JPS6399088A - 物質ｋｂｓ３−ｐ１００２及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗真菌活性を有する物質ＫＢＳ３−Ｐ１００２
及びその製造法に関するものである。

本発明者らは、バチルス属菌の生産する抗菌性低分子物
質を探索中バチルス属の一菌株が抗真菌活性物質を生産
することを知り、更に、該物質が新規物質であることを
確認し、これを物質ＫＢＳ３−Ｐ１００２と命名し、本
発明を完成するに到った。

本発明で使用する菌は物質ＫＢＳ３−Ｐ１００２を生産
するものであればいずれでもよいが、例示としてはバチ
ルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）　ＫＢ−３３があげられる。

バチルスＫＢ−Ｓ３は微工研にＦＥＲＭ　Ｐ−８９８６
として寄託されており、また菌学的性質の概要は次の通
りである。

ダラム染色　　　　　　　　　　十 胞子染色　　　　　　　　　　　十 カタラーゼテスト　　　　　　　＋ オキシダーゼテスト　　　　　　＋ 物質ＫＢＳ３−Ｐ１００２生産菌の培養培地は、資化で
きる炭素源、窒素源、ビタミン等を含有する栄養料等適
宜含有したもので、物質ＫＢＳ３−Ｐ１００２を生産蓄
積する培地であればいずれの培地でもよい。

バチルスＫＢ−Ｓ３の培養に適した培地は例えば次のも
のがあげられる。

ポリペプトン　　　　　３０ｇ 酵母エキス　　　　　　５ｇ ＮａＣ１５ｇ 脱イオン水　　　　　　１１１１ （ｐＨ７，０） 培養は２５〜３０℃で、通気、撹拌、振どう等好気的に
４日間程度行なわれる。

得られた培養液は濾過して濾液を得、これに６Ｎ　ｌＩ
ｃＩ２を添加し、ＰＨ＝３．０に調整し沈澱物を得る。

沈澱物は水に溶解し、ＮａＨＣＯ，を加え、ｐＨ＝７．
０とし、次いでエタノールを８０％まで加える。得られ
た上滑液を真空乾燥し、乾燥物を蒸留水に溶解し。

再び６Ｎ　Ｈ（Ｊｌを加えてｐＨ＝３．０に調整し、沈
澱物を得る。得られた沈澱物を蒸留水に溶解し、ＮａＨ
ＣＯｉを加え、　ｐＨ＝７．０とし、蒸留水に対して透
析する。

透析内液を凍結乾燥することによって物質ＫＢＳ３−Ｐ
１００２含有粗精製物を黄色粉末として得る。

得られた黄色粉末を水に溶解し、アセトニトリル系で高
速液体クロマトにがけ、これを単離し、凍結乾燥するこ
とによってほぼ純品の物質ＫＢＳ３−Ｐ１００２を白色
無定形粉末として得る。

得られた物質にＢ５３−Ｐ４Ｏ１０の理化学的性質は次
の通りである。

１、元素分析値 Ｃ：４８．２７％ Ｈ：　　７．４７％ Ｎ　　：　１１．９８％ Ａｓｈ　：　　１．６９％ ２、灰化点 １８３〜１８５℃ ３、物質の色及び性状：白色粉体 ４、紫外線吸収スペクトル：第１図に示す通り。

５、赤外線吸収スペクトル：第２図に示す通り。

６、溶剤に対する溶解性：水、メタノール、エタノール
、アセトニトリルに可溶。

ｎ−プロピルアルコール、アセトン、酢酸エチル、エー
テル、クロロホルム、ジエチルエーテル、石油エーテル
に不溶。

７、呈色反応 ニンヒドリンテスト　　　　− ８、　アミノ酸組成ニアミノ酸分析機によるアミノ酸組
成は次の通りである。

９、物質１分゛子あたり構造未決定の脂肪酸が１分子存
在する。

１０、本物質は真菌に対して強い抗菌性を示す。

１１、精製法：ｐＨ＝３．０程度で沈澱させ、沈澱物を
ｐＨ＝７．０で溶解する工程をくりかえし、最後に高速
液体クロマトにがけることによってほぼ純品を得ること
ができる。高速液体クロマトにおける人２２０による吸
光度曲線は第３図に示す通りである。矢印が物質ＫＢＳ
３−Ｐ１００２を示している。

なお、高速液体クロマトはカラムサイズφ１．０Ｘ２０
ａｓ、ゲルは日立ゲル３０５３　（シワ力系）、溶出条
件は初発アセトニトリル４０％、トリフルオロ酢酸０．
１％の水性溶媒で、最終（４０分後）アセトニトリル６
０％、トリフルオロ酢酸、０．１％の水性溶媒になる直
線濃度勾配によって行った。

１２、抗菌スペクトラム：物質ＫＢＳ３−Ｐ１００２の
抗菌　活性は次の表１に示される。

表　　１ 次に本発明の実施例を示す。

実施例１゜ バチルスＫＢ−５３，ＦＥＲＮ　Ｐ−８９８６を次の培
地に接種して、２７℃で４日間振どう培養した。

ポリペプトン　　　　　３０ｇ 酵母エキス　　　　　　５ｇ ＮａＣΩ　　　　　　　　　５ｇ 脱イオン水　　　　　　ｌΩ （ＰＨ７，０） 得られた培養液を濾過して、培養濾液とし、これを６Ｎ
　ＨＣＱでｐｔｔ　＝　３．０とし、しばらく放置する
と沈澱物が得られるので、得られた沈澱物を蒸留水に溶
解し、これにＮａＨＣＯ，を加え、　ＰＨ＝７．０とし
。

更にエタノールを８０％まで加え、濾過する。得られた
上清を真空乾燥し、乾固物を得る。この乾固物を蒸留水
に溶解し、６Ｎ　ＨＣｆｉでｐＨ＝３．０とし、しばら
く放置し、沈澱物を得る。この沈澱物を蒸留水に溶解し
、ＮａＨＣＯ３でｐｔｔ　＝　７．０とし、この溶液を
蒸留水に対して透析する。

得られた透析液を凍結乾燥し、物質ＫＢＳ３−Ｐ１００
２含有の粗精製物を黄色粉末で得る。

得られた黄色粉末を高速液体クロマトにかけ、第３図に
矢印で示す物質ＫＢＳ３−ＰＩＯ０２該当部分をとり、
これを凍結乾燥することにより、はぼ純品の物質ＫＢＳ
３−ＰＩＯ０２を白色無定形粉末として得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は物質に８５３−Ｐ４Ｏ１０の紫外線吸収スペク
トルを示す図で、第２図は同じく赤外線吸収スペクトル
を示す図で、第３図は物質ＫＢＳ３−Ｐ１００２含有粗
精製物の高速液体クロマトによる人２２０による吸光度
曲線を示す図である。矢印は物質ＫＢＳ３−Ｐ１００２
を示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の理化学的性質を有する物質ＫＢＳ３−Ｐ１
   ００２。 １、元素分析値 Ｃ：４８．２７％ Ｈ：７．４７％ Ｎ：１１．９８％ Ａｓｈ：１．６９％ ２、灰化点 １８３〜１８５℃ ３、物質の色及び性状：白色粉体 ４、紫外線吸収スペクトル：第１図に示す通り。 ５、赤外線吸収スペクトル：第２図に示す通り。 ６、溶剤に対する溶解性：水、メタノール、エタノール
   、アセトニトリルに可溶。 ｎ−プロピルアルコール、アセトン、酢酸 エチル、エーテル、クロロホルム、ジエチ ルエーテル、石油エーテルに不溶。 ７、呈色反応 ニンヒドリンテスト ８、アミノ酸組成：アミノ酸分析機によるアミノ酸組成
   は次の通りである。 ９、物質１分子あたり構造未決定の脂肪酸が１分子存在
   する。
2. （２）バチルス属に属する物質ＫＢＳ３−Ｐ１００２生
   産菌を培養し、物質ＫＢＳ３−Ｐ１００２を採取するこ
   とを特徴とする物質ＫＢＳ３−Ｐ１００２の製造法。