JPS63152995A - ポリアミンの測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は酵素法によるポリアミンの測定方法に関するも
のである。

〔従来の技術及び問題点〕

ポリアミンは、自然界に広く分布する非蛋白性低分子量
の脂肪族塩基性化合物で、種々の生理活性を有し蛋白質
合成の促進や酵素活性の発現、核険の代謝等に重要な役
割を果たし生体反応と深いかかわりをもっている。哺乳
動物の生体内ではプトレツｔン、カダベリン、スペルミ
ジン及びスペルミンが主なもので、これら四種のポリア
ミンをまとめて総ポリアミンと称している。

またポリアミンは細胞増殖と深いかかわりを持つため、
細胞増殖の盛んな癌細胞を有する癌患者においては、血
液、尿等いわゆる体液中の総ポリアミン鎗が健常人に比
して著しく増加することが報告されている。従って体液
９総ポリアミンの測定は癌の有力な診断法として、また
癌の治療効果の判定や予後の診断等、臨床検査分野での
幅広い応用が期待されている。

また総ポリアミン測定方法も種々の方法が報告されてい
る。例えば、特公昭５６−３６９１８号、特開昭５９−
２７００号、特開昭５８−１４１７９８号などがある。

このうち特会昭５６−３６９１８号方法は、ポリアミン
を含有する試料に発芽大豆由来のアミンオキシダーゼを
作用させ、生成する過酸化水素を定量する方法であり、
特開昭５９−２７００号方法は、ポリアミンを含有する
試料にあらかじめアスコルビン酸オキシダーゼを作用さ
せて還元性物質を除去したのち、発芽大豆由来のアミン
オキシダーゼを作用させ、生成する過酸化水素な定量す
る方法である。しかしながらこの両者の総ポリアミン淘
定方法は次の欠点を有している。すなわちポリアミンの
酸化に使用する発芽大豆由来のアミンオキシダーゼは、
プトレッシン、カダベリン及びスペルミジンからは１モ
ルの過酸化水素を生成するがスペルミンからは２モルの
過酸化水素な生成するので、試料中の総ポリアミンモル
数に対応した過酸化水素生成とはならない。従ってこれ
らの方法で求めた総ポリアミン臆は真値から正の誤差を
持つことになる。従って、スペルミンの含量の多い試料
例えば血液を試料とした場合には、これらの総ポリアミ
ン測定法は誤差が大きくなり使用不可能であった。

一方特開昭５８−１４１７９８号方法は、ポリアミンの
酸化にミクロコツカス・フラビダスのプトレッシンオキ
シダーゼを使用するポリアミンの分析法で優れた方法の
１つである。しかし、このプトレツシンオ千シダーゼノ
基質特異性が総ポリアミンのうちのスペルミンに対して
弱く、スペルミン含量の多い試料例えば血液を試料とし
て用いるとき今−歩満足出来ない傾向がある。

また、ポリアミンを含有する試料にミクロコツカスー−
ローゼウスのプトレッシンオキシダーゼとトウモロコシ
由来のポリアミンオキシダーゼを組み合わせて作用させ
ることにより、総ポリアミンの測定する方法も提案され
ている。この方法は優れたポリアミンの測定法であるが
トウモロコシ由来のポリアミンオキシダーゼは、スペル
ミンに対するミカエリス定数Ｃｋｊ値）が比較的大きく
、また酵素生産性が低い傾向があり、多少不安定なため
精製に麺がある。そのため、測定時間が長くかかりかつ
測定感度が低く正確性に欠ける場合もあり、十分に満足
出来るまでに至っていない。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者等はこのような状況に鑑み、煩雑な操作を必要
とせず、経済的、迅速かつ正確に総ボリア之ン量を測定
する方法を開発すべく研究を１ねた。その結果、カラス
ムギ由来のポリアミンオキシダーゼがポリアミンに対す
る一値が非常に小さいうえ、生産性が高く且つ該ポリア
ミンオキシダーゼとプトレッシンオキシダーゼを組み合
せしかもあるＰＨ範囲で反応させることにより、両ポリ
アミン酸化静素がポリアミンに正確かつ迅速に作用する
という知見を得、本発明を完成するに至った。

即ち本発明は、ポリアミンを含有する試料にポリアミン
酸化酵素を作用させ、生成する過酸化水素を定量するこ
とにより試料中の遊離のポリアミン量な求めるに際し、
該ポリアミン酸化酵素として、カラスムギ由来のポリア
ミンオキシダーゼ及びプトレツシンオ牛シダー−ｖ４−
ＰＲ＆５〜９．３　　（１）範Ｂテ作用すセルことを特
徴とするポリアミンの測定方法である。

本発明においてポリアミンを含有する試料としては、尿
、血液、リンパ液、腹水、真水。

精液、だ液等あらゆる体液更には微生物培養液や動植物
の組織が使用出来る。また該試料中に測定阻害物質例え
ば着色物質、還元物質が含まれるときは該試料に適当な
前処理！ｔはどこして使用するのが好ましい。該前処理
の方法は試料によって異なるが、イオン交換樹脂やシリ
カゲルを利用したポリアミンの抽出。

有機溶媒によるポリアミンの抽出、トリクロロ酢酸や過
塩素酸による除蛋白処理等が適宜用いられる。またアセ
チル複合体ポリアミンなどの非遊離のポリアミンを含む
試料例えば尿等の試料については、あらかじめ４〜１０
規定＃Ａ醗やアシルポリアミン加水分解酵素等による加
水分解処理を行ない、すべて遊離のポリアミンに変換し
たのち本測定用の試料とするのが好ましい。

また本発明で使用するポリアミンオキシダーゼは、カラ
スムギ由来のポリアミンオキシダーゼである必ｌ！があ
る。オキシダーゼは発芽カラスムギ中に大量に含有され
ている。

（約ｌＯ単位／グラム・芽）該カラスムギからの抽出方
法は特に限定されないが一般に例えば次の方法により調
製できる。例えばカラスムギの芽に０．１Ｍ塩化ナトリ
ウム溶液を加えてホモジネートし、ガーゼ等で濾過した
濾液に硫酸アンモニウムを加えて塩析する。遠心分離で
沈澱を採取し、この沈澱に０．０５Ｍ−クエン陳緩衝液
（ＰＨａ、Ｏ）！加えて沈澱を溶解したのち、同緩衝液
で透析する。この程度の部分精製酵素でも十分実用に耐
え得る。

勿論必要に応じて再に精製して使用すればよい。

更に本発明で使用する他のポリアミン酸化酵素はプトレ
ッシンオキシダーゼである。該プトレッシンオキシダー
ゼは、総ポリアミンのうちの少なくともプトレッシン及
びカダベリンと反応し且つ反応性な有するポリアミンを
酸化した際、各々１モルの過酸化水素な生成するもので
あればいずれでもよい。一般に好適に使用されるものを
例示すればミクロコツカス・７ラビダスのプトレッシン
オキシダーゼやミクロコツカス−ローゼウスのプトレッ
シンオキシダーゼ等があげられる。これらのプトレッシ
ンオキシダーゼは、微生物１１体内より公知の生化学的
手法を用いて調製すればよい。

本発明においては、前記ポリアミンオキシダーゼとして
カラスムギに由来のポリアミンオキシダーゼを使用し、
しかも該ポリアミンオキシダーゼをプトレッシンオキシ
ダーゼと組合せて使用することが必要である。しかしな
がら、カラスムギ由来のポリアミンオキシダーゼのどの
ような機能又は因子がプトレッシンオキシダーゼと作用
し、本発明の作用効果を発揮するのかその作用機構は現
在なお明らかではない。

本発明においては、また上記ポリアミン醸化酵素ｔｋＰ
Ｈ＆５〜９３好ましくは６．８〜９．０の範囲で作用さ
せることも重要な要因である。

該ＰＨの調整は試料のＰＨ調整を実施することで行って
もよいが一般には緩衝液を使用すると好適である。該緩
衝液は緩衝作用を有するものであれば種類を問わず、例
えばリン酸緩衝液、トリス緩衝液、ホウ酸緩衝液、クエ
ン酸緩衝液及び一連のグツド緩衝液等が好適に用いられ
る。該ＰＨの調整は総ポリアミンを測定しようとする試
料にポリアミン酸化酵素を加える前に上記緩衝液で行う
のが望ましいが、緩衝液に溶解したポリアミン酸化酵素
を加えることによって同時に試料のＰＨ調整することも
可能である。

本発明における前記ポリアミン酸化酵素の作用温度は特
に限定されず適宜選択して採用すればよいが一般には２
０℃〜４５℃好ましくは３０℃〜４０℃の範囲が好適で
ある。

本発明においては前記ポリアミン酸化酵素の作用により
、試料中の総ポリアミンｌに対応したモル数の過酸化水
素が生成する。この生成した過酸化水素を測定すること
によりポリアミン量を求めることが出来る。該過酸化水
素の定量には公知の過酸化水素定量法のいずれでも適用
できる。例えばペルオ千シダーゼの存在下、４−７ミノ
アンチビリンと水素供与体である色原体とを過酸化水素
によって酸化縮合させ、生成した色素を比色する方法が
好適である。この場合の色原体としては、フェノール、
２，４−ジクロロフェノール。

Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロ牛シー３−スルホプロピ
ル）−篤−トルイジンφナトリ９ム墳、Ｎ−エチル−’
Ｎ−（２−ヒドロ中シー３−スルホプロピル）−３，５
−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩及びジエチルアニ
ンなどが用いられる。

本発明における試料中の総ポリアミン量の求め方は特に
限定されないが例えば次の方法で求められる。既知濃度
（Ｃｐ）のポリアミン標準液ｔ−１１１１Ｌ、該ポリア
ミン標準液と試料とを同じ操作で反応させ、生成した過
酸化水素を前記の定量法に従い発色させ、瀾定したポリ
アミン標準液の吸光＆　（Ｅ＊）と試料の吸光度（Ｉｔ
）及び試薬盲検の吸光度（Ｅｋ＋）から式ｌに従って計
算する。

式ｌ ８日−Ｅｂ 〔作用及び効果〕 本発明の特徴の１つは、プトレツシンオキシダーゼとカ
ラスムギ由来のポリアミンオキシダーゼを組み合せるこ
とである。両者を組み合せて作用させることにより、１
段階で試料中の総ポリアミ装置に対応したモル数の過酸
化水素を生成させ、該過酸化水素を定量することにより
試料中の総ポリアミン量を経済的かつ正確に求めること
がで自る。

本発明のもう１つの特徴は、ポリアミンに対するｉ値の
非常に小さいカラスムギ由来のポリアミンオキシダーゼ
とプトレツシンオ中シダーゼ七組み合せて特定のＰＨ範
囲で作用させることにより、全ポリアミンの敏化反応か
非常に連（完了することである。作用ＰＲ範囲としては
前記のようにＰＨ６，５〜９３好ましくはＰＨＩＬ８〜
９０　更に好ましくはＰＨ７，２〜＆２　が好適である
。このＰＨ範囲で両ポリアミン賑化静素を組み合せる効
果を具体的に示す。

表−１はプトレッシン２０　ｎｍｏｌ・／−及びスペル
ミン２０　ｎｍｏｌ・／ｉｌｊを基質とし、α１Ｍトリ
ス−塩酸緩衝液（ＰＨ＆Ｏ）中、３０℃で、カラスムギ
由来のポリアミンオキシダーゼ１２単位のみな作用させ
た場合と、ミクロコツカス・７ラビダス由来のプトレツ
シンオキシダーゼ２０単位のみを作用させた場合と、及
び両者な共に作用させた場合の反応時間と吸光度の関係
を示したものである０表−１に示される結果を第１図と
して表わす。第１図中、■の曲線はカラスムギ由来のポ
リアミンオキシダーゼ１２単位のみを作用させた場合を
、■の曲線はミクロコツカス・フラビダス由米のブトレ
ツシンオ中シダーゼ２０単位のみを作用させた場合を、
■の曲線は両者を共に作用させた場合な示している。

表−１ 両者を共に作用させた場合、全ポリアミンＩＩ（この場
合プトレッシン＋スペル之ン）に対応した発色強度が得
られるのみでな（、プトレツシンオ中シダー＜ｔ−単独
で作用させたときプトレッシンオキシダーゼが基質（プ
トレッシン）をすべて激化するに要する時間（約１５分
）よりはるかに速く（約７．５分）全ポリアミシＶ絨化
し終っている。

表−２には表−１と同じ実験を叉応液のＰＲを変えて行
なった結果を示す。ＰＨと反応完了に要する時間（反応
時間）との関係を示す。

ＰＲ緩衝液トＬ　テＰ　ＨＩＬＯ〜６．０ではαＩＭク
エンＲ繰衝液を、ＰＨ＆５〜７．０ではα１Ｍリン酸緩
衝液を、ＰＨ７，５〜９，０では０．１Ｍ）リスー壌酸
緩衝液を、ＰＨ９，５〜１α０では０．１Ｍホウ識緩衝
液を使用した。表中プトレッシンオキシダーゼをＰＵＯ
と、ポリアミンオキシダーゼ１ｌｋＰＡｏと、プトレッ
シンをＰｕｔと、スペルミンをＳｐｍと略記した。

表−２ 本に応ｌｋ件ニ！イテ、ＰＨ４５〜９．３ノ１ｌｉｌ！
１では着しく短時間で酸化が可能で特にＰＩ１８〜９．
０では全ポリアミンを３０分以内に激化できる。更にＰ
Ｈ７，２〜ｌＬ２の範囲では反応は１０分以内に完了し
、プトレッシンオキシダーゼを単独で作用させたとき全
プトレッシンを酸化するに要する時間の半分程度となっ
ている。もちろんこの反応時間は使用するそれぞれの酵
素蓋を変えることにより変動する。

この現象はおそらく、プトレッシンオキシダーゼが基質
類似体であるスペルミンによって阻害を受けるが、カラ
スムギ由来のポリアミンオ千シダーゼは基質類似体であ
るプトレッシンで阻害を受けず、しかも該ポリアミンオ
キシダーゼのスペル虐ンに対するｉ値が非常に小さいた
め、試料中のスペルミンはすみやかに酸化され消失する
。スペルミンの消失に伴ないプトレッシンオキシダーゼ
にかかつていたスペルミンによる阻害は短時間のうちに
軽減すれて、プトレッシンオキシダーゼの酸化反応も迅
速に完了できるのであろう。

次に実施例において本発明な更に詳細に説明する。尚実
施例におけるプトレッシンオ牛シダーゼ、ボリア叱ンオ
牛シダーゼ及びペルオキシダーゼの活性は下記測定法に
よって求めた。

（１）　　プトレッシンオキシダーゼの活性測定法αＩ
Ｍ）’ＪＸ−ｊｊ＆緩衝液（Ｐ　ＨＮＯ）１００−に４
−アミノ７ンチビリン１０．２ｍ１９，２゜４−ジクロ
ロフェノール４．９■、ペルオキシダーゼ（シグマ社製
、タイプ■）５ηを溶解し発色液とする。発色液α７５
−に５ｍＭプトレッシン０．１５Ｕを加え３０”Ｃで３
分関係渇したのち、酵素液０．０５１ｕを添加し反応さ
せる。反応開始後１分間の５１０・！Ｌ易における吸光
度の上昇（ΔＡ３１０）を測定し、式２に従って酵素活
性を計算する。

なおこの場合の発色の分子吸光係数として、ｇ、６００
　（ｆ’ａａ−’）を用いている。ブトレツシンオ中シ
ダーー１／１単位とは、ＰＨ＆Ｏ。

３０℃において毎分１　！１１１０工・のプトレッシン
を酸化する酵素社である。

式２ プトレツシンオキシダーゼ活性（単位／―）０．０５　
　　　　９．６ Ｑ）　ポリアミンオキシダーゼの活性測定法　。

前起（１）のプトレツシンオキシダーゼの活性測定法に
おいて、α］　Ｍ）！Ｊスー墳駿緩衝液（ＰＲ＆Ｏ）の
変わりにα１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨａ５）な使用し、基
質の５ｍＭプトレッシンの変わりに５　ｒｎＭスペルミ
ンを使用すれば、（υと全く同様にしてポリアミンオＪ
？９ダーゼ活性を求められる。

（３）　　ペルオキシダーゼの活性測定法グアヤコール
α２２−を１００−の精製水に溶解しグアヤコール試薬
とする。３０幅過酸化水素水α０８３−な１００−の精
製水に溶解して過酸化水素試薬とする。

α】Ｍリン酸緩衝液（ＰＥ７．Ｏ）　　λ〇−にグアヤ
コール試薬Ｑ、０５−と過酸化水素試薬α２０−を加え
、３０℃で３分間保温したのち、酵素液０．０５−を添
加し反応させる０反応開始後１分間の４３６　ｎｍ　に
おけ′る吸光度の上昇（ΔＡ４３６）を測定し、式３に
従って酵素活性を計算する。

式３ ペルオキシダーゼ活性（単位／−） また以下の実施例で使用する試薬類の略記は下肥の定義
の通りである。

標準液：　３　Ｑ　ｎｍｏｌ・／−プトレッシン水溶液
。

緩衝液Ａ：α４Ｍ）リス−塩酸緩衝液（ＰＨ＆Ｏ）酵素
試薬Ａニアシルポリアミン加水分解酵素３０単位／―を
含ｔｒαＩＭリン象緩衝液（ＰＨ７，２）。

溶血ｔ＆：１．５％　　）９．）：／Ｘ−１００を含ｔ
ｒαＩＭトリスー塩ｍａｔ衝液（ＰＨＩＬＯ）。

カラムＡ：１ｉｌｌ！性カチオン交換樹脂α１２ＪＩを
充填したくニカツム。

脱着液Ａ：（１４Ｍ）’ｌクロロ酢酸溶液。

脱着液Ｂ：α４Ｍ壌象溶液。

中和液：α３Ｍ）リス−（ヒドロ牛ジメチル）−アミノ
メタン溶液。

酵素試１＆Ｂ：プトレッシンオ中シダーゼ（ミクロコツ
カス番フラビダス白来）２０単位／ Ｈｌ、ポリアミンオ牛シダーゼ（カラスムギ由来）α２
単位／―、ペルオ牛シ ダーゼ（シグマ社製、タイプ■）１０ 単位／−０４−７ミノアンチビリン ０．３■／ｍ、２．４−ジクロロフェノール１５ｑ／−
を含ｂαＩＭ）リス− 塩酸緩衝液（ＰＨ＆Ｏ） 更にまた以下の実施例において、プトレッシンはｐｕｔ
と、カダベリンはＣａｄと、スペル叱ジンは５Ｐ（ｌと
、スペルミンはＳｐｍとそれぞれ略記する。

実施例１ ４−アミノアンチピリン１α２η、２．４−がりｐマフ
エノール４．９叩、ペルオキシダーゼ３３Ｇ単位を（Ｌ
ＩＭ）リスー塩醗緩衡液（ＰＨ７，８）に溶解し発色試
薬人とした。

発色試薬Ａ！８２１１ｊに基質液として２　ｍＭｐｔｍ
ｔ又はＱ　ＩＢＭ　（ａ　Ａ又は２１１１Ｍ　８１１　
’！又は２　ｍＭ　Ｓ　ｐ　ｍ又はこれら四種ポリアミ
ン溶液の１：１：１！１の混合液のいずれかをα０８−
添加し、３７℃で３分間保温する。

保温後ミク冒コツカス・フラビダス由来のプトレッシン
オキシダーゼ２０単位のみ、又はカラスムギ由来のポリ
アミンオキシダーゼ１２単位のみ、又はプトレッシンオ
キシダーゼ２０単位とカラスムギ由来のポリアミンオキ
シダーゼ１２単位の両方のいずれかの酵素を加え（添加
量はいずれもα１−）、混合液３７℃で１０分間反応さ
せたのち、精製水を対照として５１０　！ｌ鳳　におけ
る吸光度を測定した。

結果は表−３に示した。

表−３ 実験番号１〜５により、このプトレツシンオ中シダーゼ
がＰ　ｕ　ｔ　＊　（ａ　ｄ及び５Ｐ（ｌを基質とし、
等モルの過酸化水素を生成していることがわかる。α０
１０　の吸光度は試薬盲検に相当する。実験番号５でＰ
　ｕ　ｔ　ｅ　Ｃａ　６及び５）ｄの総鰍に相当する吸
光度（およそα６１）が得られていないのはｓ　８　Ｐ
　”の阻害により反応がまだ完了していないからである
。実験釜号６〜１０により、カラスムギ由来のポリアミ
ンオキシダーゼが８１１１１及び５ｐａｔ−基質とし等
モルの過酸化水素を生成している仁とがわかる。実験番
号１１〜１５から、両酵素を組み合せることにより、い
かなる組成のポリアミン試料でも総ポリアミン量が正確
かつ迅速に測定できることが判る。

実施例２ 精−水、標準液、尿、各Ｉ　Ｌ　５　ｎｍｏｌ＊７−の
ｐｕｔ＠　Ｃａａｅ　５ｐａｔ　ａｌｌ墓を添加した尿
（添加尿ｌ）、各２４０　ｇａｏｌｅ／−のｐｕｔ。

Ｃａ　Ａｅ　Ｓ　ｐ　ａｍ　Ｓ　Ｘｌ”ｋ株加Ｌｆ尿（
添加尿２）の５本を試料とし、以下の測定操作に従い総
ポリアミン量を測定した。

〔測定操作〕

（１）　　試料１．０−に緩衝液ＡＬＯ−と酵素試薬Ａ
　１．ＯｍＶ’ａ１ＪａＬ攪拌後３７℃で１時間保温し
て、アセチルポリアミンを遊離化する。

（２）　　３．０００　ｒ）ｐｍ、５分間遠心分離し、
上澄液全量をカラム人に流し込みポリアミンをイオン交
換樹脂に吸着させる。

（３）　　精製水１０１１１４でカラム人を洗浄する。

（４）　　脱着液Ａ１．０−でポリアミンを溶出し、中
和液１．０−を加えて中和する。（ＰＨは約＆０となる
） （５）＃素試薬Ｂを１．０−添加し、３７℃で１０分間
保温後、精製水を対照に５１０　ａｍにおける吸光度Ｖ
測定する。

本測定操作に基づく５本の試料の＠光度は表−４のとお
りであった。また前述の式ｌにより計算したポリアミン
鷺もあわせて記す。

表−４ 表中の値から添加回収率を計算すると、添加尿１は９７
．６％、添加尿２は９＆３％と良好であり、尿中ポリア
ミン量が正しく測定されたことが判る。

実施−例３ 精製水、標準液、血液、各１　！５　ｍｍｏｌｅ／ｋｊ
のｐｕｔ、Ｃａａ、５ｐｄｓ　ＳｐｍＹ添加した血液（
添加血液１）、各２　＆　Ｏｎｍｏｌｅ／ｋｊのＰｕｔ
ｓ　（ａａ、１ｐａｔ　８ｐｙｍ’を添加した血液（添
加血液２）の５種類な試料とし以下の測定操作に従い総
ポリアミン量を測定した。

３種類の血液試料については各１０本ずつ測定し同時再
議性試験な行った。

〔測定操作〕

０）　試料１．０−に溶血液１０−を添加し、赤血球な
溶血さぜる。

１３　３．０００　ｒｐ鳳５分間遠心分離し、上澄液全
量をカラム人に流し込みポリアミンをイオン交ＩＩ！樹
脂に吸着させる。

Ｏ）　精１水λ０ＩＩＪＸ２回、カラムＡｔ’洗浄する
。

＠ン　脱着液Ｂ１．０１１ｊでポリアミンを溶出し、中
和液１０−を加えて中和する。（ＰＨは約＆０となる） （５）　　健素試４Ｂ＆ｔｏ−添加し、３７℃で１０分
間保温湯後精纒水を対照に５１０　ｎｗ＊における＠光
度を測定する。

表−５には同時再現性試験結果が示される。

表−５ 同時再現性は２憾以下と非常に良好であり。

本測定法により血液中線ポリアミン量が精度よく測定で
きることが判る。

表−６には５種の試料の吸光度とポリアミン値が示され
る。血液試料については１０本の平均値を採用した。

表−６ 表中の値から添加回収率を計算すると、添加血液ｌは９
９．４襲、添加血液２は１０α９≦と非常に良好であり
、本測定法により血液中線ポリアミン量が正確に測定さ
れることが判る。

【図面の簡単な説明】

第１図は、プトレッシン及びスペルミンを含ム系にカラ
スムギ由来のポリアミンオ中シダー（のみな作用させた
場合の反応時間と生成過酸化水素に基づく吸光度の変化
との関係を示すグラフを曲線■に、同様にプトレツシン
オ中シダーゼのみを作用させたときのグラフを曲線■に
及び両酵素を共に作用させたときのグラフを曲線■にそ
れぞれ示した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ポリアミンを含有する試料にポリアミン酸 化酵素を作用させ、生成する過酸化水素を定量すること
   により試料中の遊離のポリアミン量を求めるに際し、該
   ポリアミン酸化酵素としてカラスムギ由来のポリアミン
   オキシダーゼ及びプトレツシンオキシダーゼをＰＨ６．
   ５〜９．３の範囲で作用させることを特徴とするポリア
   ミンの測定方法。