JPS62272999A - 血清中のコレステリンを測定するための試薬 - Google Patents
血清中のコレステリンを測定するための試薬Info
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- JPS62272999A JPS62272999A JP61127422A JP12742286A JPS62272999A JP S62272999 A JPS62272999 A JP S62272999A JP 61127422 A JP61127422 A JP 61127422A JP 12742286 A JP12742286 A JP 12742286A JP S62272999 A JPS62272999 A JP S62272999A
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- oxidase
- serum
- reagent
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
３、発明の詳細な説明
本発明は遊離及びエステル化されたコレステリンの酵素
定量に使用する試薬に関する。
定量に使用する試薬に関する。
コレステリンの定量は医学的な診断法にとって非常に重
要である。増加したコレステリン血中ｙＱ度は動脈硬化
症の重要な危険因子である。コレステリン値の高い場合
、すなわち高コレステリン血症の場合には、コレステリ
ン値の低い場合よりも頻繁に冠機能不全及び心臓梗塞が
起きる。高コレステリン血症は動脈硬化症及び冠状動脈
疾患を惹起し易い。従って治療を適正時に開始するため
には、早期に発見しなければならない。高いコレステリ
ン値は真性糖尿病、ネフローゼ症候群、甲状腺機能減弱
及び肝疾患、例えば胆汁肝硬変の場合にもしばしば見出
される。
要である。増加したコレステリン血中ｙＱ度は動脈硬化
症の重要な危険因子である。コレステリン値の高い場合
、すなわち高コレステリン血症の場合には、コレステリ
ン値の低い場合よりも頻繁に冠機能不全及び心臓梗塞が
起きる。高コレステリン血症は動脈硬化症及び冠状動脈
疾患を惹起し易い。従って治療を適正時に開始するため
には、早期に発見しなければならない。高いコレステリ
ン値は真性糖尿病、ネフローゼ症候群、甲状腺機能減弱
及び肝疾患、例えば胆汁肝硬変の場合にもしばしば見出
される。
公知で有効なコレステリン定量法はリーベルマン拳ブル
ヒアルト（Ｌｌｅｂｅｒｍａｎｎ ｕｎｄ Ｂｕｒｃｈ
ａｒｄ ）の反応に基づいている。この方法によると、
遊離のコレステリンおよびエステル化コレステリンが無
水酢酸および１０硫酸と青−緑色に着色した化合物を形
成し、この濃淡が分光光度計で測定されている。
ヒアルト（Ｌｌｅｂｅｒｍａｎｎ ｕｎｄ Ｂｕｒｃｈ
ａｒｄ ）の反応に基づいている。この方法によると、
遊離のコレステリンおよびエステル化コレステリンが無
水酢酸および１０硫酸と青−緑色に着色した化合物を形
成し、この濃淡が分光光度計で測定されている。
この公知方法は重大な欠点を有する。その１粟な欠点は
その方法が非特異的である点にある。リーベルマン拳ブ
ルヒアルトの反応は、コレステリン以外のステロイドに
よっても起きる比較的非特異的なステロイド反応である
。例えば血漿中には他のステロイドと共に、なお１〜３
％のノヒドロコレステリン及び０．５〜１．４％のΔ７
−コレスチノールも存在するので、大きな誤差が生じる
。その上、該反応はビリルビン及びヘモグロビンによっ
て障たげられ、結果として、不当に高いプラスのコレス
テリン値が得られる。その他の欠点は、攻撃的で腐蝕性
の試薬を使用して操作しなくてはならないという点に存
する。
その方法が非特異的である点にある。リーベルマン拳ブ
ルヒアルトの反応は、コレステリン以外のステロイドに
よっても起きる比較的非特異的なステロイド反応である
。例えば血漿中には他のステロイドと共に、なお１〜３
％のノヒドロコレステリン及び０．５〜１．４％のΔ７
−コレスチノールも存在するので、大きな誤差が生じる
。その上、該反応はビリルビン及びヘモグロビンによっ
て障たげられ、結果として、不当に高いプラスのコレス
テリン値が得られる。その他の欠点は、攻撃的で腐蝕性
の試薬を使用して操作しなくてはならないという点に存
する。
前記の欠点を宵せず、かつ特にコレステリンに対し絶対
的に特異的であり、腐蝕的な試薬を必要としない新規コ
レステリン定量法は、既にコレステリンを水媒体中でコ
レステリンオキシダーゼと共に恒温に保持し、かつ酸素
消費量又は生成したＨ２０２又はコレステノンを定量す
ることから成るコレステリン定同法により解決されてい
る。
的に特異的であり、腐蝕的な試薬を必要としない新規コ
レステリン定量法は、既にコレステリンを水媒体中でコ
レステリンオキシダーゼと共に恒温に保持し、かつ酸素
消費量又は生成したＨ２０２又はコレステノンを定量す
ることから成るコレステリン定同法により解決されてい
る。
コレステリンオキシダーゼは次の反応を接触する新規酵
素である： コレステリンオキシダーゼ コレステリン＋０２□コレステノア＋）１２０２この反
応は定量的に進行し、絶対的に特異で、かつ正確なコレ
ステリンの定量を可能ならしめる。
素である： コレステリンオキシダーゼ コレステリン＋０２□コレステノア＋）１２０２この反
応は定量的に進行し、絶対的に特異で、かつ正確なコレ
ステリンの定量を可能ならしめる。
本発明の試薬を使用する方法は特に血清中のコレステリ
ンの定量に好適である。周知の如くエステル化された形
で存在する結合型コレステリンも前辺って化学的もしく
は酵素的にケン化することによて定量することができる
。例えば化学的ケン化はアルコール性苛性カリ溶液によ
って、酵素的ケン化はエステラーゼ、有利には肝臓又は
膵臓からのコレステリンエステラーゼによって行われる
。
ンの定量に好適である。周知の如くエステル化された形
で存在する結合型コレステリンも前辺って化学的もしく
は酵素的にケン化することによて定量することができる
。例えば化学的ケン化はアルコール性苛性カリ溶液によ
って、酵素的ケン化はエステラーゼ、有利には肝臓又は
膵臓からのコレステリンエステラーゼによって行われる
。
前記一般式による、Ｈ２０２生成量又はフレステノン生
成量の測定はその為に公知かつ常用の方法により行うこ
とができる。
成量の測定はその為に公知かつ常用の方法により行うこ
とができる。
即ち、生成した過酸化水素は、滴定Ｉびに電位差滴定、
ポーラログラフイー及び比色Ｉびに酵素法により定量す
ることができる。カタラーゼ又はベルオキシグーゼを使
用する酵素法が有利である。該方法は単に非常に特異的
でかつ確実であるのみならず、極めて簡単に過酸化水素
の生成下に主反応と組合わせることができるからである
。特にβ−ジケトン類、例えばアセチルアセトン及び低
級脂肪族の１価又は多価アルコール、例えばメタノール
、エタノール又はメチレングリコールの存在下でのカタ
ラーゼによる測定並びに発色体の存在下でのベルオキン
ダーゼによるｎｌ定が特に適当であると判明した。カタ
ラーゼ、アセチルアセトン及びメタノールを用いる測定
の際に、メタノールはホルムアルデヒドに酸化され、こ
のホルムアルデヒドはアセチルアセトンと共に呈色反応
を生じ、この呈色反応を測定することができる。ベルオ
キシターゼによる測定の際には、反応後に光度測定法で
測定することのできる化合物を発色体として使用する。
ポーラログラフイー及び比色Ｉびに酵素法により定量す
ることができる。カタラーゼ又はベルオキシグーゼを使
用する酵素法が有利である。該方法は単に非常に特異的
でかつ確実であるのみならず、極めて簡単に過酸化水素
の生成下に主反応と組合わせることができるからである
。特にβ−ジケトン類、例えばアセチルアセトン及び低
級脂肪族の１価又は多価アルコール、例えばメタノール
、エタノール又はメチレングリコールの存在下でのカタ
ラーゼによる測定並びに発色体の存在下でのベルオキン
ダーゼによるｎｌ定が特に適当であると判明した。カタ
ラーゼ、アセチルアセトン及びメタノールを用いる測定
の際に、メタノールはホルムアルデヒドに酸化され、こ
のホルムアルデヒドはアセチルアセトンと共に呈色反応
を生じ、この呈色反応を測定することができる。ベルオ
キシターゼによる測定の際には、反応後に光度測定法で
測定することのできる化合物を発色体として使用する。
適当な発色体の例は２．２“−アミノベンズチアゾリン
スルホン酸である。
スルホン酸である。
フレステノンの測定はケト試薬、有利にはヒドラゾン生
成下にケト基と反応するヒドラジン誘導体、例えば２．
４−ジニトロフェニルヒドラジンを用いて実施する。し
かしながら、コレステノンを直接、２４０ ｎｍにおけ
る吸収の測定によって測定することもできる。
成下にケト基と反応するヒドラジン誘導体、例えば２．
４−ジニトロフェニルヒドラジンを用いて実施する。し
かしながら、コレステノンを直接、２４０ ｎｍにおけ
る吸収の測定によって測定することもできる。
本発明のコレステリンオキシダーゼ及びＨ２０２７ＩＩ
Ｉ定用の系又はコレステノン測定用の系から成るコレス
テリン測定試薬の第一の有利な実施例において、該試薬
はコレステリンオキシダーゼ、カタラーゼ、アセチルア
セトン、メタノール及びアンモニウムイオン含有の緩衝
液（単独又は混合して）から構成されている。もう１つ
の有利な実施例においては、試薬はコレステリンオキシ
ダーゼ、ベルオキンターゼ、発色体及び緩衝液（単独又
は混合して）から構成されている。発色体としては２．
２°−アミノベンズチアゾリンスルホン酸が有利である
。
Ｉ定用の系又はコレステノン測定用の系から成るコレス
テリン測定試薬の第一の有利な実施例において、該試薬
はコレステリンオキシダーゼ、カタラーゼ、アセチルア
セトン、メタノール及びアンモニウムイオン含有の緩衝
液（単独又は混合して）から構成されている。もう１つ
の有利な実施例においては、試薬はコレステリンオキシ
ダーゼ、ベルオキンターゼ、発色体及び緩衝液（単独又
は混合して）から構成されている。発色体としては２．
２°−アミノベンズチアゾリンスルホン酸が有利である
。
その他の有利な例によれば、本発明による試薬はコレス
テリンオキシダーゼ及びヒドラゾン生成下にケト基と反
応するヒドラジン誘導体及び場合により緩衝液から構成
されている。ヒドラジン誘導体としては２，４−ジニト
ロフェニルヒドラジンが有利である。
テリンオキシダーゼ及びヒドラゾン生成下にケト基と反
応するヒドラジン誘導体及び場合により緩衝液から構成
されている。ヒドラジン誘導体としては２，４−ジニト
ロフェニルヒドラジンが有利である。
有利には、前記の試薬組合せは記載した必須成分の他に
付加的に常用の溶抱、安定剤及び表面活性物質を含有す
る。
付加的に常用の溶抱、安定剤及び表面活性物質を含有す
る。
前記の有利な試薬組合せは主成分を次の量比で含有する
１、 ｐＨ５〜７のアンモニウムイオン含有緩衝液１０
０醜監中にコレステリンオキシダーゼ１３〜１５０単販
のカタラーゼ２．１０４〜５．１０’ 単位、アセチル
アセトン０．０５〜０． ２１１及びメタノール２〜１
０１、並びに界面活性剤（有利にはヒドロキシポリニド
キシドデカン）０．０２〜０． ３脂ｌ。
１、 ｐＨ５〜７のアンモニウムイオン含有緩衝液１０
０醜監中にコレステリンオキシダーゼ１３〜１５０単販
のカタラーゼ２．１０４〜５．１０’ 単位、アセチル
アセトン０．０５〜０． ２１１及びメタノール２〜１
０１、並びに界面活性剤（有利にはヒドロキシポリニド
キシドデカン）０．０２〜０． ３脂ｌ。
２、 ｐＨ８〜８の緩衝液１００ｍ１中にコレステリン
オキシダーゼ３〜４０単位並びに市販のベルオキングー
ゼ２．１ｑ 〜１．１０’ 単位、２．２°−７ミノベ
ンズチアゾリンスルホン酸５０〜２００■ｇｆびに界面
活性剤（有利にはヒドロキシポリエトキシドデカン）０
．０５〜０．５■１。
オキシダーゼ３〜４０単位並びに市販のベルオキングー
ゼ２．１ｑ 〜１．１０’ 単位、２．２°−７ミノベ
ンズチアゾリンスルホン酸５０〜２００■ｇｆびに界面
活性剤（有利にはヒドロキシポリエトキシドデカン）０
．０５〜０．５■１。
３、コレステリンオキシダーゼ０． １〜１単位、２
． ４−ノニトロフエルヒドラジンの１ｍＭ溶液１〜
５ ｍ ｌ 及ヒ場合により界面活性剤０．００５〜０
．１１。
． ４−ノニトロフエルヒドラジンの１ｍＭ溶液１〜
５ ｍ ｌ 及ヒ場合により界面活性剤０．００５〜０
．１１。
４、ｐＨ５〜９の緩衝液、有利にはｐＨ７．５の０．５
Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液５０■ｌ中にコレステリンオキ
／ダーゼ２〜１０（ＸＩ！位Ｉびに界面活性剤（有利に
はヒドロ本／ポリエトキンドデカン）０．１〜２ ０脂
ｌ。
Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液５０■ｌ中にコレステリンオキ
／ダーゼ２〜１０（ＸＩ！位Ｉびに界面活性剤（有利に
はヒドロ本／ポリエトキンドデカン）０．１〜２ ０脂
ｌ。
次に本発明を実施例につき説明する。
参考思−上
Ｈ２Ｏ２の定量
燐酸水素アンモニウム１０ｇを水１００ｍ１に溶解し８
５％燐酸でｐＨ７．０に調整する。次いでカタラーゼ１
０５単位を添加する。こうして得た溶液で、アセチルア
セトン０、２■１とメタノール１ ０脂ｌとの混合物を
全量１００ｍ１にする。
５％燐酸でｐＨ７．０に調整する。次いでカタラーゼ１
０５単位を添加する。こうして得た溶液で、アセチルア
セトン０、２■１とメタノール１ ０脂ｌとの混合物を
全量１００ｍ１にする。
こうして得た溶液７．５脂ｌを血清０．５１又は２００
ｍｇ％コレステリン含分を膏するコレステリン標準溶液
０． ５履１と混合する。血清含有試料及びコレステリ
ン標準液含宵試料の少ｆｆｉに各々コレステリンオキシ
ダーゼ６単位及び１０％ヒドロキシポリエトキシドデカ
ン溶液０．０２■１を加え、７０分間３７゛ Ｃで恒温
保持する。
ｍｇ％コレステリン含分を膏するコレステリン標準溶液
０． ５履１と混合する。血清含有試料及びコレステリ
ン標準液含宵試料の少ｆｆｉに各々コレステリンオキシ
ダーゼ６単位及び１０％ヒドロキシポリエトキシドデカ
ン溶液０．０２■１を加え、７０分間３７゛ Ｃで恒温
保持する。
次いで生成した色素を、試薬盲検値を考慮して４０５ｎ
ｍで光度計により測定する。コレステリン標準溶液を用
いて校正線図を作成、これを図面の第１図に示した。校
正線図ではコレステリン濃度が４０５ｎｍにおける吸光
に対してプロットされている。
ｍで光度計により測定する。コレステリン標準溶液を用
いて校正線図を作成、これを図面の第１図に示した。校
正線図ではコレステリン濃度が４０５ｎｍにおける吸光
に対してプロットされている。
血請含打試料のコレステ９７１口度を、２１ｃＩｆ：量
として標準液を使用して測定する。リーベルマン・ブル
ヒアルトによる対照値は約５％の偏差を生じた。
として標準液を使用して測定する。リーベルマン・ブル
ヒアルトによる対照値は約５％の偏差を生じた。
参考斑−２
Ｈ２ ０２の定量
１００１ｇ％の２．２′−アミノベンズチアゾリンスル
ホン酸を含有するｐＨ７の燐酸カリウム緩衝液（０２飽
和）３１に２０％ヒドロキンポリエトキシドデカン０．
０５鳳ｌ及び市販のベルオキシグーゼ溶液０．０２ｍ１
（＝３ｆ３単位）及び還元性物質を除去するために８
２０２０．０２ｍ１ （水１００１に対し３０（容量／
容量）％のＨ２０２０，０２１１）を加える。この混合
物を光度計で４０３ｎｍ又は４３Ｅｉｎｍで追跡した。
ホン酸を含有するｐＨ７の燐酸カリウム緩衝液（０２飽
和）３１に２０％ヒドロキンポリエトキシドデカン０．
０５鳳ｌ及び市販のベルオキシグーゼ溶液０．０２ｍ１
（＝３ｆ３単位）及び還元性物質を除去するために８
２０２０．０２ｍ１ （水１００１に対し３０（容量／
容量）％のＨ２０２０，０２１１）を加える。この混合
物を光度計で４０３ｎｍ又は４３Ｅｉｎｍで追跡した。
反応が静止したら直ちに血清０．０ｌ−１（水で１＝１
５に希釈）を加える。１０分後にコレステリンオキシダ
ーゼ０．１５単位を加える。更に１０分後に吸光度差を
読みとる。
５に希釈）を加える。１０分後にコレステリンオキシダ
ーゼ０．１５単位を加える。更に１０分後に吸光度差を
読みとる。
同様にして、但し２００１ｇ％の含分ををするコレステ
リン標準溶液を使用し４３８ ｎ量で第２図に示した校
正線を作成した。この校正線を用いて、血清試料のコレ
ステ９７１口度を測定する。測定により１８０ｍｇ％の
コレステリンｙＱ度が１１明した。リーベルマン・ブル
ヒアルトによる対照値は１８５鵬ｇ％であった。
リン標準溶液を使用し４３８ ｎ量で第２図に示した校
正線を作成した。この校正線を用いて、血清試料のコレ
ステ９７１口度を測定する。測定により１８０ｍｇ％の
コレステリンｙＱ度が１１明した。リーベルマン・ブル
ヒアルトによる対照値は１８５鵬ｇ％であった。
実施桝−１
コレステリンの定量
血清（水で１：１０に希釈）０．２ｍｌに２０％ヒドロ
キシポリエトキシドデカン溶液０．０５ｍ１及びコレス
テリンオキシダーゼ０．１５単位を加える。１５分後に
、ＩＮ塩酸中に２． ４−ノニトロフエルヒドラシン１
ミリモルを含有する溶液２．０１を添加する。更に３０
分後に水４．０膳１を加え、生成したヒドラゾンを光度
計で４０５ｎｍで測定する。評価は試薬盲検値を考慮し
て基Ｑ線について行なう。測定はアルカリの添加後に５
４６ｎｍでも行うことができる。
キシポリエトキシドデカン溶液０．０５ｍ１及びコレス
テリンオキシダーゼ０．１５単位を加える。１５分後に
、ＩＮ塩酸中に２． ４−ノニトロフエルヒドラシン１
ミリモルを含有する溶液２．０１を添加する。更に３０
分後に水４．０膳１を加え、生成したヒドラゾンを光度
計で４０５ｎｍで測定する。評価は試薬盲検値を考慮し
て基Ｑ線について行なう。測定はアルカリの添加後に５
４６ｎｍでも行うことができる。
代表的試料の測定により遊離コレステリン６０膳ｇ％及
び全コレステリン（アルコール性ＫＯＨによってケン化
）１５４１ｇ％が得られた。
び全コレステリン（アルコール性ＫＯＨによってケン化
）１５４１ｇ％が得られた。
リーベルマンΦブルヒアルトの比較定量では全コレステ
リン１７０朧ｇ％が得られた。
リン１７０朧ｇ％が得られた。
エステル化されたコレステリンをケン化するために（血
清中の全コレステリンの測定）、血清１ｍｌ、２０％ヒ
ドロキシポリエトキシドデカン溶液１■１及び９０％エ
タノール中の０．１１１ｉＮ ＫＯＨ５鵬ｌを混合し
３０分間７０°Ｃに加熱する。次いで溶液を冷却し、０
．１Ｍ硫酸マグネンウム溶液１０１と混合しかつ遠心分
離する。上澄液（１３ｍ１）全コレステリンを遊離型で
含有する。
清中の全コレステリンの測定）、血清１ｍｌ、２０％ヒ
ドロキシポリエトキシドデカン溶液１■１及び９０％エ
タノール中の０．１１１ｉＮ ＫＯＨ５鵬ｌを混合し
３０分間７０°Ｃに加熱する。次いで溶液を冷却し、０
．１Ｍ硫酸マグネンウム溶液１０１と混合しかつ遠心分
離する。上澄液（１３ｍ１）全コレステリンを遊離型で
含有する。
肝エステラーゼ又はコレステリンエステラーゼによりエ
ステル化されたコレステリンのケン化は、３７°Ｃでｐ
Ｈ６〜８で血清を３０分間恒温で保持して行なう。
ステル化されたコレステリンのケン化は、３７°Ｃでｐ
Ｈ６〜８で血清を３０分間恒温で保持して行なう。
実施伝−２
０，４％ヒドロキシポリエトキ／ドデカンを膏するｐＨ
７，５の０．５Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液２．５１を加え
る。適当な分光光度計で２４０ｎｍにおける吸光度（Ｅ
ｌ ）を読みとり、コレステリンオキシダーゼ０．０２
ｍ１ （＝ １．５Ｕ）で反応を開始する。２分後にも
う一度吸光度（Ｅ２）を読みとる。生成したコレステリ
ンエステリンの濃度及び従ってコレステノンの濃度は、
２４００ｍにおけるコレステリンのモル吸光係数を考慮
して１回目の読みとりと２回目の読みとりとの差から得
られる。
７，５の０．５Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液２．５１を加え
る。適当な分光光度計で２４０ｎｍにおける吸光度（Ｅ
ｌ ）を読みとり、コレステリンオキシダーゼ０．０２
ｍ１ （＝ １．５Ｕ）で反応を開始する。２分後にも
う一度吸光度（Ｅ２）を読みとる。生成したコレステリ
ンエステリンの濃度及び従ってコレステノンの濃度は、
２４００ｍにおけるコレステリンのモル吸光係数を考慮
して１回目の読みとりと２回目の読みとりとの差から得
られる。
代表的試料の測定により遊離コレステリン５８層ｇ％及
び全コレステリン（鹸化により）１６３ｍｇ％が得られ
た。
び全コレステリン（鹸化により）１６３ｍｇ％が得られ
た。
リーベルマン・ブルヒアルトの比較測定で、全コレステ
リン１７８層ｇ％が得られた。
リン１７８層ｇ％が得られた。
実施倒−」−
血ｉＮ０．０５ｍ１を、ヒドロキシポリエトキシドデカ
ン０゜５％を含をする０、５Ｍ燐酸酸カリウムー緩衝液
（ｐＨ７゜５）１０■ｌ中に加える。適当な分光光度計
で２４０ｎｍでの吸光度（Ｅｌ）を読み、１Ｍ硫酸アン
モニウム溶液中の貯蔵安定で、痕跡量の界面活性剤も含
まないコレステリンオキ７ダーゼ０．０２ｍ１ （＝０
．ＩＵ）で反応を開始させる。３分後に改めて吸光度（
Ｅ２）を読む。最初の読みと２度目の読みとの差から、
２４０ ｎｍでのコレステノンに関するモル吸光係数を
考慮に入れると、生じたコレステリンのｔＨ度が得られ
る。典型的な資料の測定で、遊離のコレステリン８２ｍ
ｇ％及び全コレステリン（鹸化後の）１６７ｍｇ％が得
られた。
ン０゜５％を含をする０、５Ｍ燐酸酸カリウムー緩衝液
（ｐＨ７゜５）１０■ｌ中に加える。適当な分光光度計
で２４０ｎｍでの吸光度（Ｅｌ）を読み、１Ｍ硫酸アン
モニウム溶液中の貯蔵安定で、痕跡量の界面活性剤も含
まないコレステリンオキ７ダーゼ０．０２ｍ１ （＝０
．ＩＵ）で反応を開始させる。３分後に改めて吸光度（
Ｅ２）を読む。最初の読みと２度目の読みとの差から、
２４０ ｎｍでのコレステノンに関するモル吸光係数を
考慮に入れると、生じたコレステリンのｔＨ度が得られ
る。典型的な資料の測定で、遊離のコレステリン８２ｍ
ｇ％及び全コレステリン（鹸化後の）１６７ｍｇ％が得
られた。
界面活性剤を小力１ルない比較αＩ定：ま、１５分の反
応時間を７認とした。
応時間を７認とした。
添付図面の第１図および第２図はコレステリン標準溶液
を用いて制作した吸光度とコレステリン１０度との関係
を示す校正線図である。
を用いて制作した吸光度とコレステリン１０度との関係
を示す校正線図である。
Claims (1)
- （１）血清又は血しょう中のコレステリンエステルを先
ずコレステリンエステラーゼにより鹸化し、次いで得ら
れたコレステリンのコレステリンオキシダーゼとの反応
を一バッチで定量するための （イ）コレステリンエステラーゼ、コレステリンオキシ
ダーゼ、Ｈ＿２Ｏ＿２測定用の系、およびテスト溶液に
対し０．３％ないし４％の界面活性剤、又は （ロ）コレステリンエステラーゼ、コレステリンオキシ
ダーゼ、コレステノン測定用の系、およびテスト溶液に
対し０．３ないし４％の界面活性剤よりなることを特徴
とする血清又は血しょう中のコレステリン測定試薬
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