．８〜１．０μの円形である。胞子ノ
ウのはっきりしたふくらみは認められない。
で、運動性はあり、胞子を形成し、その大きさは０．８
〜１．０メｌ×０．８〜１．０μの円形である。胞子ノ
ウのはっきりしたふくらみは認められない。
細胞の多形性及び抗酸性は、いずれもない。ダラム染色
陽性である。
陽性である。
（２）肉汁寒天平板培養：集落の形状は円形、集落の表
面は扁平状であり、集落の周縁は波状である。また集落
の色調は白色で光沢はない。
面は扁平状であり、集落の周縁は波状である。また集落
の色調は白色で光沢はない。
（３）肉汁寒天斜面培養：生育良好、糸状に生育する。
（４）肉汁液体培養：生育良好、菌膜を形成する。
（６）リドマスミルク：ペプトン化する。
（６）ゼラチン：液化しない。
（７）硝酸塩の還元：還元しない。
（８）脱窒反応：なし
く９）ＭＲテスト：陽性
（１０） Ｖ Ｐテスト：陽性
（１１）インドールの生成：なし
く１２）硫化水素の生成：なし
く１３）デンプンの加水分解：陽性
（１４）カゼインの加水分解：陽性
（１６）クエン酸の利用：陽性
（１６）無機窒素源の利用二陽性
（１７）色素の生成：生成しない。
（］８）ウレアーゼ：陽性
（１９）オキシダーゼ：陽性
（２０）カタラーゼ：陽性
（２１）食塩肉汁：食塩１０％以−Ｌで生育しない。
（２２）ｌｉ＋育の範囲：ｐＨ４−９温度２３−４８℃
（２３）酸素に対する態度：好気性
（２４）糖類の利用性ｊ Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシ
ロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−フラク
トース、 麦芽糖、ショ糖、乳糖、トレハロース、Ｄ−
ソルビット、Ｄ−マンニット、イノジット、グリセリン
を利用し、酸を生成する。ガスの生成なし。
ロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−フラク
トース、 麦芽糖、ショ糖、乳糖、トレハロース、Ｄ−
ソルビット、Ｄ−マンニット、イノジット、グリセリン
を利用し、酸を生成する。ガスの生成なし。
Ｄ−ガラクトース、デンプンも利用するが酸もガスも生
成しない。
成しない。
以上の菌学的性質について、バージニーのマニュアル・
オブ・デタミネーティブ・バタテリオロジ第８版を参照
し、バチルス・ズブチリス（Ｉｌａｃｉｌｌｕｓ ５ｕ
ｂｔｉｌｉｓ）と同定されるべき微生物であることを認
めた。
オブ・デタミネーティブ・バタテリオロジ第８版を参照
し、バチルス・ズブチリス（Ｉｌａｃｉｌｌｕｓ ５ｕ
ｂｔｉｌｉｓ）と同定されるべき微生物であることを認
めた。
Ｔ−サイクロデキストリン合成酵素Ａ生産菌の培養にお
いては普通に使用されている培地が広く使用できる。一
般的には澱粉、デキストリンなどの澱粉部分分解物など
の炭素源を含む培地で培養される。その他、窒素源とし
て、ペプトン、カゼイン、肉エキス、酵母エキス、コー
ンステイープリカーあるいは大豆または大豆粕などの抽
出物、およびこれを補足するため、無機窒素源、リン酸
塩、マグネシウム塩、カルシウム塩を含む培地などが使
用される。培養はｐＨ４〜９、温度３０〜４０℃で、３
〜５日間、通気しながらおこなわれる。
いては普通に使用されている培地が広く使用できる。一
般的には澱粉、デキストリンなどの澱粉部分分解物など
の炭素源を含む培地で培養される。その他、窒素源とし
て、ペプトン、カゼイン、肉エキス、酵母エキス、コー
ンステイープリカーあるいは大豆または大豆粕などの抽
出物、およびこれを補足するため、無機窒素源、リン酸
塩、マグネシウム塩、カルシウム塩を含む培地などが使
用される。培養はｐＨ４〜９、温度３０〜４０℃で、３
〜５日間、通気しながらおこなわれる。
得られた培養物においては、Ｔ−サイクロデキストリン
合成酵素Ａは菌体外に出て培養液中に存在している。培
養物は濾過して菌体を除去し、濾液を濃縮し、アセトン
、エタノール、メタノール、イソプロパツールなどの有
機溶剤を加えて沈降さセるか、硫安などの塩析材で沈澱
させるなどして更に濃縮させることができる。
合成酵素Ａは菌体外に出て培養液中に存在している。培
養物は濾過して菌体を除去し、濾液を濃縮し、アセトン
、エタノール、メタノール、イソプロパツールなどの有
機溶剤を加えて沈降さセるか、硫安などの塩析材で沈澱
させるなどして更に濃縮させることができる。
こうして得られたＴ−サイクロデキストリン合成酵素Ａ
を用いてγ−サイクロデキストリンを合成するには、澱
粉、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンの少な
くとも１種に、本酵素を加え、ｐｌ（４〜９、好ましく
は６〜８、温度４０〜６０℃、好ましくは約５５℃で反
応さゼればよい。
を用いてγ−サイクロデキストリンを合成するには、澱
粉、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンの少な
くとも１種に、本酵素を加え、ｐｌ（４〜９、好ましく
は６〜８、温度４０〜６０℃、好ましくは約５５℃で反
応さゼればよい。
好ましくは、反応終了後、酵素を失活さセたのち、反応
液をグリコアミラーゼまたは細菌液化型α〜アミラーゼ
、好ましくは両者を併用して処理し、γ−サイクロデキ
ストリン以外の糖をグルコースに分解したのち、γ−サ
イクロデキストリンを採取する。Ｔ−サイクロデキスト
リンの採取には、１ｌ１１常の方法、たとえば、カラム
法、溶媒沈澱法などが適宜利用される。
液をグリコアミラーゼまたは細菌液化型α〜アミラーゼ
、好ましくは両者を併用して処理し、γ−サイクロデキ
ストリン以外の糖をグルコースに分解したのち、γ−サ
イクロデキストリンを採取する。Ｔ−サイクロデキスト
リンの採取には、１ｌ１１常の方法、たとえば、カラム
法、溶媒沈澱法などが適宜利用される。
以下に、本発明の実施例を示す。
実施例１
ハレイショデンプン２１％、ペプトン１％、Ｋ１１２Ｐ
０．０．３％、酵母エキス０．１％、ＮａＣ（１０，１
％、Ｍ ｇ Ｓ Ｏ４０，１％、ＣａＣＡｚｏ、０２％
からなる培地５００ｍｊ＋を２１容三角フラスコに入れ
常法により殺菌後、バチルス・エスピー隘３１３ （
ＦＥＲＭ Ｉ’−８３６６）を接種し、３７℃で５日
間振盪培養した。培養終了後、遠心分離機で菌体を除去
し、生産された酵素量を測定した結果、培地１ｍ／当り
、０．３３単位であった。
０．０．３％、酵母エキス０．１％、ＮａＣ（１０，１
％、Ｍ ｇ Ｓ Ｏ４０，１％、ＣａＣＡｚｏ、０２％
からなる培地５００ｍｊ＋を２１容三角フラスコに入れ
常法により殺菌後、バチルス・エスピー隘３１３ （
ＦＥＲＭ Ｉ’−８３６６）を接種し、３７℃で５日
間振盪培養した。培養終了後、遠心分離機で菌体を除去
し、生産された酵素量を測定した結果、培地１ｍ／当り
、０．３３単位であった。
実施例２
実施例１と同様の組成培地に前記バチルス・エスピー１
１ｋＬ３１３ （ＦＥＲＭ Ｐ−８３６６）を接種し、
３７℃で５日間振盪培養後、遠心分離機で菌体を除去し
、得られた相酵素液を通常の方法によってアセトン乾燥
粉末となした。培養液１７！当り６．９ｇのＴ−サイク
ロデキストリン合成酵素Ａ（比活性４３車位／ｇ）を得
ることができた。
１ｋＬ３１３ （ＦＥＲＭ Ｐ−８３６６）を接種し、
３７℃で５日間振盪培養後、遠心分離機で菌体を除去し
、得られた相酵素液を通常の方法によってアセトン乾燥
粉末となした。培養液１７！当り６．９ｇのＴ−サイク
ロデキストリン合成酵素Ａ（比活性４３車位／ｇ）を得
ることができた。
実施例３
５％バレイショデンプン糊化液２０１ＣＩＮＮ ａ Ｏ
ＨでｐＨ８，０に調整）に２４０単位のγ−サイクロデ
キストリン合成酵素Ａを加え、５５℃で２００時間反応
せＴ−サイクロデキストリンを生成させた。反応後、酵
素を加熱失活（１００℃、３０分間）させた後、ｌＮＨ
ＣｌでｐＨ５，５に調整し、グルコアミラーゼ２．００
（１位と細菌液化型α−アミラーゼ４．Ｏ００単位を加
え、５０℃で５時間反応させ、γ−サイクロデキストリ
ン以外の糖をグルコースに分解した。この反応液を活性
炭処理後、γ−サイクロデキストリンをトリクロルエチ
レンによって沈澱させた。沈澱物をろ過により分別し、
トリクロルエチレンを水蒸気蒸留で除いた。得られたγ
−サイクロデキストリン溶液を凍結乾燥しγ−サイクロ
デキストリン１０ｇを得た。
ＨでｐＨ８，０に調整）に２４０単位のγ−サイクロデ
キストリン合成酵素Ａを加え、５５℃で２００時間反応
せＴ−サイクロデキストリンを生成させた。反応後、酵
素を加熱失活（１００℃、３０分間）させた後、ｌＮＨ
ＣｌでｐＨ５，５に調整し、グルコアミラーゼ２．００
（１位と細菌液化型α−アミラーゼ４．Ｏ００単位を加
え、５０℃で５時間反応させ、γ−サイクロデキストリ
ン以外の糖をグルコースに分解した。この反応液を活性
炭処理後、γ−サイクロデキストリンをトリクロルエチ
レンによって沈澱させた。沈澱物をろ過により分別し、
トリクロルエチレンを水蒸気蒸留で除いた。得られたγ
−サイクロデキストリン溶液を凍結乾燥しγ−サイクロ
デキストリン１０ｇを得た。
実施例３で得られたＴ−サイクロデキストリンを高速液
体クロマトグラフィー（充填材ヌクレオシル５ＮＨｚ
、４．６Ｘ２５ｃｍ、アセトニトリル／水−６５／３５
、流速１ｍ７１／分）およびブＣＩム・クレゾール・グ
リーン法により同定を行った。
体クロマトグラフィー（充填材ヌクレオシル５ＮＨｚ
、４．６Ｘ２５ｃｍ、アセトニトリル／水−６５／３５
、流速１ｍ７１／分）およびブＣＩム・クレゾール・グ
リーン法により同定を行った。
第１図は高速液体クロマトグラムを示す図面であり、（
Ａ）はグルコース（Ｇ）、α−Ｃｒ）（サイクロデキス
トリン）、β−ＣＤおよびγ−ＣＤの標品を含むサンプ
ル、（Ｂ）はグルコース単位数１〜７のオリゴ糖を含む
サンプル、（Ｃ）は本発明のγ−ＣＤを含むサンプル、
（Ｄ）ばサンプル（Ａ）とサンプル（Ｃ）を混合したサ
ンプルのクロマトグラムである。」二記りロマトダラム
から本発明のｒ−ＣＤの保持時間は、ｒ−ＣＤ標品の保
持時間と完全に一致していることがわかる。
Ａ）はグルコース（Ｇ）、α−Ｃｒ）（サイクロデキス
トリン）、β−ＣＤおよびγ−ＣＤの標品を含むサンプ
ル、（Ｂ）はグルコース単位数１〜７のオリゴ糖を含む
サンプル、（Ｃ）は本発明のγ−ＣＤを含むサンプル、
（Ｄ）ばサンプル（Ａ）とサンプル（Ｃ）を混合したサ
ンプルのクロマトグラムである。」二記りロマトダラム
から本発明のｒ−ＣＤの保持時間は、ｒ−ＣＤ標品の保
持時間と完全に一致していることがわかる。
第２図はブロム・クレゾール・グリーン法によるγ−Ｃ
Ｄの吸光スペクトルを示す図面であり、本発明のγ−Ｃ
Ｄのスペクトルはｒ−ＣＤ標品のスペクトルと完全に一
致していることがわかる。
Ｄの吸光スペクトルを示す図面であり、本発明のγ−Ｃ
Ｄのスペクトルはｒ−ＣＤ標品のスペクトルと完全に一
致していることがわかる。
第１図は高速液体クロマトグラムを示す図面であり、第
２図はブロム・クレゾール・グリーン法による吸光スペ
クトルを示す図面である。
２図はブロム・クレゾール・グリーン法による吸光スペ
クトルを示す図面である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）下記の理化学的性質を有するγ−サイクロデキス
トリン合成酵素Ａ。 作用および基質特異性：澱粉、アミロース、アミロペク
チン、グリコーゲンなどからγ− サイクロデキストリンを特異的に合成する。 α−およびβ−サイクロデキストリンの生 成は認められない。 作用ｐＨの範囲：ｐＨ４〜９（０．０２Ｍ緩衝液中）最
適作用ｐＨ：ｐＨ８付近 作用温度の範囲：約７５℃以下 最適作用温度：約６５℃ 熱安定性：０．０５Ｍトリス−塩酸緩衝液中、３０分間
加熱により、５０℃以下ではほとんど 失活しないが、７０℃以上ではほぼ完全に 失活する。 ｐＨ安定性：ｐＨ６〜８で安定 分子量：６４，０００（ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電
気泳動法による測定） 等電点：７．０５（キャリヤーアンホラインを用いた電
気泳動法による測定） （２）バチルス属に属するγ−サイクロデキストリン合
成酵素Ａ生産菌を培養し、培養物からγ−サイクロデキ
ストリン合成酵素Ａを採取することを特徴とするγ−サ
イクロデキストリン合成酵素Ａの製造法。 （３）バチルス属に属するγ−サイクロデキストリン合
成酵素Ａ生産菌がバチルス・エスピー・Ｎｏ．３１３（
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ Ｎｏ．３１３）である特許請
求の範囲第（２）項記載の方法。 （４）澱粉、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲ
ンの少なくとも１種に、γ−サイクロデキストリン合成
酵素Ａを加え、ｐＨ４〜９、温度４０〜６０℃で反応さ
せることを特徴とするγ−サイクロデキストリンの製造
法。 （６）反応終了後、反応液をグリコアミラーゼおよび細
菌液化型α−アミラーゼで処理してγ−サイクロデキス
トリン以外の糖をグルコースに分解したのち、γ−サイ
クロデキストリンを採取することを特徴とする特許請求
の範囲第（４）項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60167128A JPH0632611B2 (ja) | 1985-07-29 | 1985-07-29 | γ―サイクロデキストリン合成酵素及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60167128A JPH0632611B2 (ja) | 1985-07-29 | 1985-07-29 | γ―サイクロデキストリン合成酵素及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6225976A true JPS6225976A (ja) | 1987-02-03 |
| JPH0632611B2 JPH0632611B2 (ja) | 1994-05-02 |
Family
ID=15843952
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60167128A Expired - Lifetime JPH0632611B2 (ja) | 1985-07-29 | 1985-07-29 | γ―サイクロデキストリン合成酵素及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0632611B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0614971A3 (en) * | 1993-02-09 | 1994-11-02 | Amano Pharma Co Ltd | Novel cyclodextrin glucanotransferase, process for its manufacture and method for obtaining cyclodextrin using this enzyme. |
| US5474917A (en) * | 1993-06-24 | 1995-12-12 | Consortium Fur Elektrochemische Industrie Gmbh | Modified cyclodextrin glycosyltransferases for producing γ-cyclodextrins |
-
1985
- 1985-07-29 JP JP60167128A patent/JPH0632611B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0614971A3 (en) * | 1993-02-09 | 1994-11-02 | Amano Pharma Co Ltd | Novel cyclodextrin glucanotransferase, process for its manufacture and method for obtaining cyclodextrin using this enzyme. |
| US5474917A (en) * | 1993-06-24 | 1995-12-12 | Consortium Fur Elektrochemische Industrie Gmbh | Modified cyclodextrin glycosyltransferases for producing γ-cyclodextrins |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0632611B2 (ja) | 1994-05-02 |
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