JPS636078B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規アミノプロピルアミノブレオマイ
シン誘導体に関する。ブレオマイシンは1966年本
発明者の一人である梅沢らにより発見された制癌
性抗性物質で（梅沢ら：ジヤーナル・オブ・アン
チビオチクス、200頁、1966年）放線菌ストレプ
トミセス・バーチシラスにより生産される１原子
の２価の銅を容易にキレートする塩基性水溶性糖
ペプチドで、通常の培養法では16種の含銅体が生
産され、単離されている。（例えば、梅沢ら：ジ
ヤーナル・オブ・アンチビオチクス19A、210頁、
1966年）。これらブレオマイシンのうち、A1、
A2、A5、B2、デメチルA2等は、その混合物の
脱銅体（以下「ブレオマイシン・コンプレツク
ス」という。）が現在すでに癌治療の臨床面で広
く使用されており、とくに偏平上皮癌を中心に、
皮膚癌、頭頚部癌、肺癌、悪性リンパ腫などに優
れた成績をあげている。 また、米国特許第3922262号及び米国特許第
Re30451号には種々のブレオマイシン類が開示さ
れている。 しかしながら、ブレオマイシン類は使用法によ
つては肺毒性などの副作用を生じるため、使用法
等がいちじるしく制限される。 そこで本発明者らはブレオマイシン類の肺毒性
などの副作用をへらすために種々研究の結果、ア
ミノプロピル−Ｎ−メチル−アミノプロピルアミ
ノブレオマイシン（以下APMP−BLMと略す）
のアミノ基を修飾することによりAPMP−BLM
の肺毒性が著じるしく減ずることを見いだし本発
明を完成した。 本発明の新規アミノプロピルアミノブレオマイ
シン誘導体は含銅体及び脱銅体の双方を含み、一
般式［］ ［BX］−NH−（CH2）３−Ａ−（CH2）３ −Ｂ ［］ ［式中［BX］は次式 で表わせる（含銅体の場合はキレート銅を省略）
ブレオマイシン酸のカルボキシル基から水酸基を
除いた残基を示し、Ａは式

【式】 【式】

【式】 又は

【式】で示される基（ここでR1 は水素原子、低級アルキル、ベンジル、R2は低
級アルキル、ベンジル、Ｒは低級アルキレンであ
る）を示しＢは式

【式】で示される基（ここ でR3、R4はそれぞれ(1)水素原子、(2)フエニル、
ナフチル、フリル、チオフエン、ノルボルネン、
シクロアルキル、で１つ以上置換されていてもよ
いアルキル（これらの置換基はさらにハロゲン原
子、低級アルキル、低級アルコキシ、シアノ、ハ
ロゲノメチル、ベンジルオキシ、から選ばれる１
種又は２種以上で置換していてもよい））を示す。
但し、R3、R4のどちらか少なくとも一方は水素
原子以外の基である。］で表わされる。 上記において、低級アルキルとしては、例えば
メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−
ブチル、イソブチル等が、ハロゲンとしては、例
えばフツ素、塩素、臭素等が、低級アルキレンと
しては、例えばエチレン、トリメチレン、テトラ
メチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン等
が、シクロアルキルとしては、例えばシクロペン
チル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロ
オクチル、シクロデカニル、シクロウンデカニル
等が、低級アルコキシとしては、例えばメトキ
シ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等が、ハロ
ゲノメチルとしては、例えばトリフルオロメチ
ル、トリクロロメチル等が挙げられる。 上記Ａにおける

【式】としては例えば

【式】 【式】

【式】等が、

【式】としては例えば

【式】 【式】

【式】

【式】等が、

【式】として 例えば

【式】等があげられる。 上記一般式［］で表わされる化合物のうち薬
理活性の点から好ましいものとしては、Ａが

【式】またはＡにおけるR1が低級アル キル、R2がなし、または、低級アルキルまたは
ベンジル、Ｂにおける、R3がクロロ置換フエニ
ルメチルまたはエチル、シアノ置換ベンジル、
C5〜C11のシクロアルキルで置換された低級アル
キル、R4が水素、ベンジルである化合物が挙げ
られる。 本発明化合物のうち代表的なものとしては例え
ば第一表の化合物があげられる。

【表】 ルエチルアミノ）プロピル〕ア
ミノ｝プロピルアミノBLM

【表】 ジルアミノ）プロピル〕アミノ〓
プロピルアミノBLM

【表】 ジベンジルオキシベンジル）ア
ミノ）プロピル〕アミノ｝プロ
ピルアミノBLM

【表】 なお化合物名中の「BLM」は「ブレオマイシ
ン」の語を示す。これらの中でも化合物No.７、
15、18、19、20、22、32、34、35、37、38、39、
41、42、43、44、45等はとくに好ましい。 上記一般式［］で示される本発明化合物は次
のように製造することができる。 一般式［］ ［BX］−NH−（CH2）３−Ａ−（CH2）３ −NH2 ［］ ［式中［BX］、Ａは前記と同じ。］ で示されるアミノプロピルアミノブレオマイシン
に、一般式［］ R5−CO−R6 ［］ ［式中R5、R6はそれぞれ(1)水素原子(2)シクロア
ルキル(3)シクロアルキル又はフエニルで１つ以上
置換されてもよいアルキル（フエニルはさらにハ
ロゲン原子で置換されてもよい）(4)ハロゲン原
子、低級アルキル、低級アルコキシ、ベンジルオ
キシ、シアノ、ハロゲノメチルの１種又は２種以
上で置換されていてもよいフエニル(5)ナフチル(6)
チオフエン(7)フリル(8)ノルボルネンを示す。］ で示されるカルボニル化合物を還元的に縮合する
ことにより、前記一般式［］の化合物を得るこ
とが出来る。 縮合に用いる還元剤としては、シアノ水素化ホ
ウ素ナトリウムなどの水素化ホウ素化合物などが
あげられる。またパラジウム炭素などの触媒をも
ちいて接触還元をおこなつてもよい。カルボニル
化合物は１〜1.5モルを用いれば、主としてR4が
水素の誘導体、３モル以上用いればR3、R4が同
じ誘導体が得られるが、望ましい添加量はR4が
水素の誘導体では1.2モル、R3、R4が同じ誘導体
では10モル、R1、R3、R4が同じ誘導体（化合物
番号40）では15モルである。又式〔〕の化合物
としてｍ・ｐ−ジベンジルオキシベンズアルデヒ
ドのようにメタノールに溶けにくい化合物をもち
いる場合には反応時間を増加させれば添加量を減
じてもよい。 反応は溶媒として、メタノール、水、ジメチル
フオルムアミド、アセトニトリル、それらの混合
液が用いられる。温度は０〜50℃がよい。よりく
わしくは、R4が水素の誘導体では０℃から25℃、
ケトンを用いる場合、R3、R4が同じ誘導体で特
に立体障害の大きいアルデヒド、又は溶解度の低
いアルデヒドを用いる場合は35〜50℃に暖めるこ
とが望ましい。反応時間は３時間〜70時間がよ
い。立体障害の大きいアルデヒド、又は溶解度の
低いアルデヒドを用いる場合は時間を長くするこ
とが有効である。 以上のようにして得られた誘導体を単離するに
は、水素化ホウ素化合物を用いた場合には、塩酸
で反応液のPHを１に合わせ室温で５〜10分撹拌し
過剰の還元剤を分解したのち中和し、メタノール
を減圧で溜去した後、過剰のアルデヒド、ケトン
をエーテル又はブタノールで抽出除去し、続いて
次の脱塩操作を行なつた。即ち吸着樹脂たとえば
アンバーライトXAD−２（ローム・アンド・ハ
ース社製）を蒸留水を用いて充填したカラムに注
入して、目的物を吸着する。蒸留水で塩類をあら
い流した後、酸性の含水メタノール、たとえば1/
５０規定塩酸水溶液ーメタノール（１：4v／ｖ）
で溶出し、青色のブレオマイシン誘導体の分画を
集め必要ならば、陰イオン交換樹脂、ダウエツク
ス44（OH型；ザ・ダウ・ケミカル社製）で中
和したのち、減圧下で濃縮して凍結乾燥すると、
誘導体の青色粗粉末がえられる。 さらに純度をあげるためつぎの操作を行なう。 上記の粉末を蒸留水に溶解し、あらかじめPH
4.5、１／20モル酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液で
平衡化したCMセフアデツクスＣ−25（Na＋
型：フアルマシア、フアインケミカル社製）を充
填したカラムに注入し吸着する。上記の緩衝液に
連続的に塩化ナトリウムを加えることによりナト
リウム濃度を1.0モルまで除去に上昇させる直線
濃度勾配法により溶出する。もし目的物の分画に
不純物の混入が認められれば、上記のクロマトグ
ラフイーにつづいて吸着樹脂たとえばアンバーラ
イトXAD−２を用いるクロマトグラフイーを
おこなつてもよい。樹脂を緩衝液、たとえば４％
酢酸アンモニウム水溶液、を用いて充填したカラ
ムに粗物質の水溶液を注入して、目的物を吸着す
る。緩衝液に連続的にメタノールを加えることに
よりメタノール濃度を除々に上昇させる直線濃度
勾配法により溶出する。この時未反応の原料は最
も早く、次いでR4が水素の誘導体が溶出し、
R3、R4が同じ誘導体が最後に溶出する性質があ
るので、紫外線吸収モニターを用いることにより
分離することが可能である。もし目的物の分画に
不純物の混入が認められれば、上記のクロマトグ
ラフイーを再度行ない完全除去をはかればよい。 このようにして得られる目的物の分画のメタノ
ールを減圧で溜去した後、先に用いたアンバーラ
イトXAD−２脱塩法で脱塩したのち、凍結乾燥
すると、アミノプロピルアミノブレオマイシン誘
導体の含銅体が青色の無定形粉末で得られる。 このようにして得られるアミノプロピルアミノ
ブレオマイシン誘導体の含銅体を公知の方法、た
とえばEDTAを用いる方法（特公昭52−31875）
で脱銅すれば脱銅体が得られる。 その一例を説明すると、含銅体を蒸留水に溶解
し、これを蒸留水で充填したアンバーライト
XAD−２のカラムに注入し吸着する。樹脂を塩
化ナトリウムと５％のエチレンジアミン四酢酸・
２ナトリウム（以下「EDTA・2Na」という）
からなる水溶液でカラムを洗うと、銅イオンは
EDTA・2Naにより運び去られ、アミノプロピ
ルアミノブレオマイシン誘導体（脱銅体）が樹脂
上に残る。塩化ナトリウムで洗いEDTA・2Na
を除去し、さらに蒸留水で洗浄する。最後に酸性
含水メタノール、たとえば1/50規定塩酸水溶液−
メタノール（１：4v／ｖ）で溶出し波長290ミリ
ミクロン付近に吸収極大を示す分画を集める。ダ
ウエツクス（OH型；ザ・ダウ・ケミカル社
製）でPH6.0に合わせた後、減圧下で濃縮し、凍
結乾燥するとアミノプロピルアミノブレオマイシ
ン誘導体の脱銅体・塩酸塩が白色の無定型粉末で
得られる。 もし、上記の塩酸水溶液のかわりに、硫酸水溶
液を用いれば硫酸塩が得られる。このように、上
記溶出工程で用いられる酸の種類を選択すること
により、所望の塩とすることができる。 以上に説明した方法により製造されるアミノプ
ロピルアミノブレオマイシン誘導体を６規定塩酸
水中で、105℃、20時間加水分解にかけると、
BLM類に共通する分解生成物［Ｌ−トレオニン、
β−アミノ−β−（４−アミノ−６−カルボキシ
−５−メチル−ピリミジン−２−イル）プロピオ
ン酸、４−アミノ−３−オキシ−２−メチル−ｎ
−ペンタン酸、β−オキシ−Ｌ−ヒスチジン、β
−アミノ−Ｌ−アラニン、2′−（２−アミノエチ
ル）−２・4′−ビチアゾール−４−カルボン酸］
とアミンが検出された。又アンバーリスト15を用
いたメタノリシスでは、ブレオマイシンと同じＬ
−グロース、３−Ｏ−カルバモイル−Ｄ−マンノ
ースのメチルグリコシドがガスクロマトグラフイ
ーで検出された。 以上の事実は本発明の方法によつて製造された
アミノプロピルアミノブレオマイシン誘導体が前
記式［］で表される化学構造を有することを裏
づけている。 一般式［］の化合物としては、 (1) ３−［Ｎ−（３−アミノプロピル）アミノ］
プロピルアミノブレオマイシン（APP）、(2) ３
−［Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−メチルアミ
ノ］プロピルアミノブレオマイシン（APMP）、
(3) ３−［Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ・Ｎ−
ジメチルアミノ］プロピルアミノブレオマイシン
（MMHH）、(4) ３−［Ｎ−（３−アミノプロピ
ル）−Ｎ・Ｎ−ジエチルアミノ］プロピルアミノ
ブレオマイシン（EEHH）、(5) ３−［Ｎ−（３−
アミノプロピル）−Ｎ・Ｎ−ジブチルアミノ］プ
ロピルアミノブレオマイシン（BBHH）、(6) ３
｛Ｎ−［3′−（N′（３−アミノプロピル）−N′・N′
−
ジメチルアミノ）プロピル］−Ｎ・Ｎ−ジメチル
アミノ｝プロピルアミノブレオマイシン
（PP4M）、(7) ３−［４−（３−アミノプロピル）
−ピペラジン−１−イル−］プロピルアミノブレ
オマイシン（PY）(8) ３−［Ｎ−（３−アミノプ
ロピル）−Ｎ−メチル−Ｎ−ベンジルアミノ］プ
ロピルアミノブレオマイシン（MBZHH）等が
挙げられる。但し（ ）内は略号を示す。 一般式［］の化合物としては、 ｐ−クロロフエニルアセトアルデヒド、フエニ
ルアセトアルデヒド、ベンズアルデヒド、ｐ−ク
ロロベンズアルデヒド、ｍ−クロロベンズアルデ
ヒド、ｏ−クロロベンズアルデヒド、ｍ・ｐ−ジ
クロロベンズアルデヒド、ｏ・ｐ−ジクロロベン
ズアルデヒド、ｐ−フルオロベンズアルデヒド、
ｐ−ブロモベンズアルデヒド、ペンタフルオロベ
ンズアルデヒド、ｐ−メチルベンズアルデヒド、
ｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒド、ｐ−メト
キシベンズアルデヒド、ｏ・ｐ−ジメトキシベン
ズアルデヒド、ｐ−クロロフエニルメチルケト
ン、ｍ・ｐ−ジベンジルオキシベンズアルデヒ
ド、３−フエニルプロパナール、ジフエニルアセ
トアルデヒド、ｐ−シアノベンズアルデヒド、ｍ
−トリフルオロメチルベンズアルデヒド、１・３
−ジフエニルアセトン、アセトフエノン、フルフ
ラール、チオフエン−２−アルデヒド、シクロ−
ヘキサノン、シクロ−ペンチル−アルデヒド、シ
クロ−ヘキシル−アルデヒド、シクロ−ヘキシル
−アセトアルデヒド、シクロ−ペンチル−アルデ
ヒド、シクロ−オクチル−アルデヒド、シクロ−
ウンデカノイルアルデヒド、５−ノルボルネン−
２−アルデヒド等が挙げられる。 前記一般式［］の化合物は次のように合成さ
れる。 (1)ブレオマイシン酸と一般式［］ NH2−（CH2）３−Ａ−（CH2）３ −NH2 ［］ ［式中Ａは前記に同じ。］ で示される化合物を、公知の方法（たとえば、特
開昭54−63089号参照）と同様にして、縮合する
か、(2)米国特許第Re30451号に開示される方法、
すなわち、一般式［］で示されるアミンを添加
して、ストレプトミセス・バーチシラス
（Streptomyces verticillus）に属するブレオマイ
シン生産菌例えばストレプトミセス・バーチシラ
スNK−68−144（American Type Culture
Collection No.31307）を培養することによつて
も得ることができる。 一般式［］の化合物としては、例えば、 (1) ビス（３−アミノプロピル）アミン、(2)
ビス（３−アミノプロピル）メチルアミン、(3)
ビス（３−アミノプロピル）−ジメチルアンモニ
ウム塩、(4) ビス（３−アミノプロピル）−ジエ
チルアンモニウム塩、(5) ビス（３−アミノプロ
ピル）−ジブチルアンモニウム塩、(6) １・３−
（ビス（３−アミノプロピル）ジメチルアミノ）
プロパン、(7) １・４−（ビス（３−アミノプロ
ピル））ピペラジン、(8) ビス（３−アミノプロ
ピル）−メチル−ベンジルアンモニウム塩等が挙
げられる。 上記一般式〔〕の化合物のうち、一般式〔
ａ〕、〔ｂ〕 （式中R1、R2、Ｒは前記に同じ。） で示される化合物は本発明者らによつて初めて合
成された新規化合物であり、例えば次のようにし
て合成される。すなわち、一般式［ａ］の化合
物のうちR1とR2が同一である化合物の製造法は
一般式［］ （式中R1、R2は同一で、前記に同じ。） で示される３−アミノプロピルＮ・Ｎジアルキル
アミンを1.5当量の塩化ベンゾイルと反応せしめ、
反応物をアルカリ性にして、有機溶媒で抽出し、
一般式［］ （式中R1、R2は同一で、前記に同じ。） で示される、３−ベンズアミドプロピルＮ・Ｎジ
アルキルアミンとなし、次に３−ブロモプロピル
フタルイミドと反応させ一般式〔〕 （式中Phthはフタリル基を示し、R1、R2は同一
で、前記に同じ。） で示される四級塩とし、次いで６規定塩酸と110
度８時間加熱して加水分解後副生するフタル酸、
安息香酸を除き、濃縮し塩酸を出来るだけ除いた
後、蒸留水に溶かし陰イオン交換樹脂（C1型）
のカラムを通し濃縮すると、R1、R2が同一であ
る［ａ］の塩酸塩を得ることが出来る。この方
法により得られる化合物としては例えば、ビス
（３−アミノプロピル）−ジメチルアンモニウム
塩、ビス（３−アミノプロピル）−ジエチルアン
モニウム塩、ビス（３−アミノプロピル）−ジブ
チルアンモニウム塩等が挙げられる。又、化合物
［ａ］のうちR1とR2が異なる化合物は例えば、
Ｎ−メチルベンジルアミンに塩基存在下２当量の
３−ブロモプロピルフタルイミドと反応させて生
ずる四級塩を上記と同様に加水分解して得られ
る。この方法により得られる化合物としては例え
ばビス（３−アミノプロピル）−メチル−ベンジ
ルアンモニウム塩等が挙げられる。 又、式［ｂ］で示される化合物は、例えば、
１・３−（ビス−ジメチルアミノ）プロパンに、
３−ブロモプロピルフタルイミドと反応させ１・
３−（ビス（３−フタルイミドプロピル）ジメチ
ルアミノ）プロパンとし、次い上記と同様に加水
分解後副生するフタル酸を除き、イオン交換後、
濃縮することにより得ることができる。この方法
により得られる化合物としては、例えば、１・３
−（ビス（３−アミノプロピル）ジメチルアミノ）
プロパン４塩酸塩が挙げられる。 次に本発明のアミノプロピルアミノブレオマイ
シン誘導体の代表的な化合物につき、理化学的性
質を第２表に示す。

【表】

【表】 Ｒ○
註２：アビセルSF (FMC社)・ギ酸−酢酸−水(27
：75：900 v／v)800V、15分
次に本発明の化合物の代表例によつて調べた生
物学的諸性質を以下に説明する。 (1) ミコバクテリウム・スメグマチス・
ATCC697、及びバチルス・ズブチリスに対す
る抗菌活性 上記の検定菌を用いて、寒天平板円筒法によ
り測定した。ただし、標準物質ブレオマイシン
A2（脱銅体）を1000ｍcg力価／mgとした。 (2) 培養HeLaS3細胞に対する増殖阻害効果 プラスチツク・シヤーレの培養基（10％仔牛
血清添加MEM）にHeLaS3細胞を接種し、２
日後にブレオマイシン類を添加した。さらに３
日間培養を続けた後、細胞数を測定した。増殖
阻害率は次式 阻害率（％）＝100×（Ｂ−Ａ）／（Ｂ−Ｃ） ［式中、Ａは被験試料添加後３日目の最終細胞
数、Ｂは被験試料を添加しない対照における最
終細胞数、Ｃは被験試料添加時の細胞数を表わ
す。］を用いて算出した。試料濃度と阻止率の
グラフから、ID50値（50％阻害のための濃度）
を求めた。以上(1)、(2)の結果を第３表に示す。

【表】

【表】 (3) マウスの肺毒性（肺線維化）ICR系マウス
（雄性15週令）を一群９匹として用いた。各薬
剤の投与量は、５mg／Kgとし、１日１回、連続
10日間、腹腔内注射し、投与終了後、５週間飼
育し、観察後、屠殺剖検し、肺の線維化の頻
度、及び程度を調べた。 成績は、投与群の肺線維化をもつマウス数の
頻度（Incidence）及び、の強弱の程度
（Grade）について比較した。その結果を第４
表に示す。

【表】 なお表中の点数は下記のとおりである。 ０点：線維化を認めない。 １点：肺胞に浸出液の蓄積がみられ、肺胞中隔
に線維化様変化が見られる。 ２点：数か所にみられる線維化 ４点：散在性にみられる線維化 ６点：2/3以上の広範囲にみられる線維化 また、表中の比はブレオマイシンコンプレツ
クスとの比率を示す。 以上の結果から明らかなように、本発明化合物
は培養HeLaS3細胞に対する増殖阻害活性が強
く、優れた抗菌活性をも有しており、肺毒性を著
しく減じていることがわかり、臨床面での有用性
を強く示唆している。 次に本発明を実施例により具体的に説明する。 実施例 １ Ａステツプ ３−［Ｎ−メチル−Ｎ−（３−アミノプロピル）
アミノ］プロピルアミノブレオマイシン３塩酸塩
（含銅体）1.0ｇを30mlのメタノールに溶解し、シ
クロウンデカンカルボキサアルデヒド227mgを添
加し、ついで26mgのシアノ水素化ホウ素ナトリウ
ムを添加した。室温16時間反応した後、６規定塩
酸水溶液で反応液のPHを1.0に下げ、10分間放置
して反応を止めた。１規定水酸化ナトリウムで中
和したのち、減圧下でメタノールを溜去し、残渣
に蒸留水を加えて50mlとした。これを50mlのエー
テルで抽出し過剰のアルデヒドを除いた。予め４
％酢酸アンモニウム水溶液／２％酢酸水溶液
（１：1v／ｖ）を用いて充填したアンバーライト
XAD−２（ローム・アンド・ハース社製）のカ
ラムに（100ml容）に注入して、目的物を吸着し
た。上記緩衝液500mlにメタノール500mlを連続的
に加える直線濃度勾配法により溶出した。メタノ
ール濃度65％前後で溶出される波長290ミリミク
ロン付近に吸収極大を示す目的の分画200mlをあ
つめた。この分画からメタノールを減圧溜去して
得た水溶液を予め蒸留水で充填したアンバーライ
トXAD−２（ローム・アンド・ハース社製）の
カラムに（100ml容）に注入して、目的物を吸着
した。蒸留水150mlでカラムをあらつた後、1/50
Ｍ塩酸水溶液−メタノール（１：4v／ｖ）で溶
出した。ブレオマイシン誘導体の青色の分画を集
め、陰イオン交換樹脂、ダウエツクス44（OH
型；ザ・ダウ・ケミカル社製）で中和したのち、
減圧下で濃縮して凍結乾燥した。 上記の粉末を蒸留水10mlに溶解し、あらかじめ
PH4.5、１／20モル酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液
で平衡化したCMセフアデツクスＣ−25（Na＋
型：フアルマシア、フアインケミカル社製）を充
填したカラム（100ml容）に注入し吸着した。上
記の緩衝液に連続的に塩化ナトリウムを加えるこ
とによりナトリウム濃度を1.0モルまで除々に上
昇させる直線濃度勾配法により溶出した。550ml
の溶出液を流し、0.65モル前後で溶出する青色の
分画120mlを集め、先に用いたアンバーライト
XAD−２脱塩法で脱塩したのち、凍結乾燥する
と、３−｛Ｎ−メチル−Ｎ−［3′−（シクロウンデ
カニルメチルアミノ）プロピル］アミノ｝プロピ
ルアミノブレオマイシンの含銅体872mgが青色の
無定形粉末で得られた。（収率79％） Ｂステツプ Ａステツプで得た含銅体872mgを18mlの蒸留水
に溶解し、脱銅のため蒸留水で充填したアンバー
ライトXAD−２のカラム（100ml容）に注入し吸
着する。樹脂を塩化ナトリウムと５％の
EDTA・2Naからなる水溶液300mlで洗い、２％
塩化ナトリウム100ml、蒸留水150mlの順序で洗浄
した後、最後に1/50規定塩酸水溶液−メタノール
（１：4v／ｖ）で溶出し波長290ミリミクロン付
近に吸収極大を示す分画を集めた。ダウエツクス
44（OH型；ザ・ダウ・ケミカル社製）でPH6.0に
合わせた後、減圧下で濃縮し、凍結乾燥して３−
｛Ｎ−メチル−Ｎ−［3′−（シクロウンデカニルメ
チルアミノ）プロピル］アミノ｝プロピルアミノ
ブレオマイシン（化合物No.32）の脱銅体・３塩酸
塩758mgが白色の無定型粉末で得られた。（収率90
％） 本品の蒸留水で測定した紫外吸収極大は291ｍ
μE1％／１cmは87であつた。臭化カリ錠剤法で測
定した赤外吸収極大波数（cm^-1）は3425、2950、
1650、1550、1520、1440、1400、1260、1190、
1140、1100、1060、1020、980、800であつた。 その他の理化学的性状は第２表に示した通りで
ある。 上記の反応でアルデヒドとしてｍ・ｐ−ジベン
ジルオキシベンズアルデヒド988mgを用いて27℃
で70時間反応した後上記の方法で精製、及び脱銅
し３−｛Ｎ−メチル−Ｎ−［3′−（ビス（ｍ・ｐ−
ジベンジルオキシベンジル）アミノ）プロピル］
アミノ｝プロピルアミノブレオマイシン（化合物
No.34）の脱銅体・３塩酸塩762mgを無色無定型粉
末として得た。（収率57％） 本品の蒸留水で測定した紫外吸収極大は285ｍ
μE1％／１cmは86であつた。臭化カリ錠剤法で測
定した赤外吸収極大波数（cm^-1）は3425、2950、
1650、1550、1510、1460、1430、1380、1320、
1270、1190、1140、1060、1020、960、800、730、
690、650であつた。 同様にアルデヒドとしてシクロオクタンカルボ
キサアルデヒド174mgを用い室温で24時間反応し
た後精製、脱銅して、３−｛Ｎ−メチル−Ｎ−
［3′−（シクロオクチルメチルアミノ）プロピル］
アミノ｝プロピルアミノブレオマイシン（化合物
No.22）の脱銅体・３塩酸塩605mgを無色無定型粉
末として得た。（収率58％） 本品の蒸留水で測定した紫外吸収極大は291ｍ
μE1％／１cmは86であつた。臭化カリ錠剤法で測
定した赤外吸収極大波数（cm^-1）は3425、2925、
1650、1550、1520、1440、1400、1330、1260、
1190、1140、1100、1060、1020、980、800であつ
た。 本実施例と同様にして第５表の化合物が製造さ
れた。

【表】

【表】 実施例 ２ Ａステツプ ３−［Ｎ・Ｎ−ジエチル−Ｎ−（３−アミノプロ
ピル）］アミノプロピルアミノブレオマイシン３
塩酸塩（含銅体）1.0ｇを30mlのメタノールに溶
解し、ベンズアルデヒド642mgを添加し、ついで
51mgのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加し
た。室温16時間反応した後、実施例１と同様に塩
酸処理、エーテル抽出、アンバーライトXAD
−２カラムによるクロマトグラフイーを行なつた
後、先に用いたアンバーライトXAD−２脱塩法
で脱塩したのち、凍結乾燥すると、３−［Ｎ・Ｎ
−ジエチル−（３−ジベンジルアミノ）プロピル］
アミノプロピルアミノブレオマイシンの含銅体が
青色の無定形粉末で832mg得られた。（収率75％） Ｂステツプ Ａステツプで得た含銅体832mgを17mlの蒸留水
に溶解し、実施例1Bステツプと同様に脱銅し、
減圧下で濃縮し、凍結乾燥して３−［Ｎ・Ｎ−ジ
エチル−（３−ジベンジルアミノ）プロピル］ア
ミノプロピルアミノブレオマイシン（化合物No.
37）の脱銅体・３塩酸塩が白色の無定型粉末とし
て739mg得られた。（収率92％）本品の蒸留水で測
定した紫外吸収極大は291ｍμE1％／１cmは90で
あつた。臭化カリ錠剤法で測定した赤外吸収極大
波数（cm^-1）は3425、2975、2925、1640、1550、
1520、1490、1450、1400、1320、1260、1190、
1140、1100、1060、1020、980、910、800、740、
690であつた。 又、原料として、３−｛Ｎ・Ｎ−ジメチル−Ｎ
−［3′−（Ｎ・Ｎ−ジメチル−Ｎ−（3″−アミノプ
ロピルアミノ）プロピル〕アミノ｝プロピルアミ
ノブレオマイシン・４塩酸塩（含銅体）1.0ｇを
用い、ベンズアルデヒド607mgを上記と同様に反
応させ、精製、脱銅して、３−｛Ｎ・Ｎ−ジメチ
ル−Ｎ−［3′−（Ｎ・Ｎ−ジメチル−Ｎ−（3″−ジ
ベンジルアミノプロピル）アミノ）プロピル〕ア
ミノ｝プロピルアミノブレオマイシン（化合物No.
41）の４塩酸塩の脱銅体587mgを無色無定型粉末
として得た。（収率55％） 本品の蒸留水で測定した紫外吸収極大は291ｍ
μE1％／１cmは84であつた。臭化カリ錠剤法で測
定した赤外吸収極大波数（cm^-1）は3425、2950、
1650、1560、1490、1460、1400、1330、1260、
1190、1160、1100、1060、1020、980、800、740、
600であつた。 又、ベンズアルデヒドの代わりにシクロオクタ
ンカルボアルデヒド161mgを用いて上記と同様に
反応させ、精製、脱銅を行なつた結果、３−
｛Ｎ・Ｎ−ジメチル−Ｎ−［3′−（Ｎ・Ｎ−ジメチ
ル−Ｎ−（3″−シクロオクチルメチルアミノプロ
ピル）アミノ）プロピル〕アミノ｝プロピルアミ
ノブレオマイシン（化合物No.42）の４塩酸塩の脱
銅体539mgを無色無定型粉末として得た。（収率52
％） 本品の蒸留水で測定した紫外吸収極大は291ｍ
μE1％／１cmは87であつた。臭化カリ錠剤法で測
定した赤外吸収極大波数（cm^-1）は3425、2950、
1720、1660、1550、1520、1490、1450、1400、
1360、1260、1190、1140、1100、1060、1020、
980、880、800であつた。 又原料として３−［4′−（3″−アミノプロピル）
ピペラジン−１−イル］プロピルアミノブレオマ
イシン・４塩酸塩（含銅体）1.0ｇを用い、これ
にベンズアルデヒド623mgを上記と同様に反応さ
せ、精製、脱銅を行なつた結果３−［4′−（3″−ア
ミノプロピル）ピペラジン−１−イル］プロピル
アミノブレオマイシン（化合物No.43）の４塩酸塩
の脱銅体695mgを無色無定型粉末として得た。（収
率65％） 本品の蒸留水で測定した紫外吸収極大は291ｍ
μE1％／１cmは93であつた。臭化カリ錠剤法で測
定した赤外吸収極大波数（cm^-1）は3425、2950、
1660、1560、1520、1500、1460、1260、1190、
1140、1100、1060、1030、980、880、810、740、
700であつた。 本実施例と同様にして第６表の化合物が製造さ
れた。

【表】 ボアルデヒド

実施例 ３ ブレオマイシン酸銅キレート1000mgと2948mgの
１−ヒドロキシベンズトリアゾール（以下
HOBTと略す）を10mlのジメチルフオルムアミ
ドに溶解し、０℃に冷却撹拌し、ジシクロヘキシ
ルカルボジイミド（以下DCCと略す）1500mg
（ブレオマイシン酸に対して10倍量）を加える。
10分後予め調製しておいたＮ−（３−アミノプロ
ピル）Ｎ・Ｎ−ジメチルアミノプロピルアミン３
塩酸塩1953mg（ブレオマイシンに対して10倍量）
とＮ−メチルモルフオリン2206mg（ブレオマイシ
ンに対して30倍量）のジメチルフオルムアミド５
ml溶液を加える、室温で４時間撹拌し反応させ
た。反応液に10倍容のアセトンを加え、目的物を
沈澱させ、アセトンでよく洗つた後この沈澱を蒸
留水に溶解し、あらかじめPH4.5、１／20モル酢
酸−酢酸ナトリウム緩衝液で平衡化したCMセフ
アデツクスＣ−25（Na＋型：フアルマシア、フア
インケミカル社製）を充填したカラム（100ml容）
に注入し吸着した。上記の緩衝液に連続的に塩化
ナトリウムを加えることによりナトリウム濃度を
1.0モルまで除々に上昇させる直線濃度勾配法に
より溶出した。0.45モル前後で溶出する青色の分
画を集め、先に用いたアンバーライトXAD−
２脱塩法で脱塩したのち、凍結乾燥すると３−
［Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ・Ｎ−ジメチル
アミノ〕プロピルアミノ−ブレオマイシンの含銅
体が青色の無定形粉末624mgが得られた。 本品の蒸留水で測定した紫外吸収極大は292ｍ
μ及び243ｍでありE1％／１cmは夫々124及び155
であつた。臭化カリ錠剤法で測定した赤外吸収極
大波数（cm^-1）は3425、2975、2925、1720、
1640、1560、1460、1400、1370、1330、1300、
1250、1200、1140、1100、1060、1010、990、
930、880、760であつた。 その他の理化学的性状は第７表に示した通りで
ある。 本実施例と同様にして、第７表に示す化合物が
合成された。

【表】 Ｒ○
（註２） アビセルSF (FMC社）ギ酸−酢酸−水
（25：75：900）800v、15分
参考例 １ ３−アミノプロピル−ジメチルアミン50ｇと炭
酸水素ナトリウム62ｇを蒸留水300mlに懸濁し、
氷冷下はげしく撹拌しつつこれに105ｇ（1.5当
量）の塩化ベンゾイルを滴下する。室温で６時間
反応させ、反応液を濃塩酸でPH４とし過剰の塩化
ベンゾイルをエチルエーテルで抽出除去したのち
水層を５規定NaOHでPH12にあわせ、クロロフ
オルムで抽出し硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を
減圧下溜去すると、３−ベンズアミドプロピル−
ジメチルアミンが91ｇ得られた。 これに、Ｎ−３−ブロモプロピルフタルイミド
（１当量）118ｇの300mlテトラヒドロフラン溶液
を加え室温で18時間撹拌した。析出する無色の結
晶を濾取しテトラヒドロフランで洗い乾燥し、四
級塩の無色の結晶188ｇを得た。収率90％ 次いで６規定塩酸1000mlに溶解し110度８時間
加熱して加水分解した。冷却後析出したフタル
酸、安息香酸を濾過して除き、減圧下濃縮乾固し
過剰の塩酸を除去した。残渣を蒸留水に溶解しイ
オン交換樹脂ダウエツクス−１カラム（Cl型：
600ml容）を通過させた。流出液を減圧下濃縮乾
固すると、ビス（３−アミノプロピル）ジメチル
アンモニウム３塩酸塩96ｇを得た。［収率90％］ 本化合物は吸湿性が強く融点を測定できなかつ
た。本化合物の重水中で測定したPMRスペクト
ルはδ2.1〜2.8ppm、4H（ｍ）、2.4ppm、6H（ｓ）、
3.1〜3.9ppm、8H（ｍ）［但し（ ）中はシグナル
の型を示しｍはマルチプレツト、ｓはシングレツ
トを示す。］であり、上記の構造を有することを
示している。臭化カリ錠剤法で測定した赤外吸収
極大波数（cm^-1）は3425、2975、2625、2000、
1600、1480、1470、1350、1320、1300、1230、
1200、1160、1140、1060、1040、1000、930、
840、760であつた。 本参考例と同様にして、３−アミノプロピル−
ジエチルアミン、３−アミノプロピル−ジブチル
アミン、を用いることにより夫々ビス（３−アミ
ノプロピル）ジエチルアンモニウム３塩酸塩、ビ
ス（３−アミノプロピル）ジブチルアンモニウム
３塩酸塩を得ることが出来た。これらの化合物の
理化学的性状を第８表に示す。

【表】 参考例 ２ Ｎ・Ｎ・N′・N′−テトラメチル−１・３−ジ
アミノプロパン13ｇをＮ−（３−ブロモプロピル）
フタルイミド（２当量）53.6ｇの300mlアセトニ
トリル溶液を加え室温で18時間撹拌した。１・３
−（（３−フタルイミドプロピル）ジメチルアミ
ノ）プロパン・２臭化物が白色沈澱として生ず
る。これを濾取しアセトニトリルで洗い、乾燥し
た。収率90％ 次いで上記四級塩を６規定塩酸200mlに溶解し
110度８時間加熱して加水分解した。冷却後析出
したフタル酸を濾過して除き、イオン交換樹脂ダ
ウエツクス−１カラム（Cl型：1200ml容）を通
過させ流出液を減圧下濃縮乾固すると、１・３−
ビス（（３−アミノプロピル）ジメチルアミノ）
プロパン・４塩酸塩28.7ｇを得た。 本化合物は吸湿性が強く融点を測定できなかつ
た。本化合物の重水中で測定したPMRスペクト
ルは δ2.0〜2.9ppm、6H（ｍ）、δ3.0〜4.0、12H（ｍ）、
δ3.45、12H（ｓ）［（ ）内は前記に同じ。］ であり、上記の構造を有することを示している。
第８表に示した条件でのRf、Rmは夫々0.02、
2.56であつた。臭化カリ錠剤法で測定した赤外吸
収極大波数（cm^-1）は3425、2975、2600、2000、
1720、1600、1480、1470、1400、1300、1230、
1200、1150、1060、1000、960、920、900、850、
760であつた。 参考例 ３ Ｎ−メチルベンジルアミン20ｇをテトラヒドロ
フラン300mlに溶解しこれにトリエチルアミン17
ｇ、Ｎ−（３−ブロモプロピル）フタルイミド89
ｇを添加し室温で17時間撹拌した。析出する無色
沈澱を濾取し水−エタノールから再結晶し、無色
の結晶76ｇを得た。（収率80％） これを６規定塩酸380mlに溶解し110℃８時間加
熱して加水分解した。冷却後析出するフタル酸を
濾去し、減圧下濃縮し過剰の塩酸を除き、蒸留水
に溶解しイオン交換樹脂ダウエツクス−１（Cl
型200ml容）のカラムを通過させ、流出液を減圧
下濃縮乾固して、ビス（３−アミノプロピル）−
メチル−ベンジルアンモニウム３塩酸塩41ｇを得
た。（収率90％） 本化合物は吸湿性が強く融点を測定できなかつ
た。本化合物の重水中で測定したPMRスペクト
ルはδ1.9〜2.8ppm、4H（ｍ）、δ2.9〜4.0ppm、8H
（ｍ）、δ3.2ppm、3H（ｓ）、δ4.70〜4.75ppm、2H
（ｍ）、δ7.7ppm、5H（ｓ）［（ ）内は前記に同
じ。］であり、上記の構造を有することを示して
いる。第８表に示した条件でのRf、Rmは夫々
0.29、2.14であつた。臭化カリ錠剤法で測定した
赤外吸収極大波数（cm^-1）は3425、2975、2650、
2000、1600、1470、1400、1310、1220、1200、
1180、1140、1070、1030、1000、960、890、780、
750、730、700、であつた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 〔BX〕−NH−（CH₂）₃−Ａ−（CH₂）₃−Ｂ 〔式中〔BX〕はブレオマイシン酸のカルボキシ
   ル基から水酸基を除いた残基を示し、Ａは式 【式】【式】【式】 又は【式】で示される基（ここでR₁は 水素原子、低級アルキル、ベンジル、R₂は低級
   アルキル、ベンジル、Ｒは低級アルキレンであ
   る）を示しＢは式【式】で示される基（ここ でR₃、R₄はそれぞれ(1)水素原子(2)フエニル、ナ
   フチル、フリル、チオフエン、ノルボルネン、シ
   クロアルキル、で１つ以上置換されていてもよい
   アルキル基（これらの置換基はさらにハロゲン原
   子、低級アルキル、低級アルコキシ、シアノ、ハ
   ロゲノメチル、ベンジルオキシ、から選ばれる１
   種又は２種以上で置換していてもよい））を示す。
   但し、R₃、R₄のどちらか少なくとも一方は水素
   原子以外の基である〕で表わせるアミノプロピル
   アミノブレオマイシン、および、その塩。 ２ 一般式 〔BX〕−NH−（CH₂）₃−Ａ−（CH₂）₃−NH₂ 〔式中〔BX〕はブレオマイシン酸のカルボキシ
   ル基から水酸基を除いた残基を示し、Ａは式 【式】【式】【式】 又は【式】で示される基（ここでR₁は 水素原子、低級アルキル、ベンジル、R₂は低級
   アルキル、またはベンジル、Ｒは低級アルキレン
   である）を示す〕で表わせるアミノプロピルアミ
   ノブレオマイシンを 一般式 R₅−CO−R₆ 〔式中R₅、R₆はそれぞれ(1)水素原子、(2)シクロ
   アルキル、(3)シクロアルキル又はフエニルで１つ
   以上置換されてもよいアルキル（フエニルはさら
   にハロゲン原子で置換されてもよい）(4)ハロゲン
   原子、低級アルキル、低級アルコキシ、ベンジル
   オキシ、シアノ、ハロゲノメチルの１種又は２種
   以上で置換されていてもよいフエニル、(5)ナフチ
   ル、(6)チオフエン、(7)フリル(8)ノルボルネンを示
   す。〕で表わせるカルボニル化合物と、還元的に
   縮合させることを特徴とする 〔BX〕−NH−（CH₂）₃−Ａ−（CH₂）₃−Ｂ 〔式中〔BX〕、Ａは前記と同じ。Ｂは式 【式】で示される基（ここでR₃、R₄はそれ ぞれ(1)水素原子、(2)フエニル、ナフチル、フリ
   ル、チオフエン、ノルボルネン、シクロアルキ
   ル、で１つ以上置換されていてもよいアルキル基
   （これらの置換基はさらにハロゲン原子、低級ア
   ルキル、低級アルコキシ、シアノ、ハロゲノメチ
   ル、ベンジルオキシ、から選ばれる１種又は２種
   以上で置換していてもよい））を示す。但し、
   R₃、R₄のどちらか少なくとも一方は水素原子以
   外の基である〕で表わせる、アミノプロピルアミ
   ノブレオマイシン誘導体およびその塩の製造法。