PL188873B1 - Sposób usuwania apolipoprotein z roztworu białka - Google Patents
Sposób usuwania apolipoprotein z roztworu białkaInfo
- Publication number
- PL188873B1 PL188873B1 PL97363606A PL36360697A PL188873B1 PL 188873 B1 PL188873 B1 PL 188873B1 PL 97363606 A PL97363606 A PL 97363606A PL 36360697 A PL36360697 A PL 36360697A PL 188873 B1 PL188873 B1 PL 188873B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- alpha
- solution
- added
- bentonite
- mmol
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 title claims description 13
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 title claims description 13
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 claims description 17
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 claims description 17
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims description 17
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 claims description 10
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 claims description 10
- 101710095342 Apolipoprotein B Proteins 0.000 claims description 4
- 102100040202 Apolipoprotein B-100 Human genes 0.000 claims description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 abstract description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 8
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 32
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 21
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 17
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 11
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 11
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 10
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 7
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 7
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 7
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 5
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 4
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 4
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 4
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 3
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 3
- 108010032608 Cohn fraction IV Proteins 0.000 description 3
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 3
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 3
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100033312 Alpha-2-macroglobulin Human genes 0.000 description 2
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010028275 Leukocyte Elastase Proteins 0.000 description 2
- 102000016799 Leukocyte elastase Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 2
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 2
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 230000006269 (delayed) early viral mRNA transcription Effects 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- -1 alpha-2-globulin Proteins 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 230000009693 chronic damage Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 238000011178 cuno filtration Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 229940050929 polyethylene glycol 3350 Drugs 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 230000003134 recirculating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/775—Apolipopeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- C07K14/8121—Serpins
- C07K14/8125—Alpha-1-antitrypsin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/811—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an inorganic carrier
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
Abstract
1 . Sposób usuwania apolipoprotein z roztworu bialka, zwlaszcza z roztworu bialka zawierajacego inhibitor alfa-1-proteinazy, znamienny tym, ze do roztworu bialka dodaje sie bentonit, korzystnie w ilosci od 0,1 do 1,0% wagowo, i kontaktuje sie z roztworem bialka przez co najmniej jedna godzine, do zaabsobowania apolipoproteiny A i apolipopro teiny B, po czym usuwa sie bentonit z roztworu bialka. PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób usuwania apolipoprotein z roztworu białka, zwłaszcza z roztworu białka zawierającego inhibitor alfa-1-proteinazy.
Inhibitor alfa-1-proteinazy (w skrócie alfa-1-PI) znany również jako α-antytrypsyna, jest glikoproteiną surowicy o masie cząsteczkowej 52.000. Alfa-1-PI jest syntetyzowany w wątrobie i występuje w surowicy w ilości 150-350 mg/dl (ekwiwalent 30-80 pmoli) w oznaczeniach standardowych plazmy.
Działanie alfa-1-PI w płucach polega na inhibitowaniu elastazy neutrofilowej, proteazy serynowej, która w dużych ilościach może prowadzić do rozpadu ścian pęcherzyków. W normalnym płucu, inhibitor alfa-1-proteinazy zapewnia więcej niż 90% ochrony przed elastazą neutrofilową w niższych drogach oddechowych.
Niedobór alfa-1-PI jest autosomalnym, recesywnie dziedzicznym zaburzeniem objawiającym się dużą ilością odmian allelicznych i został scharakteryzowany w układzie allelicznym określanym jako system inhibitowania proteinazy (PI). Allele te zostały usystematyzowane na podstawie poziomu alfa-1-PI, który występuje w surowicy różnych osobników. Osobniki z niedoborem mają poziom alfa-1-PI niższy niż 35% przeciętnego poziomu normalnego. Osobniki zerowe posiadają niewykrywalne ilości białka alfa-1-PI w surowicy.
Osobniki z niedoborem alfa-1-PI mają wysokie ryzyko rozwoju rozedmy płuc z niszczeniem ścian pęcherzyków. Symptomy pojawiają się u dotkniętych tą przypadłością osobników w trzeciej lub czwartej dekadzie życia.
Rozedma płuc związana z niedoborem alfa-1-PI rozwija się w rezultacie niewystarczającego stężenia alfa-1-PI w niższych partiach dróg oddechowych powodującego brak inhibitowania elastazy neutrofilowej i w wyniku tego rozpad struktury związanych tkanek miąższu płuc. Osobniki z niedoborem alfa-1-PI mają słabą ochronę przed elastazą neutrofilową uwalnianą przez neutrofile w niższych partiach dróg oddechowych. Ten brak równowagi proteinazy/inhibitora proteinazy u osobników z niedoborem alfa-1-PI daje w rezultacie chroniczne zniszczenia i w końcu rozpad miąższu płuc i ścian pęcherzyków.
Terapia pacjentów z niedoborem alfa-1-PI jest ukierunkowana na bezpośrednią wymianę lub podwyższenie poziomu alfa-1-PI w surowicy. Jeżeli poziom w surowicy zostanie podniesiony, oczekiwanym efektem jest wyższe stężenie w płucach a zatem skorygowanie nierównowagi elastazą neutrofilowa/alfa-1-PI w płucach i zapobieżenie powolnemu rozpadowi tkanki płucnej. Studia nad populacją normalną i z niedoborem alfa-1-PI sugerowały, że minimalny poziom alfa-1-PI w surowicy zapobiegający niekorzystnym zjawiskom wynosi 80 mg/dl lub 11 pmoli. W konsekwencji, większość terapii polegających na podwyższaniu poziomu alfa-1-PI w surowicy u pacjentów z niedoborem alfa-1-PI ma na celu zapewnienie minimalnego bezpiecznego poziomu alfa-1-PI w surowicy, ponieważ alfa-1-PI w surowicy jest źródłem pęcherzykowego alfa-1-PI.
188 873
Dotychczas alfa-1-PI był oczyszczany różnymi technikami stosowanymi do oczyszczania białek. Jedna z tych technik łączyła chromatografię na aniononicie z glikolem polietylenowym (PEG) dla wytrącenia towarzyszących niepożądanych białek. Inne procedury oczyszczające wykorzystują wytrącanie PEG z następującą po nim chromatografią na amonicie, lub wielokrotne wytrącanie z PEG połączone z chromatografią na anionicie. Inne wykorzystują kombinację wytrącania PEG, etapu jednokrotnej lub wielokrotnej chromatografii na anionicie oraz etapy chromatografii przy użyciu chelatów metali. Jeszcze inne metody do oczyszczenia białek wykorzystują techniki rozdziału faz.
W równoległym zgłoszeniu patentowym P-330.934 przedstawiono sposób oczyszczania inhibitora alfa-1-proteinazy, w którym nieoczyszczoną frakcję białkową zawierającą alfa-1-PI w roztworze wodnym o pH wynoszącym około 6 zawiesza się przez czas potrzebny do rozpuszczenia białek rozpuszczalnych, odsącza się zawiesinę i odzyskuje nierozpuszczalne białka, po czym ponownie zawiesza się nierozpuszczalne białka w roztworze wodnym, dodaje się glikol polietylenowy do ponownie zawieszonych nierozpuszczalnych białek w celu wytrącenia a-2-globuliny; z nad wytrąconego osądu oddziela się supematant zawierający alfa-1-PI; do supernatantu dodaje się ZnCl2 i wytrąca surowy alfa-1-PI, który oddziela się, rozpuszcza i kontaktuje ze środowiskiem aniono-wymiennym, po czym wyodrębnia się ze środowiska aniono-wymiennego frakcję zawierającą oczyszczony inhibitor alfa-1-proteinazy. Dla oczyszczonego alfa-1-PI zostały odnotowane aktywności specyficzne wynoszące 1,26 jednostek/mg. Jednak w oczyszczonym alfa-1-PI stwierdzono obecność apolipoprotein, które należy usunąć.
W szczególności wynalazek dotyczy ulepszonego sposobu oczyszczania alfa-1-PI. Sposób obejmuje oczyszczanie nieoczyszczonej frakcji białkowej, korzystnie, pasty z frakcją Cohna IV| + IV4, która zawiera alfa-1-PI. Nieoczyszczoną frakcję białkową zawiesza się w zimnej wodzie lub roztworze soli o pH wynoszącym około 6, aby rozpuścić białka rozpuszczalne łącznie z albuminą, alfa-2-globuliną (alfa-2-makroglobuliną i hatoglobuliną) oraz betaglobuliną (transferyną). Roztwór filtruje się, aby odzyskać białka nierozpuszczalne łącznie z alfa-1-PI, które następnie przemywa się wodą (lub roztworem soli). Przemytą frakcję białek nierozpuszczalnych następnie ponownie wprowadza do wody (lub roztworu soli) i pH nastawia się na około 8,5. W celu wytrącenia alfa-2-globuliny dodawane jest PEG. Do odzyskanego supernatantu z nad osadu dodaje się ZnCl2 w celu wytrącenia surowego alfa-1-PI. Surowy alfa-1-PI jest następnie ponownie solubilizowany w buforze NaEDTA i zadany fosforanem tri-n-butylu (TNBP) i polisorbatem (Tween 80), aby zdezaktywować wirusy. W celu stabilizacji alfa-1-PI podczas dezaktywacji wirusów aby podwyższyć wydajność korzystnie, dodaje się cukier taki jak sacharoza, maltoza, glukoza lub podobne.
Inhibitor alfa-1-proteinazy po kontaktowaniu ze środowiskiem aniono-wymiennym, zawiera jeszcze apolipoproteiny, które należy usunąć postępując sposobem według wynalazku.
Według wynalazku sposób usuwania apolipoprotein z roztworu białka, zwłaszcza z roztworu białka zawierającego inhibitor alfa-1-proteinazy, polega na tym, że do roztworu białka dodaje się bentonit i kontaktuje się z roztworem białka przez czas wystarczający do zaabsorbowania apolipoproteiny A i apolipoproteiny B, po czym z roztworu białka usuwa nie bentonit.
Korzystnie bentonit kontaktuje się z roztworem białka przez co najmniej jedną godzinę.
Bentonit do roztworu białka dodaje się w ilości około 0,1 do około 1,0 % wagowo. Korzystnie, bentonit dodaje się w takiej ilości, aby ilość każdej apolipoproteiny A i apoliopoproteiny B pozostająca w roztworze białkowym po usunięciu bentonitu była mniejsza niż około 0,01 mg/ml.
Sposobem tym oczyszczony inhibitor alfa-1-proteinazy otrzymuje się z wydajnością co najmniej około 1 jednostki na gram pasty Cohna Frakcji IV) + IV4.
Dodanie bentonitu pod koniec oczyszczania alfa-1-PI pozwala na uzyskanie inhibitora alfa-1-proteinazy oczyszczonego od apolipoprotein, o wysokiej aktywności specyficznej.
Ogólnie rzecz biorąc, wynalazek obejmuje ulepszenie w sposobie oczyszczania alfa-1-PI przez usunięcie alipoprotein zawartych w roztworze białka. Sposób obejmuje oczyszczanie frakcji białkowej, korzystnie, pasty z frakcją Cohna IV i + IV 4, która zawiera alfa-1-PI. Nieoczyszczoną frakcję białkową zawiesza się w zimnej wodzie lub roztworze soli o pH wynoszącym około 6, aby rozpuścić białka rozpuszczalne łącznie z albuminą, alfa-2-globuliną (alfa-2-makroglobuliną i hatoglobuliną) oraz beta-globuliną (transferyną). Roztwór filtruje się,
188 873 aby odzyskać białka nierozpuszczalne łącznie z alfa-1-PI, które następnie przemywa się wodą (lub roztworem soli). Przemytą frakcję białek nierozpuszczalnych następnie ponownie wprowadza się do wody (lub roztworu soli) i pH nastawia się na około 8,5. W celu wytrącenia alfa2-globuliny dodaje się PEG. Do odzyskanego supematantu z nad osadu dodaje się ZnCL w celu wytrącenia surowego alfa-1-PI. Surowy alfa-1-PI jest następnie ponownie solubilizowany w buforze NaEDTA i zadaje się go fosforanem tri-n-butylu (TNBP) i polisorbitalem 80, w celu dezaktywacji wirusów. Podczas dezaktywacji wirusów w celu stabilizacji alfa-1-PI i aby podwyższyć wydajność korzystnie, dodaje się cukier taki jak sacharoza, maltoza, glukoza lub podobne.
Tak potraktowany roztwór następnie kontaktuje się z środowiskiem jonowymiennym w celu oddzielenia alfa-1-PI od pozostałych białek. Frakcję zawierającą alfa-1-PI następnie odzyskuje się i w celu usunięcia jeszcze obecnych apolipoprotein zadaje się bentonitem. Otrzymany w rezultacie oczyszczony roztwór alfa-1-PI następnie odzyskuje się i zagęszcza.
Alfa-1-PI oczyszczony tym sposobem wykazuje aktywność specyficzną większą niż 1,0 jednostek/OD28o- Sposobem tym uzyskuje się wydajność większą niż 1,0 jednostki/gram pasty i korzystnie większą niż 1,3 jednostek/gram pasty.
Wynalazek został opisany w odniesieniu do otrzymywania alfa-1-PI, ale postępując tym sposobem uzyskuje się lepszą jakość i wydajność wielu białek a proces oczyszczania jest szybszy od innych procesów.
Sposób przedstawia unikalną kombinację etapów oczyszczania zapewniając wysoką wydajność i wysoką aktywność specyficzną preparatu alfa-1-Pl.
Alfa-1-PI otrzymuje się przez oczyszczenie frakcji białkowej. Nieoczyszczoną frakcją białkową może być plazma, alfa-1-PI wyprodukowane metodą rekombinacji lub jakiekolwiek inne źródło zawierające alfa-1-PI. W korzystnym przykładzie wykonania, nieoczyszczoną frakcją białkową jest pasta z frakcją Cohna IVd + IV4, której otrzymywanie jest dobrze znane ze stanu techniki.
A. Początkowy etap przerobu pasty z frakcją IV y + IVj
Pastę z frakcją Cohna IVj + IV4 (lub inną nieoczyszczoną frakcją białkową) zawiesza się w 5 ± 2 częściach wody lub roztworu soli, t j . około 0,15 do około 0,15 mola NaCl na 1 część pasty z frakcją Cohna rVj + IV4 w temperaturze poniżej 15°C, przy pH około 6,0 ± 0,2 przez co najmniej jedną godzinę. Rozpuszczalne białka, łącznie z albuminą, alfa-2-globuliną oraz beta-globuliną, oddziela się następnie od białek nierozpuszczalnych, w tym od alfa-1-PI, za pomocą prasy filtracyjnej, wirowania lub podobnych. Pozostałość przemywa się w temperaturze poniżej 15°C wodą lub roztworem soli o pH 6 ± 0,2, w ilości około 5 objętości w stosunku do pierwotnej ilości pasty, w celu usunięcia pozostałości białka rozpuszczalnego, fizycznie uwięzionego w nierozpuszczalnej paście. Stwierdzono, że w zawiesinie pasty z frakcją IVi + IV4 w wodzie lub roztworze soli o pH 6,0 ± 0,2, i kolejnym przemywaniu usuwane są prawie wszystkie albuminy i większość alfa-2- i beta protein w precypitacie frakcji Cohna IV, +IV4.
B. Wytracanie glikolem polietylenowym (PEG)
Pozostałe nierozpuszczalne białka ponownie zawiesza się w około 5 ± 2 objętościach wody o pH 8,5 + 0,5 na 1 objętość pozostałości, w temperaturze około 15°C ± 5°C korzystnie przez około 6 godzin, jednak czas ten może być krótszy lub dłuższy. Krótsze czasy nie są korzystne ze względu na to, że przy dłuższych czasach osiągane są wyższe wydajności. Sześć godzin jest optymalną kombinacją czasu i wydajności. Następnie dodaje się stały Tris do osiągnięcia końcowego stężenia 10 ± 5 mmoli oraz stały NaCl do osiągnięcia końcowego stężenia 150 ± 20 mmoli i nastawia się pH na 8,0. Następnie dodaje się glikol polietylenowy 3350 (PEG) do osiągnięcia końcowego stężenia 15% ± 5% wagowo i miesza się w temperaturze w 15°Ć ± 5°C przez około jedną godzinę. PEG dodaje się w celu wytrącenia alfa-2-globuliny.
Tworzący się precypitat PEG usuwa się za pomocą prasy filtracyjnej. Prasę filtracyjny myje się przed i po filtracji za pomocą roztworu zawierającego 150 ± 25 mmola NaCl i 15 ± 5% wagowo PEG przy pH 8,0 ± 0,5. Alternatywnie precypitat może być usuwany przez odwirowanie.
188 873
C. Wytracanie ZnCl?
ZnCl2 (100 ± 10 mmoli) dodaje się do supernatantu PEG do osiągnięcia końcowego stężenia 6 ± 5 mmoli i nastawia się pH roztworu na 4,5 ± 0,5. Roztwór chłodzi się do temperatury 5 ± 5°C i miesza przez co najmniej godzinę. ZnCh wytrąca surowy alfa-1-PI. Surowy alfa1 -PI zatęża się przez filtrację, korzystnie przez filtrację Prostak™, opisaną w „Prostak OpenChannel Module”, Millipore Corporation, lub przez wirowanie a filtrat usuwa się. Zatężona zawiesina lub precypitat mogą być zamrożone do przyszłego przerobu.
D. Dezaktywacja wirusów przez traktowanie rozpuszczalnikiem-detergentem
Surowy alfa-1-PI ponownie rozpuszcza się w 50 mmolach NaEDTA w filtrze Prostak z recyrkulacją. Jako stabilizator podczas dezaktywacji wirusów dodaje się cukier, korzystnie sacharozę, w ilości około 15 ± 5% wagowo (lub około 0,25 ± 0,05 mola cytrynianu trój sodowego), roztwór miesza się w temperaturze 15°C ± 5°C dopóki sacharoza nie rozpuści się.
W roztworze zawierającym alfa-1-PI dezaktywuje się wirusy przez traktowanie rozpuszczalnikiem-detergentem. Roztwór 10 ± 1% wagowo/objętość polisorbitalu 80 i 3 ± 0,3% wagowo fosforanu tri-n-butylu dodaje się do roztworu alfa-1-PI do końcowego stężenia 1,0 ± 0,5% wagowo/objętość polisorbitalu 80 i 0,3 ± 0,15% wagowo fosforanu tri-n-butylu. Roztwór następnie inkubuje się w temperaturze 27°C ± 3°C przez nie mniej niż 6 godzin aby zdezaktywować wszystkie wirusy, które mogą być obecne w alfa-1-PI.
Stwierdzono, że obecność cukru, np. sacharozy, jako stabilzatora podczas dezaktywacji wirusów poprzez zadawanie rozpuszczalnikiem-detergentem zwiększa wydajność jednostek alfa-1-PI w porównaniu z próbką kontrolną, tj. roztworem alfa-1-PI dezaktywowanym na wirusy przez rozpuszczalnik detergent bez cukru jako stabilizatora. Zwiększenie wydajności wynosi korzystnie co najmniej 10%, korzystniej co najmniej 20% a nawet co najmniej 30%. Po inkubacji, zadawany roztwór alfa-1-PI chłodzi się do temperatury 0 - 10°C i nastawia się pH na 8,0 ± 0,1.
E. Chromatografia anionowymienna
Roztwór potraktowany SD następnie rozcieńcza się w około 1 objętości wody na objętość roztworu potraktowanego SD. Rozcieńczony roztwór następnie dodaje się do wstępnie zrównoważonego środowiska chromatografii QAE lub innego środowiska anionowymiennego, które wiąże się z alfa-1-PI, umożliwiając oddzielenie innych białek od alfa-1-PI. Można tu stosować kąpiel lub chromatografię kolumnową. Po zaabsorbowaniu alfa-1-PI przemywa się buforem zawierającym 20 ± 10 mmola fosforanu sodu, przy pH równym 8 ± 1. Eluat, który zawiera alfa-1-PI pozyskuje się do dalszej przeróbki.
Po usunięciu alfa-1-PI, środowisko anionowymienne oczyszcza się przez przemywanie kolejno: wodnym roztworem zawierającym 2 ± 0,2 mola NaCl, 20 ± 0,2 mmola fosforanu sodu, o pH 8 ± 1; następnie wodą do iniekcji, (WFI); po czym roztworem wodnym zawierającym 500 mmola NaOH; i wreszcie WFI. Środowisko chromatograficzne przechowuje się w 2 ± 0,2 molowym NaCl, 20 ± 10 mmolowym fosforanie sodu, pH 8 ± 1.
F. Traktowanie bentonitem eluatu zawierającego alfa-1-PI
Eluat zawierający alfa-1-PI łączy się i traktuje bentonitem 0,1 do 1,0% wagowo przez około godzinę lub dłużej aby zredukować ilość apolipoprotein korzystnie do ilości mniejszej niż około 0,01 mg/ml apolipoproteiny A i do ilości mniejszej niż około 0,01 mg/ml apolipoproteiny B. Bentonit usuwa się za pomocą filtracji, korzystnie filtracji Cuno®, jak opisano w „Zeta Plus® C Series Filter Medium” Cuno Inc. Otrzymany roztwór zagęszcza się przez ultrafiltrację membranową dopóty, aż aktywność alfa-1-PI wyniesie co najmniej 10 jednostek/ml. Zagęszczony produkt następnie filtruje się przez filtr 0,45 jm aby usunąć jakiekolwiek drobne pozostałości. Alfa-1-PI następnie filtruje się metodą Planova dla usunięcia wirusów. Sterylnie filtrowany przez filtr 0,22 μιη, rozdzielany jest do fiolek i liofilizowany do przechowywania. Alfa-1-PI przechowuje się w temperaturze 2-8°C. Liofilizowany alfa-1-PI może być ponownie rozprowadzony w sterylnej wodzie do podawania pacjentom.
G. Oznaczenie aktywności alfa-1-PI
Do pomiaru aktywności alfa-1-PI może być zastosowana próba chromogeniczna ponownie rozpuszczonego alfa-1-PI. Podczas próby używany jest chromogeniczny substrat wrażliwy na trypsynę, który uwalnia p-nitroanilinę w obecności trypsyny (z firmy Sigma Chemical Co. z St Louis, Missouri). Uwalniana p-nitroanilina jest wykrywana przy 405 nm.
188 873
Alfa-1-PI inhibituje uwalnianie p-nitroaniliny z substratu. Aktywność alfa-1-PI w produkcie jest oznaczana w oparciu o standardową krzywą aktywności alfa-1-PI. Próba chromogeniczna liofilizowanego alfa-1-PI ponownie rozpuszczonego sporządzonego wyżej wymienionym sposobem wykazuje, że aktywność specyficzna wynosi co najmniej około 1,0 jednostek/OD280·
H. Podawanie
Alfa-1-PI może być podawany przez infuzję pacjentom w ilościach około 0,08 ml/kg masy ciała na minutę przez pierwszych 10 minut. Jeżeli pacjent nie odczuwa żadnego dyskomfortu, dawka może być zwiększana dopóki jest tolerowana. Jeżeli jest tolerowana, kolejne infuzję dla tego samego pacjenta mogą zawierać większe dawki. Jeżeli występują jakieś dolegliwości, dawka powinna zostać zredukowana lub infuzja przerwana, aż znikną objawy. Infuzja może zostać wtedy ponowiona przy dawce tolerowanej przez pacjenta.
Przykład 1
Pastę z frakcją IV( + IV4 (600g) frakcjonowaną według schematu Cohna zawieszano przez jedną godzinę w 1800 ml wody w temperaturze 5°C przy pH 6,0 bez jakiegokolwiek miareczkowania. Po powstaniu zawiesiny, zawiesinę przefiltrowano przez filtr 10CP (Cuno) w prasie filtracyjnej. Przesącz zebrano, oznaczono, zmierzono aktywność specyficzną (S.A.) alfa-1-PI (w poniższych tabelach oznaczany Al PI) oraz gęstość optyczną przy 280 nm (OD280nm). Pastę w prasie filtracyjnej przemywano 600 ml wody w temperaturze 5°C i przesącz zebrano. Postępowanie to powtórzono czterokrotnie, wszystkie przesączę zebrano, oznaczono i dokonano pomiaru aktywności specyficznej (S.A.) alfa-1-PI (A1PI) oraz OD280· Otrzymano 350 g pasty. Aktywność A1PI i OD280 dla wszystkich próbek przedstawiono w tabeli 1.
Tabela 1
Aktywność Al Pl i OD280 dla frakcji przemywanych wodą
| Próbka | Objętość (ml) | Al PI (j/ml) | Całkowity Al PI (j) | OD 280 | S. A. G/OD) |
| Mycie 0 | 1450 | 0,06 | 87 | 22,2 | 0,003 |
| Mycie 1 | 600 | 0,1 | 60 | 29,9 | 0,003 |
| Mycie 2 | 600 | 0,08 | 48 | 25,5 | 0,003 |
| Mycie 3 | 600 | 0,04 | 24 | 13,0 | 0,003 |
| Mycie 4 | 600 | 0 | 0 | 4,8 | 0 |
| Mycie 5 | 600 | 0 | 0 | 3,0 | 0 |
Przy kł ad 2
350 g pasty otrzymanej w przykładzie 1 ponownie zawieszono w 1050 ml wody o pH 8,5 w temperaturze 18°C w ciągu 6 godzin. Stały Tris dodano do końcowego stężenia 10 mmoli oraz dodano stały NaCl do końcowego stężenia 150 mmoli i nastawiono pH na 8,0. Glikol polietylenowy (PEG 3350) dodano do końcowego stężenia 15% wagowo i mieszano w temperaturze 18°C przez jedną godzinę. Otrzymany w rezultacie precypitat usunięto na prasie filtracyjnej z filtrem 10 CP odzyskując supematant. Pastę pozostałą na prasie filtracyjnej przemyto roztworem zawierającym 15% wagowo PEG 3350, 10 mmoli Tris, i 150 mmoli NaCl. Filtrat i ciecz po przemyciu zmieszano. Wyniki przedstawiono w tabeli 2.
Tabela 2 Precypitacja PEG 3350
| Próbka | Objętość (ml) | Al PI (j/ml) | Całkowity Al PI (j) | OD 280 | S. A. (j/OD) |
| Ponownie roztworzon filt.PEG | 1400 | 1,063 | 1488 | 13,32 | 0,0798 |
| 2465 | 0,513 | 1265 | 2,16 | 0,2375 |
188 873
Przykład 3
Do odzyskanego filtratu PEG 3350 z przykładu 2 dodano ZnCE do końcowego stężenia 2 mmole, pH nastawiono na 7,5 a temperaturę obniżono do 5°C dla wytrącenia surowego alfa-1-PI. Po godzinie mieszania, surowy alfa-1-PI przefiltrowano za pomocą filtracji Prostak w celu zagęszczenia i otrzymaną zawiesinę ponownie roztworzono roztworem NapDTA. Rezultaty przedstawiono w tabeli 3.
Tabela 3 Precypitacja ZnCl2
| Próbka | Objętość (ml) | Al PI g/ml) | Całkowity Al PI (j) | OD 280 | S. A. (j/OD) |
| Filtrat Prostak | 2200 | 0,0159 | 35 | 0,15 | 0,106 |
| AaEDTA roztworznn | 264 | 4,305 | 1065 | 13,72 | 0,3138 |
Przykład 4
Do roztworu AaEDTA z przykładu 3 dodano sacharozę w ilości 16,7% wagowo i mieszano roztwór w temperaturze 18°C dopóki sacharoza nie rozpuściła się całkowicie. Do tego roztworu dodano polisorbat-80 o końcowym stężeniu 1,0%, fosforan tri-n-butylu o końcowym stężeniu 0,3%. Roztwór inkubowano w temperaturze 27,5°C przez czas nie krótszy niż 6 godzin dla zdezaktywowania jakichkolwiek możliwych zanieczyszczających wirusów w otoczkach lipidowych. Po inkubacji roztwór ochłodzono do temperatury 5°C i nastawiono pH na 8,0. Dla porównania powyższy proces powtórzono bez dodawania sacharozy. Stabilność alfal-PI podczas zadawania rozpuszczalnikiem detergentem w obecności 16,7% sacharozy (SD Al PI) oraz bez sacharozy (próba kontrolna) pokazano w tabeli 4.
Tabela 4
Stabilność Al PI podczas zadawania rozpuszczalnikiem detergentem w obecności sacharozy
| Próbka | Objętość (ml) | A1PI (j/ml) | Całkowity A1PI (j) | %A1 PI z NaEDTA |
| SD A1PI | 311 | 3,35 | 1042 | 97,8 |
| Kontrola | 293 | 2,13 | 624 | 58,6 |
Przykład 5
Do otrzymanego roztworu SD alfa-1-PI z przykładu 4, dodano 311 g destylowanej wody, aby obniżyć siłę jonową roztworu przed wprowadzeniem do kolumny QAP. Roztwór ten wprowadzono do 300 ml wstępnie zrównoważonej kolumny jonowymiennej QAP przy przepływie 12 ml/min. Kolumnę przemyto 6 1 bufora fosforanowe solankowego (20 mmola NaCl, 20 mmola NaH2PO4, pH 8,0). Alfa-1-PI przemyto 1,8 1 buforu fosforanowe solankowego (100 mmoli NaCl, 20 mmoli NaH2PO4, pH 8,0).
Środowisko jonowymienne oczyszczono przez przemycie kolejno; 2 molowym NaCl, 20 mmolowym NaH2PO4, pH 8,0, 500 mmolowym NaOH oraz wodą destylowaną. Ośrodek chromatograficzny przygotowano do przechowywania w 2 molowym NaCl, 20 mmolowym NaH2PO4, pH 8,0. Oznaczono sumę frakcji zawierających alfa-1-PI a wyniki przedstawiono w tabeli 5.
Tabela 5
Chromatografia jonowymienna QAE
| Próbka | Objętość (ml) | A1PI g/ml) | Całkowity Al PI G) | OD2so | S. A. g/OD) |
| Eluat | 1500 | 0,62 | 930 | 0,58 | 1,058 |
Przykład 6
Do zebranego eluatu otrzymanego w przykładzie 5 dodano 3,0 g bentonitu wolnego od ciał pirogennych i mieszano roztwór w temperaturze 20°C przez 1 godzinę. Bentonit usunięto za pomocą filtracji Cuno. Filtrat zagęszczono przez ultrafiltrację. Koncentrat przefiltrowano metodą Planova oraz wielokrotnie sterylnie filtrowano. Filtrat został rozdzielony do fiolek
188 873 i liofilizowany do przechowywania. Wszystkie próbki zostały oznaczone a rezultat został przedstawiony w tabeli 6.
Tabela 6
Chromatografia jonowymienna QAE
| Objętość (ml) | Al PI (j /ml) | Całkowity Al PI (j) | OD 280 | S. A. (j/OD) | |
| F. Cuno | 1710 | 0,52 | 885 | 0,385 | 1,351 |
| Koncentrat | 75 | 11,6 | 870 | 8,092 | 1,434 |
| Fiolka | 92 | 9,4 | 865 | 6,225 | 1,510 |
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz. Cena 2,00 zł.
Claims (2)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób usuwania apolipoprotein z roztworu białka, zwłaszcza z roztworu białka zawierającego inhibitor alfa-1-proteinazy, znamienny tym, że do roztworu białka dodaje się bentonit, korzystnie w ilości od 0,1 do 1,0% wagowo, i kontaktuje się z roztworem białka przez co najmniej jedną godzinę, do zaabsobowania apolipoproteiny A i apolipoproteiny B, po czym usuwa się bentonit z roztworu białka.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że dodaje się bentonit w takiej ilości, aby pozostająca w roztworze białkowym ilość każdej apolipoproteiny A i apolipoproteiny B, po usunięciu bentonitu była mniejsza niż około 0,01 mg/ml.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/673,064 US5616693A (en) | 1996-07-01 | 1996-07-01 | Process for seperating alpha-1-proteinase inhibitor from COHN IV1 +1V4 paste |
| PCT/US1997/011256 WO1998000154A1 (en) | 1996-07-01 | 1997-06-27 | Process for separating alpha-1-proteinase inhibitor from cohn fraction iv1 +iv4 paste |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL188873B1 true PL188873B1 (pl) | 2005-05-31 |
Family
ID=24701177
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL97330934A PL188830B1 (pl) | 1996-07-01 | 1997-06-27 | Sposób oczyszczania inhibitora alfa-1-proteinazy |
| PL97363606A PL188873B1 (pl) | 1996-07-01 | 1997-06-27 | Sposób usuwania apolipoprotein z roztworu białka |
| PL97363607A PL188874B1 (pl) | 1996-07-01 | 1997-06-27 | Sposób zwiększania wydajności w procesie oczyszczania inhibitora alfa-1-proteinazy |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL97330934A PL188830B1 (pl) | 1996-07-01 | 1997-06-27 | Sposób oczyszczania inhibitora alfa-1-proteinazy |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL97363607A PL188874B1 (pl) | 1996-07-01 | 1997-06-27 | Sposób zwiększania wydajności w procesie oczyszczania inhibitora alfa-1-proteinazy |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5616693A (pl) |
| EP (2) | EP1762576B1 (pl) |
| JP (3) | JP4390855B2 (pl) |
| KR (1) | KR20000022480A (pl) |
| AT (2) | ATE352569T1 (pl) |
| AU (1) | AU726233B2 (pl) |
| BR (1) | BR9710107B1 (pl) |
| CA (2) | CA2489773A1 (pl) |
| CZ (3) | CZ300452B6 (pl) |
| DE (2) | DE69739212D1 (pl) |
| DK (2) | DK1762576T3 (pl) |
| ES (2) | ES2281104T3 (pl) |
| IL (1) | IL127774A (pl) |
| PL (3) | PL188830B1 (pl) |
| PT (2) | PT944392E (pl) |
| WO (1) | WO1998000154A1 (pl) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5616693A (en) * | 1996-07-01 | 1997-04-01 | Alpha Therapeutic Corporation | Process for seperating alpha-1-proteinase inhibitor from COHN IV1 +1V4 paste |
| WO2000051625A1 (en) * | 1999-03-05 | 2000-09-08 | The Trustees Of University Technology Corporation | Inhibitors of serine protease activity, methods and compositions for treatment of herpes viruses |
| AU3511500A (en) | 1999-03-05 | 2000-09-21 | Trustees Of University Technology Corporation, The | Inhibitors of serine protease activity, methods and compositions for treatment of nitric oxide-induced clinical conditions |
| AU3731400A (en) * | 1999-03-05 | 2000-09-21 | Trustees Of University Technology Corporation, The | Methods and compositions useful in inhibiting apoptosis |
| US6849605B1 (en) * | 1999-03-05 | 2005-02-01 | The Trustees Of University Technology Corporation | Inhibitors of serine protease activity, methods and compositions for treatment of viral infections |
| US6462180B1 (en) | 1999-11-24 | 2002-10-08 | Bayer Corporation | Method of preparing α-1 proteinase inhibitor |
| WO2002048176A1 (en) | 2000-12-14 | 2002-06-20 | Bayer Corporation | Method of preparing alpha-1 proteinase inhibitor |
| KR100406870B1 (ko) * | 2001-05-25 | 2003-11-21 | 주식회사 두산 | 침전법을 이용한 계란 난황에서의 유용 수용성 성분의분리방법 및 침전 부산물의 이용 방법 |
| WO2003014339A2 (en) * | 2001-08-07 | 2003-02-20 | Novozymes, A/S | Carbohydrates and polyols for dissolving protein crystals |
| ATE420161T1 (de) * | 2002-07-01 | 2009-01-15 | Novozymes As | Monopropylenglykol als fermentationszusatz |
| US7777006B2 (en) | 2002-12-31 | 2010-08-17 | Csl Behring L.L.C. | Method for purification of alpha-1-antitrypsin |
| US20040220242A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Leland Shapiro | Inhibitors of serine protease activity, methods and compositions for treatment of nitric oxide induced clinical conditions |
| US7850970B2 (en) | 2003-08-26 | 2010-12-14 | The Regents Of The University Of Colorado | Inhibitors of serine protease activity and their use in methods and compositions for treatment of bacterial infections |
| US7807435B2 (en) | 2005-08-11 | 2010-10-05 | Baxter International Inc. | Method for the purification of alpha-1 proteinase inhibitor (a1PI) |
| GB0524432D0 (en) * | 2005-11-30 | 2006-01-11 | Nhs Blood & Transplant | Method |
| US20080124303A1 (en) * | 2005-12-12 | 2008-05-29 | Cavit Sciences, Inc | Methods and compositions for treatment of viral infections |
| SI1999262T1 (sl) * | 2006-03-30 | 2012-12-31 | Baxter Healthcare S.A. | Postopek za čiščenje rekombinantnega alfa 1-antitripsina, ki vključuje stopnjo anionske izmenjevalne kromatografije |
| WO2007134800A1 (en) * | 2006-05-19 | 2007-11-29 | Baxter International Inc. | Ethanol dependence of alpha1 antitrypsin c-terminal lys truncation by basic carboxypeptidases |
| JP2014520094A (ja) | 2011-05-27 | 2014-08-21 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
| WO2012178102A2 (en) | 2011-06-24 | 2012-12-27 | The Regents Of The Unversity Of Colorado, A Body Corporate | Compositions, methods and uses for alpha-1 antitrypsin fusion molecules |
| CA2896951A1 (en) | 2012-01-10 | 2013-07-18 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Compositions, methods and uses for alpha-1 antitrypsin fusion molecules |
| TWI629283B (zh) | 2012-02-23 | 2018-07-11 | 巴克斯歐塔公司 | 來自血漿中的免疫球蛋白之ｉ-ｉｖ-１部分沉澱 |
| US9353165B2 (en) | 2012-07-25 | 2016-05-31 | Grifols, S.A. | Purification of cell culture derived alpha1 protease inhibitor |
| EP2978442B1 (en) | 2013-03-29 | 2020-03-18 | The Regents of the University of Colorado, a body corporate | Alpha 1 antitrypsin of use for preparing a subject for transplant |
| IL267923B2 (en) | 2018-08-02 | 2023-06-01 | Grifols Worldwide Operations Ltd | The composition containing the most concentrated alpha-1 type protein inhibitor and a method for obtaining it |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2770616A (en) * | 1951-01-29 | 1956-11-13 | Protein Foundation Inc | Fractionation of proteinaceous materials in blood plasma and liver tissue |
| US2761808A (en) * | 1952-09-06 | 1956-09-04 | Ortho Pharma Corp | Plasma fractionation process |
| US4056614A (en) * | 1972-09-22 | 1977-11-01 | Marc Bonneau | Immunity depressant medicine |
| JPS52128205A (en) * | 1976-04-16 | 1977-10-27 | Green Cross Corp:The | Prophylactic and therapeutic drugs for cerebro-vascular contraction |
| US4379087A (en) * | 1982-06-17 | 1983-04-05 | Cutter Laboratories, Inc. | Method of preparing alpha-1-proteinase inhibitor |
| US4439358A (en) * | 1982-06-17 | 1984-03-27 | Miles Laboratories, Inc. | Method of preparing alpha-1-proteinase inhibitor |
| US4540573A (en) * | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| DE3426903A1 (de) * | 1984-07-20 | 1986-01-23 | Biotest Pharma GmbH, 6000 Frankfurt | Eine immunglobulinpraeparation in kombination mit einer anderen pharmakologisch wirksamen praeparation zur verwendung bei der behandlung von krankheiten |
| US4684723A (en) * | 1985-09-11 | 1987-08-04 | Miles Laboratories, Inc. | Method of separating proteins from aqueous solutions |
| US4697003A (en) * | 1985-11-01 | 1987-09-29 | Miles Laboratories, Inc. | Method of preparing alpha-1-proteinase inhibitor |
| US4656254A (en) * | 1985-12-02 | 1987-04-07 | Miles Laboratories, Inc. | Method of preparing alpha-1-proteinase inhibitor and antithrombin III |
| US4629567A (en) * | 1986-03-07 | 1986-12-16 | Smithkline-Rit | Alpha-1-antiprotease purification |
| JPS6317899A (ja) * | 1986-07-09 | 1988-01-25 | Green Cross Corp:The | ハプトグロビンの精製方法 |
| JPS63132898A (ja) * | 1986-11-26 | 1988-06-04 | Meito Sangyo Kk | 蛋白質の分離精製方法 |
| US5093316A (en) * | 1986-12-24 | 1992-03-03 | John Lezdey | Treatment of inflammation |
| US4829054A (en) * | 1987-04-13 | 1989-05-09 | Miles Laboratories, Inc. | Method of decreasing lung damage in a host following the onset of gram negative septicemia/endotoxemia |
| EP0288841B1 (en) * | 1987-04-27 | 1992-12-30 | Miles Inc. | Method of preparing highly purified alpha-1-proteinase inhibitor |
| IL86417A (en) * | 1987-05-22 | 1992-09-06 | Armour Pharma | Process for the inactivation of pathogens in biological or pharmaceutical material by mixing with aqueous solution containing a sugar(alcohol)and neutral salts as stabilizers |
| US5073487A (en) * | 1989-01-30 | 1991-12-17 | Athens Research And Technology, Inc. | Rapid assay for functional human α1 -proteinase inhibitor |
| FR2672895B1 (fr) * | 1991-02-15 | 1995-05-12 | Transgene Sa | Procede de purification d'une proteine fortement glycosylee. |
| US6284874B1 (en) * | 1994-06-17 | 2001-09-04 | Alpha Therapeutic Corporation | Process for separating α1-proteinase inhibitor from cohn fraction IV1 and IV4 paste |
| US5610285A (en) * | 1994-08-24 | 1997-03-11 | Bayer Corporation | Purification of α-1 proteinase inhibitor using novel chromatographic separation conditions |
| US5616693A (en) * | 1996-07-01 | 1997-04-01 | Alpha Therapeutic Corporation | Process for seperating alpha-1-proteinase inhibitor from COHN IV1 +1V4 paste |
-
1996
- 1996-07-01 US US08/673,064 patent/US5616693A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-03-31 US US08/829,223 patent/US5981715A/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 DE DE69739212T patent/DE69739212D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 AT AT97932347T patent/ATE352569T1/de active
- 1997-06-27 PT PT97932347T patent/PT944392E/pt unknown
- 1997-06-27 EP EP06025342A patent/EP1762576B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 CA CA002489773A patent/CA2489773A1/en not_active Abandoned
- 1997-06-27 CZ CZ0435698A patent/CZ300452B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-06-27 CA CA002259499A patent/CA2259499C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-06-27 PT PT06025342T patent/PT1762576E/pt unknown
- 1997-06-27 AU AU35831/97A patent/AU726233B2/en not_active Expired
- 1997-06-27 ES ES97932347T patent/ES2281104T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 DK DK06025342T patent/DK1762576T3/da active
- 1997-06-27 DE DE69737294T patent/DE69737294T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 CZ CZ20070842A patent/CZ302102B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-06-27 CZ CZ20070841A patent/CZ301332B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-06-27 IL IL12777497A patent/IL127774A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-06-27 PL PL97330934A patent/PL188830B1/pl unknown
- 1997-06-27 AT AT06025342T patent/ATE420111T1/de active
- 1997-06-27 PL PL97363606A patent/PL188873B1/pl unknown
- 1997-06-27 ES ES06025342T patent/ES2320919T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 PL PL97363607A patent/PL188874B1/pl unknown
- 1997-06-27 EP EP97932347A patent/EP0944392B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 WO PCT/US1997/011256 patent/WO1998000154A1/en not_active Ceased
- 1997-06-27 BR BRPI9710107-9A patent/BR9710107B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-06-27 DK DK97932347T patent/DK0944392T3/da active
- 1997-06-27 KR KR1019980710920A patent/KR20000022480A/ko not_active Ceased
- 1997-06-27 JP JP50433698A patent/JP4390855B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-01-04 JP JP2008000174A patent/JP4588770B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-06-02 JP JP2009133123A patent/JP5245079B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL188873B1 (pl) | Sposób usuwania apolipoprotein z roztworu białka | |
| JP2008120822A6 (ja) | タンパク質溶液からアポリポタンパク質を除去する方法 | |
| US4446134A (en) | Process for heat treatment of aqueous solution containing human blood coagulation factor VIII | |
| US6284874B1 (en) | Process for separating α1-proteinase inhibitor from cohn fraction IV1 and IV4 paste | |
| CN1867582B (zh) | 制备α-1-抗胰蛋白酶溶液的方法 | |
| AU743904B2 (en) | Purification of proteins | |
| EP1913024B1 (en) | METHOD FOR THE PURIFICATION OF ALPHA-1 PROTEINASE INHIBITOR (a1PI) | |
| WO2000078792A1 (en) | Method for purification of proteins | |
| MXPA06001112A (en) | Process for preparing an alpha-1-antitrypsin solution | |
| HK1119185B (en) | Method for the purification of alpha-1 proteinase inhibitor (a1pi) |