NO177702B - Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse angår en analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser. Slike forbindelser er generelt farmakologisk anvendbare som anti-blodplateaggregeringsmidler i forskjellige vaskulære, patologier. De ovenfor angitte farmakologiske aktiviteter er anvendbare ved behandling av pattedyr. Nærmere bestemt virker sulfonamidforbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen ved blokkering av det molekylære receptorsete av protein-fibrino-genet. Fibrinogen er et glycoprotein som sirkulerer i blod-plasma og hvis blodplatereceptorsete er glycoprotein Ilb/IIIa. Ved blokkering av virkningen av fibrinogen ved receptoren (glycoprotein IIb/IIIa), interfererer forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen med blodplateaggregeringen som er en årsak til mange vaskulære patologier. For tiden er det et behov innen området for vaskulære terapeutiske midler for et fibrinogenreceptorblokkerende middel. Ved interferering med hemostasis vil slik terapi nedsette sykeligheten og dødelig-heten av trombotisk sykdom.

Hemostasis er den spontane prosess når det gjelder stopping av blødning fra skadede blodkar. Prekapillære kar trekker seg sammen umiddelbart når de kuttes. I løpet av sekunder er trombocytter eller blodplater bundet til den eksponerte matriks av det skadede kar ved en prosess kalt blodplateadhesjon. Blodplater kleber også til hverandre i et fenomen kjent som blodplateaggregering under dannelse av en blodplateplugg. Denne blodplateplugg kan stoppe blødning raskt, men den må forsterkes av proteinfibrinet for langtid-seffektivitet, inntil blodkarskaden kan repareres permanent ved vekst av fibroblastere, som er spesialiserte vevreparer-ingsceller.

En intravaskulær trombus (klump) resulterer fra en patologisk ubalanse i hemostasis. Tromben kan vokse til til-strekkelig størrelse til å blokkere av arterielle blodkar. Trombene kan også dannes i områder med stasis eller langsom blodstrømning i vener. Venøse tromber kan lett løsgjøre porsjoner av seg selv kalt emboli som vandrer gjennom det sirkulerende system og som kan resultere i blokade av andre kar, slik som pulmonare arterier. Således forårsaker arterielle tromber alvorlige sykdommer ved lokal blokade, mens venøse tromber gjør dette primært ved fjernblokade eller embolisering. Disse sykdommer innbefatter venøs trombosis, tromboflebitis, arteriell embolisme, coronar og cerebral arteriell trombosis og myocardialt infarkt, slag, cerebral embolisme, nyreembolisme og pulmonar embolisme.

Det foreligger et behov innen området av cardio-vaskulære og cerebrovaskulære terapeutiske midler for et middel som kan anvendes ved forhindring og behandling av tromber, med minimale bivirkninger, innbefattende uønsket for-lengelse av blødning i andre deler av sirkulasjonen, mens det forhindrer eller behandler måltromber. Forbindelsene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse oppfyller dette behov innen faget ved å tilveiebringe terapeutiske midler for forhindring og behandling av tromber.

Forbindelsene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse utviser effektivitet som antitrombotiske midler i kraft av deres evne til å blokkere fibrinogen fra å virke ved dens blodplatereceptorsete og således forhindre blodplateaggregering.

Foreliggende oppfinnelse angår analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser av strukturformelen

og farmasøytisk akseptable salter derav, hvori R<1> er piperidin eller piperazin, eventuelt substituert ved et hvilket som helst atom med H, R6 eller R<7>;

eller C3.10-alkyl som er substituert med NR<6>R<7>,

hvori R<6> og R<7> uavhengig er hydrogen eller C^Q-alkyl eller fenyl;

R<4> er fenyl, Cj.^-alkyl, C6_10-fenylalkyl, C6_10-f enyl-alkenyl, thienyl eller dansyl;

X og Z er en enkeltbinding eller 0;

Y er 0 eller fenyl;

m er et helt tall fra null til ti;

n er et helt tall fra null til fire;

kjennetegnet ved at en forbindelse av formelen

omsettes med C1S02R<4> under dannelse av en forbindelse med formelen som deretter hydrolyseres og avbeskyttes under dannelse av en forbindelse av formel (I), hvoretter om ønsket den erholdte forbindelse omdannes til et farmasøytisk akseptabelt salt. En foretrukket gruppe av forbindelser fremstilt ifølge oppfinnelsen er de definert for generell strukturformel III som

hvori R<1>, R<4>, X, Y, Z og m er som definert ovenfor.

Uttrykket "farmasøytisk akseptable salter" skal angi ikke-toksiske salter av forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen som generelt fremstilles ved omsetning av den fri base med en egnet organisk eller uorganisk syre. Representa-tive salter innbefatter de følgende salter: Acetat Benzenesulfonat Benzoat Bicarbonat Bisulfat Bitartrat

Borat

Bromid Caksuynedetat Camsylat

Carbonat

Klorid Clavulanat Citrat Dihydroklorid Edetat

Edisylat

Estolat

Esylat

Fumarat

Gluceptat Gluconat

Glutamat Glycollylarsanilat Hexylresorcinat Hydrabamin Hydrobromid Hydroklorid Hydroxyna f thoat Jodid

Isothionat

Lactat Lactobionat Laurat Malat Maleat Mandelat

Mesylat

Methylbromid

Methylnitrat

Methylsulfat

Mucat

Napsylat

Nitrat

Oleat

Oxalat

Pamoat

Palmitat

Pantothenat

Fosfat/difosfat

Polygalacturonat

Salicylat

Stearat

Subacetat

Succinat

Tannat

Tartrat

Teoclat

Tosylat

Triethjodid

Valerat

Uttrykket "farmakologisk effektiv mengde" skal bety den mengde av et legemiddel eller et farmasøytisk middel som vil fremkalle den biologiske eller medisinske respons av et vev, system eller dyr som behandles av en forsker eller lege. Uttrykket "anti-koagulant middel" skal innbefatte aspirin, heparin eller warfarin. Uttrykket "fibrinolyttisk middel" skal innbefatte streptotinase og vev-plasminogenaktivator.

Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen kan administreres til pasienter hvor forhindring av trombose ved inhibering av bindingen av fibrinogen til blodplatemembran-glycoproteinkomplekset Ilb/IIIa-receptoren er ønskelig. De er anvendbare innen kirurgi av perifere arterier (arterier eller trdnsplantasjoner, carotidendarterectomi) og i cardiovaskulær kirurgi hvori manipulering av arterier og organer, og/eller interaksjon av blodplater med kunstige overflater fører til blodplateaggregering og forbruk. De aggregerte blodplater kan danne tromer og tromboemboli. De kan administreres til disse kirurgiske pasienter for å forhindre dannelsen av tromber og tromboemboli.

Ekstrakorporeal sirkulasjon anvendes rutinemessig for cardivaskulær kirurgi for å oxygenere blod. Blodplater adhe-rerer til overflater av den ekstrakorporeale krets. Adhesjon er avhengig av interaksjon mellom GPIIb/IIIa på blodplate-membranene og fibrinogen adsorbert til overflaten av kretsen.

(Gluszko et al., Amer. J. Physiol., 1987, 252:H, s. 615-621). Blodplater frigitt fra kunstige overflater viser svekket hemostatisk funksjon. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan administreres for å forhindre adhesjon.

En annen anvendelse av disse forbindelser innbefatter forhindring av blodplatetrombose, tromboembolisme og reokklusjon under og etter trombolyttisk terapi og forhindring av blodplatetrombose, tromboembolisme og reokklusjon etter angio-plasti av coronare og andre arterier, og etter coronar arterie-bypass-prosedyrer. De kan også anvendes for å forhindre mycocardialt infarkt.

Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen kan administreres i slike orale doseringsformer som tabletter, kapsler, piller, pulvere, granuler, eliksirer, tinkturer, suspensjoner, siruper og emulsjoner. Likeledes kan de også administreres i intravenøs, intraperitoneal, subcutan eller intramuskulær form, hvor alle bruksformer er velkjent innen det farmasøytiske fag. En effektiv men ikke-toksisk mengde av den ønskede forbindelse kan anvendes som et anti-aggregerings-middel.

Forbindelsene av formel I kan fremstilles lett i hen-hold til de etterfølgende reaksjonsskjemaer og eksempler eller modifikasjoner derav under anvendelse av lett tilgjengelige utgangsmaterialer, reagenser og konvensjonelle synteseprose-dyrer. I disse reaksjoner er det også mulig å gjøre bruk av varianter som i seg selv er kjent for fagmannen, men som ikke er nevnt i større detalj.

De mest foretrukne forbindelser fremstilt ifølge oppfinnelsen er hvilke som helst eller alle av de som er spesi-fikt angitt i eksemplene. De etterfølgende eksempler illu-strerer ytterligere i detalj fremstilling av forbindelsene. Fagmannen vil lett forstå at kjente variasjoner av beting-elsene og prosessene av de følgende preparative prosedyrer kan anvendes for å fremstille disse forbindelser. Alle tempera-turer er i grader Celsius med mindre annet er angitt.

Reagenssymboler har de følgende betydninger:

BOC: t-butyloxycarbonyl

Pd-C palladium på aktivert carbon-katalysator DMF: dimethylformamid

DMSO: dimethylsulfoxyd

CBZ: carbobenzyloxy

CH2C12: methylenklorid

CHC13: kloroform

EtOH: ethanol

MeOH: methanol

EtOAc: ethylacetat

HOAc: eddiksyre

THF: tetrahydrofuran

Kilden for de følgende forbindelser er som vist:

er beskrevet nedenfor

2-(4-N-t-butyloxycarbonylpiperidinyl)ethanol

4-piperidin-2-ethanol (tilgjengelig fra Aldrich)

(130 g, 1,0 mol) ble oppløst i 700 ml dioxan, avkjølt til 0° C og behandlet med 3N NaOH (336 ml, 1,0 mol), og di-t-butyl-carbonat (221,8 g, 1,0 mol). Isbadet ble fjernet og reaksjonsblandingen ble omrørt over natten. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, fortynnet med vann og ekstrahert med ether. Etherlagene ble kombinert, vasket med saltvann, tørket over MgS04, filtrert og fordampet under dannelse av 225,8 g produkt (98 %).

Rf = 0,37 i 1:1 EtOAc/hexaner, ninhydrin-beis

<X>H NMR (300MHz, CDCI3) 5 4.07 (bs, 2H) , 3.7 (bs, 2H) , 2.7 (t, J = 12.5 Hz, 2H), 1.8-1.6 (m, 6H), 1.51 (s, 9H), 1.1 (ddd, J = 4.3, 12.5, 12 Hz, 2H) .

Methyl-4-(4-N-t-butyloxycarbonylpiperidinyl)-but-2-enoat

Oxalylklorid (55,8 ml, 0,64 mol) ble oppløst i

1 liter CH2C12 og avkjølt til -78° C under N2. DMSO (54,2 ml, 0,76 mol) ble tilsatt dråpevis. Etter at gassutviklingen hadde avtatt ble 2-(4-N-t-butyloxycarbonylpiperidinyl)ethanol (102,5 g, 0,45 mol) oppløst i 200 ml CH2C12 tilsatt i løpet av 20 minutter. Etter omrøring i ytterligere 20 minutter ble triethylamin (213 ml, 1,53 mol) tilsatt dråpevis og kjølebadet ble fjernet. Etter 1 og 1/2 time viste TLC at utgangsmaterialet var borte. Carbomethoxytrifenyl-fosforan (179 g, 0,535 mol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt over natten. Løsningen ble fortynnet med 300 ml Et20, ble ekstrahert én gang med 800 ml H20, to ganger med

300 ml 10 % KHS03-løsning og deretter én gang med 300 ml saltvann. Det organiske lag ble tørket over MgS04, filtrert og fordampet. Kolonnekromatografi (Si02, 5 % EtOAc/hexaner) ga 78,4 g (62 %) av rent methyl-4-(4-N-t-butyloxycarbonyl-piperidinyl)-but-2-enoat.

<1>H NKR (300MHz, CDCI3) 6 6.9 (ddd J = 15.6, 7,6, 7.6

Hz, 1H), 5.8 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.0 (bs, 2H), 3.7

(s, 3H), 2.6 (t, J = 12.6 Hz, 2H), 2.1 (t, J = 7.4

Hz, 2H), 1.7-1.4 (m, 3H), 1.4 (s, 9H), 1.1 (ro, 2H).

4-(4-N-t-butyloxycarbonylpiperidinyl)butylbromid

Methyl-4-(4-N-t-butyloxycarbonylpiperidinyl)but-2-enoat (36,2 g, 0,128 mol) ble oppløst i 500 ml EtOAc. 10 % palladium på carbon (10 g) ble tilsatt som en oppslemming i EtOAc og reaksjonsblandingen ble anbragt under H2 (i en ballong) over natten. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom S°lka-Floc, kaken ble vasket med EtOAc og ethylacetatet ble fordampet under dannelse av 34,7 g (90 %) av methyl-4-(4-N-t-butyloxycarbonylpiperidin-4-yl)butanoat. TLC Rf = 0,69 i 30 % EtOAc/hexaner.

<*>H NMR (300MHz, CDCI3) 5 4.0 (bs, 2H), 3.6 (s, 3H),

2.60 (t, J = 12.3 Hz, 2H), 2.20 (t, J = 7.4, 2H), 1.6

(m, 4H), 1.40 (s, 9H), 1.40 (m, 1H), 1.20 (m, 2H),

1.0 (m, 2H).

Butanoatesteren (45,3 g, 0,159 mol) ble oppløst i CH3OH og ble behandlet med IN NaOH (500 ml, 0,5 mol) over natten. Løsningsmidlet ble fjernet i vakuum, vann ble tilsatt og løsningen ble vasket med ether, ble deretter surgjort med 10 % KHSO^-løsning. Det vandige lag ble vasket med ether, etherlagene ble kombinert, vasket med saltvann, tørket (MgSO^) og konsentrert under dannelse av den tilsvarende syre som en klar olje (41,85 g, 97 % utbytte).

3-H NMR (300MHz, CDCI3) 5 4.0 (bs, 2H), 2.6 (m, 2H),

2.25 (m, 2H), 1.6 (bs, 4H, 1.4 <s, 9H>, 1.3-0.9 (9H).

Denne syre (20,4 g, 0,077 mol) ble behandlet med boran (BH^/THF, 235 ml, 235 mmol) i THF ved 0° C i 1 time.

NaOH (IN, 250 ml) ble dråpevis tilsatt og løsningen ble omrørt over natten. Den resulterende reaksjonsblanding ble konsentrert for å fjerne THF og ble ekstrahert med ether. Ether-ekstraktene ble kombinert, tørket over MgS04, filtrert og fordampet under dannelse av den tilsvarende alkohol som 19,7 g av en farveløs olje.

R_ = 0,7 i 2:1 ethylacetat/hexaner.

<X>H NMR (300MHz, CDCI3) 5 4.1 (bs, 2H), 3.6 (t, 2H),

2.65 (t, 2H), 2.1 (bs, 1H), 1.65 (bs, 2H), 1.55 (m,

2H), 1.4 (s, 9H), 1.35 (m, 3H), 1.25 (m, 2H), 1.1 (m,

2H) .

Denne alkohol (19,7 g, 76,5 mmol) ble oppløst i

THF og ble behandlet med trifenylfosfin (23,1 g, 88 mmol) og avkjølt til 0° C. Carbontetrabromid (29,8 g, 89,9 mmol) ble tilsatt i én porsjon, kjølebadet ble fjernet og reaksjonsblandingen ble omrørt over natten. Ytterligere trifenylfosfin (11,71 g) og carbontetrabromid (14,9 g) ble tilsatt for å føre reaksjonen til fullførelse. Blandingen ble filtrert og væsken ble fortynnet med ether og filtrert igjen. Etter løsnings-middelt jerning ble den resulterende væske adsorbert på Si02

og kromatografert med 5 % EtOAc/hexaner under dannelse av 4-(4-N-t-butyloxy-carbonylpiperidin-4-yl)butylbromid som en klar, farveløs olje (20,7 g, 85 % utbytte).

R f = 0,6 i 1:4 ethylacetat/hexaner

<X>H NMR (300MHz, CDCI3) 5 4.1 (bs, 2H), 3.4 (t, 2H),

2.65 (t, 2H), 1.85 (m, 2H), 1.65 (bd, 2H), 1.4 (s,

9H), 1.35 (m, 2H), 1.3 (m, 3H), 1.1 (m, 2H).

2.BocNH(CH2)gBr Kommersielt H2N(CH2)5CH2OH ble beskyttet som N-boc-derivatet på standard måte, og dette ble omdannet til bromidet med Ph3P/CBr4 i THF. Anvendelse av utgangs-aminoalkoholer med varierende kjedelengder tilveiebringer de analoge halogenider på denne måte.

Reaksjonsskjema 1

Eksempel 1

2-S-(benzyloxycarbonylamino)—3—[4—(N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) butyloxyfenyl] propionsyre ( 1- 2)

N-CBZ-L-tyrosin (1-1) (17,58 g, 0,055 mmol) ble oppløst i 75 ml DMF, ble avkjølt til 0 - 10° C og ble behandlet med natriumhydrid (2,88 g, 0,12 mol). Denne suspensjon ble omrørt ved 0 - 10° C i 1 time hvorpå N-t-butyloxycarbonylpiperidin-4-ylbutylbromid (17,70 g, 0,055 mol) i 25 ml DMF

ble dråpevis tilsatt i løpet av 15 minutter. Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt ved romtemperatur i 16 timer. Løsningsmidlet ble fjernet i vakuum og residuet ble tatt opp

i en blanding av 500 ml EtOAc/100 ml 10 % KHS04. Den organiske fase ble vasket med saltvann, ble tørket (Na2S04) og løsnings-midlet ble fjernet under dannelse av en viskøs olje. Denne ble renset ved flashkromatografi på' silicagel og ble eluert med 98:2:0,5 CHCl3/CH3OH/HOAc under dannelse av ren 1-2

(23,75 g), Rf = 0,35 som en lys gul olje.

Eksempel 2

Methyl-2-S-(benzyloxycarbonylamino)-3-[4-(N-t-butyloxycarbonyl- piperidin- 4- yl) butyloxyfenyl] - propionsyre ( 1- 3)

1-2 (10,05 g, 18,1 mmol) ble oppløst i 150 ml CH3OH ved romtemperatur og cesiumcarbonat (2,95 g, 9,06 mmol) ble tilsatt, og den resulterende blanding ble omrørt i 15 minutter under dannelse av en klar løsning. CH^OH ble fjernet ved redusert trykk og residuet ble deretter oppløst i 150 ml DMF og ble behandlet dråpevis med methyljodid (2,57, 18,1 mmol).. - Den resulterende løsning ble omrørt over natten ved romtemperatur. Løsningsmidlet ble fjernet i vakuum og residuet ble tatt opp i 400 ml ether og ble vasket med 3 x 50 ml porsjoner av H20, 50 ml saltvann og ble tørket (Na2S04). Løsningsmiddel-fjerning ga 1-3 som en olje.

<X>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 1.0-1.15 (2H, m), .1.30-1.70

(16H, m), 2.68 (2H, dt), 3.05 (2H, m), 3.72 (3H, s),

3.91 (2H, t), 4.08 (2H, d), 4.61 (1H, m), 5.10 (2E,

m), 5.18 (1H, m), 6.79 (2H, d), 6.98 (2H, d), 7.35

(5H, m).

Eksempel 3

Methyl-2-S-amino-3-[4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin-4-yl)-butyloxyfenyl] propionat ( 1- 4)

Til 1-3 (5,0 g, 8,79 mmol) oppløst i 150 ml absolutt ethanol ble tilsatt 0,5 g 10 % Pd/C, og den resulterende suspensjon ble hydrogenert under ballongtrykk i 12 timer. Katalysatoren ble deretter filtrert fra og løsningsmidlet ble fjernet i vakuum under dannelse av 1-4 (3,6 g) som en olje.

<3->H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 1.00-1.20 (2E, m) ,

1.22-1.55 (12H, m), 1.60-1.75 (4H, m), 2.00 (2H, bs),

2.68 (2H, t), 2.87 (1H, dd), 3.05 (lH,_dd), 3.72 (3H,

s), 3.93 (2H, t), 4.09 (2H, m), 6.82 (2H, d), 7.10

(2E, d).

Eksempel 4

Methyl-2-S-<n-butylsulfonylamino)-3-[4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin-4-yl)butyloxyfenyl]-

propionat - ( 1 - 8 )

1-4 (0,59 g, 1,36 mmol) ble løst i 10 ml ethylacetat og NaHCO-j (0,7 g, 8,68 mmol) ble tilsatt under omrøring ved romtemperatur, etterfulgt av butansulfonylklorid (0,36 ml, 2,76 mmol), og den resulterende blanding ble kokt under tilbakeløpskjøling i 26 timer. Den avkjølte reaksjonsblanding ble filtrert og konsentrert, og residuet ble renset ved flashkromatografi på silicagel og ble eluert med 4:1 hexan/EtOAc under dannelse av ren 1-8 (0,305 g) '= 0,7 i 1:1 hexan/EtOAc, ninhydrinbeising.

<X>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 0.82 (3H, t), 1.05 (2H,

ddd), 1.45 (9H, s), 1.1-1.6 (1H, m), 1.7 ( 4H, m),

2.6 (2H, t), 2.6-2.8 (2H, m), 2.78 (1H, dd), 3.05

(1H, dd), 3.7 (3H, s), 3.93 (2H, t), 4.05 (2H, bd),

4.15 (1H, dd), 6.85 (2H, d), 7.15 (2H,d).

Eksempel 5

2-S-(n-butyls-ulf onylamino)-3 [4-(piperidin-4-yl)butyl-oxY^e2lyJJ_pJ^pJ;c^ls^r^^]^dJ^k2^

1-8 (0,325 g, 0,59 mmol) ble oppløst i 1:1:1 CH3OH/H20/THF og LiOH-H20 (0,157 g, 3,76 mmol) ble tilsatt. Den resulterende løsning ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer, ble deretter konsentrert, fortynnet med 10 % KHSO^ og ekstrahert med EtOAc. Dette ga 2-S-(n-butylsulfonylamino)-3[4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin-4-yl)butyloxyfenyl]-propionsyre. Denne syre (0,315 g, 0,59 mmol) ble oppløst i 20 ml EtOAc og ble behandlet med HCl-gass ved -20° C i 15 minutter. Reaksjonsblandingen ble deretter korket og ble omrørt ved -5° C i 1 time ved hvilket tidsrom alt utgangs-materiale var forbrukt. Argongass ble boblet gjennom reaksjonsblandingen i 15 minutter og løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av et residuum som ble triturert med ether under dannelse av ren 1-9 (0,29 g) som et lyst gult fast

.materiale.

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 0.85 (3H,t), 1.2 (2H,dd), 1.2-1.7 (9H,m), 1.7 (2H, m), 1.95 (2H, bs), 2.65 (2H,

t), 2.8 (1H, dd), 2.95 (2H, bt), 3.10 (1H, dd), 3.83

(2H, bs), 3.95 (2H, t), 4.1 (1H, dd), 6.85 (2H, d),

7.2 (2H, d).

Analyse for <C>22<H>36<N>2°5<1>S*HC1'0'8 H2°

Beregnet: C 53,76 H 7,92 N 5,70

Funnet: C 53,76 H 7,66 N 5,44

Eksempel 6

Methyl-2-S-(benzylsulf onylamino)-3-[4-(N-t-butyloxy-c a r bonvlp i pe r id in-4-vl') btct^ lreyrerty 1-] propionat ( 1- 10)

1-4 (0,59 g, 1,36 mmol) ble behandlet med benzyl-sulfonylklorid (0,263 g, 1,38 mmol) som beskrevet ovenfor for 1-8. Det urene reaksjonsprodukt ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 3:1 hexan/EtOAc under dannelse av rent 1-10 (0,35 g) som en olje.

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 0.85-1.10 (2H, m) ,

1.10-1.23 (2H,m), 1.35-1.52 (11H, m), 1.61-1.80 (4H,

m), 2.65-3.00 (4H,_m), 3.65 (3H, s), 3.90-4.14 (5H,

m), 6.85 (2H, d), 7.08 (2H, d), 7.22 (2H, m), 7.30

(3H, m).

Eksempel 7

2-s-(benzylsulfonylamino)-3-[4-(piperidin-4-yl)butyl-oxyfenyl] propionsyre- hydroklorid ( 1- 11)

Behandling av 1-10 (0,354 g, 0,60 mmol) med LiOH (0,15 g, 3,7 mmol) som beskrevet for 1-8 ga 2-S-(benzyl-sulfonylamino) -3-[4-(N-t-butyloxy-carbonylpiperidin-4-yl)-butyloxyfenyl]propionsyre (0,35 g) som en viskøs olje.

<1>H NMR (300MHz CD3OD) 5 0.84-1.06 (3E, m), 1.23 (4H, m), 1.34-1.50 (11H, m), 1.60-1.78 (5H, m), 2.65 (2H, bt), 2.82 (1E, m), 3.02 (1H, m), 3.91 (2H, m), 3.96-4.12 (5H, m), 6.83 (2H, d), 7.15 (2E, d), 7.22 (2H, m), 7.29 (3E, m).

Denne syre (0,35 g, 0,60 mmol) ble oppløst i 20 ml EtOAc og ble behandlet med HCl-gass som beskrevet for 1-9 under dannelse av ren 1-11 som et hvitt fast materiale (0,30 g).

<X>H NMR (300MHz, CD3OD) 8 1.32 (4H, m), 1.40-1.65 (3H,

m), 1.72 (2H, m), 1.92 (2H, d), 2.77-3.08 (4H, m),

3.33 (3H, m), 3.95-4.14 (5H, m), 6.86 (2H, d), 7.17

(2H, d), 7.28 (2H, m), 7.31 (3H, m).

Methyl-2-S-(2-styrylsulfonylamino)-3-[4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) butyloxyfenyl] propionat ( 1- 12)

1-4 (0,647 g, 15 mmol) ble oppløst i 20 ml ethylacetat og NaHC03 (0,454 g, 5,4 mmol) ble tilsatt etterfulgt av

p-styrensulfonylklorid (0,365 g, 18,0 mmol), og den resulterende reaksjonsblanding ble oppvarmet til tilbakeløpskokning under omrøring i 16 timer. Den avkjølte reaksjonsblanding ble filtrert, løsningsmidlet ble fjernet og residuet ble renset ved flashkromatografi på silicagel med eluering med hexan (3)/ethylacetat (1) under dannelse av rent 1-12.

<1>H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 1.10 <2H, m), 1.30-1.55

(14 H, m), 1.65-1.80 (4H, m) , 2.68 (2H, t), 3.01

(2H, dt), 3.62 (3H, s), 3.88 (2H, t), 4.09 (2H, m),

4.22 (1H, m), 4.98 (1H, d), 6.45 (1H, d), 6.80 (2H, d), 7.06 (2H, d), 7.40 (4H, s).

2-S-(2-styrylsulfonylamino)-3-4-[4— piperidinylbutyloxy-feny 1 ] -" propionsyre- hydroklorid ( 1- 13)

1-12 (0,58 g, 0,97 mmol) ble oppløst i THF(1)-H20(1)-MeOH(l) (15 ml) og lithiumhydroxyd (0,12 g, 5,0 mmol) ble tilsatt, og den resulterende klare løsning ble omrørt over natten ved romtemperatur.

Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 75 ml H20, ble surgjort til pH 2-3 med 10 % KHS04-løsning og ble deretter ekstrahert med 3 x 50 ml EtOAc. Det organiske ekstrakt ble tørket, løsningsmidlet ble fjernet og residuet renset ved f lashkromatograf i på silicagel og eluering med CHCl^O?)-MeOH(3)-HOAc(1) under dannelse av den ønskede syre (R^ = 0,2).

Denne syre ble oppløst i EtOAc og ble behandlet

med HCl-gass som beskrevet for 1-9 under dannelse av 1-13.

<X>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 1.15-1.70 (10H, m),

1.70-1.82 (2H, t), 1.97 (2H, t), 2.78-3.12 (5H, m),

3.35 (3H, m), 3.87 (2H, t), 4.03 (1H, m), 6.50 (1H,

d), 6.69 (2H, m), 7.18 (3H, m), 7.41 (5H, bs). 2-S- (2-fenethylsulfonylamino) -3-[ 4- (N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) butyloxyfenyljpropionsyre ( 1- 14) l-12a (0,21 g) ble oppløst i 20 ml absolutt ethanol, 0,1 g 10 % Pd/C ble tilsatt og den omrørte suspensjon ble hydrogenert under ballongtrykk. Etter 4 timer ble reaksjonen stoppet og løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av det ønskede produkt 1-14 (0,194 g). <1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 1.05 (2H, m), 1.30-1.40 (3H, m), 1.47 (14H, m), 1.72 (5H, m), 2.67-2.93 (8H, m), 3.13 (1H, m), 3.31 (2H, m), 3.82 (2H, m), 4.00-4.20 (4H, m), 6.82 (2H, d), 7.07 (2H, d), 7.21 (5H, m). 2-S-(2-fenethylsulfonylamino)-3-4-[4-piperidinylbutyloxy-fenyl] propionsyre- hydroklorid ( 1- 15) 1-14 (0,194 g) ble oppløst i EtOAc og ble behandlet med HCl-gass som beskrevet for 1-9 under dannelse av ren 1-15 (0,145 g). XE NMR (300 MHz, CD3OD) 5 1.25-1.68 (8H, m), 1.73 (2H, m), 1.93 (2H, m), 2.78 (3H, m), 2.91 (4H, m), 3.13 (1H, m), 3.33 (4H, m), 3.86 (2H, m), 4.18 (1H, m), 6.80 (2H, d), 7.09 (2H, d), 7.22 (5H, m). '

Methyl-2-S-(fenylsulfonylamino)-3-[4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) butyloxyfenyllpropionat ( 1- 16)

1-4 (0/647 g, 1,5 mmol) ble behandlet med fenyl-sulfonylklorid (0,318 g, 1,8 mmol) som beskrevet for 1-8.

Det urene produkt ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med CHC13(98)-MeOH(2) under dannelse av ren 1-16 (0,67 g).

<X>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 1.09 (2H, m), 1.25-1.40

(3H, m), 1.42 (9H, bs), 1.60-1.85 (6H, m), 2.66 (2H,

m), 2.96 (2H, d), 3.55 (3H, s), 3.89 (2H, t), 4.09

(4H, m), 5.12 (1H, d), 6.72 (2H, d), 6.95 (2H, d),

7.40-7.65 (3H, m), 7.75 (2H, m).

2-S-(fenylsulfonylamino)-3-(4-piperidin-4-ylbutyloxyfenyl)-propionsyre- hydroklorid ( 1- 17)

1-16 (0,525 g) ble behandlet med lithiumhydroxyd

som beskrevet for 1-8 under dannelse av urent produkt som ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med CHC13(97)-MeOH(3)-H0AÆ(1) under dannelse av ren syre

(Rf = 0,2).

Denne syre ble behandlet med HCl-gass i EtOAc som beskrevet for 1-9 under dannelse av ren 1-17.

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 1.28-1.47 (6H, m),

1.50-1.70 (3H, m), 1.75 (2H, m), 1.97 (2H, d), 2.77

(1H, m), 2.95 (3H, m), 3.35 (4H, m), 3.93 (3H, m),

6.72 (2H, d), 7.02 (2H, d), 7.41 (2H, m), 7.52 (1H,

m), 7.67 (2H, m).

Methyl-2-S-(2-thienylsulfonylamino)-3-[4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) butyloxyfenyllpropionat ( 1- 18)

1-4 (0,304 g, 0,7 mmol) ble behandlet med 2-thienyl-sulfonylklorid (0,155 g, 0,85 mmol) som beskrevet for 1-8 under dannelse av urent produkt. Dette ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med CHC13(98)-CH3OH(2) under dannelse av ren 1-18 som en viskøs olje, R f = 0,3 [silicagel, CHC13(98)-CH3OH(2)].

<X>H NMR (30CTMHZ, CDCI3) 6 1.10 (2H, m), 1.31 (4H, m), 1.36-1.80 (16 H, m), 2.68 (2H, bt), 3.03 (2H, d),

3.57 (3H, s), 3.91 (2H, t), 4.08 (2H, m), 4.29 (1H,

ro), 5.16 (1H, d); 6.78 (2H, d), 7.00 (4H, m), 7.55

(2H, dd).

2-S-(2-thienylsulfonylamino)-3-[4-(piperidin-4-yl)-butyl-oxyfenyl3 propionsyre- hydroklorid ( 1- 19)

Behandling av 1-18 (0,22 g, 0,38 mmol) med LiOH (0,045 g, 1,89 mmol) som beskrevet for 1-8 tilveiebragte den ønskede syre, som ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med CHC13(97)-CH30H(3)-HOAc(1).

^-H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 1.05 (2H, d t), 1.20-1.40

(5H, m), 1.40-1.60 (12H, m) 1.65-1.80 (5H, m),

2.65-2.82 (4H, m), 2.98 (1H, dd), 3.30 (1H, m), 3.92

(2H, t), 4.00-4.13 (5H, m), 6.75 (2H, d), 7.02 (3H,

m), 7.39 (1H, d), 7.67 (1H, d).

Behandling av denne syre med HCl-gass som beskrevet for 1-9 tilveiebragte 1-19 som et hvitt fast materiale etter

triturering.

Analyse beregnet for C22H30N2O5S2*HCl*0,5 H20:

C 51,60 H 6,30 N 5,47 Funnet: C 51,57 H 6,20 N 5,51 1-H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 1.29-1.45 (4H, m), 1.47-1.70 (3H, m), 1.71-1.83 (2H, m), 1.91-2.00 (2H, bd), 2.79 (1H, m); 2.90-3.04 (3H, m), 3.95 (2H, t), 4.04 (1H, m), 6.76 (2E, d), 7.05 (3H, m), 7.40 (1H, m), 7.79 (1H, m).

2-S-(dansylamino)-3-[4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin-4- yl) butyloxyfenyl] propionat ( 1- 20) .

1-4 (0,304 g, 0,7 mmol) ble behandlet med dansyl-klorid (0,208 g, 0,77 mmol) som beskrevet for 1-8 under dannelse av urent produkt som ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med hexan(75)-EtOAc(25) under dannelse av ren 1-20. R f = 0,25 (silicagel—eluering med hexan(75)-EtOAc (25).

<X>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 1.10 (2H, m), 1.21-1.38

(6H, m), 1.40-1.53 (11H, m), 1.60-1.80 (6H, m), 2.68

(2H, bt), 2.89 (6H, s), 3.33 (2H, s), 3.89 (2H, t), 4.05-4.19 (4H, m), 5.24 (1H, m), 6.62 (2H, d), 6.82

(2H, d), 7.18 (1H, d), 7.50 (2H, m), 8.19 (2H, t),

8.51 (1H, d).

2-S-(dansylamino)-3-[4-(piperidin-4-yl)butyloxyfenyl]-propionsyre- hydroklorid ( 1- 21)

Behandling av 1-20 (0,275 g, 0,412 mmol) med LiOH som beskrevet for 1-8 ga den ønskede syre som et sterkt fluorescent, viskøst residuum.

<L>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 1.09 (2H, m), 1.22-1.40

(3H, m), 1.40-1.57 (12H, m), 1.65-1.80 (3H, m), 2.60-2.80 (3H, m), 2.90 (6H, s), 3.31 (3H, m), 3.80 (2H, t), 3.90 (1H, m), 4.01-4.15 (4H, m), 6.47 (2H, d), 7.21 (1H, d), 7.42 (2H, m), 7.98 (1H, d), 8.20 (1H, d), 8.46 (1H, d).

Behandling av denne syre i EtOAc med HCl-gass som beskrevet for 1-9 tilveiebragte 1-21 som et hvitt, fast materiale etter ethylacetat-triturering.

Analyse for C30H39<N>3<0>5S»1.8 HC1»H20:

C, 56.53; H, 6.77; N, 6.59; Cl, 10.01. Funnet: C,'56.48; H, 6.66; N, 6.36; Cl, 10.21. <!>h NMR (300 MHz, CD3OD) 5 1.30-1.51 (7H, m), 1.52-1.80 (4H, m), 1.95 (2H, bt), 2.65 (1H, m) 2.95 (3H, m), 3.30-3.40 (4H, m), 3.45 (6H, s), 3.84-3.97 (3H, m), 6.45 (2H, d), 6.77 (2H, d), 7.71 (2H, m), 8.00 (1H, d), 8.16 (2H, d), 8.55 (1H, d), 8.70 (1H, d). Reaksjonsskjema 2

2-S-(benzyloxycarbonylamino)-3-[4-(6-N-t-butyloxycarbonyl-aminohexyloxy) fenyljpropionsyre ( 2- 1)

N-CBZ-L-tyrosin (15,0 g, 0,045 mol) ble oppløst i 75 ml DMF og ble tilsatt ved 0 - 10° C til en suspensjon av natriumhydrid (2,16 g, 0,09 mol) i 25 ml DMF. Den resulterende suspensjon ble omrørt ved 0 - 10° C i 1,0 time hvorpå 6-(t-butyloxycarbonylamino)hexylbromid (12,6 g, 0,045 mol) i 25 ml DMF ble dråpevis tilsatt ved 0 - 5° C, og den klare, mørke reaksjonsblanding ble omrørt ved romtemperatur over natten.

Etter løsningsmiddeltjerning ble residuet tatt opp i ETOAc og dette ble surgjort med 10 % KHS04~løsning. Den organiske fase ble fraskilt, vasket med saltvann, tørket (Na2S04) og løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av en olje. Denne ble renset ved kolonnekromatografi på silicagel og eluering med 98:2:1 CHCl3/CH3OH/HOAc under dannelse av ren 2-1 som en klar olje.

<X>H NMR (300 MHz, CD3OD) 6 1.45 (15H, m), 1.75(2H, m), 2.80-3.15 (6H, m), 3.91(2H, t), 4.38(1H, m), 4.95(6H,

m), 6.85(2H,d), 7.06(2H,d)

Eksempel 9

Methyl-2-S-(benzyloxycarbonylamino)-3-[4-(6-N-t-butyloxy-carbonylaminohexyloxy) fenyl] propionat ( 2- 2)

Forbindelse 2-1 (10,0 g, 19,43 mmol) i 75 ml DMF ble behandlet med cesiumcarbonat (3,16 g, 9,72 mmol) under omrøring ved romtemperatur i 1,9 timer. Methyljodid (2,76 g, 19,43 mmol) ble deretter dråpevis tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt over natten ved omgivende temperatur. Løs-ningsmidlet ble fjernet ved høyvakuum (30° C), og residuet ble tatt opp i 300 ml EtOAc og vasket med 2 x 40 ml porsjoner av mettet NaHC03-løsning, saltvann og ble tørket (Na2S04). Løsningsmiddeltjerning ga 2-2 (8,5 g, 83 %) som en klar olje.

<X>H NMR (300MHz, CDCI3) 6 1.25-1.53 (16H, m), 1.76

(2H, m), 2.96-3.17 (4H, m), 3.71 (3H, s), 3.90 (2H,

t), 4.61 (1H, m), 5.10 (2H, m), 5.19 (1H, m), 6.88

(2H, d), 6.98 (2H, d), 7.32 (5H, m).

Eksempel 10

Methyl-2-S-amino-3-[4-(6-N-t-butyloxycarbonyl-amino-hexyloxy) fenyl] propionat ( 2- 3)

Forbindelse 2-2 (8,0 g, 15,1 mmol) ble oppløst i 150 ml absolutt ethanol og 1,0 g 10 % Pd/C ble tilsatt. Denne suspensjon ble hydrogenert i en Parr-apparatur (3,5 kg/cm 2) i 3,5 timer. Katalysatoren ble deretter filtrert fra og løs-ningsmidlet fjernet på rotasjonsfordamper under dannelse av ren 2-3 (5,56 g) som en klar olje. Rf = 0,4 på Si02 med 95:5 CHC13/CH30H

<3->H NMR (300 MHz, CDC13) 8 1.30-1.55 (16H, m), 1.70

(2H, m), 2.80 (1H, m), 3.00-3.17 (3H, m), 3.71 (3E,

s), 3.93 (2H, t), 6.82 (2H, d), 7.09 (2H,d).

Eksempel 11

2-S-(methylsulfonylamino)-3-[4-(6-N-t-butyloxycarbonyl-aminohexyloxy) fenyl] propionat ( 2- 4)

2-3 (0,40 g, 1,01 mmol) ble behandlet med methan-sulfonylklorid (0,116 g, 1,01 mmol) og NaHC03 (0,25 g, 3,0 mmol) som beskrevet for 1-8. Det urene reaksjonsprodukt ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 30 % EtOAc/hexan under dannelse av ren 2-4 (0,10 g) som en klar olje.

<1>H NMR (300MHz, CDCI3) 5 1.36-1.56 (15H, m), 1.77 (2H, m), 2.70 (3H, s), 3.78 (3H, s), 3.92 (2H, t), 4.36 (1H, m), 4.90 (1H, d). 6.82 (2H, d), 7.09 (2H,

d).

Eksempel 12

2- s:<->(methylsulfonylamino)-3-[4-(6-aminohexyloxy)-fenyl] propionsyre- hydroklorid ( 2- 5)

2-4 (0,1 g, 0,212 mmol) ble behandlet med LiOH (0,026 g, 1,06 mmol) som beskrevet for 1-8 under dannelse av 2-S-(methylsulfonylamino)-3-[4-(6-N-t-butyloxycarbonylamino-hexyloxy)fenyl]propionsyre (0,125 g) som en viskøs olje.

lE NMR (300 MHz, CD3OD) 5 1.30-1.55 (16H, m), 1.75

(2H, m), 2.63 (3H, s), 2.85 (1H, dd), 3.0-3.13 (3H,

m), 3.93 (2H, t), 4.17 (1H, m), 6.83 (2H, d), 7.20

(2H, d).

Den<ne syre ble oppløst i 20 ml EtOAc og ble behandlet med HCl-gass som beskrevet for 1-9. Løsningsmiddeltjer-ning tilveiebragte et residuum som ble triturert med 30 ml Et20 under dannelse av ren 2-5 som et hvitt fast materiale (0,09 g).

<1>H NMR (300MHz, CD3OD), 8 1.40-1.60 (4H, m), 1.60

(2H, m), 1.69 (2H, m), 2.68 (3H, s), 2.82 (1H, dd),

2.92 (2H, t), 3.10 (1H, dd), 3.30 (2H, m), 3.97 (2H,

t), 4.18 (1H, m), 6.83 (2H, d), 7.19 (2H, d).

Analyse for C16H26N205S.HC1.0.25 H20

Beregnet: C 48,11 H 6,94 N 7,01

Funnet: C 48,16 H 6,82 N 6,98

Eksempel 13

Methyl-2-S-(butylsulfonylamino)-3-[4-(6-N-t-butyloxy-carbonylaminohexyloxy) fenyl] propionat ( 2- 6)

2-3 (0,40 g, 1,01 mmol) ble behandlet med butylsulfonylklorid (0,47 g, 3,03 mmol) og NaHC03 (0,50 g, 6,0 mmol) som beskrevet for 1-8. Det urene reaksjonsprodukt ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 30 % EtOAc/hexaner under dannelse av ren 2-6 (0,22 g) som en klar olje.

<X>H NMR (300MHz, CDCI3) 6 0.87 (3H, t), 1.35-1.54 (18

H, m), 1.61 (2H, m), 1.77 (2H, m), 2.74 (2H, t),

2.95 (1H, dd), 3.05-3.18 (3H, M), 3.90 (2H, t), 4.32

(1H, m), 4.72 (1H, m), 6.82 (2H,d), 7.07 (2H, d).

Eksempel 14

2-S-(butylsulfonylamino)-3-[4-(6-aminohexyloxy)-fenyl] propionsyre- hydroklorid ( 2- 7)

2-6 (0,2 g, 0,39 mmol) ble behandlét i THF (1)/H20 (1)/CH3OH(l)-løsning med LiOH (0,05 g, 2,12 mmol) som beskrevet for 1-8 under dannelse av 2-S-(butylsulfonylamino)-3-[4-(6-N-t-butyloxycarbonylaminohexyloxy)fenyl]propionsyre (0,235 g) som en viskøs olje.

<X>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 0.83 (3H, t), 1.35-1.56

(16H, m) 1.76 (2H, m), 2.61 (2H, t), 2.79 (1H, ddd), 3.00-3.14 (3H, m), 3.92 (2H, t), 4.11 (1H, m), 6.82

(2H, d), 7.18 (2H, d).

Denne syre (0,235 g, 0,7 mmol) ble oppløst i 30 ml EtOAc og ble behandlet med HCl-gass som beskrevet for 1-9. Residuet ble triturert med en løsning av 40 ml ether/10 ml EtOAc under dannelse av 2-7 (0,17 g) som et hvitt, fast materiale.

<X>H NMR (300MHz, CD3OD) 5 0.85 (3H, t) , 1.24 (2H, m) , 1.35-1.60 (6H, m), 1.70 (2H, m), 1.80 (2H, m), 2.66

(2H, t), 2.78 (1H, dd), 2.92 (2H, t), 3.10 (1H, dd),

3.30 (1H, m), 6.85 (2H, d), 7.20 (2H, d).

Analyse- for C3:^32^055 .HC1

Beregnet: C 52,22 H 7,61 N 6,41

Funnet: C 51,80 H 7,61 N 6,33

Eksempel 14A

2- S-(butylsulfonylamino)-3-[4-(6-acetamidinohexyloxy)-fenyl] propionsyre ( 2- 7a)

En løsning av 2-7 (1,0 g, 2,29 mmol) i 30 ml THF ble behandlet med ethylacetimidat (0,2 g, 2,29 mmol), og den resulterende reaksjonsblanding ble omrørt ved romtemperatur i 16 timer. Løsningsmidlet ble deretter fjernet og residuet ble omkrystallisert fra ethylacetat under dannelse av ren 2-7a.

Eksempel 14B

2-S-(butylsulfonylamino)-3-[4-(6-b^ fenyljpropionsvre ( 2- 7b)

En løsning av 2-7 (1,0 g, 2,29 mmol) i 30 ml THF ble behandlet med ethylbenzimidat (0,34 g, 2,29 mmol), og den resulterende løsning ble omrørt ved romtemperatur i 20 timer. Løsningsmidlet ble fjernet og residuet ble tatt opp i EtOAc, ble filtrert og omkrystallisert under dannelse av ren 2-7b.

Eksempel 14C

2-S-(butylsulfonylamino)-3-[4-(6-guanidinohexyloxy-fenyljpropionsyre ( 2- 7c)

En blanding av 2-7 (1,0 g, 2,29 mmol) og N-nitroso-methylthioguanidin (0,32 g, 2,29 mmol) ble oppvarmet til 40° C i 5 minutter i 15 ml absolutt EtOH og fikk deretter stå i 1 dag ved romtemperatur. Løsningsmidlet ble fjernet i vakuum og residuet ble renset ved flashkromatografi på silica og ble eluert med CHC13(95)-CH3OH(5)-HOAc(2) under dannelse av det ønskede nitroguanidino-mellomprodukt.

Dette ble oppløst i 20 ml 10 % HC1-CH,0H og ristet i en Parr-apparatur (3,5 kg/cm 2) i nærvær av 100 mg 10 % Pd-C ved romtemperatur i 8 timer. Katalysatoren ble deretter fjernet ved filtrering, løsningsmidlet ble fjernet i vakuum og residuet ble oppløst i 10 % vandig HCl-løsning og oppvarmet til tilbakeløpskokning i 2 timer. Løsningsmidlet ble fjernet i vakuum og residuet ble renset ved kromatografi på en "Dowex 1-X2" kolonne og ble eluert med vann under dannelse av ren 2-7c.

Eksempel 15

Methyl-2-S-(benzylsulfonylamino)-3-[4-(6-N-t-butyloxy-carbonylaminohexyloxy) fenyl3propionat ( 2- 8) 2-3 (0,29 g, 0,735 mmol) ble behandlet med benzyl-sulfonylklorid (0,14 g, 0,735 mmol) og NaHCC>3 (0,185 g, 2,2 mmol) som beskrevet for 1-8. Det urene reaksjonsprodukt ble renset ved flashkromatografi på silicagel og ble eluert med 1:1 hexaner/EtOAc under dannelse av ren 2-8 (0,27 g) som en klar olje. 3-H NMR (300 MHz, CDCI3) 6 1.47-1.69 (15H, m), 1.90 (2H, m), 2.18 (2H, s), 3.08 (2H, d), 3.25 (2H, m), 3.85 (3H, s), 4.05 (2H, t), 4.19-4.20 (4H, m), 4.80 (1H, d), 6.83 (2H, d), 7.12 (2H, d), 7.47 (5H, m). Eksempel 16

2-S-(benzylsulfonylamino)-3-[4-(6-aminohexyloxy)-fenyl] propionsyre- hydroklorid ( 2- 9)

2-8 (0,48 g, 0,875 mmol) ble behandlet med LiOH (0,105 g, 4,37 mmol) som beskrevet for 1-8 under dannelse av 2-S-(benzylsulfonylamino)-3-[4-(6-N-t-butyloxycarbonylamino-hexyloxy)fenyl]propionsyre (0,4 g) som et skum.

<X>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 1.30-1.52 (15H, m) , 1.72

(2H, m), 2.81 (1H, dd), 3.00 (3H, m),3.93 (2H, m),

4.06 (2H, m), 6.81 (2H, d), 7.13 (2H, d), 7.20-7.32

(5H, m).

Denne syre (0,4 g, 0,75 mmol) ble oppløst i 30 ml EtOAc og ble behandlet med HCl-gass som beskrevet for 1-9. Urent reaksjonsprodukt ble triturert med ether under dannelse av rent 2-9 (0,35 g) som et hvitt fast materiale.

<X>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 1.38-1.57 (4H, m), 1.65

(2H, m), 1.73 (2H, m), 2.71 (1H, dd), 2.89 (2H, t),

3.02 (1H, dd), 3.30 (3H, m), 3.94-4.15 (5H, m), 6.83

(2H, d), 7.15 (2H, d), 7.29 (5H, m).

Eksempel 16A

2-S-(benzylsulfonylamino)-3-[4-(6-(acetamidinohexyloxy-fenyl) Jpropionsyre ( 2- 9a)

En løsning av 2-9 (1,0 g, 2,1 mmol) i 30 ml THF ble behandlet med ethylacetimidat (0,18 g, 2,1 mmol) som beskrevet i eksempel 14A under dannelse av rent 2-9a etter omkrystalli-sering fra ethylacetat.

Eksempel 16B

2-S-(benzylsulfonylamino)-3-[4-(6-(guanidinohexyloxy)-fenyl] propionsyre ( 2- 9b)

En blanding av 2-9 (1,0 g, 2,1 mmol) og N-nitroso-methylthioguanidin (0,29 g, 2,1 mmol) ble behandlet som beskrevet i eksempel 14C under dannelse av rent 2-9b.

Reaksjonsskjerna 3

Methyl-2-S-amino-3-[4-( 4- hydroxyfenyl) oxyfenyl3- propionat ( 3- 2)

100 ml CH30H ble avkjølt til 0° C og ble behandlet med 47 mmol S0C12 under omrøring i 15 minutter ved 0°, hvorpå 3-1 (1/5 g, 5,49 mmol) ble tilsatt under omrøring i 16 timer mens temperaturen steg til omgivende temperatur.

Reaksjonsblandingen ble filtrert og løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av en olje som tilveiebragte 3-2 (1,57 g) etter ethervaskning.

<3->H NMR (300 MHz, CD3OD) 6 3.10-3.30 (2H, m), 3.81

(3H, s), 6.76-6.90 (6H, m), 7.20 (2H, d).

Methyl-2-S-(N-benzyloxycarbonylamino)-3-[4-(4-hydroxyfenyl) oxyfenyl] propionat ( 3- 3)-10 ml av en vann(1)-dioxan(1)-løsning av 3-2 (0,2 g, 0,62 mmol) ble avkjølt til 0° C og ble behandlet med Na2C03 (0,131 g, 1,23 mmol) og benzylklorformiat (0,619 mmol). Etter 1,5 timer med kraftig omrøring ble dioxanet fjernet ved lavt trykk og residuet ble fortynnet med H20 og ekstrahert med EtOAc. Det organiske ekstrakt ble vasket med saltvann, ble tørket (Na2S04) og løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av 3-3 som en olje.

<X>H NMR (300 MHz,' CDCI3) 5 3.06 (2H, m), 3.75 (3H, s),

4.64 (1H, m), 5.10 (2H, m), 5.36 (1H, m), 6.83 (6H,

m), 7.00 (2H, d), 7.37 (5H, bs).

Methyl-2-S-(N-benzyloxycarbonylamino)-3-[4-(4-N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) oxyfenyloxy3 fenylpropionat ( 3- 4) 40 ml av en benzenløsning av 3-3 (0,5 g, 1,18 mmol) ble behandlet med N-t-butyloxycarbonylpiperidin-4-ol (0,24 g, 1,18 mmol) og Ph3P (0,310 g, 1,18 mmol) under omrøring ved romtemperatur med konstant N2~spyling. Diethylazodicarboxylat (1,18 mmol) ble tilsatt, og den resulterende løsning ble omrørt ved romtemperatur i 16 timer.

Løsningsmidlet ble deretter fjernet og residuet ble renset ved flashkromatografi på silicagel og ble eluert med hexan(70)-EtOAc(30) under dannelse av ren 3-4.

<1>H NMR (300 MHz, CDCI3) 6 1.48 (9H, s), 1.80 (2H, m),

1.95 (2H, m), 3.08 (2H, m), 3.36 (2H, m), 3.76 (3H,

S), 4.40 (lfl, m), 4.63 (1H, m), 5.10 (1H, m) , 5.25

(1H, m), 6.80-7.04 (8H, m), 7.36 (5H, bs).

Methyl-2-S-(butylsulfonylamino)-3-[4-(4-N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) oxyfenyloxy] fenylpropionat ( 3- 5)

En løsning av 3-4 (0,5 g, 0,082 mmol) i 40 ml EtOH ble behandlet med 125 mg 10 % Pd/C og denne suspensjon ble hydrogenert i en Parr-kolbe ved 3,5 kg/cm 2 i 1,5 timer. Katalysatoren ble filtrert fra og løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av den ønskede aminoester som en klar olje.

<1>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 1.48 (9H, s), 1.50-1.80

(8H, m), 1.91 (2H, m), 2.82 (1H, m), 3.04 (1H, m),

3.34 (2H, m), 3.-76 (3H, s), 4.20 (1H, m), 7.90 (8H,

m), 8.11 (2H, d).

/

Denne aminoester (0,36 g, 0,77 mmol) ble oppløst i 10 ml EtOAc og ble behandlet med NaHC03 (0,386 g, 4,6 mmol) og n-butylsulfonylklorid (1,53 mmol) under oppvarming til tilbake-løpskokning i 48 timer. Løsningsmidlet ble fjernet og residuet ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med hexan(65)-EtOAc(35) under dannelse av ren 3-5 som en olje.

<i>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 0.88-1.02 (4H, m) , 1.25-1.45

(3H, m), 1.50 (9H, s), 1.51-1.80 (2H, m), 1.93 (2H,

m), 2.80 (2H, m), 2.95-3.20 (2H, m), 3.21-3.40 (2H,

m), 3.72 (2H, m), 3.74 (3H, s), 4.38 (2H, m), 4,80

(1H, d), 6.90 (6H, m), 7.10-7.27 (2H, m) .

2-S-(butylsulfonylamino)-3-[4-(piperidin-4-yl)oxyfenyloxy]-fénylpropionsyre- hydroklorid ( 3- 6)

En løsning av 3-5 (0,2 g, 0,34 mmol) i THF(1)-H20(1)-CH3OH(l) ble behandlet med LiOH (0,075 g, 1,78 mmol) ved romtemperatur i 8 timer. Løsningsmidlet ble fjernet og residuet ble surgjort med 10 % KHSO^-løsning, og denne ble ekstrahert flere ganger med EtOAc. De organiske ekstrakter ble kombinert, ble vasket med saltvann, tørket (NaSO^) og løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av den ønskede syre.

Rf = 0,3 [silicagel, 97(CHC13)-3(CH3OH)-1(HOAc)].

<1>H NMR (300 MHz,.CDCl3) 6 0.85 (3H, t), 1.20-1.30

(3H, m), 1.46 \9H, s), 1.50-2.0 (6H, m), 2.75 (2H,

m), 2.97 (1H, m), 3.18 (1H, m), 3.33 (2H, m), 3.76

(2H, m), 4.35 (2H, m), 5.07 (1H, m), 6.89 (6H, m),

7.13 (2H, m).

Denne syre (0,15 g, 0,26 mmol) ble oppløst i EtOAc og ble behandlet med HCl-gass som beskrevet for 1-9 under dannelse av ren 3-6 som et hvitt fast materiale.

^■H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 0.89 (3H, t ), 1.32 (2H,

m), 1.53 (2H, m), 1.97-2.21 (4H, m), 2.75 (2H, m),

2.63 (1H, m), 3.20 (3H, m), 3.40 (2H, m), 4.14 (1H,

m), 6.82-7.05 (6H, m), 7.23 (2H, m).

Reaksjonsskjema 4

4[4-(N-benzyloxycarbonylpiperidin-4-yl)-2-methyl]-pentan-2-ol

( 4- 2)

Methyl-4-(N-benzyloxycarbonylpiperidin-4-yl)-butanoat (4-1) (10,07 g, 0,032 mol) i 200 ml THF ble avkjølt til 0° C og ble behandlet med CH3MgI (0,0 95 mol) i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble helt over på is, ble surgjort med 10 % KHSO^

og ble ekstrahert med tre porsjoner av EtOAc. Det kombinerte organiske ekstrakt ble vasket med saltvann, ble tørket (MgSO^) og løsningsmidlet ble fjernet. Residuet ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med hexan(7)-EtOAc(3) under dannelse av rent 4-2. R^ = 0,3 (silicagel, hexan (7)-EtOAc(3).

Methyl-2-S-(butylsulfonylamino)-3-[4-(N-benzyloxycarbonyl-piperidin- 4- yl)- 2, 2- dimethyl] butyloxyfenylpropionat ( 4- 3)

N-n-butylsulfonyl-L-tyrosinmethylester (7,21 g, 0,023 mol) ble oppløst i en blanding av 4-2 (1,0 g) , 30 ml CH2C12 og 250 ml benzen. Trifenylfosfin (5,97 g, 0,023 mol) ble tilsatt og etter spylijng. med N2 ble diethylazodicarboxylat (3,6 ml, 0,023 mol) tilsatt ved romtemperatur .ettersom reaksjonsblandingen gikk over i en rød-oransje farge. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 7 dager. Løsnings-midlet ble fjernet og residuet ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med hexan(60)-EtOAc(40) under dannelse av ren 4-3.

<!>h NMR (300 MHz, CDC13) 6 0.88 (6H, t), 1.10-1.40

(12H, m), 1.43-1.78 (8H, m), 2.70-2.82 (4H, m),

2.95-3.10 (3H, m), 3.75 (3H, s), 4.18 (2H, m), 4.32

(1H, m), 5.13 (2H, s), 6.88 (2H, d), 7.06 (2H, d),

7.38 (5H, m).

2-S-(butylsulfonylamino)-3-[4-(N-benzyloxycarbonylpiperidin-4- yl)- 2, 2- dimethyl3butyloxyfenylpropionsyre ( 4- 4)

4-3 (0,64 g, 0,001 mol) ble oppløst i THF/H20/ CH30H-blanding og ble behandlet med LiOH (0,26 g, 0,0062

mol) ved romtemperatur i 8 timer. Løsningsmiddelfjerning, surgjøring (KHS04~løsning) og EtOAc-ekstraksjon ga urent 4-4 som ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering

med CHC13(97)-CH3OH(3)-HOAc(1) under dannelse av ren 4-4.

<!>h NMR (300 MHz, CDCI3) 6 0.86 (6H, s), 1.05-1.50

(13H, m), 1.55-1.80 (5H, m), 2.77 (4H, m), 3.04 (2E,

m), 4.10 (2H, bd), 4.17 (1H, m), 4.85 (1H, d), 5.14

(2H, s), 6.88 (2H, d), 7.13 (2H, d), 7.39 (5H, m).

2-S-(butylsulfonylamino)-3-[4-(piperidin-4-yl)-2,2-dimethyl]-butyloxyfenylpropionsyre ( 4- 5)

Til ammoniumformiat (0,23 g, 3,65 mmol) i 5 ml

CH3OH ble tilsatt 4-4 (0,22 g, 3,65 mmol) i 10 ml CH3OH og deretter 100 mg 10 % Pd/C ved romtemperatur. Etter 15 minutter ble reaksjonsblandingen ført gjennom en Solka- Fioc-pute og løsningsmidlet ble fjernet. Dette residuum ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med EtOH(9)-H20(1)-NH4OH(1) under dannelse av ren 4-5.

<*>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 0.88 (6H, s), 1.15-1.40

(12H, m), 1.42-1.70 (7H, m) 1.90 (2H, d), 2.78-3.00

(6H, m), 3.06 (1H, dd), 3.35 (3H, m), 3.93 (1H, m),

6.86 (2H, d), 7.20 (2H, d).

Methyl-3-S-(benzyloxycarbonylamino)-4- [4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) butyloxyfenyl] butyrat ( 5- 1)

En løsning av forbindelse 1-2 (1,0 g, 1,8 mmol) og N-methylmorfolin (0,21 ml, 1,9 mmol) i 10 ml EtOAc ble omrørt ved -15° C og ble behandlet med isobutylklorformiat (0 ,24 mi;~ 1,8 mmol). Etter 15 minutter ble den heterogene blanding behandlet porsjonsvis med en etherisk løsning av diazomethan (0,5M:10 ml, 5,0 mmol), etterfulgt av kontinuerlig omrøring ved 0° C i 1,0 time. Reaksjonsblandingen ble deretter spylt med argon i 10 mihutter for å fjerne overskudd av diazomethan. Den organiske fase ble vasket med 2 x 5 ml porsjoner H20, saltvann, ble tørket (MgSO^) og fordampet. Residuet ble deretter oppløst i 15 ml CH^OH og ble behandlet sekvensvis med triethylamin (0,7 ml, 5,0 mmol) og Ag02CPh (110 mg, 0,5 mmol) under omrøring ved omgivende temperatur for å bevirke kraftig gassutvikling.

Etter 30 minutter ble løsningsmidlet fordampet hvorpå det urene reaksjonsprodukt ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 4:1 hexan/EtOAc under dannelse av 5-1 (0,52 g) som en olje.

TLC Rf = 0,23 (30 % EtOAc/hexan)

Methyl-3-S-amino-4-[4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin-4-yl)-butyloxyfenyl3butyrat ( 5- 2)

Til 5-1 (0,52 g, 0,9 mmol) oppløst i 20 ml absolutt ethanol ble tilsatt 0,25 g 10 % Pd/C, og den resulterende suspensjon ble hydrogenert under ballongtrykk i 12 timer. Katalysatoren ble deretter filtrert fra og løsningsmidlet fjernet i vakuum under dannelse av 5-2 (0,35 g) som en olje. TLC Rf = 0,15 (9:1:1 CH2Cl2/CH3OH/AcOH).

Methyl-3-S- (butylsulfonylamino) -4-[ 4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) butyloxyfenyl] butyrat ( 5- 3)

Til 5-2 (0,36 g, 0,8 mmol), triethylamin (170 \il, 1,2 mmol), 4-dimethylaminopyridin (12 mg, 0,1 mmol) og 5 ml THF ble ved 0° C tilsatt n-butylsulfonylklorid (130 ul, 1,0 mmol) under omrøring. Kjølebadet ble fjernet og omrøringen ble fortsatt i 6 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 10 ml EtOAc og ble deretter vasket med 2 x 5 ml H2O, saltvann, ble tørket (MgS04) og konsentrert. Det urene reaksjonsprodukt ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 4:1 hexan/EtOAc under dannelse av 180 mg 5-3 som en olje.

3-H NMR (300 MHz, CDCI3) 6 1.12 (2H, m) , 1.25-1.83

(13H, m), 1.29 (3H, t), 1.47 (9H, s), 2.68 (6H, m),

2.87 (2H, d), 3.73 (3H, s), 3.93 (2H, t), 4.08 (1H,

m), 4.72 (1H, d), 6.87 (2H, d), 7.12 (2H, d).

3- S- (butylsulfonylamino) -4-[ 4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin-4- yl) butyloxyfenyl] butanoinsyre ( 5- 4)

Forbindelse 5-3 (175 mg, 0,33 mmol) i 4,0 ml CH3OH ble behandlet med IN NaOH (1,0 ml, 1,0 mmol) etterfulgt av kontinuerlig omrøring ved omgivende temperatur i 20 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 15 ml EtOAc og ble deretter vasket med 10 ml 5 % KHS04 og saltvann, ble tørket (MgSO^) og konsentrert under dannelse av 16 0 mg 5-4 som en olje.

TLC Rf = 0,31 (9:0,5:0,5 CH2Cl2/CH3OH/AcOH).

3-S-(butylsulfonylamino)-4-[4-piperidin-4-yl)butyloxyfenyl]-butanoinsvre ( 5- 5)

Til en omrørt løsning av forbindelse 5-4 (160 mg, 0,30 mmol), 2 ml CH2Cl2 og 100 ul anisol ved 0° C ble tilsatt i 1,0 ml CF3C02H. Etter 1,5 timer ved 0° C ble løsningsmidlet fordampet og det urene reaksjonsprodukt ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 10:0,8:0,8 ethanol/H20/kons. NH^OH under dannelse av 42 mg 5-5 som et fast materiale.

<1->H NMR (300 MHz, D20/CF3C02D) 6 0.82 (3H, t),

1.10-1.70 (11H, m), 1.80 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 2.48

(2H, t), 2.72 (3H, m), 3.00 (3H, m), 3.43 (2H, m),

3.96 (1H, m), 4.10 (2H, t), 7.01 (2H, d), 7.32 (2H,

d).

Methyl-2-S-(N-benzyloxycarbonylamino)-3-[4-(3-klor-propyloxyfenyl) propionat ( 6- 1)

Behandling av en DMF-løsning av 1-1 (0,95 g, 2,9 mmol) og 3-klor-l-tosyloxypropan (0,84 g, 3,19 mmol) med cesiumcarbonat (0,47 g, 1,45 mmol) ga en løsning som ble omrørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med H20 og ble ekstrahert med ether. Etherekstraktet ble vasket med saltvann, ble tørket (Na2S04) og løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av et oljeaktig residuum. Dette ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med EtOAc(5)-hexan(95) under dannelse av 6-1 som en klar olje. Rf = 0,5 (silicageleluering med EtOAc(30)-hexan(70).

Methyl-2-S-(benzyloxycarbonylamino)-3-[4-(3-jod-propyloxyfenyl) propionat ( 6- 2)

En løsning av 6-1 (0,6 g, 1,5 mmol) i aceton ble behandlet med natriumjodid (1,1 g, 7,5 mmol), og den resulterende løsning ble oppvarmet til tilbakeløpskokning i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med ether, ble vasket med vann, saltvann og tørket (Na2S04) . Løsnings^--middelfjerning ga en olje som ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med hexan(90)-EtOAc(10) under, dannelse av 6-2 som en klar olje.

<1>H NMR (300 MHz, CDCI3) 6 1.85-2.08 <4H, m), 3.04

(2H, m), 3.26 (2H, t), 3.71 (3H, s), 3.95 (2H, t),

4.60 (1H, m), 5.00-5.21 (3H, m), 6.78 (2H, d), 6.99

(2H, d), 7.33 (5H, m).

Methyl-2-S-(N-benzyloxycarbonylamino)-3-[4- (2,6-di-methylpiperazin- 4- yl) propyloxyfenyl] propionat ( 6- 3)

En løsning av 6-2 (0,1 g, 0,2 mmol) og 2,6-dimethyl-piperazin (0,068 g, 0,6 mmol) i 1 ml THF ble omrørt ved romtemperatur i 20 timer. Løsningsmidlet ble fjernet ved lavt trykk under dannelse av 6-3 som en klar olje.

<1>H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 1.45 (4H, d), 1.82 (3H, m),

2.65 (2H, m), 2.79 (2H, m), 3.05 (1H, m), 3.18 (2H,

bd), 3.60 (1H, m), 3.72 (3H, s), 3.96 (2H, m), 4.62

(1H, m), 5.10 (2H, s), 5.21 (1H, m), 6.79 (2H, d),

7.00 (2H, d), 7.35 (5H, bs).

2-(N-benzyloxycarbonylamino)-3-[4-(2,6-dimethylpiperazin-4- yl) propyloxyfenyllpropionsyre ( 6- 4)

6-3 (0,090 g, 0,2 mmol) i methanol ble behandlet med 0,7 ml IN NaOH ved romtemperatur i 16 timer. Løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av uren syre som ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med isopropanol(10)-NH4OH(l)-H20(1) under dannelse av ren 6-4, Rf = 0,25.

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 1.65-1.85 (4H, m),

2.60-2.70 (2H, m), 2.80-2.95 (6H, m), 3.11 (8H, m),

3.52 (2H, m), 3.65-3.75 (2H, m), 3.82 (2H, t), 4.17

(1H, m), 4.70 (2H, s), 4.85 (2H, m), 6.63 (2H, d),

6.92 (2H, d), 7.10 (5H, bs).

Methyl-2-S-(N-benzyloxycarbonylamino)-3-[4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) propyloxyfenyl] propionat ( 7- 1)

En løsning av 1-1 (4,0 g, 2,6 mmol) og 3-(N-Boc-piperidin-4-yl)propyljodid (1,1 g, 3,3 mmol) i 40 ml DMF ble behandlet med cesiumcarbonat (0,4 g, 1,35 mmol), og den resulterende løsning ble omrørt ved romtemperatur i 20 timer. Løsningsmidlet ble fjernet og residuet ble tatt opp i EtOAc, ble vasket med vann, saltvann og tørket (Na2S04). Løsnings-middelt jerning ga et residuum som ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 4:1 hexan(80)-EtOAc(20) under dannelse av ren 7-1 som en klar olje.

<X>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 1.10 (2H, m), 1.37-1.45

(11H, m), 1.65-1.82 (4H, m), 2.68 (2H, m), 3.03 (2H,

m), 3.71 (3H, s),-3.90 (2H, t), 4.08 (2H, bd), 4.61

(1H, m), 5.10 '(lH, s), 5.18 (1H, m), 6.79 (2H, d),

7.00 (2H, d), 7.35 (5H, bs).

2-(S)-(N-benzyloxycarbonylamino)-3-[4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) propyloxyfenyl] propionsyre ( 7- 2)

7-1 (0,5 g, 0,9 mmol) 12 ml methanol ble behandlet med 3 ml IN NaOH ved romtemperatur i 16 timer. Løsningsmidlet ble deretter fjernet og residuet■surgjort med 5 % KHS04~ løsning. Denne ble ekstrahert med EtOAc flere ganger, og de kombinerte organiske ekstrakter ble vasket med saltvann og tørket (Na2S04). Løsningsmiddeltjerning ga 7-2 som en klar olje.

<!>h NMR (300 MHz, CDCI3) 6 1.10 (2H, m), 1.37-1.52

(12H, m), 1.62-1.85 (5H, m), 2.66 (2H, t), 3.10 (2H,

m), 4.89 (2H, t), 4.10 (4H, m), 4.62 (1H, m), 5.09

(1H, s), 5.19 (1H, m), 6.79 (2H, d) 7.03 (2H, d),

7.34 (5H, bs).

Methyl-3-S-(N-benzyloxycarbonylamino)-4-[4-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) propyloxyfenyl] butanoat ( 7- 3)

Til en omrørt løsning av 7-2 (1,6 g, 2,9 mmol) i EtOAc vad -15° C ble tilsatt 2,9 mmol isobutylklorformiat og 2,9 mmol N-methylmorfolin, og den resulterende løsning ble omrørt i 1/2 time ved -15° C. Deretter ble diazomethan

(5,0 mmol i Et20) tilsatt, og reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0° C i 20 minutter. Reaksjonsblandingen ble spylt med argon, ble fortynnet med EtOAc og vasket med vann. Den organiske fase ble tørket (MgS04) og løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av det ønskede diazoketon.

<X>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 1.10 (2H, m), 1.35-1.50

(12H, m), 1.55-1.85 (6H, m), 2.68 (2H, bt), 2.95 (2H,

d), 3.90 (2H, t), 4.09 (3H, m), 4.42 (1H, m), 5.06

(1H, m), 5.20 (1H, m), 5.35 (1H, m), 6.80 (2H, d),

7.06 (2H, d), 7.35 (5H, bs).

Dette diazoketon (1,63 g, 2,9 mmol) ble oppløst i

20 ml CH^OH og ble behandlet ved romtemperatur med 5 ml av en CH3OH-løsning av sølvbenzoat (0,22 g, 0,96 mmol) og 1,25 ml triethylamin. Etter noen få minutter ble reaksjonsblandingen sort med tydelig gassutvikling. Etter 1/2 time ble løsnings-midlet fjernet og residuet ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 4:1 hexan(80) EtOAc(20) under dannelse av 7-3 som en olje.

<X>H NMR (300 MHz, CPCI3) 6 1.12 (2H, m), 1.37-1.47

(12H, m), 1.60 (2H, s), 1.65-1.83 (4H, m), 2.49 (2H,

m), 2.62-2.91 (4H,'m), 3.67 (3H, s), 3.90 (2H, t),

4.03-4.20 (4H, m), 5.08 (2H, s), 5.24 (1H, m), 6.79

(2H, d), 7.05 (2H, d), 7.32 (5H, bs).

3-S-(N-benzyloxycarbonylamino)-4-[4-(piperidin-4-yl)-propyloxyfenyl] butanoinsyre ( 7- 4)

En løsning av 7-3 (0,3 g, 0,53 mol) ble behandlet med 1,7 ml IN NaOH, og den resulterende blanding ble omrørt ved romtemperatur i 16 timer. Løsningsmidlet ble fjernet og residuet ble surgjort med 5 % vandig KHSO^-løsning og denne ble ekstrahert flere ganger med EtOAc. De kombinerte organiske ekstrakter ble vasket med saltvann, ble tørket (NaSO^) og løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av den ønskede syre.

<X>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 1.10 (2H, m), 1.40-1.52

(12, m), 1.65-1.84 (6H, m), 2.54-2.93 (8H, m), 3.92

(2H, t), 4.05-4.12 (3H, m), 5.10 (2H, s), 6.71 (2H, d), 7.08 (2H, d), 7.35 (5H, m).

Denne syre ble oppløst i 4 ml CH2C12 og 0,41 mmol anisol ble tilsatt, etterfulgt ved 0° C av 2 ml trifluor-eddiksyre. Etter 2,5-timers omrøring ved 0° C ble løsnings-midlet fjernet og residuet renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med EtOH(10)-NH4OH(1)-H20(1) under dannelse av ren 7-4 som et hvitt fast materiale.

<X>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 1.3-1.5 (4H, m) , 1.6 (1H,

m), 1.75-1.85 (2H, m), 1.95 (2H, d), 2.54 (2H, m),

2.72 (2H, m), 2.93 (2H, t), 3.32 (6H, m), 3.92 (2H,

t), 4.11 (1H, m), 4.95 (2H, m), 6.75 (2H, d), 7.05

(2H, d), 7.25 (5H, m).

Methyl- 2- S-( hexanoylamino)- 3-( 4- jodfenyl) propionat ( 8- 2)

En suspensjon av 8-1 (1,01 g, 2,96 mmol) i 20 ml CHC12 ble avkjølt til 0° C og pyridin (1,43 ml, 17,7 mmol) ble tilsatt, etterfulgt av hexanoylklorid (1,25 ml, 8,88 mmol). Etter 20 minutter var alt 8-1 forbrukt. 25 ml vann ble deretter forsiktig tilsatt og denne blanding ble ekstrahert med 150 ml EtOAc. Den separerte organiske fase ble vasket med 10 % KHS04, saltvann, ble tørket (Na2S04) og løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av et hvitt fast materiale. Dette ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 5 % Et20/CHC13 under dannelse av ren 8-2 (1,07 g) som et hvitt fast materiale.

<X>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 0.88 (3H, t), 1.27 (4H, m),

1.60 (2H, m), 2.09 (2H, t), 3.05 (2H, m), 3.75 (3H,

s), 4.88 (1H, m), 5.93 (1H, m), 6.83 (2H, d), 7.60

(2H? d).

5-(N-t-butyloxycarbonylpiperidin-4-yl)-1-trimethyl-l- silylpent- 3- en- l- yn ( 8- 4) En suspensjon av 3-trimethylsilyl-2-propynyl)-trifenyl-fosfoniumbromid (3,0 g, 6,62 mmol) (Aldrich) i 50 ml THF ble avkjølt til -78° C og ble behandlet med 6,62 mmol n-BuLi dråpevis. Den resulterende løsning fikk oppvarmes til -40° C og ble deretter omrørt i 1/2 time under dannelse av en dyp rød løsning. Etter avkjøling til -78° C ble reaksjonsblandingen behandlet med 8-3 (1,07 g, 4,73 mmol) i 15 ml THF, og fikk oppvarmes til 0° under omrøring i 1 time. Reaksjonen ble stanset med 50 ml H20, og dette ble ekstrahert med 200 ml EtOAc. Den organiske fase ble fraskilt, tørket (Na2S04) og avdrevet under dannelse av et residuum som ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 10 % EtOAc/hexan under dannelse av ren 8-4 (2,02 g), R^ = 0,3. <X>H NMR (300 MHz, CDCI3) 6 0.10 (9H, s), 0.70-1.10 (4H, m), 1.10-1.40 (13H, m), 1.40-1.60 (3H, m), 1.83 38H, m), 2.40-2.60 (3H, m), 3.85 (3H, m), 5.35 (1H, t), 6.00 (1H, m).

5-( N- t- butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) pent- 3- en- l- yn ( 8- 5)

En løsning av 8-4 (0,815 g, 2,54 mmol) i 60 ml THF ble behandlet med 12 ml H20 og lithiumhydroxydhydrat (0,96 g, 2,28 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 6 timer, under hvilket tidsrom fargen ble sort-oransje. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med 75 ml Et20,

og den vandige fase ble fraskilt og vasket med 3 x 75 ml Et20. De kombinerte organiske ekstrakter ble vasket med saltvann, ble tørket og avdrevet. Det resulterende residuum ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 10 % EtOAc/ hexaner under dannelse av 0,63 g ren 8-5.

<X>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 1.0-1.25 (3H, m) , 1.25-1.60 (11H, m), 1.60-1.75 (3H, m), 2.06 (2H, t), 2.30 (1H, t), 2.60-2.78 (2H, m), 4.07 (2H, m), 5.51 (1H, m), 6.22 (1H, m).

Methyl-2-S-(hexanoylamino)-3-[4-(5-N-t-butyloxycarbonylpiperidin- 4- yl) pent- 3- en- l- ynfenyl]- propionat ( 8- 6)

En løsning av 8-5 (0,3 g, 1,2 mmol) og 8-2 (0,58 g, 1,4 mmol) i 6 ml diethylamin ble spylt med N2 og bis-trifenylfosfin-palladiumklorid (0,049 g, 0,07 mmol) ble tilsatt etterfulgt av kobberjodid (7 mg, 0,035 mmol) og suspensjonen ble spylt igjen. Etter flere minutter ble reaksjonsblandingen homogen og denne løsning ble omrørt i 16 timer ved romtemperatur.

Løsningsmidlet ble fjernet ved høyvakuum og residuet ble oppløst i buffer ved pH 7 og ble ekstrahert med Et20. Det organiske ekstrakt ble vasket med 10 % KHS04, saltvann, og ble deretter tørket (Na2S04) og avdrevet. Residuet ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 20 % EtOAc/hexaner under dannelse av 0,28 g ren 8-6. R f = 0,3 (20 % EtOAc, hexaner).

^H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 0.90 (3H, m), 1.05-1.40

(9H, m), 1.52 (6H, s), 1.58-1.75 (4H, m), 2.07 (2H,

tu), 1.70 (2H, m), 3.14 (2H, m), 3.75 (2H, m), 4.10

(2H, m), 4.89 (1H, m), 5.70 (1H, m), 5.94 (1H, m),

6.18 (1H, m), 7.03 (2H, m), 7.38 (2H, m).

5

2-S-(hexanoylamino)-3-[4-(5-piperidin-4-yl)pentylfenyl]-propionsyre ( 8- 7) 8-^6 (0,275 g, 0,52 mmol) ble oppløst i EtOH og 2 ml H20 ble tilsatt sammen med 5 dråper HOAc. 100 mg Pd-C ble tilsatt, og den resulterende suspensjon ble hydrogenert på en Paar-rister (3,5 kg/cm 2) i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom Solka-^KLoc,. og det resulterende løsnings-middel ble fjernet. Det resulterende residuum ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 35 % EtOAc/hexaner under dannelse av 0,22 g methyl-2-S-hexanoylamino-3-[4-{5-N-t-butyloxycarbonylpiperidin-4-yl)-pentylfenylpropionat. <X>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 0.85 (3H, t), 1.00-1.35 (12H, m), 1.45 (9H, s), 1.50-1.65 (6H, m), 2.15 (2H, t), 2.50-2.65 (4H, m), 3.05 (2H, m), 3.71 (3H, s), 4.04 (2H, m), 4.83 (lH, m), 5.96 (1H, m), 6.98 (2H, d), 7.04 (2H, d).

Denne ester (0,17 g, 0,32 mmol) ble suspendert i

10 ml 1:1 THF/H20 og 2 ml CH3OH, lithiumhydroxydhydrat (0,067 g, 1,6 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt i 2,0 timer ved romtemperatur. Løsningsmidlet ble deretter fjernet og residuet ble tatt opp i H20. Dette ble surgjort til pH 2-3 med 10 % KHS04 og ble ekstrahert med EtOAc. Det organiske ekstrakt ble vasket med saltvann, ble tørket (Na2S04) og avdrevet under dannelse' av 0,050 g av den ønskede syre.

<1>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 0.85 (3H, m), 0.95-1.42 (15

H, m), 1.47 (9H, s), 1.50-1.70 (7H, m), 2.18 (2H, m), 2.48-2.72 (5H, m), 5.02-5.30 (2H, m), 4.03 (2H, m),

4.84 (1H, m), 6.05 (1H, m), 7.06 (4H, s).

Denne syre (0,15 g, 0,29 mmol) ble oppløst i 25 ml EtOAc, ble avkjølt til -70° C og ble behandlet med HCl-gass

i 10 minutter. Temperaturen fikk stige til -20° C i løpet av 1/2 time. Reaksjonsblandingen ble spylt med N2 og løsnings-midlet ble fjernet. Residuet ble renset ved flashkromatografi på silicagel og eluering med 9:1:1 EtOH/R^O/NH^OH under dannelse av ren 8-7, 0,040 g som et hvitt fast materiale.

<X>H NMR (300 MHz, CD3OD) 6 0.78 (3H, t), 1.05-1.30

(9H, m), 1.32-1.56 (4H, m), 1.74 (2H, d), 2.03 (2H,

m), 2.42 (2H, m), 2.70-2.85 (3H, m), 3.04 (1H, dd),

3.21 (2H, m), 4.38 (1H, m), 6.92 (2H, d), 7.00 (2H,

d).

I de ovenfor angitte reaksjonsskjemaer og eksempler

har de forskjellige reagenssymboler følgende betydninger:

BOC: t-butoxycarbonyl

Pd-C: palladium på aktivert carbonkatalysator

DMF: dimethylformamid

CBZ: benzyloxycarbonyl.

BOP: benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)-fosfonium-hexafluorfosfat

EtOAc: ethylacetat

DMF: dimethylformamid

CH2C12: methylenklorid

CHCl^: kloroform

MeOH: methanol

HOAc: eddiksyre

Egnede alternative beskyttende grupper som kan anvendes i fremstillingen ifølge oppfinnelsen innbefatter benzylester, cyklohexylester, 4-nitrobenzylester, t-butyl-ester, 4-pyridylmethylester, benzyloxycarbonyl, isonikotinyl-oxycarbonyl, O-klorbenzyloxycarbonyl, p-nitrobenzyloxycarbonyl, p-methoxybenzyloxycarbonyl, t-amyloxycarbonyl, isobornyloxy-carbonyl, adamantyloxycarbonyl, 2-(4-bifenyl)-2-propyloxy-carbonyl og 9-fluorenylmethoxycarbonyl.

Eksempel 18

Blod ble trukket inn i 0,1 volumer av syre-citrat-dextrose (85 mm natriumcitrat, 64 mm sitronsyre, 110 mm dextrose) ved venipunktur fra normale humane frivillige. Blodplaterik plasma ble fremstilt ved sentrifugering ved

400 x g i 12 minutter. PGE1 (5 mg/ml) ble tilsatt, og blodplatene ble oppsamlet ved sentrifugering ved 800 x g i 12 minutter. Blodplatepelletten ble resuspendert i human blodplatebuffer (140 mM NaCl, 7,9 roM KC1, 3,3 mM Na2HP04,

6 mM HEPES, 2 % kvegserum-albumin, 0,1 % dextrose, pH 7,2),

og filtrert over Sepharose 2B som på forhånd var ekvilibrert i human blodplatebuffer. Blodplatene ble tellet og justert til 2 x 108/ml med human blodplatebuffer. Humant fibrinogen, 10 - 100 mg/ml og 1 mM CåCl^blé tilsatt og aggregeringen ble startet ved tilsetning av 10 mM ADP. Aggregeringen ble over-våket ved begynnelseshastigheten av økningen av lystransmittans.

Fibrinogenreseptorantagonistaktivitet av utvalgte forbindelser fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse ble bestemt ved tilsvarende fremgangsmåte, idet den ovenfor beskrevne reaksjonsblanding i tillegg ble tilsatt testforbindelse. Inhibering av blodplateaggregering ble uttrykt som prosent av aggregeringshastigheten observert i fravær av inhibitor. IC50 er dosen av en bestemt forbindelse som inhi-berer aggregering med 50 % i forhold til en kontroll som mangler forbindelsen.

Inhibering av ADP-stimulerte blodplater er vist i den etterfølgende tabell som sammenligner den nødvendige konsen-trasjon (dose) av testforbindelse for å inhibere aggregering med 50 %, med en kontroll som mangler forbindelsen.

Claims (6)

1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser av strukturformelen og farmasøytisk akseptable salter derav, hvori R<1> er piperidin eller piperazin, eventuelt substituert ved et hvilket som helst atom med H, R<6> eller R<7>; eller C3_10-alkyl som er substituert med NR<6>R<7>, hvori R<6> og R7 uavhengig er hydrogen eller C1.10-alkyl eller fenyl; R<4> er fenyl, C^Q-alkyl, C6.10<-f>enylalkyl, C6_10-fenyl - alkenyl, thienyl eller dansyl; X og Z er en enkeltbinding eller 0; Y er 0 eller fenyl; m er et helt tall fra null til ti; n er et helt tall fra null til fire; karakterisert ved at en forbindelse av formelen omsettes med C1S02R4 under dannelse av en forbindelse med formelen som deretter hydrolyseres og avbeskyttes under dannelse av en forbindelse av formel (I), hvoretter om ønsket den erholdte forbindelse omdannes til et farmasøytisk akseptabelt salt.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av en forbindelse av strukturformel karakterisert ved at tilsvarende utgangsmaterialer anvendes.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av en forbindelse av strukturformel karakterisert ved at tilsvarende utgangsmaterialer anvendes.

4. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av en forbindelse av strukturformel karakterisert ved at tilsvarende utgangsmaterialer anvendes.

5. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av en forbindelse av strukturformel karakterisert ved at tilsvarende utgangsmaterialer anvendes.

6. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av en forbindelse av strukturformel karakterisert ved at tilsvarende utgangsmaterialer anvendes.